蛋白激酶Cξ亚型基因多态性与2型糖尿病的相关性

目的研究中国东南方汉族人群2型糖尿病家系的蛋白激酶Cξ亚型基因多态性,探讨其与2型糖尿病（T2DM）易感性的关系。方法应用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）方法,对来自T2DM家系成员、无家族史的T2DM患者及正常对照的该基因rs381664位点进行基因分型。结果rs381664位点基因型、等位基因频率在各组人群中分布差异无统计学意义。按年龄分层显示在家系大于50岁人群组中,突变型CC/CT型为保护性因素[OR95%CI=0.541（0.323-0.905）]。按BMI分层分析糖尿病相关生物学指标显示,在家系内对照组超重者和病例组肥胖者中,均发现携带TT基因型个体的胰岛素抵抗指数显著高于携带CC/CT型个体（P〈0.05）。结论蛋白激酶Cξ亚型基因rs381664位点多态性与胰岛素抵抗存在相关性,在50岁以上人群的T2DM发生中可能起到一定作用。

蛋白激酶Cξ亚型基因及UrotensinⅡ基因中各有一个单核苷酸位点与中国北方汉族人群2型糖尿病相关

目的采用单核苷酸多态性(singlenucleotidepolymorphism,SNP)标记,在以往中国北方汉族人群2型糖尿病相关基因定位区域(1p36.33-p36.23)内寻找疾病易感基因位点。方法通过生物信息学方法在公共SNP数据库中查找定位区域内10个候选基因中的23个SNP位点,用单碱基延伸反应(singlebaseextension,SBE)法对北方汉族人群散发2型糖尿病患者(192例)及对照组(172例)进行分型及病例-对照关联分析。结果23个SNP位点中有8个为中国北方人群常见SNP位点;对病例组和对照组分型分析显示,位于蛋白激酶Cξ亚型(PRKCZ)基因中的一个位点(rs436045)及urotensinⅡ(UTS2)基因中的一个位点(rs228648),其等位基因频率在两组的差异具有统计学意义(P<0.05)。结论上述两个SNP位点可能和中国北方汉族人群2型糖尿病相关,以上结果为进一步研究上述两个位点所在的基因与2型糖尿病的关系提供了理论依据。

蛋白激酶Cξ亚型基因内SNP功能分析

目的对中国北方汉族人群2型糖尿病易感基因蛋白激酶Cξ亚型(PRKCZ)基因内的5个单核苷酸多态性(singlenucleotidepolymorphismSNP)标记在疾病发生中的作用进行分析。方法通过生物信息学比对及报告基因活性测定等方法分析PRKCZ基因内5个SNP位点对基因表达的影响。结果PRKCZ基因中rs427811和rs809912位点两种等位基因重组质粒报告基因活性存在明显差异,提示这两个位点可能影响PRKCZ基因表达。结论PRKCZ基因中两个SNP位点可能通过影响基因的表达水平而在中国人2型糖尿病发生中发挥作用。

蛋白激酶C Eplison亚型在蒺藜皂苷诱导心脏保护中的作用

目的研究蒺藜皂苷对缺血/再灌注(I/R)心肌组织中蛋白激酶C Eplison亚型(PKCε)磷酸化含量及其转位的影响。方法采用Langendorff离体心脏灌流模型,40只♂SD大鼠随机等分为5组:对照组用改良Kreb-Henseleit液(K-H液持续灌注170min);I/R组(用K-H液灌流稳定20min后,停灌30min,再灌注120min);Chelerythrine组(K-H液中PKCε抑制剂1μmol.L-1);蒺藜皂苷组(K-H液中含蒺藜皂苷100mg.L-1),蒺藜皂苷+Chelerythrine组(K-H液中含蒺藜皂苷100mg.L-1+Chelerythrine1μmol.L-1),后3组I/R过程同I/R组。动态检测心率、平均动脉压。实验结束后计算心肌缺血面积,测定心脏再灌流出液肌酸激酶同工酶(CK-MB)含量变化,提取各组心肌组织检测PKCε磷酸化含量及转位情况。结果单独应用Chelerythrine对I/R心功能、心肌CK-MB及心肌缺血面积无影响;蒺藜皂苷可降低心率和平均动脉压,减少心肌CK-MB释放,缩小心肌缺血面积,促进心肌组织内PKCε磷酸化并使其由细胞质转位到细胞膜上。Chelerythrine与蒺藜皂苷合用可部分阻断蒺藜皂苷的上述作用。结论PKCε抑制剂可减弱蒺藜皂苷对离体大鼠I/R心肌的保护作用,蒺藜皂苷对I/R损伤的保护作用机制与PKCε磷酸化程度及转位有关。

