三七多糖调控蛋白激酶C-η及蛋白激酶C-ζ表达改善2型糖尿病大鼠肾功能的研究

目的探讨三七多糖干预2型糖尿病大鼠后大鼠肾脏病理学、肾功能、血糖、蛋白激酶C-η(PKC-η)及蛋白激酶C-ζ(PKC-ζ)的特点。方法 100只雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为空白对照组,模型组及三七多糖低、中、高剂量组,每组20只。模型组及三七多糖低、中、高剂量组大鼠给予高脂高糖饮食6个月建立2型糖尿病大鼠模型,模型建立成功后三七多糖低、中、高剂量组大鼠分别给予三七多糖28.5、57.0、114.0 mg·kg-1·d-1灌胃治疗,模型组大鼠给予10 m L·kg-1·d-1生理盐水灌胃,空白对照组大鼠不给予任何干预。治疗4周和8周后各组分别处死大鼠各半,苏木精-伊红(HE)染色检测肾脏病理学变化,试剂盒检测肾功能及血糖水平,半定量聚合酶链反应检测肾脏组织中PKC-ηmRNA和PKC-ζmRNA的表达。结果 HE染色可见空白对照组大鼠肾小管清晰无任何损伤,而模型组大鼠肾小管有炎症反应,但肾小球病变不明显,治疗4、8周后,三七多糖低、中、高剂量组大鼠肾小管逐步缩小,细胞趋于致密。治疗4周后,三七多糖低、中、高剂量组大鼠血尿素氮水平与模型组比较显著降低(P<0.05),治疗8周后进一步降低(P<0.05);治疗8周后三七多糖中、高剂量组大鼠血尿素氮水平与空白对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。治疗4、8周后,三七多糖低、中、高剂量组大鼠血肌酐、血尿酸、血糖水平与模型组和空白对照组比较显著降低(P<0.05);三七多糖低、中、高剂量组大鼠血尿素氮、血肌酐、血尿酸及血糖水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。治疗4、8周后,三七多糖低、中、高剂量组大鼠PKC-ηmRNA和PKC-ζmRNA的表达显著低于模型组(P<0.05)。治疗4周后三七多糖高剂量组大鼠PKC-ζmRNA表达与空白对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);治疗8周后,三七多糖高剂量组大鼠PKC-ζmRNA表达显著低于空白对照组(P<0.05)。治疗4周后,三七多糖高剂量组大鼠PKC-ηmRNA及PKC-ζmRNA表达显著低于三七多糖低剂量组(P<0.05);治疗8周后,三七多糖中、高剂量组大鼠PKC-ηmRNA表达显著低于三七多糖低剂量组(P<0.05)。结论三七多糖可调节大鼠血脂,进而改善2型糖尿病大鼠肾功能,这可能与肾脏中PKC-η和PKC-ζ表达降低有关。

蛋白激酶C-ζ研究进展

蛋白激酶C ζ是PKC家族的新成员。由于它的一级结构缺乏C2区 ,且在其调节区只拥有一个锌指结构 ,因此PKC ζ显示出与其它PKC明显不同的特性 ,如激活不需要Ca2 + 参与 ,不被PKC的激活剂佛波酯激活等。另外 ,许多研究人员发现PKC ζ还有诱导细胞分化、抑制癌细胞增殖和调节细胞肌动蛋白骨架的作用。更多的是PKC ζ在细胞信号转导如介导MAPK和NF κB激活方面发挥重要功能。

