丰富环境对抑郁大鼠行为学及海马组织中丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶-1表达的影响

目的探讨丰富环境(EE)对慢性不可预见性轻度应激(CUS)抑郁模型大鼠行为学及海马组织中丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶-1(MKP-1)表达的影响,为抑郁症的治疗提供线索。方法 40只Sprague-Dawley大鼠随机分为对照组、CUS组、氟西汀组及EE组,每组10只。CUS组、氟西汀组、EE组大鼠分别给予8周的CUS,从第5周起EE组及氟西汀组大鼠分别给予EE干预及氟西汀灌胃4周;对照组大鼠正常环境饲养8周。采用体质量增加量、旷场试验、蔗糖偏好等评估各组大鼠行为学的变化,采用免疫印迹法检测大鼠海马组织中MKP-1蛋白的表达。结果各组大鼠造模前体质量、水平运动距离、直立次数、穿格次数、蔗糖偏好指数比较差异均无统计学意义(P>0.05)。与对照组比较,造模后CUS组、氟西汀组及EE组大鼠体质量增加减少,水平运动距离、直立次数、穿格次数减少,蔗糖偏好指数降低(P<0.05);CUS组、氟西汀组及EE组大鼠体质量增加、水平运动距离、直立次数、穿格次数及蔗糖偏好指数两两比较差异无统计学意义(P>0.05)。氟西汀及EE干预后,CUS组大鼠体质量增加、水平运动距离、直立次数、穿格次数、糖水偏好指数与对照组大鼠比较均减少(P<0.05);氟西汀组及EE组大鼠体质量增加、水平运动距离、直立次数、穿格次数及蔗糖偏好指数与对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05);氟西汀组和EE组大鼠体质量增加、水平运动距离、直立次数、穿格次数及蔗糖偏好指数较CUS组均升高(P<0.05);EE组大鼠体质量增加、水平运动距离、直立次数、穿格次数及蔗糖偏好指数与氟西汀组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。与对照组比较,CUS组和EE组大鼠海马组织中MKP-1蛋白表达显著升高(P<0.05);氟西汀组大鼠海马组织中MKP-1蛋白表达与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。与CUS组比较,氟西汀组大鼠海马组织中MKP-1蛋白表达明显下调(P<0.05);EE组大鼠海马组织中MKP-1蛋白表达与CUS组比较差异无统计学意义(P>0.05)。与氟西汀组比较,EE组大鼠海马组织中MKP-1蛋白表达显著升高(P<0.05)。结论 EE对大鼠抑郁样症状有显著的改善作用,但对海马组织中MKP-1蛋白表达无显著影响,EE可能不是通过影响MKP-1表达作用于抑郁症。

丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶-1在人胰腺癌组织中的表达

目的观察丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶-1(MKP-1)在人胰腺癌组织中的表达。方法收集手术切除人胰腺癌组织、慢性胰腺炎(CP)组织和正常胰腺组织标本各20例,分别采用Northern blot法及Western blot法检测MKP-1在3种组织中的表达情况,并采用Western blot法进一步验证MKP-1在6株胰腺癌细胞株中的表达情况。结果 Northern blot检测结果显示,20例正常胰腺组织标本中,有7例(35%)存在MKP-1 mRNA弱表达,13例(65%)表达极弱甚至不表达;20例CP组织标本中,7例(35%)存在MKP-1 mRNA中至高水平表达;20例胰腺癌组织标本中,12例(60%)存在MKP-1 mRNA高表达,8例(40%)为低到中等水平表达。半定量分析结果显示,与正常胰腺组织相比,胰腺癌组织中MKP-1 mRNA平均表达水平升高了8.1倍(P=0.016),CP中MKP-1 mRNA的表达水平升高了6.2倍(P=0.035);胰腺癌与CP组织的MKP-1 mRNA表达水平差异没有统计学意义(P=0.442)。Western blot检测结果显示,胰腺癌组织中MKP-1蛋白表达水平也明显高于正常胰腺组织;在6株胰腺癌细胞株中均检测到MKP-1的表达,除胰腺癌CAPAN-1细胞株表达略低外,其余5株胰腺癌细胞均呈高表达。结论在CP组织、胰腺癌组织及胰腺癌细胞株中均存在MKP-1高表达,MKP-1可能参与了胰腺癌细胞的早期发生过程。

