蛋白激酶C-alpha和beta在血压及肾小球滤过功能中的作用比较

目的明确蛋白激酶C(PKC)-alpha和beta在小鼠血压及肾小球滤过功能中的不同作用。方法使用代谢箱收集正常饮食下PKC-alpha和beta两种基因敲击鼠及相应野生鼠24 h尿液,采用间接免疫酶联吸附法(ELISA)检测血清及24 h尿白蛋白排泄情况,3[H]标记的菊粉作清除率试验并观察小鼠血压。结果与野生鼠相比,正常饮食下PKC-alpha基因敲击鼠血压、尿白蛋白正常,肾小球滤过率(GFR)减少(P=0.02),而PKC-beta基因敲击鼠尿白蛋白、GFR正常,血压上升(P=0.03)。结论PKC-alpha主要参与调节肾小球的滤过功能,而PKC-beta主要参与调节动脉血压,每一亚基的具体作用不能被另一亚基取代。

血管内皮生长因子调节蛋白激酶C表达对子宫内膜异位症间质细胞侵袭性的影响

目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)调节蛋白激酶C(PKC)表达对子宫内膜异位症(EMs)间质细胞侵袭性的影响。方法收集因卵巢EMs行手术并经术后病理证实为EMs的20例患者在位及异位内膜组织,分为EMs在位内膜组及EMs异位内膜组,收集同期因其他卵巢良性肿瘤行手术的10例患者子宫内膜作为对照组,应用免疫组织化学染色法及Western blot法检测各组子宫内膜中VEGF及PKC蛋白表达情况;分离培养EMs在位内膜间质细胞与非EMs子宫内膜间质细胞,应用细胞免疫鉴定法鉴定间质细胞,应用免疫荧光染色法及Western blot法检测各组间质细胞中VEGF和PKC蛋白表达及定位情况;采用VEGF-siRNA转染EMs子宫内膜间质细胞,采用Western blot法检测沉默VEGF后EMs间质细胞的VEGF、PKC蛋白表达变化,采用Transwell法检测其侵袭性的变化。结果与对照组相比,EMs在位内膜组及EMs异位内膜组VEGF、PKC蛋白表达均升高,且EMs异位内膜组中的表达水平高于EMs在位内膜组(P均<0.01)。EMs子宫内膜间质细胞中VEGF蛋白、PKC蛋白荧光染色均能看到绿色荧光,VEGF蛋白在子宫内膜间质细胞质和细胞核中均有表达,而PKC蛋白主要表达在子宫内膜间质细胞质中。Western blot结果显示,与对照组相比,EMs组VEGF及PKC蛋白表达均升高(P均<0.001);培养72 h后siRNA转染效率最高;与si R-NC组比较,VEGF-siRNA转染后EMs间质细胞中VEGF、PKC蛋白表达水平均降低(P均<0.001);Transwell结果显示,与siR-NC组及空白对照组比较,VEGF-siRNA转染后,EMs间质细胞的侵袭细胞数减少(P均<0.001)。结论VEGF可能通过调节PKC蛋白表达,继而改变细胞侵袭活性,诱导EMs的发生和发展。

蛋白激酶C-beta在小鼠肾小管物质转运中的作用

目的:明确蛋白激酶C(PKC)-beta在小鼠肾小管物质转运中的作用。方法:使用代谢笼收集正常及无盐饮食下PKC-beta基因敲除鼠及C57BL/6野生鼠24 h尿液,采用火焰光度计检测24 h尿钠、钾及氯的排泄情况;给予PKC-beta基因敲除鼠及C57BL/6野生鼠正常饮水和无水36 h,分别收集最后14 h尿液,观察尿量及尿渗透压改变;给予PKC-beta基因敲除鼠及C57BL/6野生鼠正常饮水和0.3 mol/L NH4C l各6 d,分别收集两组小鼠新鲜尿液及尾静脉血,采用血气分析机及数值pH计检测血气及尿pH值的变化。结果:正常及无盐饮食下野生鼠及基因敲除鼠尿钠、钾、氯排泄未见明显差异;在正常及限水情况下尿量及尿渗透压未见明显异常;在正常饮食下PKC-beta基因敲除鼠尿pH值下降,血pH值正常,给予0.3 mol/L NH4C l 1周后基因敲除鼠尿pH值及血pH值与野生鼠相比均下降,并出现明显的代谢性酸中毒。结论:PKC-beta对小鼠主要参与调节肾小管酸碱而非水盐转运,且这一作用不能被其它PKC亚基所代替。