血管紧张素-(1-7)对自发性高血压大鼠颈动脉去外膜后蛋白激酶C-ζ和胞外信号调节激酶1/2蛋白表达的影响

目的探讨血管紧张素-(1-7)[Ang-(1-7)]对自发性高血压大鼠(SHR)一侧颈动脉外膜去除后蛋白激酶C-ζ(PKC-ζ)和胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)蛋白表达的影响。方法24只雄性SHR右侧颈动脉外膜去除后,随机分为3组(每组8只):对照组、Ang-1(1-7)组和Ang779[Ang-(1-7)拮抗剂]组。另选8只WKY大鼠作为WKY组。机械和化学方法去除大鼠右侧颈动脉外膜,左侧作假手术对照。采用微渗泵植入技术经颈静脉给药2周,鼠尾袖法测量尾动脉收缩压(SBP),放免法测定血浆及双侧颈动脉血管紧张素II(AngII)浓度。取双侧颈动脉制成光镜标本,病理图像分析系统测定颈动脉腔横截面积(LA)、内弹力层围绕面积(IELA)、外弹力层围绕面积(EELA),评价内膜和中膜增生状况。免疫组织化学方法测定双侧颈动脉PKC-ζ和ERK1/2蛋白表达。结果(1)各组SBP于给药前差异无统计学意义(P>0.05),给药2周后,Ang-(1-7)组SBP较Ang779组和对照组显著下降(均P<0.01);(2)对照组和Ang779组颈动脉内膜增生去外膜侧较未去外膜侧差异有统计学意义(均P<0.01),未去外膜侧和去外膜侧颈动脉内膜增生Ang-(1-7)组较对照组和Ang779组明显改善(P均<0.01);(3)与未去外膜侧比较,去外膜侧颈动脉AngII浓度显著增高(P<0.01);(4)颈动脉PKC-ζ和ERK1/2蛋白表达对照组和Ang779组去外膜侧较未去外膜侧显著增高(均P<0.01),未去外膜侧和去外膜侧颈动脉PKC-ζ和ERK1/2蛋白表达Ang-(1-7)组较对照组和Ang779组显著减少(均P<0.01)。结论Ang-(1-7)可通过减少PKC-ζ及ERK1/2蛋白表达而实现对SHR去外膜后颈动脉内膜增生的抑制作用。

乙酰葛根素对阿尔茨海默病大鼠蛋白激酶C-δ及白细胞介素-6表达的影响

目的研究乙酰葛根素对β-淀粉样肽1-42(Aβ1-42)海马立体定位注射所致阿尔茨海默病(AD)模型大鼠的药物作用和对炎症因子蛋白激酶C-δ(PKC-δ)、白细胞介素-6(IL-6)表达的影响。方法将40只Wistar大鼠随机分为对照组、模型组、乙酰葛根素低、高剂量组。用Aβ1-42双侧海马注射制备AD大鼠模型,Morris水迷宫测定不同时期各组大鼠的学习记忆能力,ELISA测定血清IL-6含量的变化,Western blotting测定PKC-δ表达的变化。结果模型大鼠应用Aβ1-42注射14d后,Morris水迷宫逃避潜伏期与术前及对照组比较显著延长,穿越平台次数显著减少(P<0.01);应用乙酰葛根素10d后,血清中IL-6的表达量模型组显著高于对照组、乙酰葛根素低、高剂量组(P<0.01);海马匀浆中PKC-δ的表达量模型组显著高于对照组、乙酰葛根素低、高剂量组,乙酰葛根素低、高剂量组表达仍高于对照组(P<0.05)。结论乙酰葛根素能显著改善阿尔茨海默病模型大鼠的学习记忆能力,对阿尔茨海默病有显著的预防和保护作用,机制可能与调控PKC-δ/Caspase通路,抑制β-淀粉样肽的神经毒性,降低PKC-δ、IL-6的表达,从而发挥抗痴呆的作用。