脑胶质瘤中磷脂酰肌醇3-激酶、蛋白激酶B及同源磷酸酶-张力蛋白表达水平

目的探讨PI3K、AKT、PTEN在脑胶质瘤中的表达。方法选择2017年1~12月在我院及华山医院手术治疗的脑胶质瘤患者66例的病理标本进行分析,另选择50例患者的正常脑组织病理标本为参照。应用免疫组化方法检测磷脂酰肌醇3-激酶、蛋白激酶B及同源磷酸酶-张力蛋白表达,比较脑胶质瘤组织中以及正常脑组织中三者的表达水平,分析脑胶质瘤组织中三者阳性表达的相关性。结果 PI3K及AKT在正常脑组织的阳性表达率显著低于低级别脑胶质瘤及高级别脑胶质瘤,差异有统计学意义(P<0.05);低级别脑胶质瘤显著低于高级别脑胶质瘤,差异有统计学意义(P<0.05)。正常脑组织PTEN蛋白阳性率100.0%,显著高于低级别脑胶质瘤与高级别脑胶质瘤,差异有统计学意义(P<0.05);低级别脑胶质瘤显著高于高级别脑胶质瘤,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 PI3K、AKT在脑胶质瘤中呈高表达,PTEN呈低表达,且与恶性程度有关。

丝裂素活化蛋白激酶磷酸酶-1对血管平滑肌细胞增殖的影响及其机制

目的研究丝裂素活化蛋白激酶磷酸酶 - 1(MKP1)对血管平滑肌细胞增殖的影响及机制。方法转染MKP1质粒 72h后 ,收集培养的血管平滑肌细胞 (VSMC) ,利用P42 /P44磷酸化抗MAPK抗体通过免疫印迹法测定MAPK活性 ,用流试细胞仪测定细胞周期、细胞周期素和P2 7蛋白的表达。结果转染MKP1质粒后 ,MAPK活性明显下降 ,VSMC阻滞于G0 -G1期 ,同时抑制了细胞周期素D、E的表达 ,P2 7蛋白表达却明显增加。结论MKP1抑制VSMC增殖可能是通过降低MAPK活性 ,抑制细胞周期素表达和增加P2 7蛋白表达途径实现的。

结直肠癌肝转移患者白细胞介素-18、促肝再生磷酸酶蛋白3表达与PI3K及AKT蛋白的关系

目的探讨结直肠癌肝转移患者癌组织中白细胞介素-18(IL-18)、促肝再生磷酸酶蛋白3(PRL-3)表达与临床病理特征及磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、丝苏氨酸蛋白激酶B(AKT)蛋白水平的关系。方法选取2019年10月至2021年10月于上海中医药大学附属岳阳中西医结合医院行同期切除术的85例结直肠癌肝转移患者(肝转移组)的癌组织样本及癌旁正常组织(距肿瘤切缘4 cm),以及同期65例未发生肝转移结直肠癌患者(未肝转移组)的癌组织为研究对象。免疫组织化学S-P法检测不同组织中IL-18、PRL-3阳性表达率,Western blot检测癌组织中PI3K、p-AKT相对表达水平,分析IL-18、PRL-3与患者临床病理的关系及其与PI3K、p-AKT表达的相关性。结果与未肝转移组比较,肝转移组TNM分期IV期、低分化程度比例较高(P<0.05)。肝转移患者癌组织中IL-18、PRL-3、PI3K、p-AKT蛋白阳性表达率高于其癌旁正常组织和未肝转移患者癌组织,且未肝转移患者癌组织中IL-18、PRL-3、PI3K、p-AKT蛋白阳性表达率高于肝转移患者癌旁正常组织(P<0.05)。相关性分析示,肝转移患者癌组织中IL-18、PRL-3表达与PI3K、p-AKT均呈正相关(P<0.05);未转移癌组织中IL-18表达与PI3K、p-AKT均呈正相关(P<0.05),PRL-3表达与p-AKT均呈正相关(P<0.05),且IL-18与PRL-3呈显著正相关(P<0.05)。结论IL-18、PRL-3可能通过激活PI3K/AKT信号通路从而参与结直肠癌肝转移过程。