铝暴露对大鼠海马蛋白激酶Cγ亚型影响

目的通过研究慢性铝暴露大鼠海马蛋白激酶Cγ亚型(PKCγ)的蛋白和mRNA表达的变化,观察大鼠海马CA1区长时程增强(LTP)形成,探讨铝暴露对学习记忆机制的影响。方法选择断乳后Wistar大鼠,以含有不同浓度A1Cl3的水进行饲养。3个月后,测量大鼠海马LTP,用改良的Takai法测定PKC活性的变化,蛋白印迹(Western blotting)法检测PKCγ的蛋白表达;RT-PCR检测PKCγ的mRNA表达。结果(1)各染铝组PKC活性与对照组比较均降低,差异有统计学意义(P<0.01);(2)各染铝组PKCγ蛋白表达与对照组比较有降低趋势(P<0.05);(3)各染铝组PKCγmRNA表达与对照组比较均降低(P<0.05),0.2%与0.4%,0.6%组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论慢性铝暴露影响大鼠海马PKCγmRNA和PKCγ蛋白表达,使PKC活性降低,导致LTP的下降,从而影响学习记忆的功能。

胰岛素对蛋白激酶C亚型在人动脉平滑肌细胞中分布和含量的影响

目的：了解动脉平滑肌细胞（ＡＳＭＣ）的蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）含量及亚型分布，以及与细胞增殖的关系。方法：采用点印迹技术及ＭＴＴ方法，检测了人ＡＳＭＣ颗粒部分与胞浆部分ＰＫＣ的６种亚型的含量和分布。结果：①人ＡＳＭＣ细胞中主要有ＰＫＣα、ＰＫＣβ、ＰＫＣζ３种亚型分布，并发现６３％分布在胞浆中；②人ＡＳＭＣ细胞ＰＫＣ总量随着佛波酯（ＰＭＡ）、胰岛素浓度的增加而增加，人ＡＳＭＣ细胞增加数量也随着ＰＭＡ、胰岛素的浓度增加而增加。结论：人ＡＳＭＣ细胞中以ＰＫＣα、ＰＫＣβ、ＰＫＣζ３型含量较多，胰岛素可能是通过激活ＰＫＣ信号传导途径引起细胞的基因表达增高，导致ＡＳＭＣ细胞增殖。

