基于环磷酸腺苷/蛋白激酶A/环磷酸腺苷反应元件结合蛋白通路探究丙泊酚对局灶性脑缺血再灌注大鼠神经功能改善机制

目的:基于环磷酸腺苷/蛋白激酶A/环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(cAMP/PKA/CREB)通路探究丙泊酚对局灶性脑缺血再灌注大鼠神经功能的改善机制。方法:采用改良线栓法缺血2 h,再灌注24 h建立大鼠脑缺血再灌注损伤(CIRI)模型,将造模成功大鼠随机分为模型组和丙泊酚低(1 mg/ml)、中(2.5 mg/ml)、高剂量(5 mg/ml)组,各12只,另设含有12只大鼠的假手术组。分组后即开始给药,1次/d,共4周,末次给药12 h后,采用改良神经功能评分(mNSS)法进行神经缺损评分;采用TTC染色法检测脑梗死面积;HE、Nissl染色进行神经元细胞及尼氏小体形态学观察;Tunel法进行神经元细胞凋亡检测;Elisa法检测脑组织cAMP、脑源性神经营养因子(BDNF)、神经生长因子(NGF)含量;免疫荧光法检测脑组织环磷酸腺苷(cAMP)、p-PKA、p-CREB阳性细胞数及其蛋白共表达阳性细胞数;Western blot法检测脑组织PKA、p-PKA、CREB、p-CREB蛋白表达量。结果:模型组大鼠比较假手术组大鼠的mNSS评分、脑梗死面积百分比显著增加(均P<0.05),HE染色和Nissl染色可见明显的神经元细胞损伤和尼氏小体破坏,脑组织cAMP、BDNF、NGF含量和PKA、p-PKA、CREB、p-CREB蛋白表达量显著下降,模型组大鼠比较假手术组大鼠的cAMP、p-PKA、p-CREB阳性细胞数和蛋白共表达阳性细胞数也明显下降(均P<0.05)。与模型组比较,丙泊酚给药组大鼠mNSS评分、脑梗死面积百分比显著降低(均P<0.05),HE染色和Nissl染色可见神经元细胞损伤和尼氏小体破坏有不同程度改善,脑组织cAMP、BDNF、NGF含量和PKA、p-PKA、CREB、p-CREB蛋白表达量显著升高(均P<0.05),cAMP、p-PKA、p-CREB阳性细胞数及其蛋白共表达阳性细胞数均显著升高(均P<0.05)。结论:丙泊酚可能通过cAMP/PKA/CREB通路改善CIRI大鼠神经功能。

低强度激光促细胞增殖效应与丝裂原激活的蛋白激酶信号传导途径

人们在应用中发现低强度激光有种特殊的作用,即作用于生物体时不产生不可逆损伤,而直接由辐射产生刺激效应。如病灶直接照射和穴位照射,能产生消炎,镇痛,血管扩张,促进创伤愈合、毛发、神经及骨再生等作用;照射小鼠胸腺区和脾区可增强免疫细胞活性及促进免疫分子产生[1]。...

七种黄酮类化合物对重组人蛋白激酶CK2全酶抑制作用的结构效应关系(英文)

目的:观察7种黄酮类化合物对重组人蛋白激酶CK2全酶活性的影响并进行结构效应关系的分析。方法:将利用基因工程技术获得的重组人CK2α′及β亚基在体外等摩尔混合构成CK2全酶。通过测定药物作用后转移到CK2底物上的[γ-32P]ATP的32P的放射性活度,探讨黄酮类化合物对重组人CK2全酶活性的抑制作用,并采用半数效量概率单位法计算其IC50值。结果:杨梅黄酮、槲皮素、桑色素、毛地黄黄酮、莰非醇、芹菜苷配基和白杨黄素能明显抑制重组人CK2全酶活性,其IC50值分别是1.18,0.51,16.16,0.86,1.88,1.72和13.63μmol/L;其中杨梅黄酮、槲皮素、毛地黄黄酮、莰非醇和芹菜苷配基的作用效果均强于目前已知的CK2抑制剂DRB和A3;而桑色素和白杨黄素的作用效果接近于DRB。结构效应关系分析表明,C6,C3′和C4′上的-OH可能是黄酮类CK2抑制剂发挥抑制作用的药效基团;而在C3上去除1个-OH对其抑制效果基本没有影响;此外,C2′和C5′上的-OH可减弱黄酮类化合物对CK2的抑制作用。结论:黄酮类化合物对体外蛋白激酶CK2的抑制效果可能取决于其羟基的位置。

