蛋白激酶CβⅡ (PKCβ2)抑制剂LY333531减少心肌梗死后心肌肥大细胞浸润

目的探讨蛋白激酶CβⅡ(PKCβ2)特异性抑制剂LY333531对心梗后心衰大鼠心肌组织中肥大细胞浸润的影响。方法利用左冠状动脉降支(LAD)结扎制备大鼠心梗模型,将手术4周后出现心衰的大鼠分为对照组和LY333531治疗组,分别给予生理盐水和LY333531处理6周,同时设置假手术组。检测各组大鼠体质量和各项心功能指标,采用天狼星红染色观察心肌组织胶原沉积情况,甲苯胺蓝染色观察肥大细胞密度,ELISA检测血清中组胺和白细胞介素4(IL-4)的含量。结果与假手术组大鼠相比,手术后4周心衰大鼠(生理盐水组和LY333531组)左心室短轴缩短率(FS)显著减少,左心室收缩末期内径(LVESD)、左心室舒张末期内径(LVEDD)以及左心室后壁厚度(PWT)明显增加;心肌组织可观察到胶原沉积、肥大细胞浸润,血清中组胺和IL-4的含量增加。与生理盐水对照组相比,经LY333531治疗6周后,FS、LVESD以及PWT明显改善;但是LVEDD的改善无显著性差别,胶原蛋白沉积降低约50%,心肌组织肥大细胞数减少,血清中组胺和IL-4的含量降低。结论使用LY333531选择性抑制PKCβ2能够通过抑制心肌炎症反应,改善心梗后心力衰竭模型大鼠心脏功能和抑制病理性心肌重塑。

地塞米松诱导成骨细胞凋亡的蛋白激酶C途径

背景:地塞米松以增加细胞周期时间的方法提高细胞凋亡来减少成骨细胞和骨细胞的数量。蛋白激酶C是细胞内信号传导通路的一种,与细胞凋亡有关已有相关文献报道。目的:探讨地塞米松诱导成骨细胞凋亡在蛋白激酶C细胞内信号转导途径方向的机制。方法:取胎鼠骨髓间充质干细胞进行成骨诱导,分为塞米松模型组、佛波醇组和星型胞菌素组。地塞米松模型组加入1×10^-6mol/L地塞米松,佛波醇组加入1×10^-6mol/L地塞米松和1×10^-7mol/L佛波醇,星型胞菌素组加入1×10-6mol/L地塞米松和1×10^-7mol/L星型胞菌素,观察不同干预组细胞的增殖或抑制,并对细胞膜及细胞质中蛋白激酶C含量的变化进行检测。结果与结论:地塞米松可明显的诱导凋亡,加入佛波醇后凋亡明显增加,加入星形孢菌素后凋亡明显减少。加入地塞米松后胞浆的蛋白激酶C明显减少,包膜明显增加。加入地塞米松不同时间,胞浆和胞膜的蛋白激酶C变化在30 min最明显。说明地塞米松诱导成骨细胞凋亡的机制与蛋白激酶C有关,地塞米松为蛋白激酶C激动剂。细胞受到刺激后,胞浆的蛋白激酶C转移至包膜,胞浆中的蛋白激酶C量减少,包膜中的增加。

蛋白激酶C(PKC)与心衰

心衰是一种严重威胁人类健康和生活质量的疾病。研究表明 ,PKC存在于心脏所有的细胞内 ,当发生心衰时 ,不同亚型的PKC表达提高 ,通过进一步研究发现PKC在心衰细胞中作为肥大信号传导 ,从而推进了心衰功能障碍机理的研究 ,开辟出治疗心衰的一条新路 。