磷酸酶张力蛋白同源物基因/磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B信号通路在肝纤维化发生及治疗中的作用研究进展

肝纤维化是最常见的肝脏病理变化,是慢性肝损伤发展为肝硬化或肝癌的重要过渡阶段,有效控制肝纤维化是防治晚期肝病的主要途径。第10号染色体缺失的磷酸酶张力蛋白同源物基因/磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B(PTEN/PI3K/AKT)信号通路能够有效调控肝纤维化进程,是肝纤维化发生的重要分子机制,也是防治肝纤维化的重要调控靶点。本文对PTEN/PI3K/AKT信号通路在肝纤维化中的作用机制及以该通路为靶点的抗肝纤维化药物研究进行综述。

阻断肾素-血管紧张素系统对糖尿病大鼠肾脏蛋白激酶Cα亚型的影响

目的研究肾素-血管紧张素系统(RAS)对链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病大鼠肾脏组织蛋白激酶C(PKC)α亚型的表达和转位的影响。方法将糖尿病模型大鼠随机分为伊贝沙坦组(40mg/kg)、福辛普利组(40mg/kg)、两药合用组(各20mg/kg)和糖尿病对照组。采用免疫组织化学法检测肾组织中PKCα的表达,采用Western blot法检测肾皮质、髓质PKCα的表达和胞膜转位情况。结果各用药组肾皮质PKCα总表达量和胞膜转位量均明显降低。各组间肾髓质PKCα的总量及胞膜、胞浆部分量的差异无显著性。结论RAS参与早期糖尿病大鼠肾脏中PKC途径,尤其是PKCα亚型的激活,而阻断RAS可部分纠正这种变化,提示RAS通过影响PKCα转导途径的异常参与糖尿病肾病的发生、发展机制。

复合成骨蛋白-1多肽水凝胶缓释系统对小鼠成骨细胞碱性磷酸酶、骨钙素和核心结合因子α1表达的影响

研究复合成骨蛋白-1(osteogenic protein-1,OP-1)多肽水凝胶缓释系统对小鼠成骨细胞碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、骨钙素(osteocalcin,OC)和核心结合因子α1(corebinding factor α1,Cbfα1)表达的影响。实验分OP-1组、OP-1/水凝胶组和对照组,对小鼠成骨细胞培养1d、4d、7d、10d、14d后,运用免疫细胞化学方法分别检测各组各时间点ALP、OC和Cbfαl的表达。结果显示培养4d、7d、10d、14d,OP-1组和OP-1/水凝胶组ALP、OC、Cbfαl阳性表达均比对照组多(P<0.05),培养4d、7d、10d,OP-1/水凝胶组ALP、OC、Cbfαl阳性表达均较OP-1组少(P<0.05);OP-1组培养1d,Cbfαl开始有表达,而其他组、其他指标在1d均无表达;OP-1组培养7d,ALP和Cbfαl表达量达顶峰,而OP-1/水凝胶组培养10d才达顶峰;到14dOP-1组和OP-1/水凝胶组ALP、Cbfαl的表达无显著性差异(P>0.05)。研究表明复合OP-1多肽水凝胶缓释系统能缓慢释放OP-1,促进成骨细胞分化,增加ALP、OC和Cbfαl的表达。

