蛋白激酶C相互作用蛋白1基因敲除诱导神经元氧化应激

目的 研究蛋白激酶C相互作用蛋白1(PICK1)敲除对神经元氧化应激反应的影响,从而明确PICK1在神经元氧化应激反应中的作用。方法 剪取小鼠尾巴1 cm,匀浆后提取DNA和蛋白质,利用PCR和Western blot鉴定野生型小鼠和PICK1敲除鼠的基因型。利用ELISA检测试剂盒,检测野生型和PICK1敲除小鼠脑组织中活性氧簇(ROS)和谷胱甘肽(GSH)的水平。硝基酪氨酸(Nitrotyrosine)是氧化损伤标志因子,利用Western blot及免疫荧光染色方法,检测小鼠脑内Nitrotyrosine与神经元的标记物MAP2。结果 成功鉴定出野生型鼠、PICK1基因杂合子小鼠和纯合子小鼠。PICK1敲除小鼠脑内的氧化应激因子ROS (P<0.05)和Nitrotyrosine水平显著升高(P<0.05),而抗氧化应激因子GSH明显下降(P<0.05)。Nitrotyrosine与MAP2免疫荧光共染结果显示,PICK1敲除的小鼠中神经元细胞存在氧化损伤。结论 PICK1基因敲除导致了小鼠神经元的氧化应激反应,提示PICK1可能是抑制神经元氧化应激的一个靶点。

蛋白激酶CβⅡ (PKCβ2)抑制剂LY333531减少心肌梗死后心肌肥大细胞浸润

目的探讨蛋白激酶CβⅡ(PKCβ2)特异性抑制剂LY333531对心梗后心衰大鼠心肌组织中肥大细胞浸润的影响。方法利用左冠状动脉降支(LAD)结扎制备大鼠心梗模型,将手术4周后出现心衰的大鼠分为对照组和LY333531治疗组,分别给予生理盐水和LY333531处理6周,同时设置假手术组。检测各组大鼠体质量和各项心功能指标,采用天狼星红染色观察心肌组织胶原沉积情况,甲苯胺蓝染色观察肥大细胞密度,ELISA检测血清中组胺和白细胞介素4(IL-4)的含量。结果与假手术组大鼠相比,手术后4周心衰大鼠(生理盐水组和LY333531组)左心室短轴缩短率(FS)显著减少,左心室收缩末期内径(LVESD)、左心室舒张末期内径(LVEDD)以及左心室后壁厚度(PWT)明显增加;心肌组织可观察到胶原沉积、肥大细胞浸润,血清中组胺和IL-4的含量增加。与生理盐水对照组相比,经LY333531治疗6周后,FS、LVESD以及PWT明显改善;但是LVEDD的改善无显著性差别,胶原蛋白沉积降低约50%,心肌组织肥大细胞数减少,血清中组胺和IL-4的含量降低。结论使用LY333531选择性抑制PKCβ2能够通过抑制心肌炎症反应,改善心梗后心力衰竭模型大鼠心脏功能和抑制病理性心肌重塑。

蛋白激酶PKCθ的研究进展

蛋白激酶C(proteinkinaseC,PKC)家族作为第二信使在多条信号通路中发挥着重要作用,具有广泛的生物学效应。PKCθ作为这个家族的一个成员有选择性地主要表达在T淋巴细胞和骨骼肌,对于T细胞的正常发育和全面活化有着重要意义。在胰岛素耐受的2型糖尿病的发生以及在一些肿瘤的形成、远处转移和耐药性的出现中扮演着重要角色,因此成为近几年研究的热点之一。