重组脂连蛋白通过非AMPK依赖的蛋白激酶C途径抑制小鼠星形胶质细胞炎症相关蛋白表达

目的探讨重组脂连蛋白(APN)是否通过蛋白激酶C(PKC)及AMP活化蛋白激酶(AMPK)途径在小鼠星形胶质细胞氧糖剥夺/复氧(OGD/R)模型中发挥抗炎作用。方法MA1800小鼠星形胶质细胞分别采用氧糖剥夺(OGD)2、4、6、8、12、24 h及(20、50、100、200、400、600、800、1000、1200、1600、2000)μmol/L氯化钴(CoCl2)进行OGD/R处理,采用Western blot法检测PKC、AMPK的磷酸化水平,确定后续实验中OGD/R处理条件。将细胞分为正常对照组、OGD/R处理组、单纯APN处理组、OGD/R联合APN处理组、AMPK抑制剂联合OGD/R和APN处理组。采用Western blot法检测PKCα、磷酸化的广谱PKC[p-PKC(pan)]、AMPKα、磷酸化的AMPKα(p-AMPKα)以及含pyrin结构域NOD样受体家族3(NLRP3)炎性体和细胞培养液上清液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平。结果在OGD处理6 h后复氧以及OGD处理中CoCl2为400μmol/L时,PKC磷酸化水平达到峰值。与对照组相比,OGD/R组PKCα、p-AMPKα水平,NLRP3炎性体及培养细胞上清中TNF-α水平显著增加;与模型组相比,APN处理组和AMPK抑制剂联合APN处理组的p-PKC(pan)水平、NLRP3水平及培养基中的TNF-α水平降低,但对APN处理组AMPKα的磷酸化无显著影响。结论重组APN可能通过非AMPK依赖的PKC途径抑制小鼠星形胶质细胞炎症相关蛋白表达。

复方丹参对缺血预适应大鼠心肌蛋白激酶C表达的影响

目的 探讨复方丹参加强缺血预适应 ( IPC)的机制 ,是否通过促进蛋白激酶 C ( PKC)蛋白、m RNA水平表达发挥作用。方法 采用冠脉结扎大鼠 5 min缺血 ,5 min再灌反复循环 3次的缺血预适应方案 ,缺血 30 m in,再灌 2 h的缺血再灌模型 ,通过免疫组化、RT— PCR的方法观察 PKC蛋白、m RNA表达以及复方丹参对其影响。结果 PKC在正常对照组中主要存在胞浆 ,但经过 IPC和使用复方丹参后 ,在胞膜和胞核也可见 ;不论早期 ,还是晚期 IPC组 PKC表达均高于假性预处理组 ,以早期 IPC组明显 ( P<0 .0 1) ;经复方丹参预处理后 ,PKC的表达均高于再灌组、早期、晚期 IPC组 ,以药物预处理 +缺血预处理组 ( DIPC)为优 ,显著高于早期 IPC组 ( P<0 .0 1)。PKCm RNA在正常心肌组织、再灌组、假性预处理组间无明显差异 ,但 IPC后不论早期 ,还是晚期 PKC m RNA表达均高于假性预处理组 ,晚期 IPC组表达更加明显 ;经复方丹参预处理后 ,可明显促进早、晚期 IPC及再灌组 PKC m R-NA的表达 ( P<0 .0 5 )。结论 复方丹参可激活 PKC,使其发生转位 ,促进其蛋白、m RNA表达水平增高。这可能是此方加强

铝暴露对大鼠海马蛋白激酶Cγ亚型影响

目的通过研究慢性铝暴露大鼠海马蛋白激酶Cγ亚型(PKCγ)的蛋白和mRNA表达的变化,观察大鼠海马CA1区长时程增强(LTP)形成,探讨铝暴露对学习记忆机制的影响。方法选择断乳后Wistar大鼠,以含有不同浓度A1Cl3的水进行饲养。3个月后,测量大鼠海马LTP,用改良的Takai法测定PKC活性的变化,蛋白印迹(Western blotting)法检测PKCγ的蛋白表达;RT-PCR检测PKCγ的mRNA表达。结果(1)各染铝组PKC活性与对照组比较均降低,差异有统计学意义(P<0.01);(2)各染铝组PKCγ蛋白表达与对照组比较有降低趋势(P<0.05);(3)各染铝组PKCγmRNA表达与对照组比较均降低(P<0.05),0.2%与0.4%,0.6%组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论慢性铝暴露影响大鼠海马PKCγmRNA和PKCγ蛋白表达,使PKC活性降低,导致LTP的下降,从而影响学习记忆的功能。

