蛋白激酶Cζ在人类NSCLC细胞趋化运动中的作用

[目的]探讨蛋白激酶Cζ(PKCζ)在表皮生长因子及其受体(EGF/EGFR)诱导的人类非小细胞肺癌(NSCLC)细胞(A549、H1299)趋化运动中所起的作用。[方法]利用趋化实验比较不同化诱因子及不同亚型PKC分子在趋化运动中的作用。[结果]EGF诱导的趋化运动指数比趋化因子CXCL12诱导的高出近3.6倍(P<0.001);且用针对不同PKC亚型的抑制剂及PKCζ假底物处理细胞,Chelerythrine chloride对EGF诱导的A549趋化运动阻断具有剂量依赖性(P1=0.0372,P2=0.0098,P3<0.0001);myr-假底物对A549趋化运动的阻断也具有剂量依赖性(P1=0.0227,P2=0.0081,P3<0.0001),对H1299趋化运动具有阻断作用但无剂量依赖性(P≤0.0066);其他抑制剂仍可以使EGF诱导出趋化运动。[结论]在NSCLC细胞中,EGF诱导趋化运动的能力强于CXCL12,且PKCζ参与了EGF诱导的趋化运动。

蛋白激酶Cζ在乳腺癌侵袭转移中的意义

目的分析蛋白激酶Cζ(PKCζ)在乳腺癌组织中的表达与临床病理的关系,探讨PKCζ在乳腺癌侵袭转移中的作用机制。方法采用免疫组织化学与逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测15例正常乳腺组织及52例乳腺癌组织中PKCζ的表达,分析其与乳腺癌临床病理特征、侵袭性和转移性的关系。结果 PKCζ在各组中均有表达,乳腺癌中的表达量显著高于正常乳腺组织(P<0.05);浸润性导管癌中的表达量显著高于导管内癌(P<0.05);伴淋巴结转移的浸润性导管癌中的表达量高于无淋巴结转移的浸润性导管癌(P<0.05)。结论 PKCζ的异常表达与乳腺癌发生发展密切相关,与肿瘤细胞分化程度、淋巴结转移存在正相关。PKCζ可能作为一种诱导因子在乳腺癌侵袭和转移中发挥作用。

蛋白激酶Cζ抑制剂对皮肤鳞癌细胞A-431增殖和侵袭的影响

目的探讨蛋白激酶C(PKC)ζ抑制剂T5450996对皮肤鳞癌细胞A-431增殖和侵袭能力的影响。方法应用Z′-LYTE^(?)试剂盒筛选PKCζ抑制剂T5450996;利用细胞增殖实验和细胞周期分析观察T5450996对皮肤鳞癌细胞A-431增殖的影响;运用划痕实验和侵袭实验分析T5450996对A-431迁移和侵袭能力的影响。结果T5450996可以抑制PKCζ激酶的活性,半数抑制浓度(IC_(50))约为35μmol/L;与对照组相比,35μmol/L和70μmol/L的T5450996可以显著抑制A-431细胞的增殖,阻滞A-431细胞周期;划痕实验和侵袭实验结果显示35μmol/L和70μmol/L的T5450996处理A-431细胞后,A-431细胞的迁移及侵袭能力明显下降(均P<0.05),20μmol/L的T5450996没有明显作用(均P>0.05)。结论 PKCζ抑制剂T5450996可显著抑制皮肤鳞癌细胞A-431的增殖和侵袭能力,是一个有潜在应用前景的小分子抑制剂。

