牛精子蛋白激酶C抑制剂逆转KB/VCR的作用及其机理

目的 :研究牛精子蛋白激酶C抑制剂 (PKCI)对肿瘤细胞多药耐药性的逆转作用及机理。方法 :选用KB细胞及其耐长春新碱的耐药株 (KB VCR)测定其蛋白激酶C活性及PKCI的影响 ,用MTT法测药敏 ,用流式细胞仪测定细胞对罗丹明 1 2 3的蓄积及外排。结果 :耐药细胞细胞膜的蛋白激酶C活性是亲本细胞的 2 9倍 ,耐药性是亲本细胞的 1 72倍。经PKCI作用后 ,罗丹明 1 2 3的蓄积量增加了 6 8倍 ,外排明显延缓 ,外排后潴留增加了 4 3倍 ,耐药性被逆转了 1 0倍。PKCI对亲本株的蛋白激酶C活性和耐药性影响不大。结论 :PKCI可明显地逆转耐药细胞的多药耐药性 。

蛋白激酶C抑制剂Staurosporine对人胃癌细胞周期的影响

背景与目的:蛋白激酶C(proteinkinaseC,PKC)已成为一个潜在的有价值的抗肿瘤治疗靶点。本研究旨在探讨PKC抑制剂Staurosporine(ST)对人胃癌细胞株MGC-803和SGC-7901的增殖抑制、凋亡诱导及对其细胞周期的影响。方法:在用台盼蓝拒染法检测细胞增殖抑制率的基础上,通过细胞形态学观察凋亡小体,流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期变化。结果:ST抑制MGC-803细胞生长,24h的IC50为54ng/ml,48h的IC50为23ng/ml;ST抑制SGC-7901细胞的生长,24h的IC50为61ng/ml,48h的IC50为37ng/ml。40、60、100ng/mlST分别作用MGC-803细胞24h后,发现G0/G1期细胞分别为(23.6±1.8)%、(11.6±0.7)%、(3.3±0.2)%,而对照组为(54.3±3.1)%;G2/M期细胞分别为(22.6±4.0)%、(35.5±0.4)%、(36.8±5.5)%,而对照组为(13.5±0.2)%。40、60、100ng/mlST分别作用于SGC-7901细胞24h后,G0/G1期细胞分别为(27.1±1.4)%、(17.0±3.4)%,(13.7±0.7)%,而对照组为(52.5±4.4)%;G2/M期细胞分别为(21.9±2.6)%、(39.5±4.9)%、(38.4±3.1)%,而对照组为(13.5±2.2)%。实验组细胞与对照组比较,ST使两种细胞G0/G1期明显减少及G2/M期明显增加(P<0.01)。200ng/mlST作用24h后两种细胞的G1期前均出现明显的凋亡峰,可诱导细胞出现典型凋亡小体。

蛋白激酶C抑制剂对T细胞表达IL-2及IFN-γ的影响

目的 :研究蛋白激酶C(PKC)抑制剂H7和棉酚对体外活化T细胞表达白细胞介素 - 2 (IL - 2 )和γ -干扰素 (INF -γ)的影响。方法 :在莫能菌素 (monensin)存在时 ,以佛波醇酯 (PDB) +离子霉素 (I)体外活化人外周血单个核细胞 (PBMC) ,以流式细胞术胞内细胞因子检测法分析H7和棉酚对CD3+ T细胞表达IL - 2和IFN -γ水平的影响。结果 :PDB +I处理PBMC 4h后 ,表达IL - 2和IFN -γ的CD3+ T细胞百分率分别为 16 6 4± 2 0 4和 2 5 81±3 5 3( x±s) ,而对照组二者的比率为 1 0 6± 0 2 2及 3 12± 0 77(P <0 0 5 )。棉酚 (5 0 μmol/L)可明显抑制IL - 2及IFN-γ的表达 ,抑制后表达率分别为 2 0 8± 0 12及 9 0 1± 1 90。H7作用比棉酚强 ,5 0 μmol/L的H7抑制后的IL - 2及IFN -γ阳性T细胞比率分别为 0 4 3± 0 0 6和 2 4 0± 0 2 7。结论 :PKC在CD3+ T细胞表达IL - 2及IFN -γ中发挥重要作用 ;PKC抑制剂H7及棉酚明显抑制IL - 2及IFN -γ的表达 ,提示H7和棉酚可通过抑制PKC活性 。