预先电刺激小脑顶核对局灶缺血/再灌注大鼠脑蛋白激酶C同工酶表达的影响

目的 :观察预刺激脑缺血大鼠小脑顶核不同时相蛋白激酶C同工酶γ、δ蛋白表达。方法 :采用线栓法大鼠大脑中动脉栓塞 /再灌注模型 ,缺血时间均为 1 .5hr/再灌注 2 4hr;于缺血前1、4、7天分别刺激小脑顶核、齿状核 1hr。以尾状核冠状切面作为观察对象 ,应用免疫组织化学方法观察单纯缺血 /再灌注组、假手术组、刺激小脑顶核组和刺激齿状核组PKCγ、δ的表达情况。结果 :缺血前 1、4、7天刺激小脑齿状核各组、单纯缺血 /再灌注组、假手术组PKCγ、δ阳性细胞数比较无显著性差异 (P >0 .0 5) ,而缺血前 1、4、7天预刺激小脑顶核能明显抑制PKCγ、δ蛋白的表达(P <0 .0 5)。结论 :缺血性脑损害能诱导PKCγ、δ蛋白表达上调 ,预先电刺激小脑顶核的缺血脑保护作用可能与其下调PKCγ。

蛋白激酶C激活的荧光共振能量转移分析

目的当前,检测蛋白激酶C(PKC)激活的方法尚缺乏灵敏性或直接性,这里我们提供了一种新的直接而灵敏的方法——利用荧光共振能量转移(fluorescence resonance energy transfer,FRET)技术来构建检测PKC激活的方法。方法将表达PKC激活的报告分子(CKAR)的质粒单独转染或与表达甲状旁腺素1型受体(PTHR1)的质粒共转染HEK293细胞,培养72 h后用激光共聚焦显微镜检测FRET的变化,并以此判断甲状旁腺素或佛波酯是否激活PKC。结果在只转染CKAR质粒的HEK293细胞,佛波酯降低了CKAR分子的FRET效率,并使青色荧光与黄色荧光的比值(C/Y)增加,而PTH(1-34)未能改变C/Y的值。在共转染了CKAR和PTHR1质粒的HEK293细胞,PTH(1-34)则使C/Y增加。结论PKC激活报告分子可用于检测PKC的激活,该方法也可作为PKC相关信号转导的实验平台。

细胞凋亡过程中细胞内Ca^(2+)和蛋白激酶C浓度的改变

目的 :探讨阿霉素诱导人涎腺癌细胞凋亡过程中细胞游离Ca2 + ([Ca2 + ]i)和蛋白激酶C(PKC)浓度的变化特点和意义。方法 :选择阿霉素诱导人涎腺粘液表皮样癌细胞凋亡 ,采用光镜、电镜、琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪检测凋亡 ;同时流式细胞检测细胞内 [Ca2 + ]i,Bradford法测定PKC浓度。结果 :阿霉素作用于人涎腺粘液表皮样癌细胞系MEC 1细胞 2 4h出现典型的凋亡改变。细胞凋亡过程中 ,胞内 [Ca2 + ]i明显升高 ;而PKC浓度在凋亡早期明显升高 ,到凋亡晚期则明显降低。结论 :细胞内 [Ca2 + ]i和PKC浓度的改变是阿霉素诱导涎腺细胞凋亡的主要机制 。

腺病毒介导的心肌蛋白激酶Cε基因转移导致心肌损害

目的研究腺病毒介导的成年小鼠心肌直接蛋白激酶(PK)Cε基因转移对左心室收缩功能的影响。方法使用标准方法建立表达PKCε基因的重组腺病毒载体。直接注射重组腺病毒到FVB/N和ICR小鼠心肌,对照鼠给予相同剂量空载腺病毒。Western免疫印迹测定PKCε蛋白质表达水平。用非开胸经颈总动脉插管的显微外科技术评价小鼠左心室收缩功能。结果与对照鼠相比基因转移鼠心肌转基因PKCε蛋白质表达水平增加近4倍,基线左心室最大收缩压、最大收缩速率(dP/dt)、-dP/dt明显降低,左心室舒张末压、舒张压明显升高(P<0.01),异丙肾上腺素刺激后左心室dP/dt随剂量递增的依次升高明显抑制(P<0.01),PKCε基因转移鼠心脏质量/体质量比也较对照鼠明显增加(P<0.01)。结论腺病毒介导的、心肌直接的PKCε基因转移诱发了左心室收缩功能降低,导致了心肌肥厚和心力衰竭。

