蛋白激酶B受体在大鼠脑星形胶质细胞的表达及其磷酸化

目的：研究大鼠脑星形胶质细胞蛋白激酶B受体（TrkB）的表达及其信号转导通路。方法：用生后2-3dSD大鼠,在无菌条件下取脑,制备细胞悬液,以胶质纤维酸性蛋白（GFAP）鉴定星形胶质细胞;以RT-PCR法研究星形胶质细胞TrkB、ERK1、ERK2 mRNA表达,用蛋白印迹和免疫细胞化学法研究星形胶质细胞TrkB、ERK1、ERK2蛋白表达。用蛋白印迹法检测脑源性神经营养因子（BDNF）作用后的星形胶质细胞p-TrkB。结果：星形胶质细胞的纯度达95%以上,RT-PCR结果显示星形胶质细胞表达TrkB、ERK1、ERK2 mRNA,蛋白印迹及免疫细胞化学法显示星形胶质细胞表达TrkB、ERK1、ERK2蛋白。BDNF作用1h后TrkB磷酸化,K252a可阻止TrkB磷酸化。结论：培养的大鼠星形胶质细胞表达TrkB、ERK1、ERK2;BDNF可使TrkB磷酸化,TrkB与星形胶质细胞信号转导有关。

奥氮平介导环磷酸腺苷反应元件结合蛋白/脑源性神经营养因子/酪氨酸蛋白激酶受体B通路对精神分裂模型大鼠的神经修复作用

目的 探讨奥氮平通过对环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)/脑源性神经营养因子(BDNF)/酪氨酸蛋白激酶受体B(TrkB)通路的影响对精神分裂模型大鼠的神经修复作用。方法 将60只大鼠纳入对照组、模型组、奥氮平低、中、高剂量组,各组均10只。模型组、奥氮平低、中、高剂量组大鼠进行MK-801腹腔注射0.2 mg/(kg·d),对照组注射等量生理盐水。模型建立成功24 h后,奥氮平低、中、高剂量组分别以0.5、1.0、1.5 mg/(kg·d)奥氮平溶液灌胃,对照组、模型组同剂量生理盐水灌胃。按照共济失调和刻板行为标准对大鼠行为学进行评分;Morris水迷宫实验评定大鼠认知功能及学习能力;ELISA法检测大鼠血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)水平;观察海马组织病理学变化;检测海马区细胞凋亡及CREB/BDNF/TrkB通路相关蛋白表达。结果 与对照组比较,模型组大鼠共济失调、刻板行为评分、TNF-α、IL-6表达、细胞凋亡率极显著增加(P<0.01),奥氮平低、中剂量组显著增加(P<0.05)。与对照组比较,模型组大鼠跨越平台次数、目标象限停留时间、CREB、磷酸化CREB(p-CREB)、磷酸化TrkB(p-TrkB)、TrkB、BDNF蛋白相对表达极显著减少(P<0.01),奥氮平低、中剂量组显著减少(P<0.05)。与模型组比较,奥氮平低、中剂量组跨越平台次数、目标象限停留时间显著增加(P<0.05),奥氮平高剂量组极显著增加(P<0.01)。模型组以及奥氮平低剂量组中海马细胞肿大明显、细胞核破碎分裂、固缩,组织排列杂乱;奥氮平中、高剂量组大鼠海马细胞中少见破碎分裂以及核固缩现象,整体组织与对照组大鼠相似。结论 奥氮平对精神分裂症模型大鼠的神经修复作用机制涉及到改善大鼠认知功能受损、保护大鼠海马神经细胞以及激活CREB/BDNF/TrkB信号通路的表达。