蛋白激酶C抑制剂的研究新进展

蛋白激酶C(PKC)是一组磷脂依赖性的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,与蛋白激酶A(PKA)和蛋白激酶G(PKG)共同构成丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶AGC超家族。PKC包括传统型PKC、新型PKC、非典型PKC和与PKC相关的一些激酶(PRK)成员。PKC广泛分布于哺乳动物的组织和细胞中,对细胞的生长代谢、增殖分化等起着重要的生物学作用。研究表明,多种细胞的变异和疾病的发生发展都与PKC的异常表达有关。因此,设计和寻找高效的PKC抑制剂对于多种有效药物的合成和临床上包括肿瘤、心血管疾病、高血压等多种疾病的治疗都具有非常重要的意义。近年来,关于PKC抑制剂的研究已经成为国内外研究的焦点。大量文献报道了多种有效的PKC抑制剂,并对其作用位点、作用机制以及临床试验数据等进行了分析。这些PKC抑制剂的发现对于PKC的结构分析和疾病的治疗具有重要的意义。因此,本文对这些高效的PKC抑制剂进行综述。

蛋白激酶C抑制剂诱导CNE-2Z细胞凋亡的研究

目的和方法：采用蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）催化区抑制剂ｓｔａｕｒｏｓｐｏｒｉｎｅ（ＳＴ）、调节区抑制剂ｓｐｈｉｎｇｏｓｉｎｅ（ＳＳ），诱导ＣＮＥ—２Ｚ细胞２４ｈ。结果：（１）ＳＴ、ＳＳ对细胞ＤＮＡ裂解的影响均随浓度增高而逐步增强，作用明显的终浓度分别为１×１０６ｍｏｌ／Ｌ和４×１０５；（２）核形态观察：诱导后部分细胞核变小，核浓缩及核碎裂；（３）ＤＮＡ琼脂糖电泳：诱导后的细胞有典型梯状ＤＮＡ条带；（４）流式细胞仪分析：诱导组Ｇ１期前均有ＤＮＡ亚二倍体峰，即凋亡峰。细胞周期改变：ＳＴ使Ｇ２期增加、Ｇ１、Ｓ期减少；ＳＳ使Ｓ期增加和Ｇ１期减少。结论：ＰＫＣ抑制剂可有效地促进ＣＮＥ－２Ｚ细胞凋亡，但与抑制剂剂量有关，细胞周期的改变可能在ＰＫＣ抑制剂诱导的细胞凋亡中起重要作用。

蛋白激酶-C抑制剂对脑缺血大鼠突触体游离钙的影响

目的 :探讨蛋白激酶C(ProteinkinaseC,PKC)参与神经损伤的机制。方法 :采用大鼠全脑缺血模型 ,观察脑缺血/再灌流后突触体游离钙的变化及PKC的抑制剂灯盏花对突触体游离钙的影响。结果 :脑缺血/再灌流可以导致突触体游离钙增加的抑制剂灯盏花可以阻止脑缺血/再灌流导致突触体游离钙增加。结论 :PKC参与神经元缺血性损伤可能与其促进钙内流有关。

吲哚马来酰亚胺类蛋白激酶C抑制剂的研究进展

吲哚马来酰亚胺类化合物是对星型孢菌素进行结构改造而得到的一类新型蛋白激酶C抑制剂.对近年来吲哚马来酰亚胺类化合物在结构修饰、合成和生物活性等方面的研究进行了总结和概述,重点介绍了吲哚马来酰亚胺类化合物的合成方法,讨论了各种合成方法的优缺点.

