丝裂霉素C与表达Smac/DIABLO的肿瘤靶向腺相关病毒联用对抗恶性黑色素瘤的效果

目的探讨重组腺相关病毒(rAAV)介导促凋亡因子Smac/DIABLO是否能提高恶性黑色素瘤细胞对丝裂霉素(MMC)的敏感性。方法将携有目的基因的rAAV加入到培养液中转染肿瘤细胞,荧光显微镜观察绿色荧光蛋白(EGFP)的表达,RT-PCR检测Smac/DIABLO基因的表达,MTT法测定肿瘤细胞增殖,流式细胞术测定肿瘤细胞的凋亡;动物在体实验测定抗肿瘤效果。结果 rAAV转染96h后几乎所有细胞表达明亮的黄绿色荧光。RT-PCR检测发现转染48h后目的基因Smac/DIABLO稳定表达。MTT检测显示rAAV-hTERT/Smac/DIABLO+MMC对肿瘤细胞的抑制率最高(P<0.05)。流式细胞检测结果显示,rAAV-hTERT/Smac/DIABLO+MMC组肿瘤细胞的凋亡率明显高于生理盐水(HBSS)组、MMC组和rAAV-hTERT/Smac/DIABLO组(P<0.01)。动物实验结果表明,rAAV-hTERT/Smac/DIABLO+MMC有非常强的抑制肿瘤作用,其抗癌效果优于HBSS、MMC、rAAV-hTERT/EGFP和rAAV-hTERT/Smac/DIABL组。结论 rAAV-hTERT/Smac/DIABLO在体内、体外均能提高肿瘤细胞对MMC的敏感性。此作用与Smac/DIABLO的促凋亡作用有关。

B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白基因过表达对人脑胶质瘤U251细胞株Smac/DIABLO表达的影响

目的 观察B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白（bax）基因过表达对人脑胶质瘤U251细胞第二线粒体来源的半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶激活剂或低等电点的凋亡蛋白抑制剂家族直接结合蛋白（Smac/DIABLO）表达的影响,并探讨其机制.方法 采用脂质体Lipofectamine2000转染,将携带人bax基因的表达质粒转入人脑胶质瘤U251细胞株中,同时设转染pEGFP空载体和未转染的U251细胞为对照.用Western blot法检测3组细胞中bax、Smac/DIABLO蛋白的表达,用免疫荧光法检测Smac/DIABLO蛋白在细胞中的分布.结果 bax蛋白表达水平在转染外源性bax基因组为0.82±0.12,相较于未转染组（0.35±0.05）、转染pEGFP组（0.32±0.09）显著增高（P＜0.05）.Smac/DIABLO蛋白表达在转染bax组为1.09±0.16,相较于未转染组（0.62±0.10）、转染pEGFP组（0.70 ±0.20）表达上调（P＜0.05）.bax、Smac在未转染和转染pEGFP细胞中表达差异无统计学意义（P＞0.05）.免疫荧光显示Smac/DIABLO主要分布于胞质.结论 外源性bax基因转入人脑胶质瘤细胞中并过表达,能够上调Smac/DIABLO蛋白表达.

清下化瘀方对急性胰腺炎大鼠胰腺细胞Survivin、XIAP及Smac的影响

目的:探讨清下化瘀方干预急性胰腺炎的作用机制。方法:通过胆胰管逆行注射法建立重症急性胰腺炎大鼠模型。将84只SD雄性大鼠随机分为假手术组、模型组、生长抑素组、清下组、化瘀组、疏肝组和清下化瘀组7组,各组均于术前2 h、术后1 h及术后6 h进行相应干预,并于术后24 h取材。HE染色观察并进行病理评分;实时荧光定量PCR法检测胰腺组织Survivin、X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)和低等电点的凋亡抑制蛋白直接结合蛋白(Smac)的mRNA水平;免疫组化法检测Survivin、XIAP及Smac表达。结果:清下化瘀方组大鼠胰腺病理评分明显低于模型组(P<0.05);清下化瘀方组Survivin、XIAP的mRNA及蛋白表达显著降低(P<0.05),Smac mRNA及蛋白表达显著升高(P<0.05)。结论:清下化瘀方可能通过调控Survivin、XIAP和Smac的表达而起到治疗急性胰腺炎的作用。

VEGF和Smac/DIABLO对胶质瘤细胞凋亡及化疗敏感性的影响

目的:旨在研究血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和第二线粒体衍生的caspase激活剂(second mitochondrial activator of caspase,Smac)/低等电点凋亡抑制蛋白直接结合蛋白(direct IAP binding protein with low PI,DIABLO)在胶质瘤发生和发展中的作用。方法:采用慢病毒介导的RNA干扰技术沉默VEGF基因在胶质瘤细胞U251中的表达;分别采用实时荧光定量PCR(real-time?uorogenic quantitative-PCR,RFQ-PCR)和蛋白质印迹法检测VEGF和Smac/DIABLO mRNA及蛋白在U251细胞中的表达水平;采用蛋白质印迹法检测磷酸化细胞外蛋白调节激酶(extracellular regulated protein kinase,ERK)的表达;FCM检测VEGF沉默对细胞周期的影响;MTT法检测VEGF沉默对U251细胞化疗敏感性的影响。结果:VEGF基因沉默可导致VEGF和Smac/DIABLO mRNA及蛋白表达水平的下调,并抑制磷酸化ERK的表达,提示VEGF是Smac/DIABLO的上游调节因子,通过激活ERK的信号通路调节Smac/DIABLO的表达水平。VEGF基因沉默导致U251细胞中处于S期的细胞比例增多,并增强顺铂对U251细胞的凋亡诱导作用。结论:VEGF可影响胶质瘤细胞周期的分布以及对顺铂的化疗敏感性。Smac/DIABLO参与了VEGF信号通路。