蛋白激酶C(PKC)对人精子活动力的影响及其作用机制

目的探讨人精子蛋白激酶C(PKC)的表达水平对精子活动力的影响及其作用机制。方法收集30份正常精液(精子浓度≥20×106/mL,a≥25%或a+b≥50%)和20份弱精子症患者精液(精子浓度≥20×106/mL,a+b≤40%)分别作为对照组和弱精症组。对照组先后加入PKC激活剂PMA和抑制剂GF109203X,用流式细胞术(FCM)检测精子中PKCβⅠ含量;用Western blot方法检测ERK蛋白和磷酸化表达水平。结果弱精组精子PKCβⅠ含量显著低于对照组(P<0.05);加入PMA后精子ERK磷酸化水平明显升高(P<0.05),加入GF109203X后ERK磷酸化水平明显降低(P<0.05)。结论精子活力低下的原因与PKC的含量降低有关,PKC可通过ERK信号传导途径参与调节精子活动力。

血管内皮生长因子调节蛋白激酶C表达对子宫内膜异位症间质细胞侵袭性的影响

目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)调节蛋白激酶C(PKC)表达对子宫内膜异位症(EMs)间质细胞侵袭性的影响。方法收集因卵巢EMs行手术并经术后病理证实为EMs的20例患者在位及异位内膜组织,分为EMs在位内膜组及EMs异位内膜组,收集同期因其他卵巢良性肿瘤行手术的10例患者子宫内膜作为对照组,应用免疫组织化学染色法及Western blot法检测各组子宫内膜中VEGF及PKC蛋白表达情况;分离培养EMs在位内膜间质细胞与非EMs子宫内膜间质细胞,应用细胞免疫鉴定法鉴定间质细胞,应用免疫荧光染色法及Western blot法检测各组间质细胞中VEGF和PKC蛋白表达及定位情况;采用VEGF-siRNA转染EMs子宫内膜间质细胞,采用Western blot法检测沉默VEGF后EMs间质细胞的VEGF、PKC蛋白表达变化,采用Transwell法检测其侵袭性的变化。结果与对照组相比,EMs在位内膜组及EMs异位内膜组VEGF、PKC蛋白表达均升高,且EMs异位内膜组中的表达水平高于EMs在位内膜组(P均<0.01)。EMs子宫内膜间质细胞中VEGF蛋白、PKC蛋白荧光染色均能看到绿色荧光,VEGF蛋白在子宫内膜间质细胞质和细胞核中均有表达,而PKC蛋白主要表达在子宫内膜间质细胞质中。Western blot结果显示,与对照组相比,EMs组VEGF及PKC蛋白表达均升高(P均<0.001);培养72 h后siRNA转染效率最高;与si R-NC组比较,VEGF-siRNA转染后EMs间质细胞中VEGF、PKC蛋白表达水平均降低(P均<0.001);Transwell结果显示,与siR-NC组及空白对照组比较,VEGF-siRNA转染后,EMs间质细胞的侵袭细胞数减少(P均<0.001)。结论VEGF可能通过调节PKC蛋白表达,继而改变细胞侵袭活性,诱导EMs的发生和发展。

IL-1通过PKC/MAPK激活蛋白激酶通路上调泡沫细胞ACAT-1的表达及活性

目的研究白细胞介素1(IL-1)是否通过蛋白激酶C/丝裂原激活蛋白激酶(PKC/MAPK)信号通路上调泡沫细胞中脂酰CoA胆固醇酯酰转移酶-1(ACAT-1)的表达及活性。方法复苏并培养人单核细胞白血病细胞系/THP-1细胞,与200 nmol/L乙酸肉豆蔻佛波酯(PMA)共孵育48 h,再与氧化低密度脂蛋白(Ox-LDL)共孵育24 h,油红O染色观察胞质内脂质沉积;分别以非放射性酶法和Western blot检测细胞中PKC和MAPK活性;加入PKC和MAPK抑制剂后,以Western blot及液相闪烁计数法检测ACAT-1的蛋白表达及酶活性。结果与PMA共孵育48 h后,THP-1细胞逐渐伸出突起,由圆形、悬浮式生长转变为多角形、梭形,呈阿米巴样贴壁生长;经Ox-LDL诱导24 h后,油红O染色胞质内可见大量吞噬的脂质小滴。与泡沫细胞组相比,泡沫细胞加IL-1组PKC活性、MAPK活性、ACAT-1蛋白表达及活性增加(P<0.05);ACAT-1蛋白表达由4.92±0.11增至5.95±0.12(P<0.05);PKC抑制剂和MAPK抑制剂能显著抑制IL-1上调ACAT-1表达(P<0.05)及活性(P<0.05)的作用。结论 IL-1上调泡沫细胞ACAT-1表达及活性,其作用是通过PKC/MAPK信号通路途径实现的。

