偏头痛模型大鼠三叉神经脊束核神经元兴奋性增高及蛋白激酶Cε膜转位增加

目的:探讨蛋白激酶Cε(protein kinase Cε,PKCε)对偏头痛中枢敏感化大鼠三叉神经脊束核神经元兴奋性的影响。方法:实验选取200～250 g雄性SD大鼠共60只;随机均分为正常组(N组)、假手术组(C组)、偏头痛模型组(M组)、氯仿组(L组)和PKCε抑制剂H-7组(H-7组),每组大鼠12只。进行三叉神经脊束核神经元放电记录和PKCε膜转位水平检测。结果:(1)放电频率变化百分比:造模后,三叉神经脊束核细胞外放电频率增加,造模后2 h为造模前的(325.88±47.32)%;M放电频率变化百分比高于N组和C组。L组放电频率变化百分比与M相比,差异无统计学意义;H-7组放电频率变化百分比低于M和L组。(2)膜转位水平:M组、L组PKCε膜转位水平高于N组和C组;L组与M组相比,PKCε膜转位水平无明显变化;H-7组膜转位水平低于其余四组。结论:偏头痛中枢敏感化过程中,三叉神经脊束核神经元兴奋性和PKCε膜转位增加,PKCε抑制剂H-7能减少神经元兴奋性和PKCε膜转位,说明PKCε可能参与大鼠偏头痛中枢敏感化的形成。

灯盏花乙素干预缺血再灌注损伤人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子与蛋白激酶Cε的表达

背景:有关灯盏花乙素的研究多集中在神经细胞、神经元及平滑肌细胞上,但对血管内皮细胞的作用研究尚少。目的:观察灯盏花乙素预处理后对人脐静脉内皮细胞缺血再灌注损伤后血管内皮生长因子与蛋白激酶Cε表达的影响。方法:体外培养的人脐静脉内皮细胞,分别设立对照组,模型组和及灯盏花乙素高、中、低剂量组。将人脐静脉内皮细胞予缺氧缺糖3h/复氧糖5或24h;灯盏花乙素高、中、低剂量组分别加1×10-5,1×10-6,1×10-7mol/L灯盏花乙素孵育30min,然后予缺血再灌注处理。实验结束后取细胞裂解液用Westernblot检测血管内皮生长因子、蛋白激酶Cε的蛋白表达。结果与结论:缺血3h再灌注5及24h,较对照组,模型组血管内皮生长因子的表达降低,细胞颗粒部分蛋白激酶Cε的表达明显增加。灯盏花乙素能促进缺血3h再灌注5h人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子的表达,尤其以灯盏花乙素高剂量和中剂量组明显,但对蛋白激酶Cε的表达没有影响。

腺病毒介导的心肌蛋白激酶Cε基因转移导致心肌损害

目的研究腺病毒介导的成年小鼠心肌直接蛋白激酶(PK)Cε基因转移对左心室收缩功能的影响。方法使用标准方法建立表达PKCε基因的重组腺病毒载体。直接注射重组腺病毒到FVB/N和ICR小鼠心肌,对照鼠给予相同剂量空载腺病毒。Western免疫印迹测定PKCε蛋白质表达水平。用非开胸经颈总动脉插管的显微外科技术评价小鼠左心室收缩功能。结果与对照鼠相比基因转移鼠心肌转基因PKCε蛋白质表达水平增加近4倍,基线左心室最大收缩压、最大收缩速率(dP/dt)、-dP/dt明显降低,左心室舒张末压、舒张压明显升高(P<0.01),异丙肾上腺素刺激后左心室dP/dt随剂量递增的依次升高明显抑制(P<0.01),PKCε基因转移鼠心脏质量/体质量比也较对照鼠明显增加(P<0.01)。结论腺病毒介导的、心肌直接的PKCε基因转移诱发了左心室收缩功能降低,导致了心肌肥厚和心力衰竭。