蛋白激酶A部分通过环磷腺苷效应元件结合蛋白信号防止足细胞凋亡

目的 探讨转录因子环磷腺苷效应元件结合蛋白（CREB）在蛋白激酶A（PKA）信号防止足细胞损伤中的作用。方法 使用条件永恒的小鼠足细胞株（5P12）14~25代分化的足细胞进行研究,细胞分为对照组、阿霉素（ADR）处理组（ADR组）和PKA特异性激动剂（pCPT-cAMP）预孵育＋ADR刺激组（pCPT-cAMP＋ADR组）。CCK-8法检测细胞毒性;Western blotting检测足细胞内被切割的半胱氨酸蛋白酶-3（cleaved caspase-3）表达;siRNA抑制细胞内CREB表达,免疫荧光共聚焦显微镜和Western blotting检测磷酸化CREB（p-CREB）的定位和表达。结果 ADR诱导足细胞内cleaved caspase-3表达升高,pCPT-cAMP预孵育可显著降低ADR诱导的cleaved caspase-3表达上升。ADR使足细胞减少为原来的（40.45±6.78）%,pCPT-cAMP预孵育使细胞数量恢复为原来的（69.8±5.48）%。Western blotting检测结果显示：pCPT-cAMP分别预孵育5、15 min可使足细胞总蛋白中p-CREB表达分别上升（105.64±38.21）%和（98.61±41.03）%,细胞核内p-CREB的表达上升（114.52±11.28）%和（118.84±14.44）%。免疫荧光共聚焦显微镜检测显示pCPT-cAMP主要引起细胞核内p-CREB表达上升。siRNA可使足细胞CREB蛋白表达下降为原来的（25.1±2.44）%,且pCPT-cAMP预孵育不能防止ADR诱导的cleaved caspase-3表达升高。结论 转录因子CREB介导了PKA信号对足细胞的保护作用。

妊娠期接触糖皮质激素对子代大鼠心肌血清和糖皮质激素调节的蛋白激酶1表达和心脏功能的印迹效应

目的揭示妊娠期暴露于糖皮质激素(glucocorticoids,GCs)对子代大鼠心脏功能的印迹效应,探索GCs对子代心肌保护性因子的调节作用及其可能机制。方法构建妊娠后期GCs暴露大鼠模型,通过2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色观察子代心肌缺血再灌注损伤后的梗死程度;实时定量PCR检测心肌保护因子血清和糖皮质激素调节的蛋白激酶1(Sgk1)、促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)受体2(Crhr2)、CRH家族肽urocortin(Ucn)和Ucn2等基因的表达;蛋白质印迹分析检测SGK1蛋白的表达;亚硫酸氢盐处理后测序确定Sgk1基因启动子的甲基化水平。结果妊娠期GCs暴露大鼠子代出生时和成年后体质量减轻(P<0.01),子代雄性大鼠心肌对缺血再灌注损伤的耐受性下降(P<0.01);SGK1的mRNA和蛋白在子代雄性大鼠心肌中的表达降低(P<0.01或P<0.05);Ucn和Ucn2在子代雌性大鼠心肌中的表达下降(P<0.05);Sgk1基因启动子区域存在多个CpG岛,且近端CpG岛的甲基化水平在妊娠期GCs暴露的子代雄性大鼠心肌中升高(P<0.01)。结论妊娠期GCs暴露可能通过下调心肌保护因子SGK1的表达对子代雄性大鼠心肌功能产生印迹效应,而Sgk1基因启动子区域CpG岛的高甲基化改变可能是介导GCs对Sgk1的印迹效应的重要机制。

