水酶法提取大豆油脂过程中蛋白相对分子质量变化对油脂释放的影响

分析对比4种挤压膨化工艺和4种蛋白酶对水酶法水解挤压膨化大豆的油得率、蛋白得率的影响,并分析水解过程中蛋白相对分子质量的变化与油脂释放的关系。结果表明,Alcalase 2.4L碱性蛋白酶水解膨化大豆粉3.6h后油脂已经被充分释放出来。水解过程中油脂释放率与蛋白性质变化的分析表明,油脂释放的状态与相对分子质量大于70000的蛋白质能否被水解到相对分子质量小于5000的肽有一定的联系。水解3.5h后近90%易水解的大分子蛋白被水解为相对分子质量小于5000的肽,此时油脂已经充分释放。水解前油脂受到相对分子质量大于70000的蛋白的束缚,油脂释放不够完全。

水酶法提取大豆油脂过程中蛋白相对分子质量变化对油脂释放的影响

分析对比4种挤压膨化工艺和4种蛋白酶对水酶法水解挤压膨化大豆的油得率、蛋白得率的影响,并分析水解过程中蛋白相对分子质量的变化与油脂释放的关系。结果表明,Alcalase 2.4L碱性蛋白酶水解膨化大豆粉3.6 h后油脂已经被充分释放出来。水解过程中油脂释放率与蛋白性质变化的分析表明,油脂释放的状态与相对分子质量大于70000的蛋白质能否被水解到相对分子质量小于5000的肽有一定的联系。水解3.5 h后近90%易水解的大分子蛋白被水解为相对分子质量小于5000的肽,此时油脂已经充分释放。水解前油脂受到相对分子质量大于70000的蛋白的束缚,油脂释放不够完全。

SDS-聚丙烯酰氨凝胶电泳法测定蛋白质相对分子质量的改良和优化

为了能够提高实验效率和资源利用率,生物化学实验教学团队分别从分离胶和浓缩胶的配制、凝胶的染脱色等方面不断探索,对SDS-聚丙烯酰氨凝胶电泳法测定蛋白质相对分子质量进行了改良和优化。在试剂改良方面,利用二硫苏糖醇代替毒性较大的β-巯基乙醇,适当减少TMED在分离胶和浓缩胶中的含量,增加APS的含量;在步骤优化方面,省去了凝胶染色固定,建立了微波中火加热30s-震荡染色5min-蒸馏水洗掉染色液-电磁炉蒸馏水煮10-15min的快速染色-脱色方法。

IgA肾病与低相对分子质量尿蛋白的关系

目的观察IgA肾病患者尿蛋白相对分子质量与肾小管间质损害及临床指标之间的关系,探讨低相对分子质量尿蛋白在IgA肾病发病机制中的作用。方法采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)法检测34例同步行肾活检诊断明确的IgA肾病尿蛋白相对分子质量。结果据SDS-PAGE法,尿蛋白可分为4组类型:小球性尿蛋白组,生理性尿蛋白组,混合性尿蛋白23×103组,混合性尿蛋白10×103组。IgA肾病患者肾小管间质损害评分、24小时尿蛋白定量及血清肌酐(Scr)水平比较,混合性尿蛋白10×103组均较23×103组升高(P<0.05)。结论 SDS-PAGE分型10×103组尿蛋白对判断IgA肾病肾小管间质损害程度有临床意义,其作为无创性检测手段,可以作为判断IgA肾病肾小管间质损害程度的指标。

恙虫病东方体Karp株相对分子质量为47蛋白基因的克隆与表达

目的了解恙虫病东方体Karp株相对分子质量为47蛋白的表达,检测其抗原性和免疫原性。方法采用PCR扩增恙虫病东方体Karp株相对分子质量为47蛋白成熟肽全基因序列并TA克隆,酶切PCR产物构建pGEX-47原核表达质粒,转化BL21,IPTG诱导表达相对分子质量为47重组蛋白,并检测其抗原性及免疫原性。结果1.扩增PCR产物约1300bp,测序结果与相对分子质量为47蛋白基因序列相同;2.构建原核表达质粒pGEX-47,纯化的重组蛋白SDS-PAGE分析在相对分子质量为47处,薄层扫描分析表达率为15.8%;3.Dot blot分析显示其有抗原性,小鼠免疫实验证实其有免疫原性。结论扩增相对分子质量为47蛋白的成熟肽全基因序列,在原核细胞得到表达,表达产物具有抗原性和免疫原性。

部分小麦品种的高相对分子质量谷蛋白亚基组成分析

利用电泳技术分析了94个国产小麦样品的高相对分子质量谷蛋白亚基组成，结果表明：这些小麦品种大部分具有1A上的优质亚基1，1B上的优质亚基7＋8／17＋18，1D上的5＋10，个别品种还同时具有1A、1B、1D上的优质亚基；我国的小麦品种高相对分子质量谷蛋白亚基组成类型较丰富，共检测到16种亚基和28种亚基组合类型，品质评分4～10分，平均为6．9分；在小麦品种中，含有优质亚基5＋10、17＋18或2^＊，分别有44、5和13个品种，可供优质小麦育种应用。