何首乌提取物对注意缺陷多动障碍模型大鼠BDNF/TrkB及其下游信号通路的影响

目的观察何首乌提取物对注意缺陷多动障碍(attention deficit hyperactivity disorder,ADHD)模型大鼠的影响并探讨其作用机制。方法选择自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rat,SHR)为ADHD模型,随机分为模型组、托莫西汀组(4.5 mg/kg),何首乌低(0.54 g/kg)、中(1.08 g/kg)、高(2.16 g/kg)剂量组,另设Wistar京都大鼠为正常组,每组10只。各组大鼠每日给予相应药物灌胃,4周后观察各组大鼠行为学,ELISA法检测前额叶皮质中二十二碳六烯酸(docosahexaenoic acid,DHA)含量,Western blot和RT-qPCR法检测前额叶皮质和海马组织中脑源性神经营养因子(brain derived neurotrophic factor,BDNF)/酪氨酸蛋白激酶受体B(tyrosine kinase receptor B,TrkB)及其下游信号通路中生长因子受体结合蛋白2(growth factor receptor-bound protein 2,Grb2)、肌肉RAS癌基因(muscle RAS oncogene,Ras)3的表达水平。结果托莫西汀和何首乌均能有效控制SHR大鼠多动、冲动行为。与正常组比较,模型组大鼠前额叶皮质中DHA含量降低(P<0.05),BDNF、TrkB、Grb2、Ras3蛋白和mRNA表达明显降低(P<0.01),海马中BDNF、TrkB、Grb2、Ras3蛋白和BDNF、Ras3 mRNA表达明显下调(P<0.05)。给药4周后,在前额叶皮质中,何首乌低、中、高剂量组大鼠DHA含量均显著升高(P<0.01),BDNF、TrkB、Grb2、Ras3的mRNA表达水平均显著上升(P<0.01),何首乌低、中剂量组大鼠BDNF、TrkB、Grb2蛋白,高剂量组大鼠BDNF、Grb2、Ras3蛋白表达水平均显著上升(P<0.05);在海马中,何首乌高剂量组大鼠BDNF、TrkB、Grb2、Ras3蛋白和mRNA表达均明显增加(P<0.05)。结论何首乌提取物能够明显改善SHR多动、冲动行为,其机制可能与调节BDNF/TrkB及其下游信号通路有关。

艾司西酞普兰联合氟西汀治疗老年脑卒中后抑郁的疗效及对海马脑源性神经营养因子-酪氨酸蛋白激酶受体B通路的影响

目的探讨艾司西酞普兰联合氟西汀治疗老年脑卒中后抑郁的疗效及对海马脑源性神经营养因子(BDNF)-酪氨酸蛋白激酶受体B(TrkB)通路的影响。方法选取2018年1月至2021年12月武警山东省总队医院收治的脑卒中后抑郁患者89例作为研究对象,按照治疗方法不同分为两组。对照组(n=44)采用氟西汀治疗,观察组(n=45)采用艾司西酞普兰联合氟西汀治疗。比较两组临床疗效,汉密尔顿抑郁量表(HAMD)、Barthel评分,血清BDNF、TrkB水平及成本-效果。结果观察组治疗有效率(91.11%)高于对照组(75.00%)(χ^(2)=4.121,P<0.05)。治疗后,观察组HAMD评分低于对照组,Barthel评分及血清BDNF、TrkB水平高于对照组(P<0.05)。观察组成本-效果低于对照组(P<0.05)。结论艾司西酞普兰联合氟西汀治疗老年脑卒中后抑郁疗效显著,能有效改善患者抑郁症状,提高生活自理能力,调控血清BDNF、TrkB水平,且经济性更佳。

大鼠眼挫伤后视网膜BDNF及其受体TrkB的表达

目的探讨眼挫伤后视网膜脑源性神经营养因子(BDNF)及其受体-酪氨酸蛋白激酶受体B(TrkB)的表达。方法重击法致2个月龄SD雄性大鼠眼挫伤,伤后1、4、7、14d分别取材,冰冻切片,免疫组化检测BDNF和TrkB,并与正常同龄大鼠视网膜BDNF和TrkB相比较。结果正常同龄大鼠视网膜有少量BDNF和TrkB表达;而挫伤眼,在伤后不同的时间有不同程度的BDNF和TrkB表达增加。结论眼挫伤后视网膜BDNF和TrkB表达增加,说明BDNF和TrkB参与眼挫伤后视网膜的修复过程。

