白藜芦醇抑制蛋白激酶B磷酸化缓解大鼠肌成纤维细胞形成及肾纤维化

目的探讨白藜芦醇对大鼠肌成纤维细胞形成及肾纤维化的影响。方法制备大鼠单侧输尿管梗阻(UUO)模型,白藜芦醇干预组于手术当天ig给予白藜芦醇20 mg·kg^(-1),术后第7天取其梗阻侧肾脏进行检测。HE和Masson染色分别观察肾组织病理改变和纤维化程度;免疫组织化学染色检测肌成纤维细胞标志物α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达。体外分别培养肾小管上皮细胞(NRK-52E)和成纤维细胞(NRK-49F),各分为3组:细胞对照组,转化生长因子β_1(TGF-β_1)5μg·L^(-1)诱导组和TGF-β_15μg·L^(-1)+白藜芦醇10或100 mmol·L^(-1)干预组。细胞免疫荧光染色检测α-SMA、细胞外基质成分(Ⅲ型胶原)和上皮细胞标志物E-钙黏着蛋白的表达;Western蛋白印迹法检测细胞或组织中蛋白激酶B(AKT)磷酸化。结果与假手术组相比,HE染色显示UUO模型组肾间充质面积扩大(P<0.01),Masson染色显示UUO模型组胶原累积明显(P<0.05);白藜芦醇干预组上述改变均被抑制(P<0.05),α-SMA阳性肌成纤维细胞的形成亦被抑制(P<0.05)。体外应用TGF-β_1刺激后,与细胞对照组相比,TGF-β_15μg·L^(-1)诱导组α-SMA表达增加(P<0.01),提示细胞表型转化为肌成纤维细胞数量明显增加,同时伴随着Ⅲ型胶原过度累积(P<0.01);白藜芦醇干预组上述改变被抑制(P<0.05)。进一步研究发现,在肌成纤维细胞产生过程中,AKT磷酸化水平增加(P<0.05);白藜芦醇干预后,体内外AKT磷酸化升高均被抑制(P<0.01)。结论白藜芦醇可能通过拮抗AKT的磷酸化,抑制TGF-β_1所诱导的NRK-52E和NRK-49F表型转化为肌成纤维细胞,进而减少基质累积,缓解肾纤维化。

胰岛素和表皮生长因子刺激引起的蛋白激酶B磷酸化与PTEN突变的关系

目的研究第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因(PTEN)突变对人鼻咽癌细胞系CNE-1中蛋白激酶B(Akt)的磷酸化的影响。方法 CNE-1细胞用含100 m L/L胎牛血清RPMI1640培养基培养,并分别转染野生型PTEN(wt PTEN)质粒、突变型PTEN C124S质粒和突变型PTEN G129E质粒。各组细胞加刺激前用无血清RPMI1640培养基饥饿过夜,用0.15 IU/m L胰岛素或0.3μg/m L重组人表皮生长因子(rh EGF)刺激,Western blot法检测Akt的磷酸化水平。结果胰岛素和rh EGF刺激均可导致CNE-1细胞Akt信号激活;wt PTEN可抑制胰岛素或rh EGF刺激引起的Akt信号激活;PTEN C124S突变体可激活胰岛素刺激引起的Akt信号,但不可激活rh EGF刺激引起的Akt信号;PTEN G129E突变体抑制胰岛素刺激引起的Akt信号激活。结论 wt PTEN可抑制胰岛素或rh EGF刺激引起的Akt信号激活,但PTEN C124S和G129E突变体不能一致性激活Akt信号表达。这表明PTEN基因突变可能与Akt信号表达无关。

