未折叠蛋白反应-蛋白激酶R样内质网激酶通路对氧化应激诱导生长抑制因子1的影响

目的寻找肝脏内质网应激过程中未折叠蛋白反应-蛋白激酶R样内质网激酶(UPR-PERK)通路潜在的作用靶点,并在肝脏内质网应激模型中验证UPR-PERK通路对氧化应激诱导生长抑制因子1(Osgin1)是否存在调控关系。方法以GEO数据库作为分析数据的来源,通过GEO2R软件挑选出符合标准的差异基因,对禁食-再喂食、运动及年龄3种生理因素引起显著变化的差异基因使用韦恩图取交集,确定Osgin1是变化显著的基因。通过GENEMANIA数据库验证UPR-PERK通路与Osgin1是否存在直接作用。随后分别在GEO数据库和TCGA数据库中通过3种不同的肝脏内质网应激模型(急性内质网应激模型、非酒精性脂肪性肝病模型及肝癌模型)进一步验证UPR-PERK通路对于Osgin1的调控关系。数据统计采用GraphPadPrism 9.0.0软件,采用Pearson相关分析法分析UPR-PERK通路基因与Osgin1转录水平的相关性。结果与对照组相比,在禁食-再喂食、增加运动及增龄3种生理因素下,Osgin1转录水平分别上调了700%、下调156%以及229%(P<0.05)。经GENEMANIA数据库验证UPR-PERK通路与Osgin1存在直接作用。在内质网应激诱导剂导致的急性肝脏内质网应激模型中,与对照组相比,抑制UPR-PERK通路相关基因(Eif2ak3)可以显著逆转由内质网应激诱导剂Tunicamycin导致的Osgin1 mRNA水平的上调(Osgin1 mRNA下调87%,P<0.001);在非酒精性脂肪性肝病模型中,与对照组相比,通过给予药物实现缓解UPR-PERK通路的同时,Osgin1转录水平也随之下调(减重药物BI4556906组Osgin1 mRNA下调48.0%;EX10970组Osgin1 mRNA下调43.3%;肌醇需要酶1α激动剂IXA4组Osgin1 mRNA下调56.6%;P<0.05);在肝癌模型中,与对照组相比,UPR-PERK通路相关基因与Osgin1转录水平在肝癌组织中显著上调(Osgin1 mRNA上调109%,P<0.001)。结论在生理条件及肝脏内质网应激模型中,UPR-PERK通路的激活上调Osgin1转录水平。

黄芪对糖尿病肾病小鼠内质网应激中蛋白激酶R样内质网激酶通路的影响

目的探讨黄芪对糖尿病肾病(DN)小鼠内质网应激中蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)通路的影响。方法 KKAy小鼠和C57BL/6J小鼠分别给予高脂饲料和普通饲料,连续饲养2周。将建模成功的KKAy小鼠随机分为模型组和实验组,每组15只,15只C57BL/6J小鼠为对照组。实验组小鼠经腹腔注射黄芪注射液0. 003 mL·g^(-1),qd,连续干预4周;模型组和对照组均腹腔注射等量0. 9%NaCl。用全自动生化分析仪检测小鼠血清生化指标,苏木精-伊红(HE)染色法和蛋白免疫印迹法观察小鼠肾组织病理学形态及肾组织组织PERK通路相关蛋白表达。结果对照组,模型组,实验组体质量分别为(29. 20±1. 20),(48. 40±6. 90),(35. 10±2. 40) g,肾质量分别为(0. 16±0. 01),(0. 23±0. 01),(0. 20±0. 02) g,空腹血糖(FBG)分别为(5. 36±1. 25),(33. 08±5. 42),(23. 15±1. 05) mmol·L^(-1),肌酐(CREA)分别为(11. 69±0. 51),(10. 23±0. 28),(10. 95±0. 36)μmol·L^(-1),尿素(URE)分别为(8. 96±0. 84),(13. 52±0. 96),(10. 22±0. 69) mmol·L^(-1); 78kD-葡萄糖调节蛋白(GRP78)蛋白相对表达量分别为0. 23±0. 06,0. 79±0. 22,0. 53±0. 16; PERK蛋白相对表达量分别为0. 19±0. 04,0. 81±0. 16,0. 62±0. 19。实验组与模型组比较,差异均有统计学意义(均P <0. 01)。结论黄芪可降低DN小鼠体质量,改善肾组织损伤程度及肾功能,可能与下调PERK通路蛋白表达有关。