酵母双杂交筛选与蛋白激酶CK2α′相互作用蛋白--泛素-52氨基酸融合蛋白的鉴定

蛋白激酶CK2是一种真核细胞中普遍存在的信使非依赖性丝/苏氨酸蛋白激酶.为研究CK2α′亚基在精子发生中的作用机制,将构建于pACT2质粒的人睾丸cDNA文库和人蛋白激酶CK2α′为诱饵蛋白进行酵母双杂交实验.以初步筛选与人蛋白激酶CK2α′相互作用蛋白的阳性候选克隆,筛选获得8个阳性克隆,其中1个与人泛素-52氨基酸融合蛋白基因(UBA52)的cDNA序列有高度同源性(100%).GST pull-down实验在细胞外进一步证实了CK2α′与UBA52之间存在相互作用.本实验证明,人泛素-52氨基酸(UBA52)融合蛋白是人CK2α′亚基的相互作用蛋白,它们之间的相互作用对精子发生机制的影响尚不清楚,进一步分子机制研究正在进行中.

钙调神经磷酸酶-活化T细胞核因子信号通路与系统性红斑狼疮关系的研究进展

系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)是一种以多种自身抗体产生为特点的侵犯多系统多脏器的自身免疫性疾病,其发病机制尚未明确,目前认为T淋巴细胞异常是SLE的发病的关键。钙调神经磷酸酶-活化T细胞核因子(Calcineurin-nuclear factors of activatedT cells,CaN-NFAT)信号通路作为T细胞内重要的生物信号转导通路,在T细胞活化中起到调节枢纽的作用,本文就CaN/NFAT信号途径在SLE中的作用及目前相关主要治疗药物的研究现状作一综述,为SLE的基础研究及临床治疗提供依据。

血浆受体相互作用蛋白激酶-3与短暂性脑缺血发作患者近期预后的相关性

目的探讨血浆受体相互作用蛋白激酶-3(RIP3)与短暂性脑缺血发作(TIA)危险分级评估系统(ABCD2)评分的相关性,以及其对TIA患者近期预后的预测价值。方法选择2018年1月至2019年12月在西安医学院第一附属医院急诊科住院治疗的235例TIA患者(TIA组)纳入研究,另匹配与TIA组患者年龄、性别相当60例健康体检志愿者为对照组。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血浆RIP3水平,采用ABCD2评分对TIA患者进行危险分级评分。TIA患者在出院后至少随访90 d,复合终点事件包括再发TIA、脑梗死及死亡,以此将TIA患者进一步分为事件组和无事件组。结果 TIA组血浆RIP3水平(pg/m L)显著高于对照组[437.61(364.63,483.67) vs. 379.18(330.54,405.41),Z=5.966,P<0.001],事件组血浆RIP3水平显著高于无事件组[500.31(470.53,534.92) vs. 423.20(360.88,481.08),Z=5.419,P<0.001]。Spearman直线相关分析结果示,血浆RIP3与ABCD2评分呈正相关(r=0.501,P<0.001)。多元线性回归分析结果示,血浆RIP3是TIA患者ABCD2评分的独立影响因素(Beta=0.531,P<0.001)。二分类Logistic回归分析结果示,血浆RIP3水平≥500 pg/m L是TIA患者出院90 d发生复合终点事件的独立危险因素(OR=4.171,95%CI 1.327-13.105,P=0.014)。ROC曲线分析结果示,血浆RIP3水平和ABCD2评分预测出院90 d发生终点事件的AUC分别为0.821(0.751,0.891)和0.879(0.816,0.941),差异无统计学意义(Z=1.204,P>0.05)。结论血浆RIP3对TIA患者近期预后具有较高的预测价值。