子宫内膜腺癌组织中磷酸化蛋白激酶B和PTEN蛋白的表达

目的:探讨子宫内膜腺癌组织中磷酸化蛋白激酶B(P-AKT)和PTEN蛋白的表达。方法:应用免疫组化SP法检测12例增生期子宫内膜、42例子宫内膜增殖症[包括15例单纯型增生(SH)、19例复合型增生(CH)和8例非典型增生(AH)]及46例子宫内膜腺癌组织中P-AKT和PTEN蛋白的表达情况。结果:增生期子宫内膜、子宫内膜增殖症和子宫内膜腺癌中PTEN阳性表达率分别为91.7%、42.9%和37.0%,差异有统计学意义(χ2=11.64,P=0.003),增生期子宫内膜高于子宫内膜增殖症和子宫内膜腺癌;PTEN在SH、CH和AH阳性表达率分别为73.3%、26.3%和25.0%,差异有统计学意义(P=0.014),SH高于CH和AH。P-AKT在正常子宫内膜、子宫内膜增殖症和子宫内膜腺癌中的阳性表达率分别为25.0%、57.1%和87.0%,差异有统计学意义(χ2=19.37,P<0.001),子宫内膜腺癌高于增生期子宫内膜和子宫内膜增殖症;SH、CH和AH组织中P-AKT的阳性表达率分别为26.7%,68.4%和87.5%,差异有统计学意义(χ2=5.28,P=0.027),SH和CH低于AH。PTEN表达与子宫内膜腺癌的组织学分级有关(P<0.001),与临床分期无关(χ2=0.06,P=0.89)。P-AKT的表达与子宫内膜癌的临床分期(χ2=0.20,P=0.82)和组织学类型无关(χ2=0.94,P=0.32)。子宫内膜腺癌组织中PTEN与P-AKT表达关系密切(rP=-0.368,χ2=6.69,P=0.012)。结论:PTEN基因可能通过影响AKT通路参与子宫内膜腺癌的发生。

磷酸化蛋白激酶B和p27在宫颈癌组织的表达及意义

目的:探讨宫颈癌组织中磷酸化蛋白激酶B(P-PKB)和p27蛋白的表达及其在子宫颈癌发生、发展中的意义。方法:采用免疫组化SP法检测51例宫颈癌组织,36例宫颈上皮内瘤变(CIN)组织和20例正常宫颈组织中P-PKB蛋白和P27蛋白的表达,并分析它们与宫颈癌临床病理因素的关系。结果:宫颈癌组织中P-PKB的阳性表达率(74.5%)明显高于CIN组(52.8%)和正常宫颈组(15%)(P<0.05),P-PKB蛋白的表达随宫颈癌分化程度下降、临床分期升高而升高(P<0.05),在无淋巴结转移的宫颈癌中的表达明显低于有淋巴结转移癌(P<0.05)。p27蛋白在宫颈癌组织中的阳性表达率(49.0%)明显低于CIN组(80.1%)和正常宫颈组(90.0%)(P<0.05),p27蛋白的表达随宫颈癌分化程度下降、临床分期升高而降低(P<0.05),在无淋巴结转移的宫颈癌中的表达明显高于有淋巴结者(P<0.05)。宫颈癌中P-PKB蛋白表达与p27蛋白表达呈负相关(r=-0.326,P<0.05)。结论:P-PKB蛋白在宫颈癌中过表达,p27蛋白在宫颈癌中表达明显降低,与P-PKB蛋白表达呈负相关,P-PKB蛋白可能通过抑制p27蛋白的表达,促进肿瘤的发生发展。

甲状腺乳头状癌中磷酸化蛋白激酶B和PTEN蛋白的表达及意义

目的分析磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)和PTEN蛋白在甲状腺乳头状癌中的表达及意义。方法应用免疫组化PV-6001/6002两步法检测40例甲状腺乳头状癌手术切除标本和20例癌旁正常甲状腺组织中p-AKT和PTEN蛋白的表达,分析二者与临床病理特征的关系。结果 p-AKT蛋白在甲状腺乳头状癌中阳性表达率显著高于癌旁正常组织,差异有统计学意义(P<0.01);而PTEN蛋白在甲状腺乳头状癌中阳性表达率显著低于癌旁正常组织的阳性表达率,差异有统计学意义(P<0.01)。不同临床TNM分期、有无浆膜浸润、有无淋巴结转移的患者,癌组织中p-AKT和PTEN蛋白的阳性表达率比较,差异均有统计学意义(P<0.05);而不同年龄、肿瘤直径的患者,癌组织中二者的阳性表达率间差异无统计学差异(P>0.05)。p-AKT与PTEN蛋白的表达呈负相关(r=-0.325,P<0.05)。结论 p-AKT和PTEN蛋白的表达改变与甲状腺乳头状癌的形成有一定关系;二者表达状况的检测对判断甲状腺乳头状癌的恶性程度及预后具有重要的临床意义。