肺癌中蛋白激酶C-α、βⅡ及δ的表达及意义

目的检测PKCα-、β-Ⅱ、-δ在肺癌中的表达以探讨其与肺癌发生、发展的关系。方法采用免疫组化SP法分别检测84例肺癌原发灶及30例非小细胞肺癌淋巴结转移灶中PKC-α、-βⅡ、-δ的表达,分析其在肺癌的不同组织类型、不同分化程度以及原发灶与淋巴结转移灶之间表达的差异及意义。结果PKC-α、-βⅡ与-δ在84例肺癌的阳性率分别为61.9%、70.2%和66.7%,在不同肺癌组织类型之间差异无显著性。PKC-α阳性率在小细胞癌(SCLC,58.3%)与非小细胞肺癌(NSCLC,62.5%)及其高中分化组(70.2%)与低分化组(48.0%)之间差异无显著性。PKC-βⅡ阳性率在SCLC(41.7%)与NSCLC(75.0%)及其高中分化组(74.5%)之间差异有显著性,在SCLC与低分化组(48.0%)之间差异无显著性。PKC-δ阳性率在SCLC(41.7%)与NSCLC(70.8%)及其高中分化组(78.7%)之间差异有显著性,在SCLC与低分化组(56.0%)之间差异无显著性。比较PKC-α、-βⅡ与-δ在30例淋巴结转移NSCLC的原发灶与转移灶的表达,3组阳性率差异无显著性。结论PKC-α、-βⅡ与-δ的异常激活,在肺癌发生、发展过程中起重要作用。但3种亚型的作用各有不同,PKC-βⅡ可能是促进癌前病变的增生;PKC-α过表达与PKC-δ表达降低促进癌细胞增殖与凋亡减少,而癌分化降低、恶性程度增加。

人成釉细胞瘤中蛋白激酶C-α表达与端粒酶活性的关系

目的:研究蛋白激酶C-α(PKCα)在人成釉细胞瘤(AB)中的表达及与端粒酶逆转录酶(hTERT)的关系,探讨其临床生物学意义。方法:用原位杂交和免疫组化SP法分别检测了AB中hTERT mRNA及PKCα蛋白的表达。同时选取牙源性角化囊肿(OKC)16例,正常口腔黏膜7例做对比研究。结果:hTERT mRNA在AB中阳性率为94.4%(51/54),OKC中为87.5%(14/16)及1/7正常口腔黏膜有hTERT mRNA表达,组间差异有显著性(P<0.001)。伴随AB的复发与恶变hTERT的表达逐渐增高。PKCα在AB中阳性表达为85.1%(46/54),OKC中为56.2%(9/16),4/7正常口腔黏膜有PKCα阳性,组间差异有显著性(P<0.01),伴随AB的复发与恶变PKCα阳性表达也随之增高(P<0.05)。hTERT阳性表达与PKCα阳性表达之间经Kendall相关分析rk=1.000,P=0.005呈高度正相关。结论:hTERT与AB的发生发展及临床生物学行为相关,端粒酶活性的释放激活与PKCα的高表达可能正相关。

灯盏花素对创伤性脑损伤模型大鼠脑组织中蛋白激酶C-γ表达的影响

背景:防止创伤性脑损伤后继发性损伤具有重要意义,也是脑保护性治疗的目标。目的:通过观察灯盏花素对创伤性脑损伤大鼠脑组织蛋白激酶C-γ蛋白表达的影响,初步探讨灯盏花素对脑组织的保护作用。方法:65只SD大鼠随机分为空白对照组(n=5)、假手术组(n=20)、模型组(n=20)及灯盏花素组(n=20)。模型组及灯盏花素组采用落体撞击制备脑损伤模型,假手术组切开头皮打开骨窗后即缝合。灯盏花素组伤后立即腹腔注射灯盏花素0.4 mg/(kg·d),模型组和假手术组分别腹腔注射0.4 mL/(kg·d)生理盐水。使用免疫组织化学方法检测大鼠脑组织蛋白激酶C-γ蛋白的表达。结果与结论:创伤性脑损伤后蛋白激酶C-γ蛋白表达明显增加(P<0.05),在24 h到达高峰;灯盏花素能明显减少创伤性脑损伤后蛋白激酶C-γ蛋白表达(P<0.05)。结果说明灯盏花素对创伤性脑损伤后的脑组织具有保护作用。