糖尿病大鼠肾小球蛋白激酶Cα表达与肾病发病关系的研究

目的 :观察四氧嘧啶诱发的糖尿病大鼠肾小球中蛋白激酶Cα(PKCα)、转化生长因子 - β1(TGF - β1)和α-平滑肌肌动蛋白 (α -SMA)表达的动态变化 ,探讨 3者之间相互关系以及与肾损害之间的关系。方法 :将大鼠随机分为正常对照组 (A组 ) ,糖尿病 1周组 (B组 ) ,糖尿病 1月组 (C组 )和糖尿病 2月组 (D组 )。用免疫组化和Western印迹法检查PKCα ,TGF - β1和α -SMA在肾小球的表达情况。光镜观察肾组织的形态改变 ,生化法测定大鼠血糖 ,血脂 ,血尿肌酐以及尿蛋白。结果 :糖尿病各组肾小球PKCα和TGF - β1的表达多于正常组 (P <0 0 5 ) ,糖尿病各组PKCα,TGF - β1和α -SMA 3者间呈正相关 ,并且与肾脏病变程度呈正相关。结论 :糖尿病早期肾组织PKCα表达持续增加 ,可使肾小球滤过率和滤过膜通透性增加 ,参与了肾病早期蛋白尿的发生机制 ,使TGF - β1增多并诱导α-SMA的表达 ,标志着肾脏固有细胞激活及表型转变和肾脏组织学改变。

灵芝多糖对小鼠T细胞蛋白激酶A和蛋激酶C活性的影响

:目的 :观察灵芝多糖体外对小鼠T细胞蛋白激酶A (PKA)和蛋白激酶C(PKC)活性是否有影响。方法 :采用反相离子对高效液相色谱法测定PKA和PKC活力。结果 :灵芝多糖GLB7 能引起T细胞中PKA和PKC活性明显增强并具有剂量依赖性 ,达峰时间分别为5min和20min ,于20min及1h分别恢复到基础水平 ;GLB7 还可引起T细胞中PKC发生质膜转位 ,并拮抗Stau rosporine对T细胞中PKC的抑制作用。结果

桂枝汤有效部位B对胃肠运动双向调节作用的实验研究Ⅵ—对cAMP、蛋白激酶A和C活性的影响

目的:探讨桂枝汤有效部位B(Fr.B)对胃肠运动双向调节的作用机理。方法:应用放射免疫法测定阿托品致胃肠运动受抑或新斯的明致胃肠运动亢进大鼠下丘脑及胃肠组织cAMP含量、PKA和PKC活性。结果:对阿托品致胃肠运动受抑大鼠,Fr.B可拮抗下丘脑和空肠组织cAMP含量及PKA、PKC活性的降低,对胃窦组织PKA活性的降低也具拮抗作用;对新斯的明致胃肠运动亢进大鼠,Fr.B可升高胃窦组织PKA活性、下丘脑和空肠组织PKC活性,对cAMP含量无明显影响。结论:Fr.B对胃肠运动的双向调节与其影响下丘脑及胃肠局部组织中cAMP含量和蛋白激酶活性有关。

灵芝多糖对小鼠腹腔巨噬细胞蛋白激酶C活性的影响

目的 观察灵芝多糖在体外对小鼠腹腔巨噬细胞(MΦ)蛋白激酶C(PKC)活性是否有影响。方法 采用反相离子对高效液相色谱法测定PKC活力。结果 灵芝多糖GLB7( 40mg·L-1)能引起小鼠腹腔MΦ中PKC活性明显升高 ,30min达峰值 ,2h恢复到基础水平 ;GLB7还可引起MΦ中PKC发生质膜转位 ,并拮抗Staurosporine对MΦ中PKC的抑制作用。