幽门螺杆菌与蛋白激酶C在胃癌及癌前病变基因突变中的作用

目的通过检测慢性胃炎、肠化生、不典型增生和胃癌组织中幽门螺杆菌(Hp)感染、蛋白激酶C(PKC)水平、细胞增殖水平以及p53突变基因表达状态探讨Hp感染在胃癌发生中的作用及其作用机制。方法采用病例对照研究,病例来源于中山医院,经内镜和病理检查证实。Hp感染采用快速尿素酶和病理Gimsa染色检测。PKC的检测采用免疫组化EnVision^(TM)法,增殖细胞核抗原(PCNA)、突变型p53基因表达的检测采用免疫组织化学方法。结果①总的Hp感染的检出率为76.2％(138/181)。在慢性胃炎肠化生组、不典型增生组、胃癌组分别为62.0％(31/50),88.6％(39/44),78.3％(68/87),均明显高于单纯慢性胃炎对照组52.6％(20/38,P<0.05)。②PCNA增殖指数在三组病例中均处于高水平,且Hp阳性组均高于Hp阴性组。③突变型p53基因表达在肠上皮化生、不典型增生和胃癌组阳性率分别为36.0％(18/50),54.6％(24/44),57.2％(48/84)。不典型增生和胃癌组均明显高于肠上皮化生组。在肠化生组,Hp阳性病例的P53表达率明显高于Hp阴性病例(48.5％ vs15.8％,P=0.020)。但在不典型增生和胃癌组,Hp阳性与Hp阴性病例的P53突变蛋白表达率无明显差别(53.9％ vs60.0％,P=0.794;53.8％ vs 68.4％,P=0.258)。P53表达与PCNA增殖指数有明显的相关性。④PKC在慢性胃炎伴肠化生、不典型增生和胃癌组阳性表达的比例呈递增趋势,分别为16.0％,28.5％,41.8％,对照组的阳性表达率不足5％。Hp阳性组PKC表达阳性率(47/130,36.2％)高于Hp阴性组(6/41,14.6％.P=(0.010)。PKC表达组,其P53表达的阳性率和阳性表达程度均高于PKC无表达的病例,在肠化生组统计学检验差异有显著性(75.0％ vs 28.6％,P=0.012),不典型增生(66.7％ vs 50.0％,P=0.430)和胃癌(63.6％ vs 52.2％,P=0.310)统计学检验差异无显著性。结论在从慢性胃炎到肠上皮化生、不典型增生、胃癌的发生过程中,存在PKC表达水平的增高、PCNA高表达和突变型P53基因表达的异常增高,而且这种增高在肠上皮化生阶段就很明显。Hp感染在肠化生阶段促进p53基因突变,其作用途径可能系通过PKC表达增强。P53蛋白可以作为早期监测胃癌发生或高危人群(肠化生)的指标。

加巴喷丁对偏头痛病人发作期血浆降钙素基因相关肽、蛋白激酶C水平的影响

目的:通过观察偏头痛急性发作期病人加巴喷丁治疗后血浆降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)和蛋白激酶C(Protein kinase C,PKC)水平的变化,探讨加巴喷丁治疗偏头痛急性发作的作用机制。方法:偏头痛病人按照随机数字表法随机分为:氟桂利嗪对照组和加巴喷丁治疗组,对照组33例,治疗组35例。加巴喷丁组用药剂量在900~2 400 mg/d之间,分3次口服,疗程为3天。氟桂利嗪组每晚10时口服1次,剂量10 mg,疗程为3天。分别在给予加巴喷丁药物治疗前、治疗后12 h、治疗后24 h、治疗后48 h和治疗后72 h进行疼痛视觉模拟评分(visual analogue score,VAS)测定和外周空腹静脉血CGRP、PKC水平检测。结果 :氟桂利嗪组和加巴喷丁组病人治疗后VAS评分逐渐降低;加巴喷丁组VAS疼痛评分显著低于氟桂利嗪组(P<0.05)。氟桂利嗪组和加巴喷丁组病人治疗后12 h、24 h、48 h和72 h分别与治疗前相比,CGRP和PKC水平明显降低(P<0.05或P<0.01);加巴喷丁组与氟桂利嗪组治疗后12 h、24 h、48 h和72 h相比,CGRP和PKC水平明显降低(P<0.05或P<0.01)。结论:加巴喷丁能明显减轻偏头痛急性发作期VAS评分,对偏头痛急性发作期治疗有效。加巴喷丁能明显减少偏头痛急性发作期血浆CGRP和PKC水平,可能是加巴喷丁治疗偏头痛急性发作期机制之一。

KBV200细胞多药耐药与蛋白激酶C亚型表达的关系

目的探讨蛋白激酶C(proteinkinaseC,PKC)亚型与KBV200肿瘤细胞多药耐药(multidrugresistance,MDR)的关系。方法(1)用Westernblotting法检测PKC亚型在耐药株KBV200及敏感株KB的表达及亚细胞分布;(2)流式细胞仪检测PKC亚型的荧光强度并对数据进行统计分析。结果(1)PKCα亚型的表达在KBV200中选择性升高,而PKCβ、ε无显著变化,PKCγ、ζ则未测出表达;(2)流式细胞仪检测发现KBV200细胞的PKCα的荧光强度较KB细胞显著升高,PKCβ、ε则无显著差别。结论PKC与KBV200MDR细胞株的MDR表型关系密切。在PKC亚型中,PKCα可能在KBV200细胞的MDR表型中起重要作用。