蛋白激酶C(PKC)与心衰

心衰是一种严重威胁人类健康和生活质量的疾病。研究表明 ,PKC存在于心脏所有的细胞内 ,当发生心衰时 ,不同亚型的PKC表达提高 ,通过进一步研究发现PKC在心衰细胞中作为肥大信号传导 ,从而推进了心衰功能障碍机理的研究 ,开辟出治疗心衰的一条新路 。

复方丹参对缺血预适应大鼠心肌蛋白激酶C表达的影响

目的 探讨复方丹参加强缺血预适应 ( IPC)的机制 ,是否通过促进蛋白激酶 C ( PKC)蛋白、m RNA水平表达发挥作用。方法 采用冠脉结扎大鼠 5 min缺血 ,5 min再灌反复循环 3次的缺血预适应方案 ,缺血 30 m in,再灌 2 h的缺血再灌模型 ,通过免疫组化、RT— PCR的方法观察 PKC蛋白、m RNA表达以及复方丹参对其影响。结果 PKC在正常对照组中主要存在胞浆 ,但经过 IPC和使用复方丹参后 ,在胞膜和胞核也可见 ;不论早期 ,还是晚期 IPC组 PKC表达均高于假性预处理组 ,以早期 IPC组明显 ( P<0 .0 1) ;经复方丹参预处理后 ,PKC的表达均高于再灌组、早期、晚期 IPC组 ,以药物预处理 +缺血预处理组 ( DIPC)为优 ,显著高于早期 IPC组 ( P<0 .0 1)。PKCm RNA在正常心肌组织、再灌组、假性预处理组间无明显差异 ,但 IPC后不论早期 ,还是晚期 PKC m RNA表达均高于假性预处理组 ,晚期 IPC组表达更加明显 ;经复方丹参预处理后 ,可明显促进早、晚期 IPC及再灌组 PKC m R-NA的表达 ( P<0 .0 5 )。结论 复方丹参可激活 PKC,使其发生转位 ,促进其蛋白、m RNA表达水平增高。这可能是此方加强

铝暴露对大鼠海马蛋白激酶Cγ亚型影响

目的通过研究慢性铝暴露大鼠海马蛋白激酶Cγ亚型(PKCγ)的蛋白和mRNA表达的变化,观察大鼠海马CA1区长时程增强(LTP)形成,探讨铝暴露对学习记忆机制的影响。方法选择断乳后Wistar大鼠,以含有不同浓度A1Cl3的水进行饲养。3个月后,测量大鼠海马LTP,用改良的Takai法测定PKC活性的变化,蛋白印迹(Western blotting)法检测PKCγ的蛋白表达;RT-PCR检测PKCγ的mRNA表达。结果(1)各染铝组PKC活性与对照组比较均降低,差异有统计学意义(P<0.01);(2)各染铝组PKCγ蛋白表达与对照组比较有降低趋势(P<0.05);(3)各染铝组PKCγmRNA表达与对照组比较均降低(P<0.05),0.2%与0.4%,0.6%组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论慢性铝暴露影响大鼠海马PKCγmRNA和PKCγ蛋白表达,使PKC活性降低,导致LTP的下降,从而影响学习记忆的功能。

蛋白激酶C（PKC）调节作用及与抗癌关系

蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）调节作用及与抗癌关系蛋白激酶Ｃ（ＰｒｏｔｅｉｎＫｉｎａｓｅＣ，ＰＫＣ）调节剂是对抗癌药物武库的一个有价值的新补充。它可作为抗增殖药物起作用，又可抑制ｍｄｒ中介的药物外排而克服耐药性，增加铂化合物的细胞毒性，通过拮抗Ｐ２１ｒａｓ功能...