蛋白激酶R样内质网激酶参与维生素E琥珀酸酯激活人胃癌细胞内质网应激和自噬的调控

目的:研究蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)在维生素E琥珀酸酯(VES)激活人胃癌细胞发生内质网应激(ERS)与自噬中的影响。方法:体外培养人胃癌细胞系MKN28和MKN45,通过CCK-8法绘制细胞生长曲线,根据生长曲线确定用药剂量。不同剂量的VES处理细胞24 h后,qRT-PCR检测葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和beclin-1的mRNA表达,Western blot检测GRP78、微管相关蛋白1轻链3(LC3)、beclin-1及PERK的蛋白表达。用2μmol/L GSK2606414(GSK)抑制PERK,设置对照组、GSK组、VES组和VES+GSK组,Western blot检测PERK、GRP78、LC3和beclin-1的蛋白表达。结果:CCK-8实验结果显示,VES对两种人胃癌细胞系的活力均有显著抑制作用(P<0.01)。qRT-PCR结果显示,两种细胞中beclin-1和GRP78的mRNA表达均随着VES剂量的增加而不断升高(均P<0.05)。Western blot结果显示,与对照组相比,VES均可以显著上调两种细胞中GRP78、PERK、LC3和be⁃clin-1的表达(均P<0.05);抑制PERK后,两种细胞中p-PERK/PERK的比值显著下降(P<0.01),相较VES组,VES+GSK组GPR78、LC3和beclin-1的蛋白表达均显著降低(均P<0.05)。结论:VES激活人胃癌细胞发生ERS和自噬的同时上调PERK的表达,而PERK参与了VES对ERS和自噬的调节。

蛋白激酶R样内质网激酶信号通路在内质网应激中作用的研究进展

蛋白激酶R样内质网激酶(protein kinase R-like ER kinase,PERK)是一种位于内质网膜上的I型跨膜蛋白,属于eIF2α上游激酶家族。当发生内质网应激时,PERK被激活,通过磷酸化真核细胞起始因子2α(eukaryotic initiation factor 2α,eIF2α)抑制蛋白质合成,并活化转录活化因子4介导的细胞凋亡途径,参与细胞的整合应激反应。PERK本身的活性可以被特异性的磷酸酶去磷酸化抑制,所调控的信号途径在心力衰竭、缺血-再灌注损伤及代谢异常等病理过程中发挥重要作用。

非酒精性脂肪性肝病中蛋白激酶R样内质网激酶/真核翻译起始因子-2α通路的变化及意义

目的:又见察蛋白激酶R样内质网激酶/真核翻译起始因子-2α(protein kinase R-like endoplasmic reticulum kinase/eukaryotic translation initator factor-2α,PERK/eIF-2α)信号通路在大鼠实验性非酒精性脂肪肝(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)中的变化并探讨该信号通路在NAFLD中可能的作用.方法:健康Wistar大鼠30只,雌雄不限,按照随机数字表法分为正常对照组和NAFLD组,每组各15只.NAFLD组大鼠采用高脂高糖饮食诱导NAFLD的发生,而正常对照组大鼠则给予普通饲料喂养,时间总计为16 wk.检测血清中总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三醋(triglyceride,TG)、高密度脂蛋白(highdensity lipoprotein,HDL)和低密度脂蛋白(lowdensity lipoprotein,LDL)的含量;实时荧光定量PCR技术检测肝脏中PERK,eIF-2α、CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(C/EBP homologous protein,CHOP)及葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein 78,GRP78)等指标在mRNA水平的表达改变;蛋白质免疫印迹(Western blot)技术检测肝脏中磷酸化PERK(pPERK),磷酸化eIF-2α(p-eIF-2α),CHOP及GRP78等指标在蛋白水平的改变;同时采用流式细胞仪检测细胞凋亡情况.结果:NAFLD组大鼠血清中TC、TG、LDL含量较正常对照组明显增高(P<0.05),而HDL则明显低于正常对照组大鼠(P<0.05);PCR结果发现,NAFLD组大鼠肝组织中PERK,eIF-2α、CHOP及GRP78的mRNA表达水平均较正常对照组大鼠显著升高(P<0.05或P<0.01):同时Western blot结果显示NAFLD大鼠肝脏中p-PERK,p-eIF-2α,CHOP及GRP78等指标的蛋白水平表达较正常对照组大鼠明显增多(P<0.05);此外,流式细胞仪检测发现NAFLD大鼠肝细胞凋亡较正常对照组大鼠显著升高.结论:NAFLD的发生发展过程中可能有内质网应激诱导细胞凋亡通路PERK/eIF-2α的参与.