食管癌组织中BDNF、TrkB、Ki-67和p63蛋白的表达及临床意义

目的探讨食管癌组织中脑源性神经营养因子(BDNF)、酪氨酸蛋白激酶受体B(TrkB)、增殖细胞核抗原(Ki-67)和肿瘤抑制基因p63蛋白的表达水平及临床意义。方法回顾性分析2018年7月至2021年4月惠州市第三人民医院收治的84例食管癌患者的临床资料。采用免疫组织化学两步法检测癌组织及癌旁正常组织的BDNF、Trk B、Ki-67和p63阳性表达水平,采用单因素分析法分析食管癌组织中BDNF、Trk B、Ki-67、p63蛋白阳性表达水平与临床特征的关系。结果食管癌组织中BDNF、Trk B、Ki-67、p63蛋白阳性表达率分别为73.81%、86.90%、75.00%、84.52%,明显高于癌旁正常组织的9.52%、15.48%、47.62%、27.38%,差异均有统计学意义(P<0.05);低分化、有淋巴结转移、TNMⅢ~Ⅳ期、深层浸润食管癌组织中的BDNF阳性表达率分别为96.15%、91.89%、94.00%、84.91%,明显高于高分化、无淋巴结转移、TNMⅠ~Ⅱ期、浅层浸润的55.88%、59.57%、44.12%、54.84%,低分化、有淋巴结转移、TNMⅢ~Ⅳ期、深层浸润食管癌组织中的Trk B阳性表达率分别为96.15%、100.00%、98.00%、94.34%,明显高于高分化、无淋巴结转移、TNMⅠ~Ⅱ期、浅层浸润的76.47%、76.60%、70.59%、74.19%,差异均有统计学意义(P<0.05);深层浸润食管癌组织中的Ki-67阳性表达率为84.91%,明显高于浅层浸润的58.06%,差异有统计学意义(P<0.05);有淋巴结转移食管癌组织中的p63的阳性表达率为94.59%,明显高于无淋巴结转移的76.60%,差异有统计学意义(P<0.05);BDNF阳性表达与Trk B、Ki-67、p63阳性表达均呈正相关(r=0.415、0.397、0.496,P<0.05)。结论食管癌组织中BDNF、Trk B、Ki-67、p63蛋白的阳性表达水平均较高,且BDNF和Trk B与肿瘤分化度、淋巴结转移、TNM分期、浸润深度相关,Ki-67与浸润深度相关,p63与淋巴结转移相关,它们可能参与了食管癌的产生、发展。

脑源性神经营养因子及其受体在人卵巢的表达与卵泡发育的关系

目的 :研究脑源性神经营养因子 (BDNF)及其受体———酪氨酸蛋白激酶受体B(TrkB)在人卵巢中的表达。初步探讨其与卵泡发育的关系。方法 :取排卵前期人卵巢组织和来自体外受精 胚胎移植 (IVF ET)周期的取卵日卵泡液、人卵巢黄素化壁层颗粒细胞 (hMGLCs)、人卵巢黄素化卵丘颗粒细胞 (hCGLCs)、未受精卵母细胞或未成熟卵母细胞。用免疫组织化学SABC法研究BDNF在人卵巢组织中不同发育阶段卵泡的表达 ,酶联免疫吸附实验 (ELISA)方法检测BDNF在人卵泡液 ,hMGLCs和hCGLCs无血清培养上清液中的表达。用免疫组织化学SABC法研究TrkB在人卵巢组织不同发育阶段卵泡的表达 ,免疫细胞化学SABC法研究TrkB在hMGLCs,hCGLCs和未受精或未成熟卵母细胞的表达 ,Westernblotting方法检测TrkB在hMGLCs和hCGLCs的表达及其差异。结果 :人卵泡液中存在BDNF ,BDNF表达于初级卵泡和次级卵泡的颗粒细胞及窦状卵泡的卵丘颗粒细胞。TrkB表达于初级卵泡和次级卵泡的颗粒细胞、窦状细胞的卵丘颗粒细胞、壁层颗粒细胞及卵母细胞 ,壁层颗粒细胞表达量高于卵丘颗粒细胞。结论 :在人卵巢BDNF及其受体TrkB可能 (通过旁分泌和自分泌的方式 )参与颗粒细胞功能的完成和卵母细胞发育的调控。