哮喘大鼠肺泡巨噬细胞蛋白激酶C-α表达及丹参对其影响

探讨蛋白激酶 C (Protein Kinase-α,PKCα)在大鼠哮喘模型肺泡巨噬细胞中的表达及丹参的治疗作用。哮喘模型大鼠分为四组。 A组正常对照 ;B组即刻激发组 ;C组哮喘发作一周组 ;D组丹参治疗组。每组分别测定肺功能 ,支气管肺泡灌洗液 (BAL F) ,分离巨噬细胞作免疫细胞化学染色 ,观察 PKCα在大鼠哮喘模型肺泡巨噬细胞中的表达及丹参对其影响。结果发现 A组中肺泡巨噬细胞见 PKCα少量表达 ,而 B、 C、 D组则见大量巨噬细胞 PKCα表达 ,但 D组巨噬细胞 PKCα表达比例显著低于 B、 C组 (P<0 .0 1 )。四组肺泡巨噬细胞 PKCα表达百分比分别为 A组 3.49± 2 .40 % ,B组 85 .0 6± 5 .46 % ,C组 90 .2 3± 2 .87% ,D组 37.89± 7.2 1 %。且 A、 B、 C组肺泡巨噬细胞 PKCα表达比例与气道阻力呈正相关 (n=2 1、 r=0 .74 P<0 .0 1 ) ,结果说明丹参对哮喘大鼠 BAL F中巨噬细胞 PKCα表达有抑制作用 ,提示肺泡巨噬细胞 PKCα表达参与哮喘发病过程 ,而丹参则对这一过程有抑制作用。

定量构效关系方程对靶向蛋白激酶 C-α m RNA的反义药物的活性预测(英文)

以往研究对 34个针对蛋白激酶 C- α m RNA二级结构设计的反义药物 (AS- ODNs)进行了定量构效关系 (QSAR)分析并得到 QSAR方程 .本研究再次设计 1 0个 AS- ODNs验证 QSAR方程对药物活性预测的可靠性 .结果显示其中 4个 AS- ODNsIC50 值明显低于阳性对照 ISIS352 1 (P<0 .0 5) . 8个AS- ODNs与 ISIS352 1的实测 IC50 与 QSAR方程预测相符 ,实测与预测 IC50 之间相关系数为 0 .76(P<0 .0 5) .两个 AS- ODNs,AP1 2 61 (2 0 )和 AP0 1 86(2 0 )的实测 IC50 与预测不符 .结果提示 QSAR方程一定程度上反映了 AS- ODNs活性与靶结构的关系 ,对预测反义药物生物活性有益 .但

糖尿病足截肢患者胫后神经中S-100蛋白、蛋白激酶C-β_2表达的病理学研究

目的观察不同糖尿病病程患者胫后神经中蛋白激酶C-β_2(protein kinaseβ_2,PKC-β_2)、S-100蛋白的表达情况,为糖尿病周围神经病变与PKC-β_2、S-100蛋白关系的研究提供依据。方法选取2012年5月至2017年6月在河北北方学院附属第一医院骨外科因糖尿病足行高位截肢患者截下的肢体共50例,均于大腿中下1/3截肢,手术时留取截肢肢体胫后神经,应用免疫组织化学方法观察不同糖尿病病程患者胫后神经PKC-β_2及S-100蛋白表达的差异。结果免疫组织化学染色结果显示,不同糖尿病病程患者的糖尿病足胫后神经均有PKC-β_2、S-100蛋白表达,且随糖尿病病程延长,糖尿病足胫后神经中PKC-β_2表达水平逐渐增高,S-100蛋白表达水平逐渐降低,差异均有显著性(P<0.05)。结论 PKC-β_2表达增多、S-100蛋白表达减少可能通过某种机制参与了糖尿病周围神经病变的发生发展。