内质网应激及蛋白激酶R样内质网激酶/CCAAT增强子结合蛋白同源蛋白/门冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-12信号通路介导的细胞凋亡在糖尿病肾病发病机制中的作用研究进展

糖尿病肾病(DN)是糖尿病微血管并发症,主要表现为血糖升高、蛋白尿、肾功能下降,也是患者后期肾功能衰竭的主要原因。临床上主要通过控制血压和血糖水平来抑制DN的进展,但效果不佳。现有研究发现,内质网应激及其介导的细胞凋亡是引起DN的重要原因,蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)/CCAAT增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)/门冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-12(caspase-12)信号通路在其中发挥关键性作用,其中PERK是内质网应激启动的标志,CHOP是内质网应激由抗凋亡作用开始转为促凋亡作用的重要分子,caspase-12是内质网应激介导细胞凋亡的最终执行分子。本文就内质网应激及相关信号通路介导的细胞凋亡在DN发病机制中的作用进行综述。

黄芪皂苷通过调控蛋白激酶R样内质网激酶途径抑制高糖诱导的人视网膜色素上皮细胞自噬的研究

目的:探讨黄芪皂苷通过调控蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)途径影响高糖诱导的人视网膜色素上皮细胞(ARPE-19细胞)自噬水平。方法:体外培养人视网膜色素上皮细胞,实验分为正常对照组(5.5 mmol/L葡萄糖),高糖组(30 mmol/L葡萄糖),黄芪皂苷组(30 mmol/L葡萄糖+2.5、5、10μg/mL黄芪皂苷)。噻唑蓝比色(MTT)法检测ARPE-19细胞活性,流式细胞仪检测细胞凋亡率,蛋白免疫印迹(Western blot)法检测自噬相关蛋白及PERK途径关键因子表达水平。添加PERK特异性抑制剂GSK2606414,Western blot检测对细胞自噬水平的影响。结果:与正常对照组比较,高糖组ARPE-19细胞活性降低,凋亡率升高,自噬相关蛋白LC3表达水平明显升高,另一自噬相关蛋白p62蛋白表达水平明显降低。PERK途径关键因子葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、Perk和增强子结合蛋白的同源蛋白(CHOP)表达水平明显上调,差异具有统计学意义(P<0.05)。与高糖组比较,黄芪皂苷组ARPE-19细胞活性升高,凋亡率降低,LC3蛋白表达水平明显下调,p62蛋白表达水平明显上调,GRP78、Perk和CHOP蛋白水平明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。PERK特异性抑制剂GSK2606414能够进一步抑制黄芪皂苷组ARPE-19细胞LC3蛋白表达水平,上调p62蛋白表达水平,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:黄芪皂苷能够抑制高糖诱导的人视网膜色素上皮细胞自噬水平,其作用机制可能与抑制蛋白激酶R样内质网激酶途径有关。

人参皂甙Rbl对心力衰竭大鼠蛋白激酶R样内质网激酶途径的影响

目的探讨人参皂甙Rbl(Gs-Rb1)改善阿霉素所致心力衰竭(HF)效应是否与调整蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)通路有关。方法阿霉素(Adr)诱导的HF大鼠随机分为HF组(n=15)和Gs-Rbl组(70mg/kg/d,n=17),另随机选取同龄大鼠作为对照组(n=10)。干预结束并进行心脏超声检查后,TUNNEL检测心肌细胞凋亡率(AR),Western blot和Rt-PCR检测葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、PERK、p-PERK、真核细胞起始因子2α(eIF2α)、p-eIF2α、C/EBP同源蛋白(CHOP)和cleaved caspase-12。结果 1.Adr干预成功构建HF模型,Gs-Rb1显著提高左室射血分数(LVEF)和降低心肌细胞AR(P<0.01);2.HF组GRP78mRNA和蛋白均显著高于对照组,Gs-Rb1显著低于HF组和对照组二组的表达(P<0.01);3.Gs-Rb1显著降低HF大鼠PERK和p-PERK表达(P<0.01);4.HF导致eIF2αmRNA和蛋白、p-eIF2α显著升高,Gs-Rb1显著下调三者的表达(P<0.01);5.HF组CHOP mRNA和蛋白显著高于对照组,Gs-Rb1组显著抑制其表达(P<0.01);6.Gs-Rb1显著抑制阿霉素所致的caspase-12mRNA和cleaved caspase-12蛋白表达(P<0.01)。结论 Gs-Rb1通过调节PERK内质网通路介导其改善HF效应。