CCL_（229）细胞经诱导后蛋白激酶C及抑制剂活性的变化

检测以维甲酸（ＲＡ）、１，２５－二羟基维生素Ｄ３（１，２５（ＯＨ）２ＶＤ３）诱导２ｄ、佛波酯（ＰＭＡ）诱导６ｈ的人大肠癌细胞ＣＣＬ（２２９）的蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）及其抑制剂活性．结果显示：诱导后ＰＫＣ总活性升高（Ｐ＜０．０５）；ＲＡ、１，２５（ＯＨ）２ＶＤ３诱导引起细胞质ＰＫＣ活性增加，ＰＭＡ诱导后细胞膜ＰＫＣ比率（细胞膜活性／总活性）显著升高（Ｐ＜０．０１）；诱导后ＰＫＣ抑制剂活性均降低，其中１，２５（ＯＨ）２ＶＤ３组与对照组有显著差异（Ｐ＜０．０５）；提示ＰＭＡ引起ＰＫＣ从细胞质向细胞膜转移，不同药物诱导后ＰＫＣ及其抑制剂活性出现不同的相对均衡关系．

蛋白激酶C抑制剂对人非小细胞肺癌细胞株药物敏感性的影响

背景与目的蛋白激酶C(PKC)在癌变过程中的作用使其成为肿瘤治疗的潜在重要靶点。非小细胞肺癌(NSCLC)中存在PKC-α的异常表达和活性增高,PKC抑制剂能通过诱导肿瘤细胞凋亡、增强细胞毒作用及下调多药耐药基因的表达而发挥其抗肿瘤作用。通过观察PKC抑制剂白屈菜红碱(CH)对四种人NSCLC细胞株药物敏感性的影响,初步探讨其作用机制。方法以PKC抑制剂CH分别处理四种NSCLC细胞株H1299、H460、A549及耐顺铂A549细胞株,逆转录聚合酶链式反应法(RT-PCR)及蛋白印迹法(Westernblot)检测PKC-α的mRNA及蛋白表达水平,流式细胞仪检测细胞凋亡率,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞株对顺铂药物敏感性。结果用药前A549/DDP细胞株中PKC-αmRNA及蛋白的表达水平高于NSCLC细胞株H1299、H460及亲本A549细胞株(P<0.05),CH处理后四种NSCLC细胞株中PKC-αmRNA及蛋白的表达水平均有不同程度的下降,CH处理4h及24h后H1299、H460、A549细胞株的凋亡率无明显增加,仅A549/DDP细胞株的凋亡率明显增加,用药后NSCLC细胞株对顺铂的药物敏感性即IC50值有不同程度的下降,以A549/DDP细胞株降低更为明显(P<0.05)。结论四种NSCLC细胞株中存在PKC-αmRNA及蛋白的高表达。通过抑制NSCLC细胞株中PKC-αmRNA及蛋白的表达,PKC抑制剂CH能增加其对顺铂的药物敏感性。与亲本A549细胞株相比,PKC抑制剂CH能通过抑制耐顺铂A549细胞株中PKC-α蛋白的表达及增加细胞凋亡率,而更有效地增加其对顺铂的药物敏感性。

蛋白激酶C抑制剂对念珠菌性阴道炎患者Th1/Th2免疫偏移的作用

目的观察蛋白激酶C抑制剂对念珠菌性阴道炎患者Th1/Th2免疫偏移的作用。方法选择2014年1月1日至2015年1月1日达州市中西医结合医院收治的念珠菌性阴道炎患者共134例,按随机分组原则分为观察组65例和对照组69例。对照组进行单纯抗真菌治疗,观察组进行蛋白激酶C抑制剂联合抗真菌治疗。治疗前测定患者血清白介素12(IL-12)及干扰素γ(IFN-γ)水平。治疗结束后7 d、14 d、1个月和3个月各随访一次,3个月后再次测定血清IL-12及IFN-γ水平,以及取阴道分泌物,采用10%氢氧化钾溶液湿片检查是否还存在假菌丝或孢子。结果两组患者治疗前IL-12及IFN-γ水平比较差异均无统计学意义(P>0.05);治疗后,观察组患者的IL-12及IFN-γ水平比对照组明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05);经过3个月的治疗与随访结束后,观察组治愈53例,好转8例,总有效率为93.85%,对照组治愈35例,好转16例,总有效率为73.91%,两组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。结论蛋白激酶C抑制剂可明显降低念珠菌性阴道炎患者IL-12及IFN-γ水平,纠正Th1/Th2免疫偏移,可提高治愈率。