桂枝汤有效部位B对胃肠运动双向调节作用的实验研究Ⅵ—对cAMP、蛋白激酶A和C活性的影响

目的:探讨桂枝汤有效部位B(Fr.B)对胃肠运动双向调节的作用机理。方法:应用放射免疫法测定阿托品致胃肠运动受抑或新斯的明致胃肠运动亢进大鼠下丘脑及胃肠组织cAMP含量、PKA和PKC活性。结果:对阿托品致胃肠运动受抑大鼠,Fr.B可拮抗下丘脑和空肠组织cAMP含量及PKA、PKC活性的降低,对胃窦组织PKA活性的降低也具拮抗作用;对新斯的明致胃肠运动亢进大鼠,Fr.B可升高胃窦组织PKA活性、下丘脑和空肠组织PKC活性,对cAMP含量无明显影响。结论:Fr.B对胃肠运动的双向调节与其影响下丘脑及胃肠局部组织中cAMP含量和蛋白激酶活性有关。

银耳多糖对小鼠脾脏淋巴细胞蛋白激酶C活性的影响

目的观察银耳多糖(TPS)体外对小鼠脾脏淋巴细胞蛋白激酶C(PKC)活性的影响,探讨TPS对免疫细胞信息传递系统的效应。方法应用反向离子对高效液相色谱法测定小鼠脾脏淋巴细胞PKC活性。结果TPS能促进体外培养的小鼠脾脏淋巴细胞PKC活性。结论TPS的免疫调节作用与淋巴细胞的信号传导系统密切相关。

低氧预适应增加小鼠脑组织蛋白激酶C膜转位

初步探讨蛋白激酶C(PKC)在脑低氧预适应发生机制中的作用 ,以我室建立的小鼠低氧预适应模型 ,结合SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)、蛋白印迹 (Westernbolt)等生化技术 ,观察了低氧预适应对小鼠大脑皮层及海马组织内PKC膜转位的影响。结果表明 ,在小鼠大脑皮层和海马组织内的PKC膜转位均随着低氧次数 (小鼠低氧耐受时间 )的增加而增高。特别是低氧 3次的海马组织和低氧 4次的大脑皮层和海马组织内 ,PKC膜转位的增加有统计学显著意义。结果提示 ,PKC的激活可能在脑低氧预适应发生机制中具有重要的作用。

艾灸预处理对急性力竭运动大鼠心肌损伤及蛋白激酶C的影响

目的探讨艾灸预处理对急性力竭运动导致的心肌损伤的保护作用及蛋白激酶C(PKC)的影响。方法健康雄性SD雄性大鼠40只,随机分为正常对照组(C组)、艾灸组(M组)、力竭组(E组)、艾灸力竭组(ME组)和艾灸力竭+PKC抑制剂组(ME+CHE组)5组。在一次性游泳急性力竭模型的基础上,用艾灸预处理进行干预,并注射PKC抑制剂白屈菜红碱(CHE),采用透射电镜观察心肌细胞超微结构的变化,运用酶联免疫吸附(ELISA)法检测大鼠心肌PKC蛋白水平及其活化情况。结果 1E组心肌超微结构损伤改变明显,ME组心肌超微结构损伤较E组轻,而ME+CHE组心肌超微结构损伤程度与E组相似。2与C组比较,M组和ME组PKC蛋白水平无明显变化,E组和ME+CHE组p-PKC水平均有明显升高(P<0.05);与E组比较,ME组PKC水平有明显下降(P<0.05),ME+CHE组水平无明显变化;与ME组比较,ME+CHE组PKC水平有明显上升(P<0.05)。3与C组p-PKC水平比较,M组无明显变化,E组、ME组和ME+CHE组水平均有明显升高(P<0.05);与E组比较,ME组p-PKC水平有明显下降(P<0.05);与ME组比较,ME+CHE组P-PKC水平有明显上升(P<0.05)。结论急性力竭运动所致的心肌损伤与PKC的过度表达和活化有关,艾灸预处理对急性力竭所致的心肌损伤有保护作用,阻止PKC的过度表达和活化可能是其起效的机制之一。