艾灸预处理对急性力竭运动大鼠心肌损伤及蛋白激酶C的影响

目的探讨艾灸预处理对急性力竭运动导致的心肌损伤的保护作用及蛋白激酶C(PKC)的影响。方法健康雄性SD雄性大鼠40只,随机分为正常对照组(C组)、艾灸组(M组)、力竭组(E组)、艾灸力竭组(ME组)和艾灸力竭+PKC抑制剂组(ME+CHE组)5组。在一次性游泳急性力竭模型的基础上,用艾灸预处理进行干预,并注射PKC抑制剂白屈菜红碱(CHE),采用透射电镜观察心肌细胞超微结构的变化,运用酶联免疫吸附(ELISA)法检测大鼠心肌PKC蛋白水平及其活化情况。结果 1E组心肌超微结构损伤改变明显,ME组心肌超微结构损伤较E组轻,而ME+CHE组心肌超微结构损伤程度与E组相似。2与C组比较,M组和ME组PKC蛋白水平无明显变化,E组和ME+CHE组p-PKC水平均有明显升高(P<0.05);与E组比较,ME组PKC水平有明显下降(P<0.05),ME+CHE组水平无明显变化;与ME组比较,ME+CHE组PKC水平有明显上升(P<0.05)。3与C组p-PKC水平比较,M组无明显变化,E组、ME组和ME+CHE组水平均有明显升高(P<0.05);与E组比较,ME组p-PKC水平有明显下降(P<0.05);与ME组比较,ME+CHE组P-PKC水平有明显上升(P<0.05)。结论急性力竭运动所致的心肌损伤与PKC的过度表达和活化有关,艾灸预处理对急性力竭所致的心肌损伤有保护作用,阻止PKC的过度表达和活化可能是其起效的机制之一。

再生小室内间断给予蛋白激酶C激动剂对周围神经表达NGF及损伤修复的影响

目的 探讨大鼠坐骨神经再生小室内间断给予蛋白激酶 C激动剂 -佛波醇酯 ( phorbol- 12 - myristate-13- acetate,PMA)后 ,坐骨神经蛋白激酶 C( protein kinase C,PKC) m RNA、神经生长因子 ( nerve growth factor,NGF)m RNA表达变化规律及轴突数目变化。 方法 SD大鼠 4 2只行双侧坐骨神经中段切断约 5 mm,“T”形硅胶管套接 ,随机分为 6组 ,分别为损伤 1、3天 ,1、2、3和 4周组。右侧间断给予 1× 10 - 9mol/ L PMA( PMA侧 ) ;左侧注射等量生理盐水(对照侧 )。采用组织切片核酸原位杂交 ( in situ hybridization,ISH)技术检测各组术后各不同点 PKC m RNA和 NGFm RNA在坐骨神经表达的动态变化及轴突数目变化。 结果 对照侧大鼠坐骨神经 PKC m RNA在损伤后表达上调 ,第2周达高峰后下降 ;NGF m RNA在损伤后表达上调 ,第 3周达高峰值后下降。PMA侧 PKC m RNA于第 2、3和 4周表达较对照侧明显增高 ,差异有统计学意义 ( P<0 .0 1或 P<0 .0 5 ) ;NGF m RNA第 2、3和 4周表达也较对照侧明显增强 ,差异有统计学意义 ( P<0 .0 1)。轴突数目在 2、3和 4周时多 ,差异有统计学意义 ( P<0 .0 1)。 结论 PKC介导了周围神经损伤修复中的 NGF m RNA表达及神经再生 ,而且 PMA能够促进 NGF m