蛋白激酶Cζ抑制剂对人乳腺癌细胞侵袭迁移力的影响

目的探讨蛋白激酶C(PKC)ζ抑制剂T1038-2546对人乳腺癌细胞侵袭迁移力的影响。方法体外应用美国经典Z'-LYTETM试剂盒筛选出PKCζ的高效抑制剂T1038-2546,其半数抑制浓度(IC50)约为30μmol/L;通过观察T1038-2546处理人乳腺癌MDA-MB-231细胞前后细胞的生长速度,细胞周期分布以及细胞侵袭迁移能力的改变,探讨T1038-2546对乳腺癌细胞MDA-MB-231恶性生物学行为的影响。结果与DMSO处理的MDA-MB-231细胞(对照组)相比,低浓度T1038-2546处理的细胞(实验组)生长速度没有明显改变,而90和180μmol/L T1038-2546处理的MDA-MB-231细胞生长速度明显减慢(P<0.05),并且呈现时间依赖性;实验组与对照组细胞相比,细胞周期分布差异无显著性(P>0.05);体外迁移实验结果显示,与对照组细胞相比,30μmol/L T1038-2546处理组细胞的迁移能力明显减弱(P<0.05);体外侵袭实验结果显示,30μmol/L T1038-2546处理组细胞的穿膜细胞数明显少于对照组细胞的穿膜细胞数,差异有显著性(P<0.05)。结论蛋白激酶Cζ抑制剂T1038-2546可显著抑制人乳腺癌细胞MDA-MB-231的侵袭迁移力。

蛋白激酶C_ζ对小鼠受精卵发育早期基因组转录活化的影响

为研究蛋白激酶Cζ (proteinkinaseCζ ,PKCζ)在小鼠受精卵细胞早期发育过程中对胚胎基因组活化影响 ,采用免疫印迹和细胞免疫荧光的方法 ,观察PKCζ的抑制剂对小鼠受精卵 1 细胞期G1和G2 不同时期小鼠受精卵基因组活化的影响 .小鼠 1 细胞期受精卵蛋白激酶C (PKC)的活性不断增加 ,并在G2 期达到最高 .PKC的抑制剂calphostinC可以明显抑制PKC的活性达 4 7% .同时calphostinC对受精卵 1 细胞期基因组的早期活化具有显著的抑制作用 (P <0 0 1) .在小鼠 1 细胞期受精卵的G2 期 ,具有活性的磷酸化PKCζ的含量明显多于G1期和卵母细胞MⅡ期 ,分别比它们高2 7%和 110 % .PKCζ的特异性抑制剂可以抑制受精卵 1 细胞期基因的转录和活化 (P <0 0 5 ) .实验结果表明 。

针刺强刺激对类痛经大鼠镇痛效应及二酰甘油/蛋白激酶C信号通路的影响

目的观察针刺强刺激对类痛经大鼠的镇痛效应及二酰甘油(DAG)/蛋白激酶C(PKC)信号通路的影响。方法40只雌性SD大鼠采用随机数字表法分为空白组、模型组、针刺弱刺激组和针刺强刺激组,每组10只,适应性饲养7 d后,采用苯甲酸雌二醇联合缩宫素注射法建立类痛经模型。其中,空白组与模型组不予针刺干预,针刺弱刺激组予Φ0.20 mm×1.5 mm揿针治疗,针刺强刺激组给予Φ0.25 mm×40 mm一次性针灸针进行深刺并行平补平泻手法,两组分别留针20 min后,观察大鼠的扭体反应。比较4组的扭体潜伏期和扭体评分,子宫平滑肌细胞内Ca 2+平均荧光强度(MFI),血清和子宫组织中的DAG水平,钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)水平和PKCγ蛋白表达的变化。结果模型组的扭体潜伏期短于空白组[(251±90)s比(505±76)s]、扭体评分高于空白组[(34.2±25.0)分比(5.9±2.1)分](P<0.01);针刺弱刺激组、针刺强刺激组的扭体潜伏期长于模型组[(354±109)s、(513±76)s比(251±90)s](P<0.05或P<0.01),针刺强刺激组的扭体评分低于模型组[(9.9±6.6)分比(34.2±25.0)分](P<0.01);针刺强刺激组的扭体潜伏期长于针刺弱刺激组(P<0.01)、扭体评分低于针刺弱刺激组[(9.9±6.6)分比(23.1±11.9)分](P<0.05)。模型组大鼠子宫平滑肌细胞内Ca 2+MFI显著高于空白组(P<0.01),针刺强刺激组和针刺弱刺激组大鼠子宫平滑肌细胞内Ca 2+MFI均明显低于模型组(578±134、588±288比1099±872)(P<0.05)。模型组血清和子宫组织中的DAG水平均明显高于空白组(P<0.01),针刺强刺激组和针刺弱刺激组血清和子宫组织中的DAG水平均明显低于模型组[(8.5±2.6)μg/L、(9.0±3.6)μg/L比(14.4±3.1)μg/L,(6.5±3.4)μg/L、(7.3±2.6)μg/L比(13.4±4.2)μg/L](P<0.01)。模型组的CaMKⅡ水平显著低于空白组(P<0.01),PKCγ蛋白表达水平高于空白组(P<0.01);针刺强刺激组的CaMKⅡ水平显著高于模型组(0.24±0.07比0.17±0.07)(P<0.01),PKCγ蛋白表达水平明显低于模型组(0.39±0.10比0.71±0.18)(P<0.01);针刺强刺激组的PKCγ蛋白表达水平低于针刺弱刺激组(0.39±0.10比0.62±0.22)(P<0.05)。结论针刺强刺激类痛经大鼠三阴交穴能更好地缓解大鼠的腹痛,且镇痛效应优于针刺弱刺激,其机制可能与DAG/PKC通路引起子宫平滑肌细胞内Ca 2+水平降低相关。