内质网应激蛋白激酶R样内质网激酶和CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白在甲亢性肌病中的作用

目的:探讨内质网应激蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)和CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)在甲亢性肌病中的作用。方法:选取2020年2月至2021年6月在南宁市第一人民医院初次诊断的急性甲亢性肌病患者21例,单纯甲亢患者30例,同时选取健康者25例作为正常对照组。比较3组血清促甲状腺素(TSH)、游离甲状腺素(FT_(4))、游离三碘甲状腺原氨酸(FT_(3))和促甲状腺受体抗体(TRAb)水平,提取外周静脉血RNA,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测PERK、CHOP mRNA的表达水平。结果:与单纯甲亢组比较,TRAb、FT_(4)、FT_(3)、PERK、CHOP mRNA水平在急性甲亢性肌病组中增高(P<0.01)。在急性甲亢性肌病中,TRAb与PERK、CHOP mRNA表达水平呈正相关关系(r=0.898,P<0.01;r=0.897,P<0.01)。结论:内质网应激PERK、CHOP可能在急性甲亢性肌病发病的过程中起着重要的作用,TRAb结合PERK、CHOP有利于早期判断急性甲亢性肌病。

内质网应激PERK-eIF2α-AFT4-CHOP信号通路在血液肿瘤中的研究进展

在生理状态下,内质网主要负责蛋白质的生物合成和成熟。然而,当机体稳态受到内外因素干扰破坏后,引发内质网中未折叠和错误折叠蛋白的累积,进而诱导产生内质网应激和未折叠蛋白反应(UPR)。在内质网应激条件下,未折叠蛋白反应可通过不同途径来维持细胞内稳态,其中活化蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)是其重要途径之一。活化的PERK使真核翻译起始因子2亚基α(eIF2α)磷酸化,引发活性转录因子4(ATF4)选择性翻译,并与促凋亡转录因子C/EBP同源蛋白(CHOP)的启动子直接结合诱导细胞凋亡。该信号通路也是UPR参与血液肿瘤细胞和免疫细胞调节的重要机制之一。本文阐述了PERK-eIF2α-ATF4-CHOP信号通路在血液肿瘤中的研究进展,以及靶向该信号通路在血液肿瘤治疗中的潜在价值。

高压氧对大鼠脊髓损伤后蛋白激酶R样内质网激酶表达和运动功能的影响

目的观察高压氧对脊髓损伤大鼠行为学、组织形态学以及蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)表达的影响,探讨高压氧治疗脊髓损伤大鼠的作用机制。方法将36只雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为正常组(n=9)、假手术组(n=9)、模型组(n=9)和高压氧组(n=9)。正常组不做任何处理;假手术组仅行椎板切除,不予脊髓打击;其余两组采用改良Allen法建立大鼠脊髓损伤模型,高压氧组于术后6 h开始,给予纯氧治疗连续7 d,每天1次。各组于术前(0 h)及术后6h、3 d、7 d进行BBB运动功能评分。术后7 d处死大鼠,提取各组损伤区脊髓1.5 cm,采用HE染色法观察损伤脊髓区域组织形态结构的变化;采用Western blotting检测脊髓组织中PERK蛋白表达量。结果正常组和假手术组均无神经功能损伤症状;术后3 d和7 d,模型组BBB评分低于假手术组(P <0.05);术后7 d,高压氧组BBB评分高于模型组(P <0.05)。正常组和假手术组均未见明显的结构异常;模型组损伤脊髓区域可见胞体肿胀,细胞结构模糊,间隙增大,胞核固缩溶解等病理结构;与模型组相比,高压氧治疗组组织损伤情况明显好转。术后7 d,模型组PERK表达明显高于假手术组(P <0.01),高压氧组低于模型组(P <0.05)。结论高压氧可以降低受损脊髓PERK蛋白的表达,促进大鼠后肢运动功能恢复。