葡萄籽原花青素对蛋白激酶C及鸟氨酸脱羧酶活性的影响

目的 :探讨葡萄籽原花青素预防癌前病变作用机制。方法 :从大鼠脑中提取并纯化蛋白激酶C(PKC) ,采用 [γ 3 2 P]ATP掺入法对PKC活性进行了研究。结果 :原花青素对Diolein活化的PKC活性有显著性抑制作用 ,对TPA活化的PKC活性在一定剂量范围内显示出较强的抑制作用 ,对不依赖Ca2 + 、磷脂酰丝氨酸、Diolein的硫酸鱼精蛋白底物未观察到原花青素对PKC的抑制作用。结论 :原花青素对PKC的抑制作用可能不是通过改变酶的活性中心 ,而是通过对信号传递过程的中间代谢产物的影响而抑制了PKC的活性。以14 C标记的L 鸟氨酸为底物 ,对巴豆油活化的小鼠表皮细胞鸟氨酸脱羧酶 (ODC)活性增高 。

蛋白激酶C生物学特性及与脑胶质瘤的关系

人脑胶质瘤是一种常见而危害性较大的肿瘤，占颅内肿瘤的40％～60％。传统的手术合并放射治疗脑胶质瘤，其5年生存率一直徘徊在40％左右。PKC是细胞信息传导过程中起重要作用的蛋白激酶，具有双相通道的调节功能，诱导细胞增殖或凋亡。恶性胶质瘤细胞具有相当高的PKC活性，了解PKC的生物学特性，对于深入掌握脑胶质瘤的生物学特性，指导治疗具有重要的意义。

半边旗提取物6F抑制HL-6 0细胞蛋白激酶C活性(英文)

目的 探讨半边旗提取物 6F的细胞毒作用及诱导DNA片段化与蛋白激酶C(PKC)信号转导途径的关系 ,检测 6F对PKC活性的影响。方法 受试对象为HL 6 0细胞 ,超速离心法获得的胞液 (可溶部分 )及颗粒 (不可溶部分 ,包括细胞膜系统及胞核 )部分用作PKC活性测定。经 0 .4g·L- 1磷脂酰丝氨酸 ,0 .0 4g·L- 1甘油二油酸酯激动剂作用酶粗提物后 ,用液体闪烁计数仪计数 [γ 32 P]ATP参入外源底物的量以测定PKC活性。MTT法测定HL 6 0细胞的活力 ,二苯胺法测定 6F诱导DNA片段化程度。结果 在所测试的浓度范围内 (0 .5～ 312 μmol·L- 1) ,化合物 6F显著抑制胞液及颗粒部分PKC活性 ,最大抑制率达 88.6 % ,呈浓度依赖关系 (胞液部分r =0 .781,P <0 .0 5 ,颗粒部分r =0 .931,P <0 .0 1)。 6F诱导HL 6 0细胞DNA片段化及对细胞的毒性作用可被具有致癌作用的PKC激活剂肉豆蔻酸酯 (PMA ,浓度为 6 5nmol·L- 1)拮抗 ,抑制率分别是 30 %和 4 4% (P <0 .0 1)。PMA单独用使HL 6 0细胞线粒体将MTT还原为甲月赞的能力增强 14 % (P <0 .0 1) ,即增强细胞活力。结论化合物 6F是PKC的抑制剂。 6F对HL 6

葡萄糖对内皮细胞蛋白激酶C活性、通透性及粘附性的影响

目的 研究不同浓度葡萄糖对血管内皮细胞的蛋白激酶C(PKC)活性、通透性及粘附性的影响。方法 用[γ32 P]ATP参入外源性底物的方法测定人脐静脉内皮细胞(HUVECs )PKC活性;用51 Cr标记的静止血小板与HUVECs保温,测定内皮细胞的粘附性;用HUVECs对白蛋白的体外通透性实验测定内皮细胞的通透性。结果 2 0mmol L的高浓度葡萄糖可最大程度活化HUVECs的PKC ,膜PKC活性为( 2 874±0 0 4 6 )mmol·mg- 1 ·min- 1 ,明显高于浆PKC活性[( 1 2 15±0 0 19)mmol·mg- 1 ·min- 1 ,P <0 0 1];HUVECs在2 0mmol L高浓度葡萄糖作用下的最大粘附率为( 6 2 84±3 2 4 ) % ,对白蛋白的最大通透率为( 0 32±0 0 0 2 )ng ml,明显高于对照组(P <0 0 1) ;HUVECs的PKC总活性与HUVECs的通透性及粘附率的相关系数r分别为0 84 6、0 734(P均<0 0 5 )。PKC抑制剂CalphostinC能抑制高浓度( 2 0mmol L)葡萄糖对HUVECs的PKC活化,并使HUVECs的通透性及粘附率明显下降。结论 高浓度葡萄糖( 2 0mmol L)可活化血管内皮细胞的PKC ,进而增加其通透性及粘附性;

