SiRNA干扰慢性炎性痛大鼠患侧背根神经节MrgC表达及PKCε磷酸化的研究

目的观察鞘内注射小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)对完全弗氏佐剂(complete freund’s adjuvant,CFA)诱导的慢性炎性痛大鼠患侧背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)中Mrg C(Mas-related G protein-coupled receptor C,Mrg C)mRNA与蛋白表达的干扰作用,并观察该作用对大鼠患足痛阈及患侧DRG PKCε丝氨酸729点位磷酸化(phosphorylation of PKCεSer729,p-PKCεSer729)水平的影响。方法健康雄性SD(Sprague-Dawley,SD)大鼠16只,随机分为对照siRNA组,Mrg C siRNA组,每组8只。大鼠脊髓鞘内插管成功后,两组大鼠给予相应药物鞘内注射4 d,1次/d,5μg/d/只。给药第4 d,大鼠右后足底注射CFA 0.1 m L建立慢性炎性痛模型,此后隔日注射药物,直至给药第11 d处死。分别于鞘内置管前、给药前、给药4 d(CFA造模0 h)、给药5 d(CFA造模24 h)、给药11 d(CFA造模7 d)5个时点检测大鼠患足机械缩腿阈(Paw withdrawal thresholds,PWTs)的变化。荧光定量PCR法检测患侧DRG Mrg C的mRNA的表达,免疫荧光法检测患侧DRG Mrg C表达量及p-PKCεSer729的含量。结果与给药4 d比较,给药5 d两组大鼠的PWTs均有显著的下降(P<0.01);给药前后各时点,两组大鼠之间PWTs没有明显差异。观察给药11d时大鼠患侧L4-L6 DRG Mrg C mRNA的表达,与对照siRNA组比较,Mrg C siRNA组各神经节Mrg C mRNA的表达均明显下降(P<0.01);观察大鼠给药11d时大鼠患侧L4-L6 DRG Mrg C与p-PKCεSer729的表达,与对照siRNA组比较,Mrg C siRNA组患侧DRG的Mrg C阳性细胞率明显减少(P<0.01),而p-PKCεSer729的阳性细胞率显著上升(P<0.05)。结论 Mrg C siRNA片段可有效干扰CFA慢性炎性痛大鼠患侧L4-L6 DRG Mrg C mRNA与Mrg C的表达,对Mrg C的干扰作用能显著上调PKCεSer729磷酸化的水平,但不影响大鼠患足机械缩腿阈。