蛋白激酶C参与调控小鼠脑皮层神经元神经调节蛋白1表达的初步研究

为探索神经活动依赖的神经调节蛋白1(Nrg1)的表达及其机制,在体外培养的小鼠皮层神经元中,通过实时定量聚合酶链反应法发现氯化钾或荷包牡丹碱刺激6 h时,Nrg1和Ⅰ型Nrg1 mRNA表达增加,Ⅱ、Ⅲ型Nrg1表达不变。蛋白激酶C抑制剂bisⅠ可降低氯化钾诱发的Nrg1和Ⅰ型Nrg1 mRNA表达,蛋白激酶C抑制剂bisⅠ、丝裂原活化蛋白激酶抑制剂U0126和Ca^(2+)/钙调蛋白激酶抑制剂KN62,可降低荷包牡丹碱诱发的Nrg1和Ⅰ型Nrg1 mRNA表达。蛋白激酶C参与了氯化钾诱导的Nrg1和Ⅰ型Nrg1 mRNA的表达增加,蛋白激酶C、Ca^(2+)/钙调蛋白激酶和丝裂原活化蛋白激酶参与了荷包牡丹碱诱导的Nrg1和Ⅰ型Nrg1 mRNA的表达增加。

降钙素原通过影响磷酸化蛋白激酶Cα、闭合蛋白表达损害脓毒症大鼠肠黏膜屏障功能

目的研究降钙素原(procalcitonin,PCT)是否通过增加肠黏膜磷酸化蛋白激酶Cα(p-protein kinase Cα,p-PKCα)表达,减少闭合蛋白表达,从而损害脓毒症大鼠肠黏膜屏障。方法120~150g SPF级SD雄性大鼠20只,使用随机数表法随机分5组(每组4只)。(1)正常组:不做任何处理;(2)脓毒症组:盲肠结扎穿孔法(cecal ligation and puncture,CLP)造模;(3)脓毒症+PCT组:大鼠CLP造模后,尾静脉注射PCT;(4)脓毒症+PCT+Go6983组:大鼠CLP造模后,先后经尾静脉注射PCT及Go6983(PKCα磷酸化抑制剂);(5)脓毒症+Go6983组:大鼠CLP造模后,尾静脉注射Go6983。术后24h于眼静脉取血1ml行血清D-乳酸(D-lactic acid,D-lac)、二胺氧化酶(diamine oxidase,DAO)浓度测定,取血后处死大鼠,留取回肠末端肠道组织行组织学、免疫组化、免疫荧光、原位末端标记法(TdT-mediated dUTP nick end labeling,TUNEL)检查。结果与正常组比较,脓毒症组大鼠血清D-lac、DAO水平水平明显升高[(0.39±0.14)mmol/L比(5.15±0.66)mmol/L,(12.17±3.34)U/L比(31.43±3.94)U/L,P均<0.001];肠道组织中肠黏膜细胞p-PKCα表达增加[(58.85±11.43)×10^(3)IOD比(111.25±14.96)×10^(3)IOD],闭合蛋白表达量减少[(317.41±23.46)×10^(3)IOD比(192.98±15.97)×10^(3)IOD],肠黏膜细胞凋亡增加[(15.93±0.87)×10^(3)IOD比(20.53±1.87)×10^(3)IOD],P均<0.001,肠道组织病理损伤加重。