虎杖苷对缺血缺氧下平滑肌细胞蛋白激酶C的影响

目的 观察虎杖苷对缺血缺氧作用下血管平滑肌细胞(VSMC)蛋白激酶C(PKC)活性的影响以探讨其抗休克作用的机制。方法 取大鼠胸主动脉培养VSMC,用Koyama方法复制VSMC缺血缺氧模型。用液体闪烁计数仪测定PKC的活性。结果 缺血缺氧状态下VSMC胞浆PKC的活性上升(vs正常组P<0 .05),但胞膜的PKC活性下降(vs正常组P<0 .05),经PD治疗后胞浆PKC的活性下降(vs缺血缺氧组、治疗对照组P<0. 05,vs正常组P>0 05 ),胞膜的PKC活性上升(vs缺血缺氧组、治疗对照组P<0 .05,vs正常组P>0 .05)。结论 PD对缺血缺氧作用下的VSMCPKC的活性有调节作用,这可能是PD抗休克作用的分子机制之一。

蛋白激酶C Eplison亚型在蒺藜皂苷诱导心脏保护中的作用

目的研究蒺藜皂苷对缺血/再灌注(I/R)心肌组织中蛋白激酶C Eplison亚型(PKCε)磷酸化含量及其转位的影响。方法采用Langendorff离体心脏灌流模型,40只♂SD大鼠随机等分为5组:对照组用改良Kreb-Henseleit液(K-H液持续灌注170min);I/R组(用K-H液灌流稳定20min后,停灌30min,再灌注120min);Chelerythrine组(K-H液中PKCε抑制剂1μmol.L-1);蒺藜皂苷组(K-H液中含蒺藜皂苷100mg.L-1),蒺藜皂苷+Chelerythrine组(K-H液中含蒺藜皂苷100mg.L-1+Chelerythrine1μmol.L-1),后3组I/R过程同I/R组。动态检测心率、平均动脉压。实验结束后计算心肌缺血面积,测定心脏再灌流出液肌酸激酶同工酶(CK-MB)含量变化,提取各组心肌组织检测PKCε磷酸化含量及转位情况。结果单独应用Chelerythrine对I/R心功能、心肌CK-MB及心肌缺血面积无影响;蒺藜皂苷可降低心率和平均动脉压,减少心肌CK-MB释放,缩小心肌缺血面积,促进心肌组织内PKCε磷酸化并使其由细胞质转位到细胞膜上。Chelerythrine与蒺藜皂苷合用可部分阻断蒺藜皂苷的上述作用。结论PKCε抑制剂可减弱蒺藜皂苷对离体大鼠I/R心肌的保护作用,蒺藜皂苷对I/R损伤的保护作用机制与PKCε磷酸化程度及转位有关。

菟箭合剂对糖尿病大鼠肾组织蛋白激酶C活性作用的研究

目的 :观察菟箭合剂对实验性糖尿病肾病大鼠肾组织蛋白激酶C(PKC)活性、肾功能及肾脏结构的影响。方法 :单肾切除加链脲佐菌素 (STZ)腹腔注射制作糖尿病肾病动物模型。中药菟箭合剂 (2 0g·kg-1·d-1)和阳性对照药缬沙坦 (2 0mg·kg-1·d-1)干预治疗 12周 ,用氚标记的二丁酸佛波醇酯 ([3 H]PDBu)结合法测定大鼠肾组织PKC活性 ,检测 2 4h尿蛋白排出量 (Upro) ,肾脏常规染色光镜观察病理变化。结果 :12周时单肾糖尿病大鼠肾组织出现肾小球硬化病理改变 ,Upro明显升高 ,细胞膜PKC活性 (mPKC)明显升高 ,细胞浆PKC活性 (cPKC)明显降低 ,mPKC和cPKC比值 (M/C)明显升高。菟箭合剂和缬沙坦干预治疗显著降低Upro ,降低mPKC和M/C ,升高cPKC(P <0 .0 1) ,改善肾组织病理改变。结论 :菟箭合剂对单肾切除STZ糖尿病大鼠具有肾保护作用 ,推测部分地通过抑制肾组织PKC激活途径来达到的。

银耳多糖对小鼠脾脏淋巴细胞蛋白激酶C活性的影响

目的观察银耳多糖(TPS)体外对小鼠脾脏淋巴细胞蛋白激酶C(PKC)活性的影响,探讨TPS对免疫细胞信息传递系统的效应。方法应用反向离子对高效液相色谱法测定小鼠脾脏淋巴细胞PKC活性。结果TPS能促进体外培养的小鼠脾脏淋巴细胞PKC活性。结论TPS的免疫调节作用与淋巴细胞的信号传导系统密切相关。