BDNF和TrkB在食管癌组织中表达及BDNF对食管癌细胞生物学行为的影响

目的 探讨脑源性神经营养因子(BDNF)和酪氨酸蛋白激酶受体(Trk)B在食管癌组织中的表达,并观察外源性BDNF对食管癌细胞生物学行为的影响.方法 采用免疫组织化学方法检测食管癌和癌旁组织中BDNF、TrkB的表达;以两种食管癌细胞株ECA109、TE-1和正常食管永生化上皮细胞株HET-1A作为实验对象,用RT-PCR和Western印迹法分别检测3种细胞中BDNF、TrkB mRNA和蛋白的表达;CCK8、Transwell实验观察外源性BDNF对食管细胞增殖和侵袭能力的影响.结果 在食管癌组织中BDNF和TrkB的阳性表达率明显高于癌旁组织(P<0.05),并且两者的表达与组织学分级、浸润深度、淋巴结转移和TNM分期有关(P<0.05);外源性BDNF能够促进TE-1细胞的增殖,具有剂量时间依赖性;Transwell实验结果显示80 ng/ml BDNF能够促进TE-1细胞侵袭.结论 BDNF和TrkB与食管癌的发生发展密切相关,BDNF能够提高食管癌细胞的增殖活力,促进细胞的侵袭.

促性腺激素对人卵巢脑源性神经营养因子及其受体表达的影响

目的 :探讨促性腺激素 ( Gn)对脑源性神经营养因子 ( BDNF)及其受体——酪氨酸蛋白激酶受体 B( Trk B)在人卵巢中表达的影响。方法 :体外培养来自体外受精 -胚胎移植 ( IVF- ET)周期的黄体化卵丘颗粒细胞与壁层颗粒细胞 ,ELISA方法检测不同浓度人绝经期促性腺激素 ( h MG)对卵丘颗粒细胞分泌 BDNF的影响 ,Western免疫印迹方法检测不同浓度 h MG对壁层颗粒细胞表达 Trk B的影响。结果 :h MG促进卵丘颗粒细胞 BDNF的分泌 ,增加壁层颗粒细胞 Trk B的表达 ;不同浓度h MG作用的实验组之间表达差异无统计学意义。结论 :Gn促进 BDNF及其受体 Trk B在人卵巢的表达。

半夏生物总碱对癫痫大鼠行为学、脑组织病理学及BDNF/Trk-B表达的影响

目的评价半夏生物总碱(PTA)对癫痫大鼠模型的神经保护作用。方法92只SPF级雄性SD大鼠在首次行为学测试(强迫路线转换测试、旷场活动及自发路线转换测试)后分为正常对照组及模型组。模型组经癫痫造模后再分为癫痫对照组、托吡酯组(0.06g/kg)、PTA低剂量组(0.4g/kg)和PTA高剂量组(0.8g/kg),与正常对照组同时灌胃14d后复查行为学测试。检测海马结构的组织形态改变、苔藓纤维发芽(MFS)现象及BDNF和Trk-B的蛋白表达量。结果与正常对照组比较,癫痫对照组的强迫路线转换行为比和自发路线转换行为比下降(各P<0.05),旷场活动进入格数升高(P<0.001);海马CA3区(P<0.01)、CA1区(P<0.01)及齿状回门区(P<0.05)的神经元数量下降,见苔藓纤维发芽现象(P<0.01);mBDNF和Trk-B表达下降而proBDNF表达上升(各P>0.05)。与癫痫对照组比较,半夏生物总碱提高自发路线转换行为比(0.4g/kg,P>0.05),提高CA3区(0.8g/kg,P<0.01)及齿状回门区(0.8g/kg,P<0.05)的神经元数量,降低苔藓纤维发芽程度(各P<0.05)及mBDNF(各P<0.01)的表达量。结论半夏生物总碱对癫痫大鼠存在神经保护作用,能显著降低海马结构神经元的减损、苔藓纤维发芽的程度及mBDNF的蛋白表达水平,并改善空间工作记忆障碍。