佛波酯对人肝癌细胞胞液和膜性组分中3类蛋白激酶的早期效应

研究佛波酯（PMA）对人肝癌细胞7721胞液和膜性组分中3类蛋白激酶（TPK、PKA、PKC）的早期（5～60min）效应。采用体外细胞培养和蛋白激酶的同位素标记底物测定法。结果：PMA在30min内可促进PKA由膜向胞液的转位和PKC由胞液向膜的转位，并能迅速促进胞液PKC的下降，但膜性PKC的下降发生在30min的活力高峰以后。60min时膜性PKA和PKC都恢复到正常水平。PMA还使胞液TPK持续升高，高峰在5min，而使膜性TPK先降低，40min后才明显升高。结论：PMA对蛋白激酶的早期作用相当多样化，不单是通过受体PKC起作用。

腺苷酸活化蛋白激酶活性及其级联效应对肉品品质的影响研究进展

腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)是主要的细胞能量调节器。AMPK的活化将启动其级联效应,参与调节一系列机体能量代谢,如糖代谢、脂代谢和蛋白质代谢等,最终影响畜禽肉的品质。因此,AMPK及其下游信号通路有可能成为改善肉品品质的重要靶点。本文主要探讨AMPK的活化机制和级联效应,分析其对肉品品质的影响,从而为改善肉品品质提供理论依据。

丝裂原激活蛋白激酶抑制剂对弓形虫速殖子侵入宿主细胞信号转导途径的阻断效应

目的观察丝裂原激活蛋白激酶(mitogen activated protein kinases,MAPK)抑制剂对弓形虫速殖子侵入细胞的影响。方法 IFA 荧光标记检测在不同剂量抑制剂作用下及在不同时间其宿主细胞感染速殖子的差异;SDS-PAGE 和 Western blot 分析 MAPK 的表达及其相对活性。结果在 PD980591μM 和10μM 作用下其感染率仅分别为对照组的18.00%(u=9.03,P<0.01)和14.80%(u=7.93,P<0.001);在 PD98059 50μM 作用下宿主细胞感染率在24h 和48h 分别为对照组的55.45%(u=3.58,P<0.01)和49.15%(u=4.08,P<0.01);与对照比较,其 MAPK 的相对活性明显下降,10μM 和50μM 组分别降低了43.03%(u=2.72,P<0.01)和78.79%(u=5.74,P<0.001)。结论 PD98059通过作用于 MAPK 信号转导途径而抑制速殖子侵入宿主细胞的过程。

蛋白激酶B活性及其级联效应对肉品质的影响

蛋白激酶B(PKB/Akt)是真核细胞中非常重要的丝/苏氨酸蛋白激酶,也是磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)的关键下游信号分子。它既可以通过调控哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、糖原合成酶激酶-3(GSK-3)和叉头转录因子(FoxO)的表达影响蛋白质代谢;也可以通过磷酸化FoxO和GSK-3调节糖原合成/分解;还可以通过固醇调节元件结合转录因子(SREBPs)及mTOR信号通路促进机体的脂质合成。此外,Akt可磷酸化FoxO、前体凋亡蛋白(如Bad、Bcl-2)和半胱天冬蛋白酶抑制细胞凋亡,最终影响畜禽肉的品质。综上所述,Akt及其级联效应可能成为提高肉品质的重要手段。本文阐述了Akt的活化机制、级联效应及其对肉品质的影响,以期为改善肉品质提供参考。