与脓毒症组比较,脓毒症+PCT组大鼠血清D-lac、DAO水平升高[(5.15±0.66)mmol/L比(7.55±0.76)mmol/L,(31.43±3.94)U/L比(58.71±7.54)U/L,P均<0.001],肠道组织中肠黏膜细胞p-PKCα表达增加[(111.25±14.96)×10^(3)IOD比(220.51±24.04)×10^(3)IOD],闭合蛋白表达量减少[(192.98±15.97)×10^(3)IOD比(91.28±9.7)×10^(3)IOD],肠黏膜细胞凋亡增加[(20.53±1.87)×10^(3)IOD比(28.05±1.48)×10^(3)IOD],P均<0.001,肠道组织病理损伤加重。与脓毒症+PCT组相比,脓毒症+PCT+Go 6983组大鼠血清D-lac、DAO水平升高程度减少[(7.55±0.76)mmol/L比(5.55±0.73)mmol/L,(58.71±7.54)U/L比(42.68±2.78)U/L,P均<0.001],肠道组织中肠黏膜细胞p-PKCα表达减少[(220.51±24.04)×10^(3)IOD比(157.13±12.79)×10^(3)IOD,P=0.002],闭合蛋白表达量增多[(91.28±9.7)×10^(3)IOD比(131.23±11.58)×10^(3)IOD,P<0.001],肠黏膜细胞凋亡减少[(28.05±1.48)×10^(3)IOD比(22.66±0.72)×10^(3)IOD,P<0.001],肠道组织病理损伤减轻。与脓毒症+PCT+Go 6983组相比,脓毒症+Go6983组大鼠血清D-lac、DAO水平下降[(5.55±0.73)mmol/L比(2.82±0.49)mmol/L,(42.68±2.78)U/L比(23.28±3.86)U/L,P<0.001],肠道组织中肠黏膜细胞p-PKCα表达减少[(157.13±12.79)×10^(3)IOD比(81.84±11.53)×10^(3)IOD],闭合蛋白表达量增加[(131.23±11.58)×10^(3)IOD比(260.37±11.44)×10^(3)IOD],肠黏膜细胞凋亡减少[(22.66±0.72)×10^(3)IOD比(19.14±1.05)×10^(3)IOD],P均<0.001,肠道组织病理损伤减轻。结论PCT使脓毒症大鼠肠黏膜细胞p-PKCα表达增加,闭合蛋白表达减少,加重脓毒症大鼠肠屏障功能损害。

糖尿病胃动力障碍大鼠胃窦平滑肌中蛋白激酶C的活性变化

[目的]观察糖尿病胃动力障碍大鼠胃窦平滑肌中蛋白激酶C(PKC)活性的变化情况.[方法]通过腹腔注射给予链脲佐菌素制作糖尿病大鼠模型,利用RM-6240四道生理信号记录仪观察大鼠胃窦环行平滑肌自发性收缩运动情况,将自发性收缩运动减弱的大鼠归为糖尿病胃动力障碍模型组.采用蛋白免疫印迹法观察PKC的活性变化.[结果]与正常对照组比较,糖尿病组大鼠胃窦平滑肌组织PKCα、PKCβⅠ蛋白膜浆比明显减小,且PKCα磷酸化情况亦明显降低(P<0.05),即PKC活性明显减弱.[结论]糖尿病大鼠发生胃动力障碍可能与胃窦平滑肌中PKC活性减弱有关系.