HCC病灶EphB4表达水平与超声造影灌注参数的相关性

背景原发性肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)作为一种富血供肿瘤,其血流灌注变化贯穿于肿瘤的整个病理学过程.超声造影(contrast-enhanced ultrasound,CEUS)通过分析肿瘤组织的血流灌注变化,能客观反映其血管生成状态,继而间接反映其病理生物学特征,有着重要临床意义.目的探讨超声造影灌注参数与原发性肝细胞癌酪氨酸蛋白激酶受体B4(ephrin type-B receptor 4,EphB4)表达水平的相关性.方法选取在我院行手术切除治疗的52例HCC患者作为研究对象.所有患者术前1周内行CEUS检查,测定肝癌组织以及癌旁组织的血流灌注参数:峰值强度(maximum intensity,IMAX)、达峰时间(time to peak,TTP)、流出时间(washout time,WT).术后将肝癌组织以及癌旁组织标本送病理检测,测定各组织EphB4表达水平及微血管密度(microvessel density,MVD).结果肝癌组织IMAX明显高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05);肝癌组织TTP、WT明显短于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05);肝癌组织EphB4表达水平及MVD明显高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05);肝癌组织EphB4表达水平与IMAX呈正相关(r=0.862,P<0.05),与TTP、WT呈负相关(r=-0.765,r=-0.781,均P<0.05).结论CEUS能定量评估HCC微循环血流状态,其灌注参数与EphB4表达水平有一定相关性,可为临床无创性评估EphB4表达水平提供参考.

耳穴电刺激配合声音掩蔽对耳鸣大鼠听觉皮层的CREB蛋白、BDNF及其受体TrkB表达的影响

目的:探讨耳穴电刺激配合声音掩蔽对耳鸣大鼠听觉皮层的环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)、脑源性神经营养因子(BDNF)及其受体酪氨酸蛋白激酶受体B(TrkB)表达的影响。方法:将27只成年雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组和治疗组。模型组及治疗组大鼠采取腹腔注射水杨酸钠诱导制作耳鸣模型;对照组注射0.9%NaCl溶液。造模成功后,治疗组采用耳穴"神门""胰胆"电刺激配合声音掩蔽法治疗,每天1次,治疗15d。采用声音惊吓反应监测系统监测各组大鼠的停顿声音预刺激抑制惊吓反应(GPIAS)及预刺激抑制反应(PPI),以WesternBlot法检测各组大鼠听觉皮层的BDNF及其受体TrkB,CREB和磷酸化CREB(p-CREB)蛋白表达。结果:①与对照组比较,模型组大鼠在12、16、20、28 kHz高频背景声音的GPIAS比值均下降(均P<0.05);与模型组比较,治疗组在12、16、20、28 kHz高频背景声音的GPIAS比值均升高(均P<0.05)。②与对照组比较,模型组BDNF蛋白表达、p-CREB蛋白表达均升高(均P<0.01),TrkB表达升高(P<0.05);治疗组与模型组BDNF和TrkB表达、CREB及p-CREB蛋白表达比较差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论:耳穴电刺激配合声音掩蔽法能改善耳鸣大鼠高频背景声音的GPIAS比值变化,此作用可能与抑制耳鸣大鼠听觉皮层的BDNF/TrkB/CREB信号通路相关蛋白表达下调,进而逆转不良可塑性改变有关。