蛋白激酶C抑制剂Staurosporine对A类清道夫受体胞浆域结构去除后功能的影响

A类清道夫受体 (scavengerreceptor,SR A)是一种主要位于巨噬细胞膜表面的同源三聚体糖蛋白 ,能够结合和摄取多种配基并介导内移 .在清道夫受体胞浆域有几个潜在的磷酸化位点 ,有关这些磷酸化位点与受体功能之间的确切关系目前尚所知甚少 .为深入探讨A类清道夫受体胞浆域与磷酸化之间的关系 ,以及受体胞浆域磷酸化对受体功能的影响 ,实验以含有SR AcDNA质粒为模板 ,采用PCR方法扩增不含胞浆域序列的清道夫受体 ,同时扩增全长清道夫受体作为对照 .PCR产物经纯化酶切后 ,进一步亚克隆到PcDNA3 1/HisB中 ,测序结果表明 ,重组产物能够编码正确的氨基酸序列 .重组产物经脂质体Lipofectamine (LF2 0 0 0 )介导转化入CHO细胞中 ,在含G4 18选择性培养液中培养筛选 14天后 ,分离阳性克隆 ,继续培养 .采用流式细胞计数仪 (FACS)鉴定转化筛选后细胞能否表达具有功能的清道夫受体 .结果发现 ,转化的CHO细胞可以稳定表达SR A的蛋白质 ,但受体胞浆域去除后 ,摄取配基的能力明显弱于全长组 (1∶1 337) .用荧光DiI标记乙酰化低密度脂蛋白(DiI AcLDL) ,37℃孵育转化细胞 5h后 ,激光共聚焦显微镜下观察到 :全长受体转化组细胞荧光散在分布于细胞膜和细胞器 ,而去除胞浆域组荧光只局限于细胞膜 ,说明SR

缺血再灌注大鼠脑保护过程中蛋白激酶C同工酶抑制剂的作用(英文)

背景:蛋白激酶C(ProteinKinaseC,PKC)抑制剂能明显减轻缺血性脑损害,但其毒副作用大、价格昂贵。灯盏花素注射液能明显抑制PKC活性,对缺血性脑损害有一定的保护作用。目的:研究局灶脑缺血再灌注大鼠PKC抑制剂灯盏花素缺血脑保护作用的可能机制。设计:完全随机设计,对照实验研究。主要观察指标:采用线栓法制备大鼠局灶脑缺血再灌注模型。于缺血1.5h再灌注4,24,72h观察PKC同工酶γ蛋白表达及神经元凋亡的变化规律。结果:再灌注4hPKCγ及神经元凋亡明显升高,PKCγ在24h达高峰,72h开始下降(P<0.05);神经元凋亡的变化规律同PKCγ(P<0.01);灯盏花素组再灌注24h前能明显抑制PKCγ及神经元凋亡的表达(P>0.05)。结论:灯盏花素的缺血脑保护作用可能与其下调PKCγ蛋白表达有关。

蛋白激酶C抑制剂对细胞生长增殖的影响

本文对新近分离纯化的蛋白激酶C抑制剂的生物学特性进行了分析,应用细胞增殖试验表明,蛋白激酶C抑制剂对培养的L_(929)细胞和Hela细胞生长增殖有显著的抑制作用,并且该抑制作用有细胞周期特异性。对这种抑制功能的可能机理进行了初步探讨。

以蛋白激酶C-θ为靶点的免疫抑制剂研究进展

蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)至少含有12个亚型,其中PKC的θ亚型(PKC-θ)可参与T细胞受体(T-cell receptor,TCR)和共刺激分子CD28介导的信号整合,调控白细胞介素(interleukin-2,IL-2)的表达和早期T细胞的活化,是自身免疫疾病的主要作用靶点。本文对近年来报道的以PKC-θ为靶点的免疫抑制药物星型孢菌素、Sotrastaurin、噻吩并[2,3-b]吡啶-5-甲腈、吡啶甲腈、氨基嘧啶、AS2521780、甲氧基肉桂醛和单紫杉烯作一综述,旨在为高效、低毒的新型免疫抑制药物的研究提供参考。