蛋白激酶C亚型在涎腺腺样囊性囊中的表达

目的：探讨蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）与涎腺腺样囊性癌（ＳＡＣＣ）发生发展的关系。方法：采用Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔｔｉｎｇ技术对ＰＫＣ５种亚型α，βⅠ，βⅡ，ε，δ在该肿瘤亚细胞水平的表达进行研究。结果：（１）ＳＡＣＣ及临近正常组织胞浆中均可见ＰＫＣ－α、ＰＫＣ－βⅠ，ＰＫＣ－βⅡ的表达，与临近正常组织相比，肿瘤组织胞浆中上述３种ＰＫＣ亚型表达明显降低（Ｐ〈０．０１）；

新生大鼠缺氧缺血性脑损伤蛋白激酶C与c-fos基因表达关系的探讨

目的 :探讨蛋白激酶 C与 c fos基因蛋白 (c Fos)表达在新生大鼠缺氧缺血性脑损伤时的作用机制。方法 :蛋白激酶 C蛋白定量采用 L owry法 ;蛋白激酶 C活性测定采用γ 32 P催化活性测定法 ;c Fos表达采用免疫组织化学染色法。结果 :与对照组相比 ,缺血、缺氧 2 0分钟后 0、4、12、2 4、4 8、72小时及 7日组新生鼠脑皮质、海马神经细胞胞膜蛋白激酶 C活性降低 (t=3.5 0 ,P<0 .0 5 ;t=3.35 ,P<0 .0 1) ;脑皮质神经细胞胞浆蛋白激酶 C活性增高 (t=4 .2 6 ,P<0 .0 1) ;海马神经细胞胞浆活性变化不大 ;上述改变在缺血、缺氧后 14日组基本恢复正常。新生鼠缺血、缺氧后即刻脑组织各部分即有不同程度的 c Fos表达 ,且于缺血、缺氧后 4小时达高峰 ,以后强度逐渐降低 ,并持续至 72小时。 c Fos表达在脑皮质以 ～ 层明显 ,海马以 CA1、海马齿状回明显 ,CA3也有表达 ,丘脑 c Fos表达稍有增加。结论 :缺血、缺氧激活的蛋白激酶 C可调节 c fos基因表达 ,持续的蛋白激酶 C活性降低及 c Fos表达参与了神经细胞的损伤过程。

加味补肝汤对糖尿病大鼠坐骨神经中蛋白激酶Cβ亚型表达的影响

目的观察加味补肝汤对糖尿病大鼠坐骨神经中蛋白激酶Cβ亚型(PKC-βⅡ)mRNA表达的影响,探讨其对实验性糖尿病大鼠周围神经病变的防治作用。方法65只大鼠适应性喂养1周后,随机取20只为正常组,45只造模,以链脲佐菌素诱发糖尿病模型,将造模成功后的40只大鼠随机分为模型组、加味补肝汤组。分别于治疗后4、8周处死大鼠,用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术测定坐骨神经中PKC-βⅡmRNA的表达。结果治疗后4、8周模型组大鼠PKC-βⅡmRNA表达明显高于正常对照组(P<0.05),加味补肝汤组PKC-βⅡmRNA表达明显低于同期模型组(P<0.05)。结论加味补肝汤对实验性糖尿病大鼠周围神经病变有一定的防治作用。