益肾化浊方对阿尔茨海默病模型大鼠海马区BDNF及其受体TrkB蛋白表达的影响

目的:观察益肾化浊方对阿尔茨海默病(AD)模型大鼠海马区脑源性神经营养因子(BDNF)及其酪氨酸蛋白激酶受体B(Trk B)蛋白表达的影响,探讨益肾化浊方治疗AD的作用途径。方法:雄性SD大鼠随机分为5组,即假手术组、AD模型组、益肾化浊方低、中、高剂量组。参照《大鼠脑立体定位图谱》,选取左侧侧脑室注射聚集态的β-淀粉样蛋白25-35(Aβ25-35),制备AD大鼠模型。造模成功后予益肾化浊方低、中、高剂量(2.8,5.6,11.2 g·kg-1),每日灌胃1次,共灌胃4周。采用Morris水迷宫测试各组大鼠学习记忆能力,Western blot法检测海马区BDNF及其受体Trk B蛋白表达的变化。结果:与假手术组比较,模型组大鼠逃避潜伏期时间延长,穿越平台次数减少,海马区BDNF及其受体Trk B蛋白表达显著下降,差异均有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,益肾化浊方低、中、高剂量组大鼠逃避潜伏期时间缩短,穿越平台次数增加,海马区BDNF及其受体Trk B蛋白表达明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:益肾化浊方可能通过促进AD模型大鼠海马区BDNF及其受体Trk B蛋白的表达,进而改善其学习记忆功能。

芒果苷改善2型糖尿病大鼠糖脂代谢紊乱的作用及机制研究

为探讨芒果苷改善大鼠2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)糖脂代谢紊乱的作用及潜在机制,将T2DM大鼠随机分为模型对照组、二甲双胍组(100 mg/kg)及芒果苷低、中、高剂量组(50、100、200 mg/kg),另设正常对照组,10只/组;灌胃给药,1次/d,持续8周。评价空腹血糖(fasting blood glucose,FBG)、空腹胰岛素(fasting insulin,FINS)、胰岛素抵抗指数(insulin resistance index,HOMA-IR)及血清游离脂肪酸(free fatty acid,FFA)、甘油三酯(triglyceride,TG)、总胆固醇(total cholesterol,TC)等指标,并检测肝组织谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)、过氧化氢酶(catalase,CAT)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)及胰岛素受体底物1(insulin receptor substrate 1,IRS-1)/蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)/葡萄糖转运蛋白4(glucose transporter 4,Glut4)信号通路相关m RNA和蛋白表达。结果发现,芒果苷可以改善T2DM大鼠毛色、活动及精神等一般状态,减缓体重下降趋势;与模型对照组比较,经芒果苷治疗8周后,各治疗组大鼠FBG、FINS、HOMA-IR及血清FFA、TG、TC含量均显著或极显著降低(P<0.05,P<0.01);各治疗组大鼠肝组织GSH-Px、CAT、SOD活力显著或极显著高于模型对照组(P<0.05,P<0.01),而MDA含量极显著降低(P<0.01);与模型对照组比较,芒果苷低、中、高剂量组大鼠肝组织IRS-1 mRNA表达无显著差异(P>0.05),Akt、Glut4 mRNA及p-IRS-1(Tyr)、Akt、Glut4蛋白表达显著或极显著增加(P<0.05,P<0.01),而p-IRS-1(Ser)蛋白表达显著或极显著降低(P<0.05,P<0.01)。上述结果表明,芒果苷具有改善T2DM大鼠糖脂代谢紊乱的作用,该作用与抗氧化应激及调节IRS-1/Akt/Glut4信号通路有关。

IGF1信号通路IGF1 IGF1R及AKT在卵巢癌顺铂耐药中表达的研究

目的:检测IGF信号通路关键蛋白IGF1、IGF1R及AKT在卵巢癌患者血清及组织中的表达。方法:ATP-TCA法对卵巢癌标本进行药敏试验,ELISA法检测顺铂耐药和敏感组患者血清中IGF1、IGF1R及P-AKT的表达,免疫组织化学检测卵巢癌组织中IGF1、IGF1R、Akt的表达。自患者完成化疗出院后每个月复查CA125,如CA125有异常则行影像学检查,随访时间1年。结果:IGF1、IGF1R及AKT在卵巢癌顺铂耐药组的表达显著高于敏感组(P=0.000 1),免疫组织化学结果显示顺铂耐药组和敏感组IGF1、IGF1R及AKT的表达相比较差异有统计学意义(P<0.05)。随访顺铂敏感组24例中有18例患者超过1年CA125处于正常值;6例患者超过半年CA125处于正常值;耐药组中有16例患者化疗结束后半年内CA125上升高于正常值,彩超或MRI检查提示有复发病灶。结论:IGF信号通路关键蛋白可能参与卵巢癌顺铂耐药,IGF1可能作为卵巢癌靶向治疗的新靶点。