脑出血患者脑脊液中蛋白激酶R样内质网激酶水平检测及临床意义

目的探讨脑出血患者脑脊液中蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)水平检测的意义。方法选取2019年3月—2021年5月青岛市中医医院收治的121例脑出血患者为研究对象。自患者入院治疗后随访6个月,收集患者基本资料。检测不同病情严重程度脑出血患者的PERK水平,采用多因素Logistic回归模型分析影响脑出血患者预后的因素;绘制ROC曲线分析脑脊液中PERK水平预测脑出血患者预后的价值。结果重度病情组的PERK水平高于轻度与中度病情组(P<0.05),中度病情组的PERK水平高于轻度病情组(P<0.05)。121例患者随访期间预后不良30例,剩余91例预后良好。多因素Logistic回归模型分析显示美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分[O^R=7.294(95%CI:3.00,17.73)]、格拉斯哥昏迷评分(GCS)[O^R=5.217(95%CI:2.15,12.68)]、颅内压[O^R=4.943(95%CI:2.03,12.01)]、PERK[O^R=4.536(95%CI:1.87,11.02)]是影响脑出血患者预后的危险因素(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,脑脊液中PERK水平预测脑出血患者预后的敏感性为76.67%(95%CI:0.573,0.894),特异性为80.22%(95%CI:0.703,0.876),AUC为0.772(95%CI:0.660,0.884)。结论脑出血患者脑脊液中PERK水平不仅与患者病情有关,也与患者预后有关,PERK预测脑出血患者预后效能良好。

炎症微环境下蛋白激酶样内质网激酶通路对牙周膜干细胞成骨分化能力调控机制研究

目的探讨炎症微环境下蛋白激酶样内质网激酶(PERK)通路对牙周膜干细胞成骨分化能力的调控机制。方法选择因正畸拔除的新鲜前磨牙或第三磨牙10例,牙周组织无炎症,完整无龋,患者年龄18~32岁。选择因慢性牙周炎而拔除的离体牙6例,患者年龄20~35岁。健康牙周膜干细胞(H-PDLSCs)和炎症牙周膜干细胞(P-PDLSCs)分别用正常和炎症牙周膜组织制备。采用免疫组织化学检测牙周膜组织中PERK通路相关因子PERK、CHOP、GRP78及ATF4的表达情况。构建稳定干扰PERK的炎症牙周膜细胞系(P-PDLSCs-PERK shRNA),采用RT-qPCR和Western blot检测PERK基因的抑制效率;对构建的稳定干扰PERK细胞系及另外3个对照组细胞P-PDLSCs-Vector、P-PDLSCs和H-PDLSCs进行成骨诱导,RT-qPCR检测成骨相关因子碱性磷酸酶(ALP)、Runx2及OCN的mRNA水平,Westernblot检测Runx2和OCN的蛋白水平,ALP染色鉴定ALP活性,茜素红染色分析细胞成骨能力。结果免疫组织化学结果表明,炎症组织中PERK信号通路相关因子PERK、CHOP、GRP78及ATF4均显著高于正常组织(P<0.05)。RT-qPCR及Westernblot检测结果显示,PERK基因抑制效率达到59%,PERK蛋白表达的抑制效率为54%。成骨相关因子的mRNA水平检测结果显示,诱导后P-PDLSCs和P-PDLSCs-Vector相差无几(P>0.05);诱导后H-PDLSCs中3种成骨相关因子水平显著高于前2种细胞(P<0.05);PERK基因被抑制诱导后P-PDLSCs-PERK shRNA相比未被抑制的PPDLSCs,3种成骨相关因子的基因表达均显著升高(P<0.05);成骨相关因子Runx2及OCN蛋白表达和ALP活性与mRNA水平保持一致。茜素红染色后,诱导后H-PDLSCs中矿化结石数量显著高于另外3种细胞(P<0.05),而诱导后PPDLSCs-Vector和P-PDLSCs差异无统计学意义(P>0.05);而相比诱导后P-PDLSCs,沉默PERK基因后的P-PDLSCs-PERK shRNA中形成矿化结石的数量明显回升(P<0.05)。结论炎症微环境能通过激活PERK信号通路抑制牙周膜干细胞的成骨分化能力,在PERK被沉默时,炎症微环境对牙周膜干细胞成骨分化能力的抑制作用能够得到逆转。

Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶通路阻断剂Y-27632对大鼠脂肪组织源性干细胞向神经元样细胞分化的诱导作用