蛋白激酶Cε对肝癌SK-Hep-1细胞生物学行为的影响

目的:使用小干扰RNA(siRNA)抑制人肝癌SK-Hep-1细胞中蛋白激酶Cε(PKCε)的表达并对抑制效果进行测定,检测沉默后SK-Hep-1细胞增殖和侵袭能力的变化。方法:培养SK-Hep-1细胞,分为PKCε-siRNA组、阴性对照(NC-siRNA)组和未行处理(control)组。采用MTT比色法观察各组细胞增殖能力的变化,采用Transwell法观察各组细胞侵袭能力的变化,Western blotting观察细胞核增殖抗原Ki67、基质金属蛋白酶9(MMP-9)等功能蛋白的表达,萤光素酶报告基因检测NF-κB信号通路的活性。结果:与对照组相比,PKCε-siRNA组PKCεmRNA和蛋白表达水平都明显降低(P<0.01),Ki67和MMP-9蛋白表达水平降低,细胞增殖能力明显降低(P<0.01),PKCε-siRNA组穿过Transwell膜的细胞少于对照组(P<0.01),且NF-κB转录活性下降(P<0.01)。结论:通过siRNA技术降低PKCε表达可抑制肝癌SK-Hep-1细胞增殖及其侵袭能力,其抑制作用可能与抑制NF-κB通路的转录活性有关。

异丙肾上腺素活化蛋白激酶Cε诱导心肌细胞ERK磷酸化

目的研究异丙肾上腺素(Iso)刺激心肌细胞后是否激活PKCε,探讨直接被cAMP激活的交换蛋白(Epac)在其中的作用及其与ERK信号通路的关系。方法以原代培养的Wistar乳鼠心肌细胞为实验细胞,用β肾上腺素能受体(β-AR)激动剂Iso、Epac激动剂8-CPT、Epac抑制剂Epac R279K(DN)及腺病毒编码兔肌肉cAMP依赖的蛋白激酶抑制剂(Ad.PKI)和PKCε转位抑制肽处理细胞,Western blot检测细胞颗粒部分PKCε及pERK1/2,激光共聚焦显微镜观察PKCε转位情况。结果 Iso引起心肌细胞颗粒部分PKCε增加,PKCε转位于胞核周围。8-CPT增加细胞颗粒部分PKCε(P<0.05)。Epac R279K感染细胞后再予Iso处理,颗粒部分PKCε与对照组相比无增加。Ad.PKI未抑制Iso引起的颗粒部分PKCε增加(P<0.01)。PKCε转位抑制肽阻断Iso诱导的ERK1/2磷酸化。结论心肌细胞中β-AR通过Epac介导以不依赖于PKA的方式活化PKCε并诱导ERK1/2磷酸化。

腺病毒介导的心肌蛋白激酶Cε基因转移导致心功能损害

目的 本文旨在研究腺病毒介导的成年小鼠心肌直接PKCε基因转移对左室收缩功能的影响。方法 使用标准方法建立表达PKCε基因的重组腺病毒载体。直接注射重组腺病毒到FVB/N和ICR小鼠心肌 ,对照鼠给予相同剂量空载腺病毒。Western免疫印迹测定PKCε蛋白质表达水平。用非开胸经颈总动脉插管的显微外科技术评价小鼠左室收缩功能。结果 与对照鼠相比基因转移鼠心肌转基因PKCε蛋白质表达水平增加近 4倍 ,基线左室最大收缩压、最大收缩速率 (dP/dt)、 -dP/dt明显降低 ,左室舒张末压、舒张压明显升高 (p <0 0 1) ,异丙肾上腺素激发后左室dP/dt剂量依赖的升高明显减弱 (p <0 0 1) ,PKCε基因转移鼠心脏 /体重比也较对照鼠明显增加 (p <0 0 1)。结论 腺病毒介导的、心肌直接的PKCε基因转移诱发了左室收缩功能的损害 ,导致了心肌肥厚和心衰。