蛋白激酶CβⅡ通过调控翻译起始介导上皮-间充质转化促进肝细胞癌转移

目的:研究蛋白激酶C β Ⅱ(protein kinase C β Ⅱ, PKCβⅡ)上调Snail和Twist蛋白表达介导上皮-间充质转化的分子机制。方法:采用[35S]-甲硫氨酸掺入实验和核糖体分离实验观察PKCβⅡ对Snail和Twist mRNA翻译的影响。敲减真核翻译起始因子4E(eukaryotic translation initiation factor 4E, eIF4E)通过核糖体分离实验、Western blot及RT-qPCR观察对PKCβⅡ调控Snail和Twist表达的影响。利用Western blot观察PKCβⅡ对调控eIF4E活性的相关信号通路的影响。利用Western blot观察应用丝裂原活化蛋白激酶相互作用激酶1(mitogen-activated protein kinase-interacting kinase 1, MNK1)抑制剂或雷帕霉素对PKCβⅡ调控Snail和Twist蛋白表达的影响。利用Transwell实验观察敲减eIF4E对PKCβⅡ调控肝癌细胞侵袭的影响。结果:[35S]-甲硫氨酸掺入实验和核糖体分离实验表明,相比β-actin,PKCβⅡ显著上调Snail和Twist mRNA的翻译(P<0.01)。敲减eIF4E抑制PKCβⅡ介导的Snail和Twist mRNA翻译和蛋白表达的上调(P<0.01),但对Snail和Twist的转录没有影响。高表达PKCβⅡ激活细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase, ERK)/MNK1及蛋白激酶B(protein kinase B, PKB/AKT)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin, mTOR)/eIF4E结合蛋白1(eIF4E-binding protein 1, 4E-BP1)通路上调eIF4E的活性(P<0.01)。应用MNK1抑制剂或雷帕霉素可抑制PKCβⅡ介导的Snail和Twist蛋白表达上调(P<0.01)。敲减eIF4E抑制PKCβⅡ介导的肝癌细胞侵袭能力的增强(P<0.01)。结论:PKCβⅡ通过激活ERK/MNK1通路和AKT/mTOR/4E-BP1通路上调eIF4E的活性,优先促进Snail和Twist mRNA的翻译,介导上皮-间充质转化,从而促进肝细胞癌的转移。这提示PKCβⅡ作为肝细胞癌治疗靶点的潜力。

结肠腺癌中蛋白激酶C亚型的表达及意义

目的探讨蛋白激酶C(PKC)α、βⅡ、ε、ζ在结肠腺癌中的表达及与结肠腺癌发生、发展及转移的关系。方法选择2010年4月至2012年8月大庆油田总医院收治的82例原发性结肠腺癌患者的手术切除标本,其中管状腺癌52例,黏液腺癌30例;淋巴结转移39例,无淋巴结转移43例。采用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶法检测癌组织标本中PKCα、βⅡ、ε、ζ蛋白的表达。结果 52例结肠管状腺癌中,PKCα、βⅡ、ζ3个亚型的阳性表达率在高、中、低各分化组之间比较差异均无统计学意义(P>0.05);而PKCε亚型的阳性表达率在高、中分化组之间以及中、低分化组之间比较差异均无统计学意义(P>0.05),但高分化组的阳性表达率显著低于低分化组(χ2=31.523,P<0.05)。黏液腺癌组织中PKCα、βⅡ的阳性表达率显著低于管状腺癌组织(P<0.05),而PKCε的阳性表达率则显著高于管状腺癌组织(P<0.05);黏液腺癌组织与管状腺癌癌组织中PKCζ的阳性表达率比较差异无统计学意义(P>0.05)。原发性结肠腺癌患者中无淋巴结转移者癌组织中PKCα的阳性表达率显著高于有淋巴结转移者(P<0.05);无淋巴结转移者癌组织中PKCβⅡ、ε、ζ的阳性表达率与有淋巴结转移者比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 PKC各亚型在结肠腺癌发生、发展和转移中的作用不同,PKCε在结肠管状腺癌中的表达与分化有关,PKCε可能参与了黏液腺癌的黏液分泌,PKCα、βⅡ可能与结肠管状腺癌的细胞增殖有关;PKCα与结肠腺癌淋巴结转移有关。