雄激素受体、磷酸化蛋白激酶B在三阴性乳腺癌中的表达及意义

目的探讨雄激素受体（AR）、磷酸化蛋白激酶B（P-PKB）在三阴性乳腺癌中的表达及意义。方法收集2012年3月．2015年3月惠州市中心人民医院收治的乳腺癌患者115例，其中三阴性乳腺癌54例，非三阴性乳腺癌61例。采用免疫组化S-P法检测AR、P—PKB表达。比较三阴性乳腺癌和非三阴性乳腺癌AR、P—PKB表达阳性率，分析三阴性乳腺癌组织中AR和P—PKB表达与临床病理参数的关系。结果三阴性乳腺癌AR阳性表达率明显低于非三阴性乳腺癌（P〈0．05）：三阴性乳腺癌P—PKB阳性表达率明显高于非三阴性乳腺癌（P〈0．05）；三阴性乳腺癌组织中AR的表达与临床分期和淋巴结转移情况呈显著负相关（r=-0．295、-0．311，P〈0．05）；三阴性乳腺癌组织中P—PKB的表达与临床分期和淋巴结转移情况呈显著正相关（r=0．332、0．329，P〈0．05）。结论AR、P—PKB在三阴性乳腺癌的表达具有重要的意义，可以作为预后的重要指标，并有望成为未来治疗三阴性乳腺癌的新靶点。

大鼠心肌肥厚中磷酸化磷脂酞肌醇3-激酶和磷酸化蛋白激酶B蛋白表达与心肌纤维化的关系

目的:研究异丙肾上腺素致大鼠心肌肥厚中磷酸化磷脂酞肌醇3-激酶(p-PI3K)和磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)表达与心肌纤维化的关系,为探讨大鼠心肌肥厚中心肌纤维化的信号转导机制和改善心功能提供形态学资料.方法:健康成年SD大鼠皮下注射异丙肾上腺素,造成心肌肥厚模型;取心肌组织,常规石蜡切片,Masson染色,观察心肌组织的成纤维细胞变化;免疫组织化学显色和免疫荧光显色,检测p-PI3K和p-Akt的表达及分布.利用图像分析软件对p-PI3K和p-Akt的表达结果进行定量分析.结果:大鼠实验组的心肌肥厚指标明显高于对照组;Masson染色结果显示实验组心肌细胞较对照组心肌细胞直径明显变大,细胞间距变大,细胞间纤维细胞增多,呈现区域性纤维化;免疫组织化学检测显示,实验组心肌组织p-PI3K和p-Akt蛋白表达面积和平均光密度较对照组高,两者差异有统计学意义;免疫荧光检测实验组心肌组织p-PI3K和p-Akt蛋白表达较对照组高.结论:p-PI3K和p-Akt蛋白表达增高可能在心肌纤维化的发生和发展过程中起重要作用.

磷酸化蛋白激酶B在子宫颈癌组织中的表达及意义

目的探讨子宫颈癌组织中磷酸化蛋白激酶B(p-PKB)的表达及其在子宫颈癌发生、发展中的意义。方法采用免疫组织化学SP法检测51例子宫颈癌组织、36例子宫颈上皮内瘤变(CIN)组织和20例正常子宫颈组织中p-PKB蛋白的表达,并分析其与子宫颈癌临床病理因素的关系。结果p-PKB在子宫颈癌组织中的阳性表达率明显高于CIN组织和正常子宫颈组织(P<0.05)。p-PKB蛋白的表达与子宫颈癌组织学分级、临床分期及有无淋巴结转移有关(P<0.05)。结论p-PKB蛋白在子宫颈癌中过表达可能参与子宫颈癌的发生。