氯沙坦对糖尿病大鼠肾小管转化生长因子β_1及蛋白激酶Cβ表达的影响

目的探讨血管紧张素受体拮抗剂氯沙坦在糖尿病大鼠早期肾损伤中的保护作用及其机制。方法将36只实验动物随机分为正常对照组、糖尿病组及氯沙坦治疗组。链脲佐菌素(STZ)60 m g/kg制作糖尿病动物模型,检测各组大鼠的血糖、血肌酐、尿白蛋白、肾脏肥大指数的变化,免疫组织化学检测转化生长因子1β(TGF-1β)、蛋白激酶Cβ(PKCβ)的表达水平。结果治疗第8周末,氯沙坦治疗组较非治疗组白蛋白明显减少(P<0.01),肾脏肥大指数改善(P<0.05),免疫组织化学显示,糖尿病组大鼠肾小管TGF-1β和PK Cβ蛋白表达增多,氯沙坦治疗组TG F-1β和PKCβ蛋白表达均明显减少。结论氯沙坦对糖尿病早期肾脏病变有一定的保护作用,其机制可能是通过下调糖尿病大鼠TGF-1β和PKCβ的表达实现的。

趋化因子FKN对外周血单核细胞NF-κB和TNF-α表达的影响及蛋白激酶C在其中的作用

[目的]对单核细胞合成核因子-κB(nuclear factor-κappaB,NF-κB)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosisfactor-α,TNF-α)的影响,探讨趋化因子(fractalkine,FKN)-CX3CR1可能存在的信号转导机制及在动脉粥样硬化形成中的作用,并探讨了蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)的介导作用。[方法]①Ficoll密度梯度离心法分离外周血单核细胞。②每份提取的单核细胞分为空白对照组、FKN、RO31-8220(PKC特异性阻断剂)组。③免疫细胞化学法检测各组单核细胞中NF-κB的表达。④酶联免疫法检测各组培养液中TNF-α的表达水平。[结果]FKN、RO31-8220与空白对照组的NF-κB的阳性细胞率分别为(34.80±2.69)%,(20.10±2.78)%与(3.80±0.95)%(三组间差异P<0.05);TNF-α含量分别为(1506.1±69.3)pg/mL,(820.2±22.8)pg/mL,(80.5±5.5)pg/mL(三组间差异P<0.05)。[结论]FKN-CX3CR1能增加NF-κB、TNF-α单核细胞的表达;而FKN与CX3CR1结合以后,可能通过激活细胞内蛋白激酶C,进而诱导单核细胞合成NF-κB、TNF-α。

蛋白激酶C的研究进展

阐述蛋白激酶C的生化性质 ,在肿瘤多药耐药中的作用及近年来研究发现的蛋白激酶C抑制剂。

电针改善血管性痴呆大鼠学习记忆及其与海马神经细胞蛋白激酶C表达的关系

目的观察电针对血管性痴呆(VD)大鼠学习记忆功能和海马神经细胞蛋白激酶C(PKC)表达的影响,探讨电针的治疗作用机制。方法 SD大鼠,随机分为正常对照组、假手术组、模型组、电针组。在建立VD大鼠模型后,电针"百会"、"大椎"穴,水迷宫观察大鼠学习记忆能力,免疫组织化学染色技术观察脑组织海马神经细胞PKC染色结果。结果与模型组比较,经电针治疗后水迷宫潜伏期明显缩短(P<0.01),相同时间内在原平台象限跨越相应平台次数明显增多(P<0.01);PKC免疫阳性细胞积分光密度显著增加(P<0.01)。结论电针大鼠"百会"、"大椎"穴能改善大鼠学习记忆能力,其机制可能与提高海马PKC表达有关。

ACh对人垂体腺瘤细胞内蛋白激酶C、胞内游离钙及cAMP/cGMP的影响

我们曾发现ACh可明显地抑制垂体腺瘤细胞的增殖代谢 ,为深入探讨ACh抑制垂体腺瘤细胞增殖作用的机制 ,观察了ACh作用后垂体腺瘤细胞内蛋白激酶C (PKC)、[Ca2 +]i及cAMP/cGMP的变化。结果发现 :( 1)与空白处理组相比 ,使用PKC的激动剂PMA处理培养的人垂体腺瘤细胞时可使胞浆、胞膜和细胞总PKC活性浓度均升高 ,但ACh ( 10 μmol/L)作用 15min后 ,胞浆、胞膜和细胞总PKC活性均下降 ,且此作用可被阿托品阻断 ;( 2 )ACh ( 10 μmol/L)作用于单个人垂体腺瘤细胞后 ,立即使垂体腺瘤细胞 [Ca2 +]i 相对水平降低 ,但此作用可被阿托品阻断 ;( 3 )ACh作用于人垂体腺瘤细胞 15min后 ,胞内cAMP水平均明显升高 ,而cGMP没有改变。该结果为探讨ACh抑制垂体腺瘤细胞增殖的分子机制提供了重要线索 ,同时提示 。