蛋白激酶Cζ蛋白在胶质瘤中表达的意义

目的探讨蛋白激酶Cζ（PKCζ）在人脑胶质瘤组织以及癌旁组织中的表达及其与胶质瘤分级和预后的关系。方法采用免疫组织化学过氧化物酶标记的链霉卵白素染色（SP）法检测67例胶质瘤及癌旁组织中PKCζ的表达，并利用Westernblot法进行验证。同时随访患者的牛存情况，采刷Kaplan—Meier法分析，行Log—rank检验。结果PKCζ在各级别胶质瘤中均有表达，表达强度随着级别增高而增加，高级别胶质瘤的PKCζ阳性表达率高于低级别胶质瘤，其表达差异有统计学意义（P〈0．05），而在癌旁组织中仅微弱表达（≤5％，判定为阴性）。PKCζ阳性患者的平均生存时间短丁阴性患者（P〈0．05）。结论 PKCζ在胶质瘤中的表达与胶质瘤恶性程度呈正午甘关，PKCζ阳性患者的预后比阴性表达患者差，PKCζ可能促进了胶质瘤的发生进展。

蛋白激酶C活性变化对Adipophilin介导THP-1巨噬细胞脂质蓄积的影响

以THP-1巨噬细胞为研究对象,观察蛋白激酶C(PKC)激动剂佛波酯(PMA)和抑制剂钙磷酸结合蛋白C(CalphostinC)对胞膜PKC活性、胞膜PKCα及胞浆内过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARγ)和adipophilin表达以及细胞内脂质蓄积的影响,初步探讨PKC调控adipophilin表达及脂质蓄积的作用机制.采用PepTagRAssay、RT-PCR、蛋白质印迹、油红O染色和高效液相色谱法,观察到100nmol/LPMA在激活胞膜PKC((0.2514±0.0154)U/ml)的同时可以与氧化低密度脂蛋白(oxLDL)协同增强PKCα、PPARγ和adipophilin表达并使细胞内脂滴的蓄积极大地增强.细胞内胆固醇酯/总胆固醇比值增至(69.8±9.5)%;300nmol/L CalphostinC对荷脂THP-1巨噬细胞的处理则抑制酶活性至((0.0927±0.0056)U/ml,细胞内脂滴减少,胆固醇酯/总胆固醇比值降至(40.1±9.1)%;CalphostinC呈剂量依赖性的方式下调酶活性、PKCα、PPARγ和adipophilin表达,400nmol/LCalphostinC基本上可以逆转50mg/LoxLDL诱导的酶活化和PKCα、PPARγ和adipophilin表达的上调.结果提示,蛋白激酶C活性的改变可以影响adipophilin介导的脂质蓄积,其中PPARγ可能在这一调控机制中发挥了重要作用.

菟箭合剂对糖尿病大鼠肾组织蛋白激酶C活性作用的研究

目的 :观察菟箭合剂对实验性糖尿病肾病大鼠肾组织蛋白激酶C(PKC)活性、肾功能及肾脏结构的影响。方法 :单肾切除加链脲佐菌素 (STZ)腹腔注射制作糖尿病肾病动物模型。中药菟箭合剂 (2 0g·kg-1·d-1)和阳性对照药缬沙坦 (2 0mg·kg-1·d-1)干预治疗 12周 ,用氚标记的二丁酸佛波醇酯 ([3 H]PDBu)结合法测定大鼠肾组织PKC活性 ,检测 2 4h尿蛋白排出量 (Upro) ,肾脏常规染色光镜观察病理变化。结果 :12周时单肾糖尿病大鼠肾组织出现肾小球硬化病理改变 ,Upro明显升高 ,细胞膜PKC活性 (mPKC)明显升高 ,细胞浆PKC活性 (cPKC)明显降低 ,mPKC和cPKC比值 (M/C)明显升高。菟箭合剂和缬沙坦干预治疗显著降低Upro ,降低mPKC和M/C ,升高cPKC(P <0 .0 1) ,改善肾组织病理改变。结论 :菟箭合剂对单肾切除STZ糖尿病大鼠具有肾保护作用 ,推测部分地通过抑制肾组织PKC激活途径来达到的。