腺病毒介导的心肌蛋白激酶Cε基因转移导致心肌损害

目的研究腺病毒介导的成年小鼠心肌直接蛋白激酶(PK)Cε基因转移对左心室收缩功能的影响。方法使用标准方法建立表达PKCε基因的重组腺病毒载体。直接注射重组腺病毒到FVB/N和ICR小鼠心肌,对照鼠给予相同剂量空载腺病毒。Western免疫印迹测定PKCε蛋白质表达水平。用非开胸经颈总动脉插管的显微外科技术评价小鼠左心室收缩功能。结果与对照鼠相比基因转移鼠心肌转基因PKCε蛋白质表达水平增加近4倍,基线左心室最大收缩压、最大收缩速率(dP/dt)、-dP/dt明显降低,左心室舒张末压、舒张压明显升高(P<0.01),异丙肾上腺素刺激后左心室dP/dt随剂量递增的依次升高明显抑制(P<0.01),PKCε基因转移鼠心脏质量/体质量比也较对照鼠明显增加(P<0.01)。结论腺病毒介导的、心肌直接的PKCε基因转移诱发了左心室收缩功能降低,导致了心肌肥厚和心力衰竭。

葛根素对糖尿病大鼠肾脏蛋白激酶C活性的作用

目的 研究葛根素(Pue)对糖尿病大鼠肾脏蛋白激酶C(PKC)活性、肾功能及肾脏结构的影响。方法链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病大鼠模型,随机分为糖尿病组、Pue(500、250、125 mg/kg)治疗组、维生素E(VitE)组,同时另设正常对照组,给药12周后,测定肾功能及肾脏指数,ELISA法测定肾脏PKC活性,放免法测定尿蛋白排泄率,并对肾组织进行光镜及电镜观察。结果 糖尿病大鼠尿白蛋白排泄率、肾脏指数(肾脏质量/体重)、肾小球细胞膜PKC活性明显升高,给予Pue治疗12周后,治疗组糖尿病大鼠尿白蛋白排泄率较糖尿病组显著降低,肾脏肥大也有明显改善,肾小球细胞膜PKC活性显著下降,光镜及电镜下肾脏病理改变较糖尿病组有较大改善。结论 Pue可以纠正糖尿病大鼠早期肾脏高滤过、高灌注,并对糖尿病大鼠肾脏病变有一定的保护作用,其部分机制可能是通过下调肾脏PKC活性而实现的。

