蛋白激酶SPAK在海水淹溺性肺损伤中的表达和作用

目的探讨在海水淹溺性肺损伤中肺组织STE20相关脯氨酸丙氨酸蛋白激酶(SPAK)表达的变化及在肺损伤发生发展中的作用。方法健康雄性SD大鼠30只,分为5组:对照组,海水处理1 h组,海水处理3 h组,海水处理6 h组,海水处理12 h组,每组6只动物。经气管缓慢注入4 ml/kg海水。处死后检测肺湿干比(W/D)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和干扰素-1β(IL-1β)、SPAK mRNA及蛋白的表达。结果经气管海水灌注后,肺的湿干比较对照组显著升高。TNF-α和IL-1β的水平明显增高。RT-PCR及western blot方法检测肺组织匀浆中的SPAK转录及翻译均有上调。肺的湿干比,海水处理6 h组与对照组比较差异具有统计学意义(P<0.05);海水处理1 h,3 h组与对照组比较差异具有统计学意义(P<0.001 vs.P<0.01)。结论在海水高渗透压的刺激下,细胞通过转录和翻译上调SPAK的表达,参与肺的炎症反应,加重了急性肺损伤的程度。但是其确切的作用有待进一步的研究证实。

海水吸入型肺损伤中蛋白激酶SPAK的表达改变

目的通过复制海水吸入引起的大鼠急性肺损伤模型,观察海水刺激对肺部炎症因子分泌、肺组织病理改变及肺组织中SPAK表达的影响。方法将健康雄性SD大鼠分为正常组,海水处理1 h组,海水处理3 h组,海水处理6 h组,海水处理12 h组。经气管滴注无菌海水复制海水吸入性肺损伤模型,并按照预设时间收集组织标本并检测肺组织湿干比、病理、炎性因子TNF-α、IL-1β以及SPAK的转录、翻译改变。结果海水吸入可以即刻引起血氧分压下降和二氧化碳分压升高,病理结果显示肺泡结构遭到破坏,肺泡壁断裂、增厚,中性粒细胞浸润,红细胞漏出等。ELISA结果显示海水刺激可引起肺内细胞分泌炎症因子TNF-α、IL-1β。海水吸入后SPAK蛋白表达明显增加,最高可达2.7倍左右(P<0.01),然后随着肺损伤病情的恢复,SPAK表达量逐渐下降。免疫组化染色结果显示海水吸入后SPAK表达明显升高,且广泛分布于细胞浆及细胞核。结论在高渗透压海水的刺激下肺组织细胞可以通过转录和翻译使SPAK表达增多,进而参与肺损伤时的炎症反应,加重了肺损伤程度。

通过NF-κB调控蛋白激酶SPAK通路促进NR8383细胞炎症介质释放及氧化应激发生

目的分析SPAK在高渗透压应激所致大鼠肺泡世噬细胞系(NR8383)细胞炎症介质释放及氧化应激发生中的作用。方法在细胞培养液中加入核因子κB(nuclear factorκappa-B,NF-κB)的抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲盐酸(1-Pyrrolidinecarbodithioic acid,PDTC)阻断其磷酸化,检测其对高渗刺激引起的SPAK表达升高的抑制作用。通过siRNA干扰技术下调SPAK的表达,检测NR8383细胞炎症介质TNF-α和IL-1的分泌以及MPO活性和LDH释放,阐明SPAK在细胞应对高渗透压刺激时的调控作用。结果高渗透压刺激可以导致NR8383细胞中的NF-κB的磷酸化并上调SPAK蛋白表达,而通过对NR8383细胞进行PDTC预处理,NF-κB的磷酸化及SPAK蛋白表达水平可以显著受到抑制。而SPAK表达下调可以减轻高渗刺激所致的炎症因子释放增加,降低MPO活性以及H_(2)O_(2)浓度。结论磷酸化NF-κB可以调控SPAK转录及翻译,而SPAK可以通过促进炎性介质释放、诱导氧化应激参与到高渗透压刺激的调控中。