蛋白激酶Cε的结构特点和生理、病理作用

蛋白激酶C(PKCε)归为新型PKC亚家族,其特点为非钙依赖而对佛波酯或二脂酰甘油(DAG)敏感的Ser/Thr蛋白激酶。PKCε在细胞内的区域化定位取决于第二信使和一些信号蛋白因子,这类蛋白因子能对G蛋白偶连受体、酪氨酸激酶受体和酪氨酸激酶偶连受体作出应答。PKCε调节各种生理功能包括神经、内分泌、外分泌、炎症和免疫系统活化。PKCε控制性活化在心肌缺血和Alzheimer′s病中起到积极作用,而非控制、长时间活性可导致严重疾病,如恶性肿瘤和糖尿病的发生。本文就PKCε亚细胞定位及生理、病理方面的近期研究作一综述。

微小RNA-31-5p调控蛋白激酶Cε通路在远程缺血预处理保护兔脊髓缺血再灌注损伤中的作用机制

目的探讨微小RNA-31-5p(miR-31-5p)在远程缺血预处理(RIPC)保护兔脊髓缺血再灌注损伤(SCIRI)中的作用及其机制。方法将60只日本大耳白兔分为假手术(sham)组、缺血再灌注(I/R)组、RIPC组、RIPC+miR-NC组、RIPC+miR-31-5p mimic组,每组12只。采用夹闭腹主动脉30 min建立SCIRI模型,通过鞘内注射miR-31-5p mimic质粒构建miR-31-5p过表达模型,除sham组和I/R组外,其余各组于闭腹主动脉前1 h实施RIPC。再灌注48 h后,对动物进行后肢运动功能评分和血-脊髓屏障(BSCB)通透性检测;苏木精-伊红(HE)染色观察脊髓组织形态学变化;TUNEL检测脊髓组织神经元凋亡情况;逆转录-实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测脊髓组织miR-31-5p和蛋白激酶Cε(PKCε)和脑源性神经营养因子(BDNF)的mRNA表达;Western Blot检测脊髓组织PKCε、BDNF蛋白表达。结果与sham组相比,I/R组后肢运动功能评分降低,伊文思蓝(EB)含量、神经元凋亡率增加,差异有统计学意义(P<0.05),且脊髓神经元数量减少,空泡化明显,胞核固缩;与I/R组相比,RIPC组后肢运动功能评分、PKCε和BDNF的mRNA和蛋白表达增加,EB含量、神经元凋亡率、miR-31-5p表达降低,差异有统计学意义(P<0.05),且正常神经元明显增多,少数细胞空泡变性,核仁明显;使用miR-31-5p mimic上调miR-31-5p的表达可显著减弱RIPC对兔SCIRI的保护作用(P<0.05)。结论 miR-31-5p的表达在RIPC后降低,并可通过激活PKCε蛋白,上调脊髓组织中BDNF的表达,减轻SCIRI。

腺病毒介导的心肌蛋白激酶Cε基因转移的心肌保护作用

目的 蛋白激酶Cε (ProteinKinaseCε,PKCε)转基因小鼠表现了保护心肌缺血 /再灌注损伤的遗传特性 (心肌保护表型 )。本文旨在研究腺病毒介导的成年小鼠心肌直接的PKCε基因转移对心肌缺血 -再灌注损伤的影响。方法 通过克隆PKCεcDNA到人类 5型腺病毒基因组DNA的E1区建立表达PKCε基因的重组腺病毒。直接注射重组腺病毒 3 3× 10 10 菌落形成单位 (pfu) /体重 (kg)到小鼠 (10～ 13周 ) ,对照鼠被直接注射相同剂量的空载腺病毒。Western免疫印迹被用于测定PKCε蛋白质表达水平。通过冠状动脉阻断 /再灌注、染色、照像和微机计算进行心肌梗死分析。结果 PKCε重组腺病毒直接心肌注射优于静脉注射 ;直接心肌注射后 4 8h ,基因转移鼠心肌PKCε蛋白质表达水平比对照鼠增加近 4倍。心脏重、左室重、危险区重和危险区重 /左室重百分数在PKCε基因转移和对照小鼠之间无显著差异 ,而PKCε基因转移小鼠的梗死重 [(35 4± 3 1)mgvs(10 3±1 3)mg]、梗死 /危险区域百分数 (5 1 1%± 0 3%vs 17 0 %± 2 6 % )、梗死 /左室百分数 (30 0 %±3 0 %vs 9 2 %± 0 5 % )明显低于对照鼠 (均P <0 0 1)。结论 腺病毒介导的、心肌直接的PKCε基因转移小鼠表现了对心肌梗死的保护作用。