miR-130a靶向磷酸酶-张力蛋白基因/磷酸酰肌醇3激酶/蛋白激酶B轴对糖尿病肾脏疾病大鼠肾组织细胞凋亡影响的研究

目的 探讨miR-130a靶向磷酸酶-张力蛋白基因(PTEN)/磷酸酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)通路对DKD大鼠肾组织细胞凋亡的影响。方法 通过高糖高脂饲料喂养联合腹腔注射STZ构建DKD大鼠模型。将72只大鼠分为正常对照(NC)组、模型组(DKD组)、miR-130a激动剂阴性对照组(NC agomir组)、miR-130a激动剂组(miR-130a agomir组)、miR-130a激动剂+PTEN过表达物阴性对照组(miR-130a agomir+pcDNA组)、miR-130a激动剂+PTEN过表达物组(miR-130a agomir+pcDNA-PTEN组),每组各12只。尿微量白蛋白试剂盒检测各组24 h UAlb,全自动生化分析仪检测FPG、血清肌酐(Scr)、BUN,HE染色检测各组肾组织病理变化,ELISA法检测各组IL-6、TNF-α,TUNEL染色检测各组肾组织细胞凋亡,qRT-PCR检测各组miR-130a表达,Western blot法检测各组B细胞淋巴瘤-2相关X蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)及PTEN/PI3K/AKT通路相关蛋白表达,双荧光素酶报告基因实验验证miR-130a与PTEN靶向关系。结果 与DKD、NC agomir组比较,miR-130a agomir组24 h UAlb、FPG、Scr、BUN、IL-6、TNF-α、肾组织细胞凋亡率、Bax蛋白表达、PTEN蛋白表达降低(P<0.05),miR-130a、Bcl-2、p-AKT/AKT蛋白表达升高(P<0.05)。与miR-130a agomir组比较,miR-130a agomir+pcDNA-PTEN组24 h UAlb、FPG、Scr、BUN、IL-6、TNF-α、肾组织细胞凋亡率、Bax蛋白表达、PTEN蛋白表达升高(P<0.05),Bcl-2、p-AKT/AKT蛋白表达降低(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验显示,miR-130a与PTEN有结合位点。结论 过表达miR-130a可能通过下调PTEN激活PI3K/AKT通路抑制DKD大鼠肾细胞凋亡。

磷酸酶与张力蛋白同源物基因与中枢神经系统疾病

10号染色体上缺失的磷酸酶与张力蛋白同源物基因（phosphatase and tensinhomology deleted on chromosome ten，PTEN）是一种具有双重磷酸酶活性的肿瘤抑制因子。能分别抑制磷酯酰肌醇三磷酸激酶（PI3K）和丝裂原激活的蛋白激酶（MAPK）信号通路。以往对PTEN的研究主要着重于肿瘤方面，很多肿瘤都发生了该基因的缺失或失活。

神经调节蛋白-1对神经肌肉系统影响的研究进展

神经调节蛋白(NRG)家族对神经肌肉系统的发育和维持有重要作用,其中NRG-1被研究得最多,且与神经肌肉系统的关系也最为密切。NRG-1通过与细胞表面Ⅰ型酪氨酸激酶受体结合,促进神经肌肉系统的生长发育,并对各种病理条件下神经肌肉系统的损伤产生保护作用。磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B、过氧化物酶体增殖物激活受体/核因子κB等信号通路是NRG-1在细胞内发挥作用的主要信号通路。今后还需进一步开展临床转化研究,明确NRG-1是否可以应用于神经肌肉系统疾病患者。