蛋白激酶C_ζ对小鼠受精卵发育早期基因组转录活化的影响

为研究蛋白激酶Cζ (proteinkinaseCζ ,PKCζ)在小鼠受精卵细胞早期发育过程中对胚胎基因组活化影响 ,采用免疫印迹和细胞免疫荧光的方法 ,观察PKCζ的抑制剂对小鼠受精卵 1 细胞期G1和G2 不同时期小鼠受精卵基因组活化的影响 .小鼠 1 细胞期受精卵蛋白激酶C (PKC)的活性不断增加 ,并在G2 期达到最高 .PKC的抑制剂calphostinC可以明显抑制PKC的活性达 4 7% .同时calphostinC对受精卵 1 细胞期基因组的早期活化具有显著的抑制作用 (P <0 0 1) .在小鼠 1 细胞期受精卵的G2 期 ,具有活性的磷酸化PKCζ的含量明显多于G1期和卵母细胞MⅡ期 ,分别比它们高2 7%和 110 % .PKCζ的特异性抑制剂可以抑制受精卵 1 细胞期基因的转录和活化 (P <0 0 5 ) .实验结果表明 。

蛋白激酶Cα对人正常肝和肝癌细胞中Ha-ras基因表达的影响

运用基因转染技术 ,将蛋白激酶C(PKCα)cDNA正向插入的真核表达重组质粒pXJ4 1 PKCα ,导入人正常肝细胞 (L 0 2 ) ,经蛋白质免疫印迹等检验 ,表明成功构建了稳定过表达PKCα的人正常肝细胞模型 (LT3) ,用LT3和表达反义PKCα的人肝癌细胞HT6为细胞模型 ,通过RT PCR ,蛋白质印迹 (Westernblot)等分析和进一步运用自行构建的真核表达质粒prasGL3,进行荧光素酶活性检测表明 :过表达PKCα可以促进L 0 2细胞的增殖速率 ,并引起Ha ras基因转录水平上升和Ha ras启动子活性升高 ;反之 ,表达反义PKCα的BEL 74 0 2细胞增殖被抑制 ,Ha ras基因转录水平下降 ,Ha ras启动子活性降低 .通过实验我们首次观察到 ,PKCα亚类对Ha ras癌基因表达的影响与其对Ha ras启动子活性的作用有关 ,PKCα可能参与了对Ha

腺病毒介导的心肌蛋白激酶Cε基因转移导致心肌损害

目的研究腺病毒介导的成年小鼠心肌直接蛋白激酶(PK)Cε基因转移对左心室收缩功能的影响。方法使用标准方法建立表达PKCε基因的重组腺病毒载体。直接注射重组腺病毒到FVB/N和ICR小鼠心肌,对照鼠给予相同剂量空载腺病毒。Western免疫印迹测定PKCε蛋白质表达水平。用非开胸经颈总动脉插管的显微外科技术评价小鼠左心室收缩功能。结果与对照鼠相比基因转移鼠心肌转基因PKCε蛋白质表达水平增加近4倍,基线左心室最大收缩压、最大收缩速率(dP/dt)、-dP/dt明显降低,左心室舒张末压、舒张压明显升高(P<0.01),异丙肾上腺素刺激后左心室dP/dt随剂量递增的依次升高明显抑制(P<0.01),PKCε基因转移鼠心脏质量/体质量比也较对照鼠明显增加(P<0.01)。结论腺病毒介导的、心肌直接的PKCε基因转移诱发了左心室收缩功能降低,导致了心肌肥厚和心力衰竭。

牛珀至宝微丸对蛋白激酶C调控内毒素诱导iNOS基因表达的影响

目的 :探讨牛珀至宝微丸对蛋白激酶 C(PKC)调控 (L PS)诱导单核巨噬细胞诱导型一氧化氮合酶(i NOS)基因表达的影响。方法 :用 PKC活性测定法观察 L PS对 PKC的激活作用 ,用 Griess还原法测定一氧化氮 (NO)的生成 ,用基因重组技术构建 i NOS荧光素酶报告基因载体 ,用基因转染及报告基因检测等方法研究牛珀至宝微丸调控 L PS刺激 RAW2 6 4 .7细胞对 i NOS启动子活性的诱导作用及其与 PKC的关系。结果 :牛珀至宝微丸可负调节 L PS刺激 RAW2 6 4 .7细胞引起的 PKC磷酸化激活和膜移位 ,并可延长 PKC抑制剂 H 7下调 NO作用时间。荧光素酶报告基因实验结果显示 ,牛珀至宝微丸可抑制 L PS刺激诱导的 i NOS启动子的转录活性 ,并可增强 H 7和钙离子通道阻滞剂维拉帕米的作用。结论 :牛珀至宝微丸抑制 L PS刺激 RAW2 6 4 .7细胞所致的 NO生成增加 ,其机制之一是量效与时间两方面抑制 PKC激活和细胞内钙增加 ,从而影响 i