通督醒神针法对血管性痴呆模型大鼠海马神经再生的影响

目的:探讨通督醒神针法对血管性痴呆模型大鼠海马神经再生的影响。方法:将SD雄性大鼠随机分为空白组、模型组、针刺组、药物组。采用双侧颈总动脉结扎法建立血管性痴呆模型。针刺组给予通督醒神针刺法,药物组予盐酸多奈哌齐灌胃治疗。免疫组化法检测脑源性神经生长因子(BDNF)与其酪氨酸蛋白激酶受体B(TrkB)的蛋白表达情况。结果:与空白组比较,模型组BDNF与TrkB蛋白表达明显升高(P<0.01);与模型组比较,针刺组、药物组的BDNF与TrkB蛋白表达明显升高(P<0.05);与药物组比较,针刺组的BDNF与TrkB蛋白表达无明显升高(P>0.05)。结论:通督醒神针法能上调血管性痴呆模型大鼠BDNF与TrkB的蛋白表达水平,可以促进神经细胞再生,具有防治血管性痴呆的功能。

温胆汤对精神分裂症模型大鼠海马TrKB、CREB表达的影响

目的:探讨温胆汤对精神分裂症(SCZ)模型大鼠海马组织酪氨酸蛋白激酶受体B(TrKB)、环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)表达变化的影响。方法:将54只大鼠随机分为正常组、模型组、温胆汤高、中、低剂量组和氯氮平组,每组9只。各组大鼠均以灌胃的方式给药21 d,温胆汤高、中、低剂量组的给药剂量分别为40、20、10 g·kg^(-1)温胆汤药液,氯氮平组为0.02 g·kg^(-1)氯氮平原液,正常组和模型组则灌胃同等容量的生理盐水。在末次给药2 h后,除正常组外,对其余5组大鼠予以腹腔注射0.6 mg·kg^(-1)地卓西平马来酸盐(MK-801),建立SCZ模型。通过旷场实验观察大鼠的自发活动水平,苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠海马CA1区病理形态变化,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测海马组织TrKB、磷酸化(p)-TrKB、CREB和p-CREB的蛋白表达,免疫组化检测海马CA1区TrKB、CREB的蛋白表达,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测海马组织TrKB、CREB mRNA表达水平。结果:与正常组比较,模型组大鼠自发活动水平显著增加(P<0.01),海马CA1区神经元细胞排列松散紊乱,部分神经元细胞变性,海马组织TrKB、p-TrKB、CREB、p-CREB蛋白、海马CA1区TrKB、CREB蛋白及海马组织TrKB、CREB mRNA表达均明显降低(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,温胆汤各组大鼠自发活动水平显著降低(P<0.01),海马CA1区神经元细胞排列相对整齐、胞体形态较为规则,神经元变性等现象较少;温胆汤中、低剂量组海马组织TrKB蛋白表达明显升高(P<0.05),温胆汤各剂量组海马组织p-TrKB、CREB、p-CREB蛋白表达明显升高(P<0.05);温胆汤各剂量组海马CA1区TrKB蛋白表达明显升高(P<0.05,P<0.01),温胆汤中、低剂量组海马CA1区CREB蛋白表达显著升高(P<0.01);温胆汤高、低剂量组海马组织TrKB mRNA表达明显升高(P<0.05,P<0.01),温胆汤中、低剂量组CREB mRNA表达明显升高(P<0.05,P<0.01)。结论:温胆汤可以通过降低SCZ模型大鼠自发活动水平、改善海马神经元病理损伤、增加TrKB、p-TrKB、CREB、p-CREB的表达,从而预防SCZ及其认知障碍的发生、发展。