恩格列净调节AMP依赖蛋白激酶/蛋白激酶B/环磷腺苷效应元件结合蛋白信号通路对肺动脉高压大鼠肺血管重构的影响

目的探讨恩格列净调节AMP依赖蛋白激酶(AMPK)/蛋白激酶B(AKT)/环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)信号通路对肺动脉高压(PH)大鼠肺血管重构的影响。方法将60只SD大鼠随机分为对照组、PH组、恩格列净低、中、高剂量组、恩格列净+Compound C组,每组各10只。除对照组外,其余5组大鼠均采用低氧处理构建PH模型。低氧处理前,恩格列净低、中、高剂量组分别以7.5 mg/kg、15.0 mg/kg、30.0 mg/kg恩格列净灌胃,恩格列净+Compound C组以30.0 mg/kg恩格列净灌胃同时腹腔注射10 mg/kg Compound C,PH组和对照组予同体积生理盐水灌胃。6组大鼠均每天灌胃1次,连续4周。检测6组大鼠平均肺动脉压(mPAP)、右心室肥厚指数(RVHI);采用HE染色观察肺小动脉组织病理学变化并计算肺小动脉管壁厚度在血管外径中的占比(WT%)、肺小动脉管壁面积在血管总面积中的占比(WA%);采用ELISA检测大鼠血清低氧诱导因子(HIF)-1α及内皮素(ET)-1水平;采用Western blot检测大鼠肺动脉组织AMPK/AKT/CREB信号通路相关蛋白表达水平。结果与对照组比较,PH组大鼠mPAP、RVHI、肺小动脉WT%、WA%及血清HIF-1α、ET-1水平均明显升高,肺动脉组织磷酸化AMPK(p-AMPK)/AMPK、磷酸化AKT(p-AKT)/AKT、磷酸化CREB(p-CREB)/CREB表达水平均明显降低;与PH组比较,恩格列净低、中、高剂量组大鼠mPAP、RVHI、肺小动脉WT%、WA%及血清HIF-1α、ET-1水平均依次降低,肺动脉组织p-AMPK/AMPK、p-AKT/AKT、p-CREB/CREB表达水平均依次升高;与恩格列净高剂量组比较,恩格列净+Compound C组大鼠mPAP、RVHI、肺小动脉WT%、WA%及血清HIF-1α、ET-1水平均明显升高,肺动脉组织p-AMPK/AMPK、p-AKT/AKT、p-CREB/CREB表达水平均明显降低(P<0.05)。结论恩格列净能够减轻PH大鼠肺血管重构,可能是通过调节AMPK/AKT/CREB信号通路发挥作用。

抑制Polo样蛋白激酶1联合细胞因子诱导的杀伤细胞对三阴性乳腺癌杀伤效应的机制初探

目的探究抑制Polo样蛋白激酶1(Polo-likekinase1,PLK1)联合细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer cell,CIK细胞)对三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)的杀伤作用,并初步探究其作用机制。方法Ficoll密度梯度离心法分离健康志愿者外周血单个核细胞,诱导生成CIK细胞并鉴定;使用不同浓度PLK1抑制剂BI-2536处理MDA-MB-231细胞,MTT法检测细胞存活率;以MDA-MB-231细胞作为靶细胞,CIK细胞为效应细胞,MTT法检测不同效靶比下细胞存活率;再以BI-2536联合CIK细胞处理MDA-MB-231细胞,MTT法检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡水平,蛋白质印迹法测定细胞内胱天蛋白酶(caspase)-3与caspase-9蛋白活性;构建TNBC裸鼠移植瘤模型,随机分为对照组、BI-2536组、CIK组和BI-2536+CIK组,按照分组对裸鼠进行处理后,每隔2d测量瘤体,21d后处死裸鼠称重瘤体,苏木精-伊红染色观察肿瘤组织内细胞生长情况,免疫组织化学染色检测肿瘤组织内细胞增殖标记物Ki-67及caspase-3、caspase-9蛋白阳性表达情况。结果与诱导前比较,诱导后CIK细胞亚群中CD3^(+)CD8^(+)和CD3^(+)CD56^(+)细胞比例均增高,CD3^(+)CD4^(+)细胞比例减少(P<0.05);不同浓度BI-2536作用下的MDA-MB-231细胞存活率均下降,不同效靶比的CIK细胞作用下的MDA-MB-231细胞存活率也下降(P<0.05);相较于单独BI-2536或CIK细胞处理,BI-2536和CIK细胞联合作用后细胞存活率下降,细胞凋亡率升高,caspase-3与caspase-9蛋白活性增加(P<0.05)。裸鼠移植瘤模型实验发现,BI-2536和CIK细胞联合作用能够抑制肿瘤组织生长,肿瘤质量减小,肿瘤组织内细胞排列稀疏且增殖受抑制,Ki-67阳性率降低,caspase-3和caspase-9阳性率均增加(P<0.05)。结论使用PLK1抑制剂BI-2536联合CIK细胞能够在体外和体内抑制TNBC肿瘤细胞增殖,并提高对肿瘤细胞的杀伤作用,该机制可能与激活caspase依赖性途径有关。