灯盏花提取物对心脏移植异基因大鼠蛋白激酶C的作用

目的:利用异基因大鼠心脏移植模型研究中药灯盏花提取物对蛋白激酶C(proteinkinaseC,PKC)的抑制作用。方法:以Wistar大鼠为供体,SD大鼠为受体,建立大鼠腹腔异位心脏移植模型,分为灯盏花提取物低剂量组(5mg·kg-·1d-1)、中剂量组(10mg·kg-·1d-1)、高剂量组(15mg·kg-·1d-1)和对照组。移植术后各实验组受体腹腔注射药物至移植心停跳。用底物磷酸化激酶测定法检测受体外周血淋巴细胞PKC的活性并用Westernblot印迹法鉴定;用酶联免疫吸附法检测受体外周血液中白细胞介素-2(IL-2)的水平。结果:各实验组受体外周血淋巴细胞PKC活性及表达和IL-2的水平明显较对照组低。结论:在异基因大鼠心脏移植中灯盏花提取物可对PKC的活性产生抑制作用。

异丙肾上腺素活化蛋白激酶Cε诱导心肌细胞ERK磷酸化

目的研究异丙肾上腺素(Iso)刺激心肌细胞后是否激活PKCε,探讨直接被cAMP激活的交换蛋白(Epac)在其中的作用及其与ERK信号通路的关系。方法以原代培养的Wistar乳鼠心肌细胞为实验细胞,用β肾上腺素能受体(β-AR)激动剂Iso、Epac激动剂8-CPT、Epac抑制剂Epac R279K(DN)及腺病毒编码兔肌肉cAMP依赖的蛋白激酶抑制剂(Ad.PKI)和PKCε转位抑制肽处理细胞,Western blot检测细胞颗粒部分PKCε及pERK1/2,激光共聚焦显微镜观察PKCε转位情况。结果 Iso引起心肌细胞颗粒部分PKCε增加,PKCε转位于胞核周围。8-CPT增加细胞颗粒部分PKCε(P<0.05)。Epac R279K感染细胞后再予Iso处理,颗粒部分PKCε与对照组相比无增加。Ad.PKI未抑制Iso引起的颗粒部分PKCε增加(P<0.01)。PKCε转位抑制肽阻断Iso诱导的ERK1/2磷酸化。结论心肌细胞中β-AR通过Epac介导以不依赖于PKA的方式活化PKCε并诱导ERK1/2磷酸化。

NO-1886对高糖高脂喂养小型猪肾脏蛋白激酶C表达的影响

目的探讨合成化合物脂蛋白酯酶活化剂NO-1886对高糖高脂喂养小型猪肾脏蛋白激酶C表达的影响。方法广西巴马小型猪共15只,按体重随机分为3组,5只/组:正常对照组,喂正常猪饲料;高糖高脂组,喂高糖高脂饲料;加药组,喂加入1.0%NO-1886的高糖高脂饲料。动物分栏喂养,每日投食3次,日粮为体重的4%,自由饮水。实验期为5个月。实验前和实验过程中每月末分别抽取血样,葡萄糖氧化酶法检测空腹血糖;GPO-PAP酶法测定血浆三酰甘油;放射免疫法测血浆胰岛素。第5个月从左肾下极的相同部位取部分组织(包括皮质和髓质),HE染色以观察细胞显微结构,同时免疫组化染色;免疫组织化学方法和Western blot方法分别检测肾脏蛋白激酶C表达情况。结果使用NO-1886组的葡萄糖、胰岛素和三酰甘油水平显著下降;肾脏细胞显微结构结构基本正常;免疫组织化学方法和Western blot方法检测的结果同时说明NO-1886可以降低高糖高脂饮食所致巴马小型猪肾脏组织中蛋白激酶C的表达。结论NO-1886可以通过降低糖尿病肾病中的高血糖和高血脂,下调巴马小型猪肾脏组织中蛋白激酶C的表达。