细胞外信号调节激酶及蛋白激酶C_γ亚型在慢性染铅小鼠脑海马中的异常表达

目的:观察和探讨铅对小鼠脑海马蛋白激酶Cγ(PKC-γ)及细胞外信号调节激酶(ERK)蛋白表达的影响。方法:小鼠出生1d,染铅组母鼠开始通过饮水饲以不同浓度醋酸铅2.4,4.8,9.6mmol/L。幼鼠出生后,先通过哺乳接触铅,断乳后则自行饮用与母鼠饮用浓度相同的含铅水。分别在14,21,28,35d处死小鼠,用蛋白免疫印迹法观察各组小鼠海马区PKC-γ蛋白表达状况;分别在7,14,21,28d处死小鼠,用蛋白免疫印迹法观察各组小鼠海马区ERK蛋白表达状况。结果:慢性铅暴露对小鼠脑海马PKC-γ蛋白表达总体上呈现下降趋势,各染铅组中,PKC-γ蛋白表达与相应期对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05)。低浓度铅2.4mmol/L使ERK表达升高,但此后随铅浓度升高ERK表达量逐渐降低,铅浓度升高至9.6mmol/L时随着铅浓度升高ERK表达量不再降低相反有所回升。结论:铅扰乱小鼠脑海马中PKC-γ及ERK蛋白正常表达。

肺癌组织蛋白激酶C活性和亚型的测定及其临床意义

目的 研究肺癌组织蛋白激酶C活性、亚型及其临床意义。方法 从23例肺癌患者4种类型的新鲜组织取材，测定其蛋白激酶C活性及亚型，并与正常肺组织作比较。结果 肺癌组织蛋白激酶C活性明显高于正常肺组织（t=2．46，P〈0．05），而且以细胞膜的升高更为明显（t=4．63，P〈0．01），表现出典型的转膜现象；4种类型肺癌组织的蛋白激酶C活性未见统计学差异（P〉0．05）。肺癌各年龄组、吸烟组与非吸烟组的蛋白激酶C活性无统计学差异（P〉0．05）。按pTNM分期比较，自Ⅰ期～Ⅲb期，细胞质和细胞膜的蛋白激酶C活性逐渐升高，但各期间差异无显著性（P〉0．05）。肺癌组织蛋白激酶C活性随分化程度增高而降低，以未分化癌为最高。另外，蛋白激酶C—a在肺癌组织胞浆的表达较正常肺组织胞浆明显增高（P〈0．05）。结论 蛋白激酶C活性显著增高可能在肺癌发生中有重要作用，可能是一种判断肺癌进展和分化程度的重要标志物。

家蚕蛋白激酶C受体基因(Bmrack)的克隆及序列分析

蛋白激酶C受体蛋白(RACK)除作为细胞内蛋白激酶C的受体之外,还作为细胞内重要的支架蛋白调节细胞功能。应用生物信息学方法对家蚕RACK蛋白的编码基因Bmrack进行电子克隆,获得了1224 bp的重组序列,基因编码区长960 bp,编码319个氨基酸,蛋白分子质量为36.04 kD,等电点为8.07。从家蚕幼虫脂肪体基因组DNA中PCR克隆了Bmrack基因,序列总长为2 122 bp,含有4个内含子和5个外显子,通过家蚕WGS比对,结果与其中5条序列的一致性为99%,且修复了其中8个缺口。聚类分析表明RACK蛋白的氨基酸序列在鳞翅目昆虫中非常保守。