不良心理应激对人卵巢癌荷瘤裸鼠皮下移植瘤生长及表皮生长因子受体、磷酸化蛋白激酶B、血管内皮生长因子蛋白表达的影响

目的通过观察不良心理应激人卵巢癌荷瘤裸鼠皮下移植瘤的体积、重量和瘤体组织中表皮生长因子受体(EGFR)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达情况的差异,探讨其对卵巢癌生长的影响及可能的分子机制。方法购置4~6周龄的雌性BALB/c裸鼠,称重,随机分两组,每组12只。A组:荷瘤组皮下移植人卵巢癌组织瘤块,不给予应激; B组:荷瘤+应激组皮下移植人卵巢癌组织瘤块,给予应激。定期测量皮下移植瘤的体积,结束应激实验后的第2天,处死全部组别(A组、B组)裸鼠,剥离肿瘤予以称重,利用免疫组织化学及Western blotting方法对A、B两组皮下移植瘤组织中的EGFR、p-Akt、VEGF蛋白表达情况进行检测。结果荷瘤+应激组皮下移植瘤体积及其重量显著高于荷瘤组(P <0. 01);免疫组织化学实验提示,荷瘤+应激组中皮下移植瘤组织中的EGFR、p-Akt、VEGF蛋白表达水平高于荷瘤组(P <0. 05); Wester blotting提示,荷瘤+应激组皮下移植瘤组织中EGFR、p-Akt、VEGF蛋白表达水平显著高于荷瘤组(P <0. 01)。结论不良心理应激可能通过EGFR及其介导的下游PI3K/Akt信号通路来促进卵巢癌的发生、发展。

磷酸化蛋白激酶B、糖类抗原125在卵巢癌中的表达及与临床特征的关系研究

目的探讨磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、糖类抗原125(CA125)在卵巢癌组织中的表达及与临床特征的关系。方法选取102例卵巢上皮癌组织为卵巢癌组,45例卵巢上皮良性肿瘤组织为良性组,32例正常卵巢组织为对照组,应用免疫组织化学法检测3组标本中p-AKT、CA125阳性表达情况,并分析p-AKT、CA125阳性表达与卵巢癌患者临床特征的关系。结果卵巢癌组组织中p-AKT、CA125阳性表达率分别高于良性组与对照组,良性组组织中CA125阳性表达率高于对照组,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。国际妇产科联盟(FIGO)分期为Ⅲ~Ⅳ期、病理分级为G3级、有淋巴结转移的卵巢癌患者卵巢癌组织中p-AKT阳性表达率分别高于FIGO分期为Ⅰ~Ⅱ期、病理分级为G1~2级、无淋巴结转移患者,差异均有统计学意义(P﹤0.05);FIGO分期为Ⅲ~Ⅳ期、有淋巴结转移的卵巢癌患者卵巢癌组织中CA125阳性表达率分别高于FIGO分期为Ⅰ~Ⅱ期、无淋巴结转移患者,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。结论p-AKT、CA125在卵巢癌组织中的表达水平升高,均可能参与了卵巢癌的发生及发展。

磷酸化蛋白激酶B与子宫内膜腺癌恶性生物学行为的关系

目的检测磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)在子宫内膜腺癌中的表达水平,初步探讨p-Akt与肿瘤恶性生物学行为的关系。方法收集42例子宫内膜腺癌和22例正常增生期子宫内膜组织标本。采用免疫组织化学法检测p-Akt蛋白在以上组织标本中的表达水平及子宫内膜腺癌中的增殖细胞核抗原标记指数(PCNA-LI)。结果免疫组化分析显示p-Akt蛋白在增生期子宫内膜和子宫内膜腺癌中表达的阳性率分别为(22.7±3.4)%和(54.8±4.8)%,其在子宫内膜腺癌中的表达水平显著高于增生期子宫内膜(P<0.01)。子宫内膜腺癌p-Akt表达-、+、++、+++的各组中,PCNA-LI分别为(11.01±2.12)%、(21.20±4.96)%、(28.10±2.01)%和(42.65±8.14)%,其与p-Akt表达水平密切相关(r=0.726 8,P<0.01)。在临床肌层浸润>1/2及有淋巴结转移子宫内膜腺癌组织中p-Akt表达水平分别显著高于无肌层浸润(P<0.05)及无淋巴结转移(P<0.01)。结论 p-Akt蛋白特异性过表达于子宫内膜腺癌中,与子宫内膜腺癌的增殖、侵袭及转移等恶性生物学行为密切相关。