目的：研究Y-27632对大鼠脂肪间充质干细胞向神经元样细胞诱导分化作用.方法：原代培养大鼠脂肪间充质干细胞,将3～6代细胞随机分成4组,无血清对照组、无血清诱导组、血清对照组、血清诱导组.采用倒置显微镜观察细胞形态,免疫细胞化学检测巢蛋白、神经元特异性核心抗原（NeuN）、血清应答因子（SRF）、平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、vimentin的表达,免疫印迹检测SRF、vimentin的表达.结果：在无血清情况下,Y-27632能够诱导脂肪组织源性干细胞（ADSCs）出现典型的神经元样细胞形态,免疫细胞化学检测显示神经元特异性蛋白巢蛋白、NeuN的阳性表达；而在10％血清条件下,这种诱导效应被抑制,巢蛋白、NeuN无阳性表达.免疫细胞化学染色显示无血清条件下,Y-27632能够显著抑制α-SMA的表达,同时SRF和vimentin也具有较强的阳性表达.免疫印迹检测显示无论是否存在血清,Y-27632均能够抑制SRF的表达；vimentin在无血清＋Y-27632组表达高于其他各组.结论：Y-27632能够诱导ADSCs向神经元样细胞分化并伴随神经特异标记物的表达.

内质网应激通路相关蛋白IRE1、PERK、ATF6在舌鳞癌中的表达及其功能的生物信息学分析

目的:本研究旨在通过生物信息学方法系统分析肌醇需求酶1(Inositol-Requiring Enzyme 1,IRE1)、蛋白激酶R样内质网激酶(Protein Kinase R-like Endoplasmic Reticulum Kinase,PERK)、激活转录因子6(Activating Transcription Factor 6,ATF6)在舌鳞癌中的表达及意义。方法:使用GEO、Kaplan-Meier Plotter、GeneMANIA、DAVID等多个数据库对IRE1、PERK、ATF6在舌鳞癌中的表达与预后价值、相互蛋白作用网络及功能富集进行综合分析。结果:ATF6在舌鳞癌组织中表达高于癌旁正常组织,差异具有统计学意义(P <0.05)。IRE1及PERK高表达组患者总生存率(OS)高于低表达组,ATF6高表达组患者OS低于低表达组,差异均具有统计学意义(P <0.05)。本研究筛选出与IRE1、PERK、ATF6相互作用的蛋白质各20个并进行GO富集分析。IRE1及相关蛋白富集于内质网、线粒体等细胞组分中,具有蛋白质结合、蛋白磷酸酶结合等分子功能,参与内质网应激反应、泛素依赖性ERAD途径等生物学过程。PERK及相关蛋白富集于胞液、细胞膜等细胞组分中,具有翻译起始因子活性、RNA结合等分子功能,参与内质网未折叠蛋白反应、细胞对葡萄糖饥饿的反应等生物学过程。ATF6及其相关蛋白富集于内质网、细胞核等细胞组分中,具有转录调控区序列特异性DNA结合、蛋白质异二聚化活性等分子功能,参与RNA聚合酶Ⅱ启动子转录的正调控、内质网未折叠蛋白反应等生物学过程。结论:ATF6在舌鳞癌组织中呈现高表达,同IRE1、PERK与舌鳞癌患者不良预后相关。在未来抗肿瘤治疗中,IRE1、PERK、ATF6可能成为舌鳞癌的诊断和治疗的新选择。

磷酸化蛋白激酶样内质网激酶、C/EBP同源蛋白在慢性间歇低氧大鼠肺组织中的表达变化及意义

目的探讨慢性间歇低氧(CIH)大鼠肺组织中磷酸化的蛋白激酶样内质网激酶(p-PERK)、CCAAT增强子结合蛋白(C/EBP)同源蛋白(CHOP)表达变化及意义。方法将60只大鼠随机分成正常组(UC组)、CIH组,每组各自分成3、7、14、21和28 d 5个时间亚组。采用HE法观察UC组和CIH组大鼠肺组织病理形态变化;采用免疫组织化学法检测p-PERK、CHOP蛋白表达及两者的相关性;采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测两组大鼠肺组织CHOP mRNA表达。结果 1CIH组肺泡壁及间质轻度水肿,少量炎症细胞浸润,肺泡结构紊乱,部分肺泡融合;UC组大鼠肺组织无明显病理变化。2CIH组肺组织p-PERK、CHOP蛋白表达高于UC组,于21 d表达最高。3CIH组肺组织CHOP mRNA表达高于UC组,于21 d表达最高。4P-PERK、CHOP表达的上调呈正相关。结论慢性间歇低氧可引起肺组织损伤,而p-PERK、CHOP蛋白的活化表达在慢性间歇低氧大鼠肺组织的损伤中可能存在一定的作用。