牛蒡子提取物对糖尿病大鼠肾脏蛋白激酶C活性作用的研究

目的 :研究糖尿病大鼠肾皮质蛋白激酶C(PKC)活性的变化及牛蒡子提取物对其影响 ,探讨牛蒡子粗粉及提取物治疗糖尿病肾病的作用机制。方法 :采用链脲佐菌素 (STZ)腹腔注射造成糖尿病肾病大鼠模型 ,给予牛蒡子粗粉及提取物灌胃治疗 6周 ,检测其体重、肾重 体重、尿量、尿微量白蛋白、肾皮质PKC活性变化。结果 :经牛蒡子粗粉及提取物治疗后 ,糖尿病大鼠尿量、肾重 体重、尿白蛋白均有明显减少 ,与模型组相比 ,有明显差异 (P <0 0 5 )。可降低胞膜PKC活性 ,与模型组相比 ,有明显差别 (P <0 0 5 )。结论 :牛蒡子提取物降低胞膜PKC活性 ,可能为其对肾脏保护作用的机制之一。表明

灯盏花素对脑死亡巴马小型猪心脏结构、功能及蛋白激酶C表达的影响

目的探讨灯盏花素对脑死亡巴马小型猪心脏结构、功能及蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)表达的影响。方法巴马小型猪15只,随机分为脑死亡组、灯盏花素组及对照组。应用缓慢间断颅内加压法建立脑死亡模型。分别于脑死亡后6、12和24 h取血清及心肌组织进行研究。结果①脑死亡24 h灯盏花素组心肌损伤明显轻于脑死亡组;②脑死亡后各时间点灯盏花素组血清肌钙蛋白T(cTnT)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平均较脑死亡组低;③脑死亡24 h灯盏花素组心肌蛋白激酶C表达水平均显著低于脑死亡组。结论灯盏花素可通过抑制蛋白激酶C,减少炎症因子释放,减轻脑死亡巴马小型猪的心脏损伤。

人精子蛋白激酶C活性及含量对其活力的影响

蛋白激酶 C(PKC)在跨膜信息传递中起着重要的调控作用。已有文献报道 PKC存在于人精子尾部 ,与鞭毛活动力密切相关 ,且参与鞭毛活动力的调节。本实验目的是通过对正常的与活力弱的人精子的 PKC活性及含量进行比较 ,观察 PKC活性及含量对人精子活力的影响。结果表明活力弱的人精子尾部的 PKC活性及含量明显低于正常人精子 ,提示人精子活力低下的原因与 PKC的活性及含量降低有关。

电磁辐射对家兔小脑蛋白激酶C活力的影响

目的研究电磁辐射对家兔小脑蛋白激酶 C(protein kinase C,PKC)活力的影响。方法选择30只清洁级日本大耳白家兔,体重(2.31±0.33)kg,随机分为对照组和电磁辐射组[包括于辐射后即刻(0)、3、24和72 h 测定 PKC 活力的4个时相组],每组6只。辐射组给予平均功率密度为65 mW/cm^2的 S 波段电磁波,持续辐射30 min,对照组于相同环境下接受假辐射。测定辐射前和辐射后即刻家兔的肛温并计算比吸收率(specific absorption rate,SAR)值;采用改良的 TaKai 法检测 PKC 的活力。结果电磁辐射后即刻(0h)家兔肛温升高2.35℃,SAR 值为4.54 kcal/kg;小脑 PKC 的活力在电磁辐射后即刻(0 h)与对照组比较显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。小脑 PKC 的活力在电磁辐射后3、24、72 h 与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 65 mW/cm^2电磁辐射30 min 可导致家兔机体产生明显热效应,并抑制小脑 PKC的活力。