Tricine电泳优化方法在针灸效应小分子蛋白检测中的应用

目的改进一种适合分离、鉴定针灸效应小分子蛋白的Tricine-SDS-PAGE电泳体系。方法研究调整分离胶中聚丙烯酰胺浓度和凝胶交联度并加入适量甘油,从而优化Tricine电泳系统。结果与常规Glycine-SDS-PAGE电泳系统比较,分离胶聚丙烯酰胺浓度为l6.8%、交联度为5.8%、含10.4%甘油的Tricine-SDS-PAGE电泳明显减少10 kD分子量蛋白的弥散,成功分离了分子量为11.0 kD的S100A8和11.8 kD的S100A11等两个针刺抗哮喘小分子蛋白。结论优化的Tricine-SDS-PAGE电泳系统可有效分离针灸效应小分子蛋白。

蛋白质组学技术与针灸防治胃溃疡效应

蛋白质组学是一门在蛋白质水平认识生命机制的学科.近年来,应用蛋白质组学技术开展针灸防治胃溃疡效应的研究日益受到重视.本文综述了目前针灸防治胃溃疡的蛋白质组学研究的相关进展,并就研究中存在的相关问题进行分析,认为利用蛋白质组技术研究针灸机制和调节效应是未来针灸研究的重要突破口和发展方向.

丝裂原活化蛋白激酶信号转导通路与子宫内膜癌

丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路目前已鉴定出4条[细胞外信号调节激酶(ERK)1/2、P38丝裂原活化蛋白激酶(P38)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)和ERK5],其中ERK1/2通路可被多种刺激活化,通过调控细胞周期,抑制细胞凋亡,促进细胞增殖、迁移和侵袭等而与肿瘤的发生发展密切相关。许多子宫内膜癌相关因素通过MAPK/ERK通路起作用。雌激素可以通过非基因组转录效应迅速激活MAPK通路促进子宫内膜的的发生发展。综述MAPK/ERK信号通路的研究进展,重点论述MAPK/ERK信号通路与子宫内膜癌的关系及分子机制,以及MAPK/ERK通路抑制剂在肿瘤防治方面的临床应用前景。

蛋白激酶A RⅡβ结构及功能的研究进展

蛋白激酶A(PKA)是由1个调节亚基(R亚基)二聚体和两个催化亚基(C亚基)组成的四聚体,全酶无活性。R亚基有RⅠα、RⅠβ、RⅡα和RⅡβ4种亚型,分别具有不同的理化性质。RⅡβ亚基氨基端包含1个二聚化/对接结构域,PKA通过此结构域与腺苷酸激酶锚定蛋白结合锚定于细胞的特定位点。羧基端是两个串联的高度保守的环核苷酸结构域,与PKA全酶解聚以及激活有关。两个RC异二聚体通过RⅡβ亚基中的β4~β5环相锚定。细胞质中存在足够的Mg ATP时将导致RⅡβ亚基自身磷酸化。RⅡβ在特定组织表达,主要表达于内分泌腺、脑和脂肪组织。生物信息学分析表明,RⅡβ与其他R亚基的序列有很大差别,只有大约50%的序列相同,提示RⅡβ可能具有不同的生物学功能。因此,目前对PKA RⅡβ的功能及其作用机制的研究已逐渐成为热点。