蛋白激酶C-δ在热诱导舌鳞癌Tca8113细胞凋亡中的作用研究

目的探讨热诱导舌鳞癌Tca8113细胞凋亡过程中蛋白激酶C-δ(PKC-δ)的作用。方法应用PKC-δ活化抑制剂Rottlerin和等体积的Rottlerin溶剂二甲基亚砜(DMSO)分别预处理Tca8113细胞30 min后,43℃水浴法热诱导Tca8113细胞0、40、80、120 min,流式细胞仪检测细胞凋亡率、线粒体膜电位强度变化,酶标仪比色法检测Cas-pase-3活性,Western杂交分析PKC-δ的活化。结果 Rottlerin抑制热诱导的PKC-δ裂解活化;抑制热诱导Tca8113细胞凋亡、降低线粒体膜电位及Caspase-3活性。相同40、80、120 min加热时间,经Rottlerin与未经Rottlerin预处理的Tca8113细胞相比,两者凋亡率、线粒体膜电位及Caspase-3活性在统计学上有显著性差异(P<0.01)。结论活化的PKC-δ可促进热诱导Tca8113细胞凋亡,PKC-δ裂解活化是热诱导Tca8113细胞凋亡的机制之一。

蛋白激酶C-β与糖尿病肾病研究的进展

PRKCB1基因编码的蛋白激酶C(PKC)-βⅠ和PKC-βⅡ两种亚型,通过PKC信号通路途径在糖尿病肾病的发生和进展中起着重要作用。PKC-β抑制剂通过降低肾小球基膜的厚度和减少微量白蛋白尿,对糖尿病患者的肾脏起着保护作用。PRKCB1基因的多态或变异通过影响该基因的转录活性、增加胰岛素抵抗、促进血管内皮氧化应激,而与糖尿病肾病风险增加及终末期肾病相关。该文就PKC-β与糖尿病肾病关系的研究进展进行综述。

组织芯片技术检测蛋白激酶C-α蛋白在肺癌组织中的表达

背景与目的:蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)在癌变过程中的作用使其成为肿瘤治疗的潜在重要靶点,非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中存在PKC-α的异常表达和活性增高。本研究探讨组织芯片技术检测PKC-α蛋白在肺癌中的表达及其意义。方法:应用免疫组织化学SP方法检测肺癌组织芯片中PKC-α蛋白的表达,其中肿瘤组织182例,癌旁组织18例。182例肿瘤组织中,NSCLC为160例,SCLC为22例;Ⅰ期102例,Ⅱ～Ⅲ期80例。结果:PKC-α蛋白在182例肺癌组织中的表达率为48.3%(88/182),而18例癌旁组织的表达率为16.7%(3/18)(P<0.01);PKC-α蛋白在NSCLC组织中的表达率(53.1%)明显高于在SCLC中的表达率(13.6%),差异有显著性(P<0.01);而PKC-α的表达在腺癌及鳞癌之间无明显差异(P>0.05);PKC-α的表达与患者的性别、年龄等因素无明显相关;PKC-α的表达与NSCLC特别是腺癌的临床分期、淋巴结转移密切相关(P<0.05),而与SCLC的临床分期、淋巴结转移无明显相关;PKC-α的表达与腺癌的分化程度密切相关(P<0.01),而与鳞癌的分化程度无明显相关。结论:在NSCLC组织中存在PKC-α的高表达,PKC-α的表达在NSCLC特别是腺癌的浸润、转移和发展中具有重要作用。