氟西汀对抑郁症大鼠行为学表现及丝裂原活化蛋白激酶-p38信号通路的影响

目的探讨氟西汀对抑郁症大鼠行为学表现及海马内丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶-1(MKP-1)、磷酸化p38(p-p38)和p38表达的影响,为抑郁症的分子病理学机制提供线索。方法 40只雄性Sprague Dawley大鼠随机分为正常组、抑郁症组、生理盐水组和氟西汀组,每组10只。抑郁症组、生理盐水组和氟西汀组大鼠给予8周慢性不可预见性刺激(CUMS)制备抑郁症模型,第5~8周生理盐水组和氟西汀组大鼠分别给予生理盐水和氟西汀灌胃。正常组大鼠不给予任何干预措施。分别于造模前、造模后及干预后评估4组大鼠的行为学变化;最后1次行为学评估后,取大鼠海马组织,采用Western blot法检测海马组织中MKP-1、p-p38和p38蛋白表达,并计算p-p38与p38蛋白表达的比值(p-p38/p38)。结果造模前4组大鼠行为学指标比较差异均无统计学意义(P>0.05)。与造模前比较,造模后抑郁症组、生理盐水组和氟西汀组大鼠蔗糖偏好指数降低(P<0.05),旷场实验水平运动距离和直立次数减少(P<0.05),强迫游泳不动时间增加(P<0.05)。造模后抑郁症组、生理盐水组和氟西汀组大鼠行为学指标比较差异均无统计学意义(P>0.05)。与正常组比较,造模后抑郁症组、生理盐水组和氟西汀组大鼠蔗糖偏好指数降低(P<0.05),旷场实验水平运动距离和直立次数减少(P<0.05),强迫游泳不动时间增加(P<0.05)。与抑郁症组和生理盐水组比较,干预后氟西汀组大鼠蔗糖偏好指数升高(P<0.05),旷场实验水平运动距离和直立次数增加(P<0.05),强迫游泳不动时间缩短(P<0.05)。抑郁症组和生理盐水组大鼠海马组织中MKP-1表达显著高于正常组(P<0.05),氟西汀组大鼠海马组织中MKP-1表达显著低于抑郁症组和生理盐水组(P<0.05),抑郁症组与生理盐水组大鼠海马组织中MKP-1表达比较差异无统计学意义(P>0.05),氟西汀组与正常组大鼠海马组织中MKP-1表达比较差异无统计学意义(P>0.05)。4组大鼠海马组织中p-p38、p38蛋白表达及p-p38/p38比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论MKP-1可能与抑郁症的发病机制有关,MKP-1在抑郁症的发病机制中可能不是通过p38信号通路起作用。氟西汀可能通过下调MKP-1表达而发挥治疗抑郁症的作用。

醋酸去氨加压素对丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶-1在大鼠耳蜗的表达及功能研究

目的检测醋酸去氨加压素(deamino arginine vasopressin,DDAVP)作用后丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶-1(mitogen-activated protein kinase phosphatase,MKP-1)在大鼠耳蜗组织的表达情况,探讨MKP-1是否参与梅尼埃病的发生。方法选取SPF级雄性SD大鼠20只,随机分为实验组和对照组,每组10只。实验组腹腔注射DDAVP,对照组腹腔注射等量0.9%氯化钠溶液。造模结束后行听性脑干反应(auditory brainstem response,ABR)检测听力,苏木精-伊红染色观察耳蜗形态变化,免疫组织化学及蛋白质免疫印迹检测MKP-1在耳蜗的表达位置及定量分析。结果实验组ABR阈值较造模前上升约10 dB,差异有统计学意义(P<0.01);实验组耳蜗切片苏木精-伊红染色出现膜迷路积水表现,实验组积水率达80%;免疫组织化学显示,MKP-1广泛表达于血管纹、螺旋韧带、螺旋缘、柯蒂器、以及螺旋神经节。两组血管纹、螺旋韧带及螺旋神经节表达比较,差异均有统计学意义(P<0.05);两组SLM和OC表达比较,差异无统计学意义(P>0.05)。蛋白质免疫印迹显示,实验组MKP-1表达低于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论DDAVP可能通过下调MKP-1促进膜迷路积水形成,进而参与梅尼埃病的发病过程。