人非小细胞肺癌中蛋白激酶CβⅠ的表达及细胞凋亡与预后关系的研究

目的 探讨人非小细胞肺癌中蛋白激酶CβⅠ (PKC βⅠ )的表达及细胞凋亡在肺癌发生、发展和预后中的作用。方法 应用免疫组织化学LSAB法和TUNEL法检测 119例人非小细胞肺癌组织、癌旁肺组织和 3 2例肺良性疾病肺组织中PKC βⅠ的表达和凋亡水平。 结果 ( 1)NSCLC组织中PKC βⅠ阳性表达率( 82 .2 7% )显著高于癌旁肺组织 ( 62 .85 % )和肺良性疾病肺组织 ( 5 0 .47% ) (P <0 .0 5 ) ,癌旁肺组织中PKC βⅠ阳性表达率显著高于肺良性疾病肺组织 (P <0 .0 5 )。NSCLC组织中凋亡指数 ( 5 .2 7% )明显低于肺良性疾病肺组织 ( 15 .84% ) (P <0 .0 5 )。 ( 2 )NSCLC组织中PKC βⅠ阳性表达率与肺癌临床病理生理特征无明显关系 (P >0 .0 5 )。NSCLC细胞凋亡水平与肺癌 pTNM分期、原发肿瘤大小及淋巴结转移状态有密切关系 (P <0 .0 5 ) ,而与肺癌细胞分化程度、组织学类型、患者性别和年龄等均无明显关系 (P >0 .0 5 )。 ( 3 )PKC βⅠ阳性表达率与细胞凋亡水平呈显著负相关 (P <0 .0 1)。 ( 4 )PKC βⅠ高表达组肺癌患者术后 5年生存率 ( 7.3 7% )显著低于低表达组患者 ( 3 7.0 6% ) (P <0 .0 1)。肺癌细胞凋亡高水平组患者 5年生存率 ( 3 9.2 4% )显著高于凋亡低水平组患者 ( 6.14 % ) (P <0 .0 1)。

葡萄糖对内皮细胞蛋白激酶C活性、通透性及粘附性的影响

目的 研究不同浓度葡萄糖对血管内皮细胞的蛋白激酶C(PKC)活性、通透性及粘附性的影响。方法 用[γ32 P]ATP参入外源性底物的方法测定人脐静脉内皮细胞(HUVECs )PKC活性;用51 Cr标记的静止血小板与HUVECs保温,测定内皮细胞的粘附性;用HUVECs对白蛋白的体外通透性实验测定内皮细胞的通透性。结果 2 0mmol L的高浓度葡萄糖可最大程度活化HUVECs的PKC ,膜PKC活性为( 2 874±0 0 4 6 )mmol·mg- 1 ·min- 1 ,明显高于浆PKC活性[( 1 2 15±0 0 19)mmol·mg- 1 ·min- 1 ,P <0 0 1];HUVECs在2 0mmol L高浓度葡萄糖作用下的最大粘附率为( 6 2 84±3 2 4 ) % ,对白蛋白的最大通透率为( 0 32±0 0 0 2 )ng ml,明显高于对照组(P <0 0 1) ;HUVECs的PKC总活性与HUVECs的通透性及粘附率的相关系数r分别为0 84 6、0 734(P均<0 0 5 )。PKC抑制剂CalphostinC能抑制高浓度( 2 0mmol L)葡萄糖对HUVECs的PKC活化,并使HUVECs的通透性及粘附率明显下降。结论 高浓度葡萄糖( 2 0mmol L)可活化血管内皮细胞的PKC ,进而增加其通透性及粘附性;

预先电刺激小脑顶核对局灶缺血/再灌注大鼠脑蛋白激酶C同工酶表达的影响

目的 :观察预刺激脑缺血大鼠小脑顶核不同时相蛋白激酶C同工酶γ、δ蛋白表达。方法 :采用线栓法大鼠大脑中动脉栓塞 /再灌注模型 ,缺血时间均为 1 .5hr/再灌注 2 4hr;于缺血前1、4、7天分别刺激小脑顶核、齿状核 1hr。以尾状核冠状切面作为观察对象 ,应用免疫组织化学方法观察单纯缺血 /再灌注组、假手术组、刺激小脑顶核组和刺激齿状核组PKCγ、δ的表达情况。结果 :缺血前 1、4、7天刺激小脑齿状核各组、单纯缺血 /再灌注组、假手术组PKCγ、δ阳性细胞数比较无显著性差异 (P >0 .0 5) ,而缺血前 1、4、7天预刺激小脑顶核能明显抑制PKCγ、δ蛋白的表达(P <0 .0 5)。结论 :缺血性脑损害能诱导PKCγ、δ蛋白表达上调 ,预先电刺激小脑顶核的缺血脑保护作用可能与其下调PKCγ。