蛋白激酶C-ε在尿蛋白所致肾小管上皮细胞损伤中的作用

目的探讨蛋白激酶Cε(PKC-ε)在尿蛋白所致肾小管上皮细胞(RTECs)损伤中的作用。方法将体外培养的人肾小管上皮细胞株(HK-2细胞)分为对照组、尿蛋白组(4 mg/mL),激动剂组(10μmol/LPKC-ε激动剂+4 mg/mL尿蛋白)及抑制剂组(10μmol/L PKC-ε抑制剂+4 mg/mL尿蛋白)分别处理48 h,用Western Blotting法检测PKC-ε活性和α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达;用ELISA方法检测培养上清人纤维连蛋白(FN)、转化生长因子β(TGF-β)的分泌水平;用全自动生化分析仪检测细胞LDH释放率。结果尿蛋白明显抑制HK-2细胞PKC-ε的活化(P<0.01),增加HK-2细胞α-SMA表达(P<0.05)、上清液FN和TGF-β分泌(P<0.01)以及LDH释放率(P<0.01);PKC-ε激动剂减轻尿蛋白所致HK-2细胞培养上清液TGF-β分泌(P<0.01),而不影响α-SMA表达、FN分泌以及LDH释放率;PKC-ε抑制剂进一步增加尿蛋白所致HK-2细胞α-SMA表达、FN和TGF-β分泌以及LDH释放率(均P<0.05)。结论 PKC-ε高活性是维持RTECs正常形态和功能的基础,尿蛋白抑制RTECs正常PKC-ε高活性,减轻尿蛋白对PKC-ε活性的抑制可能有利于维持RTECs正常的形态和功能。

红细胞分化相关因子EDRF1的反义RNA下调蛋白激酶C-α mRNA的表达

为了研究通过功能筛选得到的一个新的红细胞分化相关的全长cDNA(命名为EDRF1)的功能 ,选择K5 6 2细胞作为模型细胞来观察反义EDRF1表达对细胞功能的影响。通过快速构建 ,同时得到了正向和反向插入片段的真核表达载体pcDNA3 EDRF1 S(sense)及pcDNA3 AS(antisense) ,并通过改进的LipofectAMINE细胞转染和G418筛选 ,得到了稳定表达的细胞株 ,进行基因组PCR鉴定 ,证明了转染的高效性。NorthemBlot试验的结果表明 ,反义载体转染的K5 6 2细胞中 ,EDRF1在mRNA表达水平上受到下调 ,提示EDRF1反义DNA的表达可能抑制了EDRF1mRNA的正常转录。进一步 ,γ 珠蛋白和PKC α的表达在反义构建质粒转染K5 6 2细胞中的表达均受到下调 ,这可能传递了红细胞分化的负反馈信号 。

蛋白激酶C-ε在丙泊酚诱导内皮源性一氧化氮合成酶激活中的作用

目的在人脐静脉内皮细胞(HUVECs)模型中观察丙泊酚对内皮源性一氧化氮合成酶(eNOS)的激活效应,探讨蛋白激酶C-ε(PKC-ε)对药物引起eNOS激活的调节作用。方法以体外培养的人HUVECs 3～5代作为实验对象。用丙泊酚(0、1、5、10、50、100μmol/L)分别处理细胞1和24 h,分析药物激活eNOS的量效关系;用丙泊酚5μmol/L和50μmol/L分别处理细胞0 min、5 min、1 h、6 h和24 h,分析药物激活eNOS的时效关系。细胞随机分为:①正常对照组;②PKC-ε假底物+丙泊酚5μmol/L组;③PKC-ε假底物+丙泊酚50μmol/L组;④单独PKC-ε假底物组;⑤单独丙泊酚50μmol/L组;⑥10%长链脂肪乳组。各组分别处理细胞1和24 h。Western blotting分析PKC-ε、eNOS、P-Ser1177-eNOS蛋白的表达。结果丙泊酚呈剂量、时间依赖性上调P-Ser1177-eNOS蛋白的表达。处理细胞24 h时,与单独丙泊酚50μmol/L组相比,PKC-ε假底物+丙泊酚50μmol/L组P-Ser1177-eNOS蛋白的表达显著降低(P<0.05)。结论丙泊酚呈剂量、时间依赖性诱导eNOS的激活,PKC-ε参与介导药物对eNOS的激活效应。