蛋白激酶Cα、δ和ε亚型与缺血/运动预处理研究进展

1986年Murry等[1]发现,预先给予狗心脏几次短暂的缺血再灌注处理,会使其心肌对随后长时间缺血损伤的耐受性增强,这种现象称为缺血预处理（ischemic preconditioning,Ip）[2-4].由运动诱导的IP样心肌保护效应,称为运动预处理（exercisepreconditioning,Ep）[5-7].EP具有与IP类似的保护效应和信号转导通路[s,s-13],但具体机制尚不清楚.在各种预处理效应机制中,蛋白激酶C （protein kinase C,PKC） α、δ和ε亚型是中介环节的关键点.在EP现象中,PKCα、δ和ε亚型表达和分布变化以及三者的交互作用（Cross-Talk）对EP效应的最终产生有重要影响.本文对蛋白激酶Cα、δ和ε亚型及其交互作用在缺血预处理和运动预处理心肌保护作用中的变化及可能机制进行综述.

钙离子／钙调蛋白激酶Ⅱ在癫痫中的作用机制

钙离子/钙调蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)是一种多功能丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶。CaMKⅡ在神经递质、细胞代谢和突触重塑性等方面参与调节,在诸多神经系统疾病中发挥极其重要的作用。CaMKⅡα特异性定位于兴奋性神经元中,一直被认为是研究治疗癫痫的关键所在。体内和体外不同癫痫模型出现CaMKⅡ的活性下降。本文从CaMKⅡ的生物学分类、结构与特性以及CaMKⅡ在癫痫中的作用方面进行综述,为深入研究癫痫病理过程及癫痫药物治疗提供新的理论依据。

针灸脑效应的影像学基础与临床研究现状

针灸学作为中医文化的重要组成部分,承载着带领中医走向国际化的历史使命。传统针刺腧穴理论,由于其自身的历史条件限制,以及诸多因素影响,导致其理论停滞于抽象、模糊、宏观的层面,未能更好的与现代医学理论相结合,也不利于现代医学对于传统针刺腧穴理论的理解与发展。针灸影像学作为一项基础性研究学科,它的价值在于对传统针刺腧穴理论的可视化观测的评估与验证,正好能够弥补传统针灸学在现代医学领域中关于理论输出方面的短板。本文将从腧穴效应特异性、针灸效应影响因素等针灸脑效应的影像学基础研究现状,以及临床上神经系统疾病、疼痛类疾病、内分泌生殖系统疾病及小儿疾病等治疗作用机制研究现状进行梳理,促进针灸影像学更好的服务于传统中医药理论体系建设。

针灸、中药包联合场效应理疗治疗寒湿痹阻型类风湿性关节炎临床研究

目的:观察针灸、中药包联合场效应理疗用于寒湿痹阻型类风湿性关节炎(RA)康复治疗的临床效果。方法:选取150例寒湿痹阻型RA患者为研究对象,按照随机数字表法分为对照组和研究组,每组75例。对照组给予抗风湿药物治疗及康复护理干预,研究组增加针灸、中药包联合场效应理疗,2组均连续干预4周。比较2组临床疗效,比较2组治疗前后晨僵时间、关节疼痛个数和关节肿胀个数,红细胞沉降率(ESR)、血清C-反应蛋白(CRP)和类风湿因子(RF)含量,疼痛视觉模拟评分法(VAS)评分、Barthel指数量表评分、匹兹堡睡眠质量指数量表(PSQI)评分。结果:研究组治疗总有效率93.33%,高于对照组70.67%(P<0.05)。治疗后,2组晨僵时间均缩短(P<0.05),关节疼痛个数和关节肿胀个数均减少(P<0.05),且研究组晨僵时间短于对照组(P<0.05),关节疼痛个数和关节肿胀个数少于对照组(P<0.05)。治疗后,2组ESR、CRP、RF均下降(P<0.05),且研究组低于对照组(P<0.05)。治疗后,2组VAS、PSQI评分均降低(P<0.05),Barthel指数评分升高(P<0.05),且研究组VAS、PSQI评分低于对照组(P<0.05),Barthel指数评分高于对照组(P<0.05)。结论:针灸、中药包联合场效应理疗可有效提高寒湿痹阻型RA临床疗效,改善RA相关临床症状,下调炎症因子及RF水平,缓解疼痛反应,提高睡眠质量及生活自理能力。