内质网应激信号通路PERK与动脉粥样硬化斑块稳定性的关系

目的探究内质网应激信号通路蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)与动脉粥样硬化(AS)斑块稳定性的关系。方法选取2021年2月—2023年2月收治的150例有AS斑块患者作为观察组,另选取150例健康体检者作为对照组。比较2组PERK信号通路相关因子水平,分析PERK信号通路相关因子对AS斑块发生风险的影响;比较不同斑块性质患者临床资料、PERK信号通路相关因子,分析PERK信号通路相关因子与血脂指标的相关性及对AS斑块稳定性的影响;受试者工作特征曲线评价PERK信号通路相关因子对AS斑块稳定性的预测价值。结果观察组血清PERK、活化转录因子4(ATF4)、C/EBP同源蛋白(CHOP)水平较对照组高(P<0.01)。当血清PERK、CHOP及ATF4处于高水平时,AS斑块发生风险分别是低水平的2.947倍、1.586倍、1.727倍。稳定斑块患者总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、三酰甘油(TG)、PERK、CHOP及ATF4低于不稳定斑块患者,高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)高于不稳定斑块患者(P<0.01)。AS斑块患者PERK、CHOP、ATF4分别与TC、LDL-C、TG呈正相关,与HDL-C呈负相关(P<0.01)。PERK、CHOP、ATF4是AS斑块不稳定的影响因素(P<0.01)。PERK、CHOP、ATF4联合预测AS不稳定斑块的曲线下面积为0.929,较各因子单独预测AUC明显升高(P<0.05,P<0.01)。结论PERK信号通路参与AS斑块发生发展,与血脂指标TC、LDL-C、TG、HDL-C显著相关。检测PERK信号通路相关因子,有助于临床预判AS斑块性质。

紫草素对肺炎链球菌引起的肺炎小鼠细胞外信号调节激酶/p38丝裂素活化蛋白激酶/核苷酸结合寡聚化结构域样蛋白3信号通路及肺血管通透性的影响

目的探究紫草素对肺炎链球菌引起的肺炎小鼠细胞外信号调节激酶/p38丝裂素活化蛋白激酶/核苷酸结合寡聚化结构域样蛋白3(ERK/p38/NLRP3)信号通路及肺血管通透性的影响。方法采用肺炎链球菌悬液50 L滴加BALB/c小鼠破损鼻黏膜建立肺炎链球菌性肺炎模型,成模小鼠采用随机数字表法分为模型组、紫草素低、中、高浓度组及头孢呋辛酯组,另取鼻腔滴加50 L生理盐水BALB/c小鼠为对照组,每组10只,紫草素低、中、高浓度组分别给予紫草素12.5 mg/kg、25.0 mg/kg、50.0 mg/kg,头孢呋辛酯组给予头孢呋辛酯50.0 mg/kg,对照组、模型组给予等量生理盐水,每天1次,连续灌胃7 d。末次给药12 h后处死小鼠,检测各组小鼠左肺湿/干重比值(W/D),每组采用随机数字表法选取4只小鼠进行1%伊文氏蓝5 mL/kg尾静脉注射检测肺血管通透性,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肺组织白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达量,实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)及蛋白质印迹法(WB)分别检测肺组织ERK、p38、NLRP3 mRNA及蛋白表达。结果与对照组比较,模型组小鼠肺组织W/D比值[(4.49±0.27)%比(3.02±0.15)%]、肺血管通透性[(0.091±0.009)g/mg比(0.034±0.004)g/mg]、IL-1β[(567.29±14.65)pg/mL比(102.46±6.73)pg/mL]、TNF-α[(417.16±12.89)pg/mL比(83.59±6.28)pg/mL]、ERK、p38、NLRP3 mRNA及蛋白表达水平均显著增加(P<0.05);与模型组比较,紫草素低、中、高浓度组小鼠肺组织W/D比值、肺血管通透性、IL-1β、TNF-α表达量、ERK、p38、NLRP3 mRNA及蛋白表达水平均依次降低(P<0.05),紫草素高剂量组均低于头孢呋辛酯组(P<0.05)。结论紫草素可减轻肺炎链球菌性肺炎小鼠肺组织损伤、炎症反应及肺血管通透性,可能与抑制ERK/p38/NL‐RP3信号通路有关。