蛋白激酶C-β抑制剂LY333531对1型糖尿病大鼠肾功能的影响

目的:观察蛋白激酶C(PKC)-β抑制剂LY333531对1型糖尿病大鼠肾功能的保护作用。方法:27只SD大鼠随机分为正常对照组、糖尿病组和LY组,每组各9只。后两组采用一次性尾静脉注射60mg/kg链脲佐菌素(STZ)成功构建1型糖尿病模型。LY组大鼠给予PKC-β抑制剂LY333531(10mg/kg/天)灌胃治疗8周。抽取各组大鼠颈动脉血并留取24h尿液,测量血糖、内生肌酐清除率和24h尿蛋白。之后处死各组大鼠,摘取肾脏称重并计算肾重/体重。统计学分析各组上述指标的差异。结果:与正常对照组比较,糖尿病组和LY组大鼠的体重均明显减轻,而肾重、肾重/体重、血糖及24h尿蛋白均显著升高(P<0.05);LY组大鼠的肾重/体重、内生肌酐清除率及24h尿蛋白水平均低于糖尿病组(P<0.05),两组肾重、体重和血糖差异无统计学意义(P>0.05)。结论:PKC-β抑制剂LY333531有利于改善1型糖尿病大鼠内生肌酐清除率和减少蛋白尿的产生。

蛋白激酶C-δ在不同发育阶段小鼠睾丸的表达

目的 观察蛋白激酶C δ (PKC δ)在不同周龄小鼠睾丸中的表达情况 ,探讨此种PKC同工酶在精子发生中的作用。方法 采用出生后不同周龄的小鼠睾丸组织 ,进行SP免疫组织化学染色。结果 PKC δ在生后睾丸组织中从无到有 ,生后第三周小鼠睾丸中微弱表达 ,第五周开始出现明显的表达量的增加 ,直到第 12周。PKC δ阳性细胞存在于曲细精管中心部位。结论 PKC δ蛋白选择性表达于精子细胞中 ,并且呈现出独特的发育阶段性 。

蛋白激酶C-α与KBV200细胞多药耐药相关性的初步研究

目的 探讨蛋白激酶C -α(PKC)与KBV 2 0 0肿瘤细胞多药耐药 (MDR )的关系及其机制。方法 应用3 2 P掺入法检测 2株细胞的PKC活性 ;用Westernblot法检测PKC -α在耐药株KBV 2 0 0及敏感株KB的表达及亚细胞分布 ;流式细胞仪检测PKC -α的荧光强度。结果 KBV 2 0 0细胞的PKC活性较KB细胞明显升高 ,且膜组分PKC活性所占总活性的百分率升高 ;PKC-α亚型的表达选择性升高 ;流式细胞仪检测发现KBV 2 0 0细胞的PKC -α的荧光强度 ( 5 .3 4± 0 .5 6)显著高于KB细胞PKC -α的荧光强度 ( 2 .0 7± 0 .2 1) ,P <0 .0 1。结论 PKC -α与KBV 2 0 0细胞株的MDR表型关系密切 ,PKC -α可能在KBV 2 0 0细胞的MDR表型中起重要作用。

靶向蛋白激酶C-α的ASODN诱导肝癌SMMC-7721细胞凋亡

目的研究聚乙烯亚胺(PEI)-PKC-α反义脱氧核寡酸(ASODN)对人肝癌SMMC-7721细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用。方法 WST-8法和台盼蓝拒染法研究细胞增殖抑制作用;Hoechst 33258染色观察凋亡细胞的形态学改变;流式细胞术(PI单染色和AnnexinⅤ+PI双染色)检测细胞凋亡。结果 PEI-ASODN对SMMC-7721细胞具有明显的增殖抑制作用;引起细胞核固缩、核碎裂;流式细胞术结果显示,PEI-ASODN组随药物浓度的增加,亚二倍体细胞阳性百分率亦增高,早期凋亡细胞百分率也明显增高。结论 PEI-ASODN能显著抑制人肝癌SMMC-7721细胞增殖,并有效诱导细胞出现早期凋亡。