肌原纤维蛋白磷酸化对其被μ-钙蛋白酶降解的影响

目的:研究肌原纤维蛋白磷酸化对其被μ-钙蛋白酶降解的影响。方法:以羊背最长肌肌原纤维蛋白为原料,添加蛋白激酶A和碱性磷酸酶催化磷酸化和去磷酸化反应,反应后加入μ-钙蛋白酶,通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)和荧光染色、蛋白质免疫印迹测定肌原纤维蛋白的磷酸化水平、蛋白降解程度。结果:蛋白激酶A处理组肌原纤维蛋白磷酸化水平显著高于对照组(P<0.05);碱性磷酸酶处理组肌原纤维蛋白磷酸化水平显著低于对照组(P<0.05);蛋白激酶A处理抑制μ-钙蛋白酶自溶,降低其活性,延长其发挥活性的时间;蛋白激酶A处理促进肌球蛋白重链及肌钙蛋白T降解;碱性磷酸酶处理促进肌动蛋白及肌间线蛋白降解。结论:磷酸化通过作用于μ-钙蛋白酶活性及肌原纤维蛋白进而影响μ-钙蛋白酶降解肌原纤维蛋白。

二甲双胍对葡萄糖-6-磷酸酶基因表达的抑制作用及其机制

目的探讨二甲双胍对葡萄糖-6-磷酸酶(G6Pase)基因表达作用及其分子机制。方法应用稳定表达G6Pase的鼠肝细胞瘤H4ⅡE M1.3细胞,一组细胞分别给予二甲双胍0.1～5.0mmol·L-1孵育16h;另一组细胞先加入化合物C 20μmol·L-1,Bay11-7085 5μmol·L-1或雷帕霉素25nmol·L-1作用30min后,再加入二甲双胍2mmol·L-1共育16h,采用荧光素酶报告基因检测方法测定G6Pase基因表达水平;细胞加入化合物C 20μmol·L-1作用30min后,再分别加入二甲双胍2mmol·L-1、5-氨基-4-甲酰胺咪唑核糖核苷酸(AICAR)1mmol·L-1孵育15min,Western印迹法检测腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)蛋白表达及其磷酸化水平;细胞加入二甲双胍2mmol·L-1和胰岛素1μmol·L-1作用15min,Western印迹法检测蛋白激酶B(Akt)蛋白表达及其磷酸化水平。结果二甲双胍0.5,1,2和5 mmol·L-1作用16h可以显著抑制G6Pase基因表达(P<0.05,P<0.01),二甲双胍0.5和5mmol·L-1时,分别抑制G6Pase基因表达26%(P<0.05)和85%(P<0.01)。AMPK抑制剂化合物C可部分逆转二甲双胍的抑制作用(P<0.05);二甲双胍可诱导AMPK磷酸化,与AICAR作用相似,但这一作用可被化合物C抑制。结论二甲双胍抑制G6Pase基因表达,其作用机制可能与激活AMPK有关,而可能与Akt,雷帕霉素靶蛋白(mTOR)及核因子-κB(NF-κB)介导的通路无关。

PP2C蛋白磷酸酶调控的细胞信号通路研究进展

2C类蛋白磷酸酶是蛋白磷酸酶家族的重要成员,可以对丝/苏氨酸残基特异性脱磷酸。近来研究表明,2C类蛋白磷酸酶控制着大量关键的细胞功能,如增殖、细胞周期阻滞、衰老和细胞程序性死亡、凋亡和自噬等,因而在介导机体免疫反应、衰老、神经发育及肿瘤发生发展中发挥重要的生物学作用。总结PP2C基因各亚型参与介导的重要细胞信号通路,如丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、磷脂酰肌醇3-激酶/丝苏氨酸蛋白激酶(PI3K/AKT)、转化生长因子-β(TGF-β)/Smads、核转录因子-κB(NF-κB)及DNA损伤应答通路,以期为阐明上述生理病理过程的分子基础和调控机制提供新的思路。