蛋白激酶Cε过量表达与乳腺癌临床病理特征的关系

目的探讨蛋白激酶Cε(protein kinase C epsilon,PKCε)在乳腺组织中的表达及其过量表达与浸润性乳腺癌临床病理特征的关系。方法采用免疫组化法检测正常乳腺组织(33例)、导管原位癌(26例)及浸润性乳腺癌(126例)中PKCε的表达情况,分析其表达水平与乳腺癌临床病理特征的关系。结果PKCε在乳腺浸润性癌中的表达高于其在正常乳腺(P<0.05)和导管原位癌组织(P<0.05)中的表达,且与乳腺癌的组织学类型相关(P<0.05)。PKCε的过量表达与乳腺癌是否发生淋巴结转移、组织学分级、PR和HER2的表达相关(P<0.05),与患者年龄、癌灶大小、TNM分期、Ki67指数及ER的表达无显著相关(P>0.05)。结论PKCε的过量表达与乳腺癌的发生、转移及不良预后密切相关,检测PKCε的表达水平可作为乳腺癌预后判断的独立指标。

蛋白激酶Cε对大鼠背根神经节持续受压后背角星型胶质细胞激活和机械痛敏的影响

目的:探讨大鼠背根神经节持续受压(chronic compression of the dorsal root ganglion,CCD)后,脊髓背角星型胶质细胞的激活情况,以及PKCε是否可以通过调节星型胶质细胞的活性而参与CCD后神经病理性疼痛。方法:将大鼠随机分为6组,每组大鼠8只:假手术组、CCD7天组、CCD14天组、CCD7天+BIM I组、CCD+DMSO组、CCD+PDBu组,分别通过鞘内注射不同药物,或对正常大鼠鞘注DMSO/PDBu后,测量大鼠机械刺激缩爪阈值(paw withdrawal mechanical threshold,PWMT)的变化,利用Western Blot技术检测脊髓背角PKCε和GFAP蛋白表达的变化,利用免疫荧光技术检测脊髓背角星型胶质细胞激活情况。结果:CCD术后第4天,鞘内注射PKCε的激动剂PDBu 1—4h,明显降低CCD大鼠PWMT(P<0.05),而给予BIM I 1—4h,可升高CCD大鼠PWMT(P<0.05)。从CCD术后第4天起,连续3天鞘注BIM I,可明显缓解大鼠的机械痛敏(4天,P<0.05),但从停止注射后镇痛作用消失(P>0.05)。与假手术组比较,CCD后7天和14天,手术侧背角PKCε和GFAP表达升高,差异有显著性意义(P<0.05),星型胶质细胞激活增加,而注射BIM I可明显抑制PKCε和GFAP表达(P<0.05)和星型胶质细胞激活。PDBu可导致正常大鼠PWMT明显降低(P<0.05),GFAP蛋白质表达量增加(P<0.05),促进星型胶质细胞激活。结论:大鼠背根神经节持续受压后,机械痛阈下降的同时,手术侧脊髓背角内PKCε和GFAP蛋白表达上调,星型胶质细胞激活增加。PKCε可能通过调节星型胶质细胞激活参与CCD后病理性神经痛的中枢敏化机制。