老龄大鼠肝脏和骨骼肌胰岛素受体底物-1及磷酸化蛋白激酶B的表达

目的探讨老龄对胰岛素受体底物-1(IRS-1)/磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(PKB,p-Akt)在肝脏和骨骼肌中表达的影响,为老年糖尿病早期干预方法提供实验依据。方法3种不同月龄SD大鼠(6、12、20～24月龄),腹腔麻醉后抽心血查血糖、血脂、游离脂肪酸(FFA);分离肝脏、骨骼肌,免疫组化观察IRS-1与p-Akt在不同月龄大鼠肝脏和骨骼肌中的表达。结果20～24月龄鼠血浆中FFA水平高于6月龄大鼠〔(419.94±93.93)vs(256.22±73.93)mmol/L,P<0.05〕;但空腹血糖及血脂水平与其它月龄大鼠相当;在肝脏或骨骼肌均未发现IRS-1表达水平的显著变化(P>0.05);p-Akt在肝细胞中的表达减少,与6月龄和12月龄组相比差异有统计学意义(P<0.05);而在骨骼肌细胞中,3组动物p-Akt表达无明显差异。结论FFA水平增高是自然衰老大鼠胰岛素抵抗的显著特征,与此相关的PI3K/Akt信号通路障碍早于血糖异常出现;Akt的磷酸化障碍可能是早期干预的靶点。Akt的磷酸化障碍主要在肝细胞中发现,肝脏可能是衰老相关胰岛素信号通路异常的主要部位。

胃肠间质瘤组织中第10号染色体缺失的磷酸酶张力蛋白同源物基因蛋白和磷酸化蛋白激酶B蛋白的表达及其对患者预后的影响

目的探讨胃肠间质瘤组织中第10号染色体缺失的磷酸酶张力蛋白同源物基因(PTEN)、磷酸化蛋白激酶B(p-PKB,又称p-Akt)表达水平以及其对患者预后的影响。方法选取行手术治疗的胃肠间质瘤患者116例为研究组,选取116例相对应的瘤旁正常胃肠道组织作为对照组。采用免疫组织化学法测定2组PTEN、p-Akt的表达水平;分析PTEN、p-Akt表达水平与胃肠间质瘤临床病理特征的关系;分析PTEN、p-Akt表达水平与胃肠间质瘤患者无复发生存状况的关系;探讨影响胃肠间质瘤患者预后的因素。结果PTEN在研究组中的阳性表达率低于对照组,而p-Akt在对照组中的阳性表达率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。PTEN的低表达、p-Akt的高表达与胃肠间质瘤组织的核分裂象、危险度分级、浸润深度有关(P<0.05)。PTEN阳性胃肠间质瘤患者平均无复发生存时间长于PTEN阴性胃肠间质瘤患者,差异有统计学意义(P<0.05);p-Akt阴性胃肠间质瘤患者平均无复发生存时间长于p-Akt阳性胃肠间质瘤患者,差异有统计学意义(P<0.05)。病理性核分裂象、浸润深度、PTEN阴性表达、p-Akt阳性表达是影响胃肠间质瘤患者预后的影响因素(P<0.05)。结论胃肠间质瘤组织中PTEN、p-Akt的表达情况与患者预后关系密切,可为评估患者预后提供参考。

卵巢上皮性癌组织中磷酸化蛋白激酶B、PTEN蛋白表达及意义

目的探讨磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)和与张力蛋白同源的第10染色体丢失的磷酸酶基因(PTEN)在上皮性卵巢癌发生发展中的作用。方法采用免疫组织化学方法检测10份正常卵巢组织(正常组)、20份卵巢良性上皮性肿瘤(良性组)、60份卵巢上皮性癌组织(卵巢癌组)中p-AKT和PTEN表达。结果 p-AKT在正常组、良性组阳性表达率显著低于卵巢癌组;PTEN蛋白在卵巢癌组表达缺失,显著低于正常组、良性组,P均<0.01。p-AKT和PTEN蛋白表达与卵巢癌临床分期、组织学分级、淋巴结转移和远处转移显著相关(P均<0.01),与年龄、病理类型、腹水无关;两者在卵巢癌组织中的表达呈负相关(r=-0.497,P<0.001)。结论 p-AKT过表达伴随PTEN表达缺失参与了卵巢癌的发生发展。