花旗松素调控内质网应激PERK-ATF4通路减轻高血压大鼠心肌肥厚的机制研究

目的探讨花旗松素(TAX)对自发性高血压大鼠(SHR)心肌肥厚的影响及分子机制。方法24只SHR分为SHR对照组(SHR组)、TAX组(20 mg/kg)、TAX+PERK激活剂CCT020312(CCT)组(20 mg/kg TAX+2 mg/kg CCT),每组8只;另选8只正常血压Wistar-Kyoto(WKY)大鼠作为正常对照组(WKY组),给予相应的药物持续干预8周。实验过程中观察大鼠血压变化,并于干预结束后超声心动图检测大鼠舒张期室间隔厚度(IVSd)、收缩期室间隔厚度(IVSs)、左心室射血分数(LVEF)判断心肌肥厚程度和心脏功能,计算心脏指数、左心室指数,苏木精-伊红(HE)染色、小麦胚芽凝集素(WGA)染色和Masson染色评估心肌组织病理学变化,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测心肌组织中心房钠尿肽(ANP)、B型利钠肽(BNP)、I型胶原蛋白α1链(COL1A1)和Ⅲ型胶原蛋白α1链(COL3A1)mRNA表达,Western blot检测心肌组织蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)-转录激活因子4(ATF4)通路相关蛋白表达。结果干预结束后,与WKY组相比,SHR组收缩压(SBP)、舒张压(DBP)、IVSd、IVSs、心脏指数、左心室指数、心肌细胞横截面积、胶原容积分数(CVF)、心肌组织ANP、BNP、COL1A1和COL3A1 mRNA表达、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、ATF4、C/EBP同源蛋白(CHOP)蛋白水平和p-PERK/PERK比值升高(均P<0.05),LVEF降低(P<0.05);与SHR组相比,TAX组SBP、DBP、IVSd、IVSs、心脏指数、左心室指数、心肌细胞横截面积、CVF、心肌组织ANP、BNP、COL1A1和COL3A1 mRNA表达、GRP78、ATF4、CHOP蛋白水平和p-PERK/PERK比值降低(均P<0.05),LVEF升高(P<0.05);CCT020312可部分逆转TAX对心脏功能和心肌肥厚的保护作用。结论TAX可通过抑制内质网应激(ERS),改善高血压心肌肥厚,其作用机制可能与抑制PERK-ATF4通路有关。

胰岛素样生长因子2通过磷酯酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B信号通路调控人卵巢颗粒细胞增殖的机制

目的检测胰岛素样生长因子2(IGF2)对人卵巢颗粒细胞(KGN细胞)增殖的调控作用及作用机制。方法将体外培养的KGN细胞,分不同浓度IGF2处理组(对照组和25μg/L、50μg/L、100μg/L IGF2组)和磷酯酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路干预组(以LY294002干预处理将细胞分对照组、100μg/L IGF2组、LY294002组和IGF2+LY294002组)。采用MTS和5-乙炔基-2’-脱氧尿苷(Ed U)法检测IGF2对KGN细胞增殖的影响,ELISA法检测细胞培养液上清中雌激素、孕激素的含量,Western blotting法检测各组胰岛素样生长因子受体1(IGF1R)、蛋白激酶B(Akt)、磷酸化的蛋白激酶B(p-Akt)及CYP19A1蛋白表达。结果随着IGF2的浓度梯度增高,KGN细胞的增殖率及雌激素、孕激素的分泌量逐渐升高,以100μg/L IGF2处理组的细胞增殖率和激素水平最高(P<0.01),而抑制PI3K/Akt信号通路,细胞增殖率和激素的分泌量均明显降低(P<0.01);Western blotting结果显示,IGF1R、p-Akt及CYP19A1蛋白表达水平随着IGF2的浓度梯度逐渐升高(P<0.05),而干预PI3K/Akt信号通路可影响上述蛋白的表达,与对照组相比,IGF2组和IGF2+LY294002组IGF1R及p-Akt蛋白表达均明显升高(P<0.01),CYP19A1在IGF2组明显升高(P<0.01),LY294002组p-Akt及CYP19A1蛋白明显降低(P<0.05),IGF1R的表达差异无统计学意义。与IGF2组相比,IGF2+LY294002组p-Akt及CYP19A1蛋白表达降低(P<0.01),IGF1R的表达差异无统计学意义,LY294002组p-Akt及CYP19A1蛋白表达量均显著降低(P<0.01)。结论IGF2可能由IGF1R介导通过PI3K/Akt信号通路促进人卵巢颗粒细胞的增殖及分泌功能。