血管紧张素Ⅱ对心肌成纤维细胞蛋白激酶Cε和蛋白激酶Cα表达及转位的影响

目的:探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对大鼠心肌成纤维细胞(MFs)蛋白激酶Cε(PKCε)和蛋白激酶Cα(PKCα)的表达及转位的影响,并探讨这两种PKC亚型在心室重构中的作用。方法:以第2～4代MFs分实验组(加AngⅡ10-6mol/L)和对照组(不加AngⅡ)通过间接免疫荧光法观察PKC亚型ε和α在细胞内的分布和定位,Image-pro-plus4.0版专业图像处理软件对荧光强度进行半定量统计。结果:荧光显微镜下观察到对照组和实验组PKC亚型ε都存在于膜、胞浆和核-细胞骨架,实验组强度明显增强,尤以核-细胞骨架为甚;对照组PKC亚型α主要存在于核-细胞骨架,而实验组α亚型存在于膜、胞浆和核-细胞骨架,强度都明显增加,尤以核-细胞骨架为甚;且PKC亚型ε和α荧光强度半定量比较实验组均显著高于对照组(P<0.001)。结论:AngⅡ对PKC亚型ε和α在MFs的表达和转位有显著影响,提示PKC亚型ε、α可能在MFs信号转导过程中起重要作用。

蛋白激酶Cε与胰岛β细胞分泌功能

蛋白激酶Cε(PKCε)是PKC家族中的一员,属于nPKC亚家族。抑制PKCε后可以降低肝胰岛素清除率,增强功能缺陷的胰岛β细胞对葡萄糖刺激的反应,增加胰岛素分泌,从而使胰岛β细胞分泌功能得到根本的改善。本文就蛋白激酶Cε与胰岛β细胞分泌功能做一综述。

蛋白激酶Cε在非酒精性脂肪性肝病与胰岛素抵抗关系中的作用

非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)与胰岛素抵抗息息相关。两者的流行是异位脂肪堆积的结果,但两者的发病机制尚有争议。30余年前,丝/苏氨酸激酶的蛋白激酶C(PKC)家族已被证实与肝脏、肌肉、脂肪细胞中的胰岛素功能改变相关,并提出了NAFLD与胰岛素抵抗之间的假定关系。PKC家族通过磷酸化和第二信使(如钙、二酰甘油)活化,人们根据各种第二信使的要求定义PKC的类别。

组织中蛋白激酶Cε表达对乳腺癌妇女临床病理特点的影响

研究组织中蛋白激酶Cε(PKCε)表达对乳腺癌妇女临床病理特点的影响。方法免疫组化法进行检测。收集的新鲜乳腺癌组织,使用4%福尔马林固定14 h,石蜡包埋,切成5µm的薄片。脱蜡,水化。山羊血清封闭,降低非特异性染色的概率。将多余血清倒出,加入一抗PKCε(1∶85稀释),冰箱4℃过夜,室温下放置20 min,缓冲液5 min/次,共3次。加入二抗,缓冲液洗3次(3 min/次);显色3 min,流水冲洗10 min,复染,脱水封片。将乳腺癌阳性切片作为阳性对照,鼠免疫球蛋白G(IgG)及磷酸盐缓冲液(PBS)代替一抗作为阴性对照。结果PKCε在56例非特殊型乳腺癌中有51例表达为阳性,阳性率达到91.07%。在38例导管原位癌中有31例为阳性表达,阳性率为81.58%。113例乳腺癌患者的切除组织中,不同年龄段之间存在较大差异,大部分集中在47~75的年龄范围内。在乳腺癌肿瘤直径中,直径>5 cm的患者中有93.33%的PKCε具有高表达。在TNM分期中,Ⅲ~Ⅳ期患者34例乳腺癌组织中,31例PKCε具有高表达,阳性率达到91.18%。结论组织中蛋白激酶Cε的表达升高与乳腺癌的患者的年龄、肿瘤直径、TNM分期及淋巴结转移之间具有相关性,PKCε的表达水平能够成为检测乳腺癌的重要指标。