磷酸化蛋白激酶B在子宫内膜癌组织中的表达及意义

目的:探讨子宫内膜癌组织中磷酸化蛋白激酶B(P-PKB)蛋白的表达及其在子宫内膜癌发生、发展中的意义。方法:采用免疫组化SP法检测51例子宫内膜癌组织、36例子宫内膜不典型增生组织和20例正常子宫内膜组织中P-PKB蛋白的表达,并分析其与子宫颈癌临床病理因素的关系。结果:P-PKB在子宫颈癌组织中的阳性表达率明显高于子宫内膜不典型增生组和正常子宫内膜组织组(P<0.05)。P-PKB蛋白的表达与子宫内膜癌组织学分级、临床分期及有无淋巴结转移有关(P<0.05)。结论:P-PKB蛋白在子宫内膜癌中过表达,可能与子宫内膜癌的发生、发展有关。

染料木黄酮通过下调磷酸化蛋白激酶B减轻小鼠动脉粥样硬化

目的:检测染料木黄酮对小鼠颈总动脉组织磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)表达水平的影响,并探究染料木黄酮对于小鼠颈总动脉粥样硬化的预防及治疗作用。方法:实验选用50只6周龄的SPF级纯种雄性C57BL6小鼠,随机分为5组,分别为空白对照组、模型组、阿托伐他汀钙组、低浓度染料木黄酮组和高浓度染料木黄酮组。颈总动脉套管后喂养14周处死小鼠,血清检测血脂4项,H-E染色观察形态学变化,油红O染色观察脂滴含量,蛋白质印迹和免疫荧光检测p-Akt蛋白含量。结果:空白对照组,高、低浓度染料木黄酮组和阿托伐他汀钙组的血脂水平明显低于模型组。组织病理学观察表明,除模型组外,其余各组颈动脉结构均无斑块形成,且脂滴含量较少。蛋白质印迹和免疫荧光检测分析显示,模型组p-Akt表达水平显著高于染料木黄酮组、阿托伐他汀钙组和空白对照组。结论:染料木黄酮可通过下调p-Akt进而减轻小鼠颈总动脉粥样硬化的形成。

磷酸化蛋白激酶B、脂肪酸合成酶、血管内皮生长因子在脑膜瘤组织中的表达及意义

目的探讨磷酸化蛋白激酶B(phosphorylated protein kinase B,p-AKT)、脂肪酸合成酶(fatty acid synthase,FASN)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)在脑膜瘤组织中的表达及意义。方法选取2010年3月至2015年9月在中国康复研究中心北京博爱医院确诊为脑膜瘤患者的活检组织标本52例作为脑膜瘤组,产生20例正常脑膜组织标本为对照组,采用免疫组织化学法检测两组切片组织中p-AKT、FASN、VEGF的表达。结果脑膜瘤组织中p-AKT、FASN、VEGF阳性表达率均明显高于正常脑膜组织,且Ⅱ级脑膜瘤组织中p-AKT、FASN、VEGF的表达强度均高于Ⅰ级脑膜瘤组织,差异有显著性(P<0.05);脑膜瘤复发患者FASN与VEGF表达强度均高于非复发患者(P<0.05),复发与非复发患者p-AKT表达强度比较差异无显著性(P>0.05)。结论在脑膜瘤组织中p-AKT、FASN、VEGF均为高表达且随着脑膜瘤等级的升高其表达强度增强,FASN和VEGF高表达者的复发可能性较大,可作为脑膜瘤风险评估的重要指标。