过表达miR-200c对人髓核细胞凋亡的影响及其机制

目的观察过表达miR-200c对人髓核细胞(HNPCs)凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制。方法体外培养HNPCs,将HNPCs分为观察组、阴性组和空白组,观察组转染hsa-miR-200c mimics,阴性组转染阴性对照mimics-NC,空白组未经任何干预。转染后24 h,采用real-time PCR法检测3组细胞miR-200c的表达,流式细胞仪测算细胞凋亡率,ELISA平板计数法检测Caspase3/7活性,Western blotting法检测3组细胞酪氨酸蛋白激酶受体B(Trk B)蛋白。结果观察组、阴性组和空白组细胞miR-200c相对表达量分别为8.11±0.21、1.07±0.04、0.99±0.05,细胞凋亡率分别为23.6%±3.1%、1.5%±0.2%、1.6%±0.1%,Caspase3/7活性分别为299.237±24.245、119.476±10.657、117.317±11.317,Trk B蛋白相对表达量分别为0.48±0.11、0.50±0.12、0.15±0.06,观察组与阴性组、空白组比较,P均<0.01。结论过表达miR-200c能够促进HNPCs的凋亡,其机制可能与调控Trk B的表达有关。

磨牙缺失对幼年大鼠海马CA1区神经元及BDNF、TrkB表达影响的研究

目的探讨磨牙缺失对幼年大鼠海马CA1区神经元及脑源性神经营养因子(BDNF)、酪氨酸蛋白激酶B受体(TrkB)表达的影响。方法 50只雄性SD大鼠,随机分为五组,每组10只,分别为正常对照组(A组)、3颗磨牙拔除组(B组)、6颗磨牙拔除组(C组)、9颗磨牙拔除组(D组)、12颗磨牙拔除组(E组),8周后处死取大鼠海马组织,分别采用HE染色法和免疫组织化学染色法,观察各组大鼠海马CA1区神经细胞结构的变化及BDNF、TrkB蛋白的表达情况。结果 (1)A组及B组海马CA1区神经组织形态结构正常,基本无病理性改变;C、D、E组出现细胞层数的减少和细胞排列稀疏、紊乱。(2)随着各组中大鼠磨牙缺失数目的增加,大鼠海马CA1区的BDNF、TrkB的表达量呈现降低趋势,与A组相比,B组BDNF、TrkB蛋白的阳性细胞表达无明显变化(P>0.05),而C、D、E组BDNF、TrkB蛋白阳性细胞表达差异有统计学意义(P<0.05)。结论较多数目的磨牙缺失可以导致幼年大鼠海马CA1区神经细胞损伤及BDNF、TrkB蛋白表达的减少。

活血通督汤对脊髓损伤后BDNF/TrkB信号表达的影响

目的:观察活血通督汤对脊髓损伤后脑源性神经营养因子/酪氨酸蛋白激酶受体B(BDNF/TrkB)信号表达的作用,探讨其对脊髓损伤后肢体运动功能恢复的作用和机制。方法:54只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、活血通督汤组,每组18只,造模后每日行BBB肢体运动功能评分,干预7d后取材,采用尼氏染色观察神经元形态,电镜观察脊髓微观结构,免疫荧光定位BDNF阳性细胞,Western blot检测BDNF、TrkB和p-TrkB蛋白表达。结果:干预后第3天起,活血通督汤组BBB评分显著高于模型组(P<0.05);尼氏染色和电镜提示活血通督汤可改善脊髓损伤后神经元和髓鞘的结构和形态;活血通督汤可促进脊髓损伤后脊髓前角细胞分泌BDNF,与模型组比较,差异具有统计学意义(P<0.05);活血通督汤可显著促进BDNF蛋白和p-TrkB蛋白表达(P<0.01),但对TrkB蛋白表达无显著作用。结论:活血通督汤促进脊髓损伤后脊髓前角细胞分泌BDNF,促进TrkB受体磷酸化,从而上调BDNF/TrkB信号表达,促进脊髓损伤后神经元存活、再生和轴突再生、再髓鞘化。