补骨脂酚经蛋白激酶Cε拮抗内皮细胞缺血再灌注损伤

目的研究补骨脂酚(BAK)对血管内皮细胞模拟缺血再灌注损伤(SIR)的保护作用及其分子机制。方法用不同浓度BAK(2,5,10μmol/L)预处理体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)24 h,接受模拟缺血再灌注(SIR)损伤(缺血45min,再灌注4 h),用CCK-8法和TUNEL法分别检测细胞活力和凋亡率,酶活性测定法检测培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性,细胞中丙二醛(MDA)的含量及超氧化物歧化酶(SOD)的活性,DHE荧光探针检测细胞中活性氧(ROS)的含量,Western blot法检测细胞膜PKCε、细胞质PKCε、Bcl-2、Bax、cleaved caspase 3和gp91phox蛋白的表达水平。使用PKCε特异性阻断剂εV1-2阻断该信号通路,进一步探究PKCε信号通路在其中的作用。结果 BAK预处理呈剂量依赖性地改善内皮细胞SIR损伤,且10μmol/L剂量效果最佳。BAK预处理可明显提高缺血再灌注损伤后内皮细胞活力,减少LDH释放,增强细胞中SOD活性,降低MDA含量及gp91phox蛋白表达量,减少ROS的产生;促进抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,抑制凋亡蛋白cleaved caspase 3,Bax的表达,降低再灌注损伤后细胞凋亡率;并且显著促进PKCε膜转位,而特异性阻断PKCε信号通路可逆转BAK的上述保护作用(均P<0.05)。结论 BAK通过激活PKCε信号通路,进而增强细胞抗氧化应激和抗凋亡能力,最终缓解内皮细胞缺血再灌注损伤。

针刺强刺激对类痛经大鼠镇痛效应及二酰甘油/蛋白激酶C信号通路的影响

目的观察针刺强刺激对类痛经大鼠的镇痛效应及二酰甘油(DAG)/蛋白激酶C(PKC)信号通路的影响。方法40只雌性SD大鼠采用随机数字表法分为空白组、模型组、针刺弱刺激组和针刺强刺激组,每组10只,适应性饲养7 d后,采用苯甲酸雌二醇联合缩宫素注射法建立类痛经模型。其中,空白组与模型组不予针刺干预,针刺弱刺激组予Φ0.20 mm×1.5 mm揿针治疗,针刺强刺激组给予Φ0.25 mm×40 mm一次性针灸针进行深刺并行平补平泻手法,两组分别留针20 min后,观察大鼠的扭体反应。比较4组的扭体潜伏期和扭体评分,子宫平滑肌细胞内Ca 2+平均荧光强度(MFI),血清和子宫组织中的DAG水平,钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)水平和PKCγ蛋白表达的变化。结果模型组的扭体潜伏期短于空白组[(251±90)s比(505±76)s]、扭体评分高于空白组[(34.2±25.0)分比(5.9±2.1)分](P<0.01);针刺弱刺激组、针刺强刺激组的扭体潜伏期长于模型组[(354±109)s、(513±76)s比(251±90)s](P<0.05或P<0.01),针刺强刺激组的扭体评分低于模型组[(9.9±6.6)分比(34.2±25.0)分](P<0.01);针刺强刺激组的扭体潜伏期长于针刺弱刺激组(P<0.01)、扭体评分低于针刺弱刺激组[(9.9±6.6)分比(23.1±11.9)分](P<0.05)。模型组大鼠子宫平滑肌细胞内Ca 2+MFI显著高于空白组(P<0.01),针刺强刺激组和针刺弱刺激组大鼠子宫平滑肌细胞内Ca 2+MFI均明显低于模型组(578±134、588±288比1099±872)(P<0.05)。模型组血清和子宫组织中的DAG水平均明显高于空白组(P<0.01),针刺强刺激组和针刺弱刺激组血清和子宫组织中的DAG水平均明显低于模型组[(8.5±2.6)μg/L、(9.0±3.6)μg/L比(14.4±3.1)μg/L,(6.5±3.4)μg/L、(7.3±2.6)μg/L比(13.4±4.2)μg/L](P<0.01)。模型组的CaMKⅡ水平显著低于空白组(P<0.01),PKCγ蛋白表达水平高于空白组(P<0.01);针刺强刺激组的CaMKⅡ水平显著高于模型组(0.24±0.07比0.17±0.07)(P<0.01),PKCγ蛋白表达水平明显低于模型组(0.39±0.10比0.71±0.18)(P<0.01);针刺强刺激组的PKCγ蛋白表达水平低于针刺弱刺激组(0.39±0.10比0.62±0.22)(P<0.05)。结论针刺强刺激类痛经大鼠三阴交穴能更好地缓解大鼠的腹痛,且镇痛效应优于针刺弱刺激,其机制可能与DAG/PKC通路引起子宫平滑肌细胞内Ca 2+水平降低相关。