蛋白激酶Cζ抑制剂对皮肤鳞癌细胞A-431增殖和侵袭的影响

目的探讨蛋白激酶C(PKC)ζ抑制剂T5450996对皮肤鳞癌细胞A-431增殖和侵袭能力的影响。方法应用Z′-LYTE^(?)试剂盒筛选PKCζ抑制剂T5450996;利用细胞增殖实验和细胞周期分析观察T5450996对皮肤鳞癌细胞A-431增殖的影响;运用划痕实验和侵袭实验分析T5450996对A-431迁移和侵袭能力的影响。结果T5450996可以抑制PKCζ激酶的活性,半数抑制浓度(IC_(50))约为35μmol/L;与对照组相比,35μmol/L和70μmol/L的T5450996可以显著抑制A-431细胞的增殖,阻滞A-431细胞周期;划痕实验和侵袭实验结果显示35μmol/L和70μmol/L的T5450996处理A-431细胞后,A-431细胞的迁移及侵袭能力明显下降(均P<0.05),20μmol/L的T5450996没有明显作用(均P>0.05)。结论 PKCζ抑制剂T5450996可显著抑制皮肤鳞癌细胞A-431的增殖和侵袭能力,是一个有潜在应用前景的小分子抑制剂。

蛋白激酶C抑制剂对小鼠腹腔巨噬细胞清道夫受体功能的影响

目的观察细胞内蛋白磷酸化水平对清道夫受体功能的影响。方法用蛋白激酶C抑制剂星形孢菌素处理小鼠腹腔巨噬细胞,利用蛋白质印迹试验和放射自显影方法观察药物对细胞表面受体表达的影响,并分别测定对照组和处理组细胞对碘标记的氧化型低密度脂蛋白的结合、降解以及细胞内脂质蓄积的程度。结果0.4μmol/L蛋白激酶C抑制剂星形孢菌素可以促进细胞结合碘标记的氧化型低密度脂蛋白,增加细胞表面受体的表达,但抑制细胞降解碘标记的氧化型低密度脂蛋白,同时抑制细胞内胆固醇酯的蓄积。结论以上表明清道夫受体功能与细胞内蛋白质磷酸化水平密切相关。

蛋白激酶C抑制剂对吸烟大鼠脑血管内皮细胞细胞间粘附分子1表达的影响

目的探讨蛋白激酶C抑制剂对吸烟大鼠脑血管内皮细胞细胞间粘附分子1蛋白和mRNA表达的影响。方法无脑梗死大鼠18只,随机分为不吸烟组6只、吸烟组6只和吸烟蛋白激酶C抑制剂组6只。脑梗死大鼠48只,随机分为脑梗死组24只和蛋白激酶C抑制剂组24只,分别于梗死后2、6、12及24h干预,每个时间点6只。采用免疫组织化学法和原位杂交法分别测定细胞间粘附分子1蛋白和mRNA。结果吸烟大鼠脑血管内皮细胞细胞间粘附分子1蛋白和mRNA均有表达,吸烟蛋白激酶C抑制剂组脑血管内皮细胞细胞间粘附分子1蛋白和mRNA的表达明显低于吸烟组(P<0.05)。蛋白激酶C抑制剂组细胞间粘附分子1蛋白和mRNA的表达均低于对应时间点脑梗死组(P<0.05),且梗死后2h蛋白激酶C抑制剂组细胞间粘附分子1蛋白和mRNA的表达明显低于其他时间点组。结论蛋白激酶C抑制剂可阻断吸烟大鼠脑血管内皮细胞细胞间粘附分子1蛋白和mRNA表达,并且早期用药效果可能更好。

蛋白激酶C抑制剂CJ9111对小鼠B_(16)黑色素瘤细胞肺转移的影响

肿瘤转移是个多步骤的连续过程。瘤细胞从原发部位扩散，浸润细胞外基质，穿透血管壁，在血管内聚积，附着于血管内皮等一系列过程形成转移灶。所有这些过程都与肿瘤细胞的粘附特性有关。自从发现佛波酯有促进肿瘤转移的作用后，表明了蛋白激酶C(PKC)在调控肿瘤转移的过程中发挥重要作用．PKC的活性与肿瘤转移呈正相关，且某些PKC抑制剂能抑制肿瘤的转移。