电针对模拟失重小鼠比目鱼肌磷酸化蛋白激酶B蛋白及mRNA表达的影响

目的观察电针对模拟失重小鼠比目鱼肌磷酸化蛋白激酶B(p Akt)蛋白及mRNA表达的影响。方法将28只C57小鼠随机分为4组,即正常对照组、模型组、预防电针组和同步电针组,每组各7只。正常对照组常规饲养28 d;模型组第1~14 d常规饲养,第15~28 d尾部悬吊造模;预防电针组第1~14 d常规饲养并每日行电针干预,第15~28 d尾部悬吊造模;同步电针组第1~14 d常规饲养,第15~28 d尾部悬吊造模并每日行电针干预。28 d后分别取4组小鼠两侧比目鱼肌,蛋白质印迹法(Western blot法)检测小鼠比目鱼肌p Akt、总Akt蛋白表达,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)法检测p Akt mRNA表达。结果与正常对照组相比,模型组p Akt蛋白及mRNA表达均明显降低(P<0.05);与模型组相比,同步电针组和预防电针组p Akt蛋白及mRNA表达均明显增加(P<0.05),但仍低于正常对照组(P<0.05);同步电针组与预防电针组之间p Akt蛋白及mRNA表达无明显差异(P>0.05)。4组之间比目鱼肌总Akt蛋白表达比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论电针可能对参与失重性骨骼肌萎缩的p Akt蛋白及mRNA表达有一定干预作用。

SETD5介导AKT1磷酸化调控结肠癌细胞的迁移和5-FU敏感性

目的:探讨含SET结构域蛋白5(SETD5)对结肠癌细胞增殖、迁移和对5-氟尿嘧啶(5-FU)药物敏感性的影响及机制。方法:常规培养结肠癌细胞,用Lipofectamine 2000将siSETD5-NC、si-SETD5-1~3质粒转染至HT-29细胞中,将其分为对照组(未处理)、si-SETD5-NC组、si-SETD5组和si-SETD5+SC79组,si-SETD5+SC79组HT-29细胞转染质粒的同时用10µmol/L SC79处理。qPCR法检测NCM460、HT-29和LoVo细胞中SETD5 mRNA表达,流式细胞术、细胞划痕法、WB法和CCK-8法分别检测各组HT-29细胞的凋亡情况、迁移能力、相关蛋白的表达,以及对5-FU的敏感性。结果:SETD5 mRNA在HT-29、LoVo细胞中均呈高表达(均P<0.01)。在HT-29细胞中成功地敲减了SETD5 mRNA(P<0.01)。敲减SETD5 mRNA可明显抑制HT-29细胞的增殖活性(P<0.01)、迁移能力(P<0.01)、相关蛋白(SETD5、p-PI3K、p-AKT1、p-mTOR蛋白)的表达(均P<0.01)、促进细胞凋亡(P<0.01),且提高其对5-FU的敏感性(P<0.01),这些作用均可被AKT激活剂SC79部分阻挡(P<0.05或P<0.01)。结论:SETD5在HT-29、LoVo细胞中高表达,SETD5通过PI3K/AKT1通路促进结肠癌HT-29细胞的增殖、迁移,且降低其对5-FU的敏感性,SETD5是结肠癌临床诊断、治疗的潜在靶点。

磷脂酰肌醇3-激酶蛋白激酶B信号通路在胃癌及癌旁组织中的表达及与其病理特征的关系

目的分析磷脂酰肌醇3-激酶蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路在胃癌及癌旁组织中的表达及与其病理特征的关系。方法选取2018年2月至2019年4月商丘市第一人民医院收治的54例胃癌患者,检测磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)表达水平,对比p-PI3K、p-Akt在胃癌及癌旁组织中的表达情况和不同病理特征胃癌组织中的阳性表达率。结果p-PI3K胃癌组织阳性表达率[81.48%(44/54)]高于癌旁组织[22.22%(12/54)](P<0.05)。p-Akt胃癌组织阳性表达率[75.93%(41/54)]高于癌旁组织[20.37%(11/54)](P<0.05)。低分化、有淋巴结转移的胃癌组织p-PI3K阳性表达率高于中高分化、无淋巴结转移的胃癌组织(均P<0.05);低分化、有淋巴结转移、TNM分期为Ⅲ~Ⅳ期的胃癌组织p-PI3K阳性表达率高于中高分化、无淋巴结转移、TNM分期为Ⅰ~Ⅱ期的胃癌组织(均P<0.05)。结论p-PI3K、p-Akt胃癌组织阳性表达率高,p-PI3K、p-Akt表达情况与分化程度、疾病分期、淋巴结转移密切相关,PI3K/Akt信号通路可能为临床药物治疗提供新靶点。