蛋白激酶C_ε在缺氧复氧心肌细胞中的调控作用

目的:研究蛋白激酶Cε(protein kinase Cε,PKCε)在缺氧复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)所致心肌细胞损伤中的调控作用。方法:取原代培养心肌细胞制作H/R模型,采用Western blot法检测PKCε蛋白转位;双抗体夹心化学发光法和酶联免疫吸附(ELISA)法分别检测培养心肌细胞上清液中肌钙蛋白(cTnI)浓度和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)分泌以观察心肌细胞损伤的状况。结果:与正常对照组比较,缺氧2 h复氧30 min时,PKCε总蛋白表达无明显变化,但PKCε由可溶性成分转位至颗粒性成分(P<0.05),延长缺氧时间至4 h,PKCε总蛋白表达明显下降(P<0.05);与H/R组比较,PKCε亚型特异性抑制剂εV1-2可增加cTnI漏出(P<0.05),但对TNF-α的分泌无明显影响。结论:PKCε转位可减轻心肌细胞H/R所致的损伤。

蛋白激酶C参与调控小鼠脑皮层神经元神经调节蛋白1表达的初步研究

为探索神经活动依赖的神经调节蛋白1(Nrg1)的表达及其机制,在体外培养的小鼠皮层神经元中,通过实时定量聚合酶链反应法发现氯化钾或荷包牡丹碱刺激6 h时,Nrg1和Ⅰ型Nrg1 mRNA表达增加,Ⅱ、Ⅲ型Nrg1表达不变。蛋白激酶C抑制剂bisⅠ可降低氯化钾诱发的Nrg1和Ⅰ型Nrg1 mRNA表达,蛋白激酶C抑制剂bisⅠ、丝裂原活化蛋白激酶抑制剂U0126和Ca^(2+)/钙调蛋白激酶抑制剂KN62,可降低荷包牡丹碱诱发的Nrg1和Ⅰ型Nrg1 mRNA表达。蛋白激酶C参与了氯化钾诱导的Nrg1和Ⅰ型Nrg1 mRNA的表达增加,蛋白激酶C、Ca^(2+)/钙调蛋白激酶和丝裂原活化蛋白激酶参与了荷包牡丹碱诱导的Nrg1和Ⅰ型Nrg1 mRNA的表达增加。