幽门螺杆菌与蛋白激酶C在胃癌及癌前病变基因突变中的作用

目的通过检测慢性胃炎、肠化生、不典型增生和胃癌组织中幽门螺杆菌(Hp)感染、蛋白激酶C(PKC)水平、细胞增殖水平以及p53突变基因表达状态探讨Hp感染在胃癌发生中的作用及其作用机制。方法采用病例对照研究,病例来源于中山医院,经内镜和病理检查证实。Hp感染采用快速尿素酶和病理Gimsa染色检测。PKC的检测采用免疫组化EnVision^(TM)法,增殖细胞核抗原(PCNA)、突变型p53基因表达的检测采用免疫组织化学方法。结果①总的Hp感染的检出率为76.2％(138/181)。在慢性胃炎肠化生组、不典型增生组、胃癌组分别为62.0％(31/50),88.6％(39/44),78.3％(68/87),均明显高于单纯慢性胃炎对照组52.6％(20/38,P<0.05)。②PCNA增殖指数在三组病例中均处于高水平,且Hp阳性组均高于Hp阴性组。③突变型p53基因表达在肠上皮化生、不典型增生和胃癌组阳性率分别为36.0％(18/50),54.6％(24/44),57.2％(48/84)。不典型增生和胃癌组均明显高于肠上皮化生组。在肠化生组,Hp阳性病例的P53表达率明显高于Hp阴性病例(48.5％ vs15.8％,P=0.020)。但在不典型增生和胃癌组,Hp阳性与Hp阴性病例的P53突变蛋白表达率无明显差别(53.9％ vs60.0％,P=0.794;53.8％ vs 68.4％,P=0.258)。P53表达与PCNA增殖指数有明显的相关性。④PKC在慢性胃炎伴肠化生、不典型增生和胃癌组阳性表达的比例呈递增趋势,分别为16.0％,28.5％,41.8％,对照组的阳性表达率不足5％。Hp阳性组PKC表达阳性率(47/130,36.2％)高于Hp阴性组(6/41,14.6％.P=(0.010)。PKC表达组,其P53表达的阳性率和阳性表达程度均高于PKC无表达的病例,在肠化生组统计学检验差异有显著性(75.0％ vs 28.6％,P=0.012),不典型增生(66.7％ vs 50.0％,P=0.430)和胃癌(63.6％ vs 52.2％,P=0.310)统计学检验差异无显著性。结论在从慢性胃炎到肠上皮化生、不典型增生、胃癌的发生过程中,存在PKC表达水平的增高、PCNA高表达和突变型P53基因表达的异常增高,而且这种增高在肠上皮化生阶段就很明显。Hp感染在肠化生阶段促进p53基因突变,其作用途径可能系通过PKC表达增强。P53蛋白可以作为早期监测胃癌发生或高危人群(肠化生)的指标。

虎杖苷对缺血缺氧下平滑肌细胞蛋白激酶C的影响

目的 观察虎杖苷对缺血缺氧作用下血管平滑肌细胞(VSMC)蛋白激酶C(PKC)活性的影响以探讨其抗休克作用的机制。方法 取大鼠胸主动脉培养VSMC,用Koyama方法复制VSMC缺血缺氧模型。用液体闪烁计数仪测定PKC的活性。结果 缺血缺氧状态下VSMC胞浆PKC的活性上升(vs正常组P<0 .05),但胞膜的PKC活性下降(vs正常组P<0 .05),经PD治疗后胞浆PKC的活性下降(vs缺血缺氧组、治疗对照组P<0. 05,vs正常组P>0 05 ),胞膜的PKC活性上升(vs缺血缺氧组、治疗对照组P<0 .05,vs正常组P>0 .05)。结论 PD对缺血缺氧作用下的VSMCPKC的活性有调节作用,这可能是PD抗休克作用的分子机制之一。