降钙素原通过影响磷酸化蛋白激酶Cα、闭合蛋白表达损害脓毒症大鼠肠黏膜屏障功能

目的研究降钙素原(procalcitonin,PCT)是否通过增加肠黏膜磷酸化蛋白激酶Cα(p-protein kinase Cα,p-PKCα)表达,减少闭合蛋白表达,从而损害脓毒症大鼠肠黏膜屏障。方法120~150g SPF级SD雄性大鼠20只,使用随机数表法随机分5组(每组4只)。(1)正常组:不做任何处理;(2)脓毒症组:盲肠结扎穿孔法(cecal ligation and puncture,CLP)造模;(3)脓毒症+PCT组:大鼠CLP造模后,尾静脉注射PCT;(4)脓毒症+PCT+Go6983组:大鼠CLP造模后,先后经尾静脉注射PCT及Go6983(PKCα磷酸化抑制剂);(5)脓毒症+Go6983组:大鼠CLP造模后,尾静脉注射Go6983。术后24h于眼静脉取血1ml行血清D-乳酸(D-lactic acid,D-lac)、二胺氧化酶(diamine oxidase,DAO)浓度测定,取血后处死大鼠,留取回肠末端肠道组织行组织学、免疫组化、免疫荧光、原位末端标记法(TdT-mediated dUTP nick end labeling,TUNEL)检查。结果与正常组比较,脓毒症组大鼠血清D-lac、DAO水平水平明显升高[(0.39±0.14)mmol/L比(5.15±0.66)mmol/L,(12.17±3.34)U/L比(31.43±3.94)U/L,P均<0.001];肠道组织中肠黏膜细胞p-PKCα表达增加[(58.85±11.43)×10^(3)IOD比(111.25±14.96)×10^(3)IOD],闭合蛋白表达量减少[(317.41±23.46)×10^(3)IOD比(192.98±15.97)×10^(3)IOD],肠黏膜细胞凋亡增加[(15.93±0.87)×10^(3)IOD比(20.53±1.87)×10^(3)IOD],P均<0.001,肠道组织病理损伤加重。与脓毒症组比较,脓毒症+PCT组大鼠血清D-lac、DAO水平升高[(5.15±0.66)mmol/L比(7.55±0.76)mmol/L,(31.43±3.94)U/L比(58.71±7.54)U/L,P均<0.001],肠道组织中肠黏膜细胞p-PKCα表达增加[(111.25±14.96)×10^(3)IOD比(220.51±24.04)×10^(3)IOD],闭合蛋白表达量减少[(192.98±15.97)×10^(3)IOD比(91.28±9.7)×10^(3)IOD],肠黏膜细胞凋亡增加[(20.53±1.87)×10^(3)IOD比(28.05±1.48)×10^(3)IOD],P均<0.001,肠道组织病理损伤加重。与脓毒症+PCT组相比,脓毒症+PCT+Go 6983组大鼠血清D-lac、DAO水平升高程度减少[(7.55±0.76)mmol/L比(5.55±0.73)mmol/L,(58.71±7.54)U/L比(42.68±2.78)U/L,P均<0.001],肠道组织中肠黏膜细胞p-PKCα表达减少[(220.51±24.04)×10^(3)IOD比(157.13±12.79)×10^(3)IOD,P=0.002],闭合蛋白表达量增多[(91.28±9.7)×10^(3)IOD比(131.23±11.58)×10^(3)IOD,P<0.001],肠黏膜细胞凋亡减少[(28.05±1.48)×10^(3)IOD比(22.66±0.72)×10^(3)IOD,P<0.001],肠道组织病理损伤减轻。与脓毒症+PCT+Go 6983组相比,脓毒症+Go6983组大鼠血清D-lac、DAO水平下降[(5.55±0.73)mmol/L比(2.82±0.49)mmol/L,(42.68±2.78)U/L比(23.28±3.86)U/L,P<0.001],肠道组织中肠黏膜细胞p-PKCα表达减少[(157.13±12.79)×10^(3)IOD比(81.84±11.53)×10^(3)IOD],闭合蛋白表达量增加[(131.23±11.58)×10^(3)IOD比(260.37±11.44)×10^(3)IOD],肠黏膜细胞凋亡减少[(22.66±0.72)×10^(3)IOD比(19.14±1.05)×10^(3)IOD],P均<0.001,肠道组织病理损伤减轻。结论PCT使脓毒症大鼠肠黏膜细胞p-PKCα表达增加,闭合蛋白表达减少,加重脓毒症大鼠肠屏障功能损害。