蛋白激酶C对大鼠支气管平滑肌K_V通道的影响

用全细胞膜片钳、Western印迹法和逆转录 PCR技术 ,观察蛋白激酶C ( proteinkinaseC ,PKC)对大鼠支气管平滑肌细胞 (bronchialsmoothmusclecells,BSMCs)电压依赖性延迟整流钾通道 (KV)活性及其亚型KV1 5表达的影响。结果为 :( 1)PKC激活剂豆蔻酰佛波醇乙酯 (phorbol 12 myristate 13 acetate ,PMA)显著抑制急性分离大鼠BSMCs的KV 通道电流 ,该效应被PKC阻断剂Ro3 1 82 2 0显著抑制 ;( 2 )PMA显著抑制体外培养大鼠BSMCs的KV1 5mRNA和蛋白质的表达 ,该效应被Ro3 1 82 2 0显著抑制。上述观察结果提示 ,PKC活化可抑制大鼠BSMCs的KV 通道电流活性 ,下调KV1

ACh对人垂体腺瘤细胞内蛋白激酶C、胞内游离钙及cAMP/cGMP的影响

我们曾发现ACh可明显地抑制垂体腺瘤细胞的增殖代谢 ,为深入探讨ACh抑制垂体腺瘤细胞增殖作用的机制 ,观察了ACh作用后垂体腺瘤细胞内蛋白激酶C (PKC)、[Ca2 +]i及cAMP/cGMP的变化。结果发现 :( 1)与空白处理组相比 ,使用PKC的激动剂PMA处理培养的人垂体腺瘤细胞时可使胞浆、胞膜和细胞总PKC活性浓度均升高 ,但ACh ( 10 μmol/L)作用 15min后 ,胞浆、胞膜和细胞总PKC活性均下降 ,且此作用可被阿托品阻断 ;( 2 )ACh ( 10 μmol/L)作用于单个人垂体腺瘤细胞后 ,立即使垂体腺瘤细胞 [Ca2 +]i 相对水平降低 ,但此作用可被阿托品阻断 ;( 3 )ACh作用于人垂体腺瘤细胞 15min后 ,胞内cAMP水平均明显升高 ,而cGMP没有改变。该结果为探讨ACh抑制垂体腺瘤细胞增殖的分子机制提供了重要线索 ,同时提示 。

灯盏花素对脑死亡巴马小型猪心脏结构、功能及蛋白激酶C表达的影响

目的探讨灯盏花素对脑死亡巴马小型猪心脏结构、功能及蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)表达的影响。方法巴马小型猪15只,随机分为脑死亡组、灯盏花素组及对照组。应用缓慢间断颅内加压法建立脑死亡模型。分别于脑死亡后6、12和24 h取血清及心肌组织进行研究。结果①脑死亡24 h灯盏花素组心肌损伤明显轻于脑死亡组;②脑死亡后各时间点灯盏花素组血清肌钙蛋白T(cTnT)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平均较脑死亡组低;③脑死亡24 h灯盏花素组心肌蛋白激酶C表达水平均显著低于脑死亡组。结论灯盏花素可通过抑制蛋白激酶C,减少炎症因子释放,减轻脑死亡巴马小型猪的心脏损伤。

灵芝多糖对小鼠腹腔巨噬细胞蛋白激酶C活性的影响

目的 观察灵芝多糖在体外对小鼠腹腔巨噬细胞(MΦ)蛋白激酶C(PKC)活性是否有影响。方法 采用反相离子对高效液相色谱法测定PKC活力。结果 灵芝多糖GLB7( 40mg·L-1)能引起小鼠腹腔MΦ中PKC活性明显升高 ,30min达峰值 ,2h恢复到基础水平 ;GLB7还可引起MΦ中PKC发生质膜转位 ,并拮抗Staurosporine对MΦ中PKC的抑制作用。