高分子量角蛋白抗体表达在甲状腺乳头状癌与乳头状增生鉴别诊断中的价值

目的为甲状腺乳头状癌(PTC)与结节性甲状腺肿伴乳头状增生(NGWPH)的鉴别诊断提供可靠分子标志物。方法用免疫组化EnVision法测定50例PTC(PTC组)及50例NGWPH组织中(NGWPH组)高相对分子质量角蛋白抗体(34βE12)表达情况,计算34βE12用于鉴别诊断的评价指标。结果PTC组34βE12表达阳性46例(92.2%),NGWPH组表达均为阴性,两组阳性率比较有显著差异(P<0.05);34βE12用于PTC与NGWPH鉴别诊断的敏感度为92%,特异度为100%,准确度为96%,阳性预测值为100.00%,阴性预测值为92.59%。结论34βE12可作为鉴别PTC与NGWPH的重要参考标志物。

维吾尔族妇女宫颈病变组织中HPV感染与低相对分子质量蛋白酶体2和7基因启动子甲基化的关系

目的探讨维吾尔族妇女宫颈病变及其人乳头状瘤病毒（humanpa pillomavirus，HPV）感染与低相对分子质量蛋白酶体（low molecular-weight protein，LMP）基因启动子区甲基化水平的关系和意义。方法利用专业软件设计LMP2和LMP7基因启动子区含CpG岛特异性PCR引物，对SiHa宫颈癌细胞DNA进行亚硫酸氢盐修饰、目的片段扩增、质粒载体克隆和测序，确定该区域所含CpG序列甲基化情况；收集维吾尔族妇女正常宫颈上皮、宫颈上皮内瘤变（cervical intraepithelial neoplasia，CIN）和宫颈鳞癌（cervical squamous cell carcinoma，CSCC）患者新鲜组织和石蜡组织标本78例，并提取DNA，采用Sequenom MassARRAYDNA技术平台（质谱分析），定量分析LMP2和LMP7基因启动子甲基化水平，同时以HPV分型芯片鉴定HPV亚型，分析基因甲基化与HPV感染的关系；应用RT—PCR和免疫组织化学方法检测LMP2、LMP7mRNA和蛋白的表达，并分析蛋白表达与基因甲基化的关系。结果LMP2和LMP7基因相应目的片段各含有22个CpG位点，在SiHa宫颈癌细胞基因组DNA中，只有LMP7有2个位点发生甲基化。宫颈病变病理过程伴随着LMP7基因CpG片段甲基化水平改变，其在CSCC和CIN组织的甲基化率（0．1864±0．0893和0．0728±0．0548）高于正常宫颈上皮组织（0．0652±0．0488），差异有统计学意义（P〈0．05）。随着宫颈病变的加重LMP7mRNA和蛋白表达逐渐下调，各组间表达差异具有统计学意义（P〈0．05），LMP7蛋白表达随着该基因甲基化率增高而降低（F=8．69，P=0．035）。而LMP2蛋白表达在3组间差异无统计学意义（P〉0．05）。HPV分型芯片检出12种HPV基因型，其中HPV16感染率构成比为52／78（66．7％），HPV16亚型阳性与宫颈病变进程及LMP7基因甲基化率升高趋势正相关（t=1．996，P=0．049）。结论LMP7基因启动子区CpG岛甲基化是一种宫颈癌病变特异性改变，与HPV16感染可能存在密切关系。

急性戊型肝炎患者尿液中低相对分子质量蛋白浓度的临床研究

近年来，临床上常用测定尿液中的低相对分子质量蛋白作为检测肾小管病变或损害的手段之一。尿液中的低相对分子质量蛋白的种类很多，但含量微小，任何一种或几种低相对分子质量蛋白排出增多，称为低相对分子质量蛋白尿。低相对分子质量蛋白尿多数情况下是肾小管重吸收功能损伤的结果。本研究对急性戊型肝炎患者尿液中低相对分子质量蛋白的水平进行了测定，探讨其临床意义并对戊型肝炎是否存在对肾脏的免疫损伤作初步探讨。

麦谷蛋白与面条品质关系的研究

研究了酸可溶麦谷蛋白、酸不溶性麦谷蛋白、高相对分子质量麦谷蛋白亚基、低相对分子质量麦谷蛋白亚基对面条质构品质的影响.结果表明:酸不溶性麦谷蛋白能增强熟面条的硬度、粘结性、粘合性、咀嚼性、最大剪切应力和拉断力;低相对分子质量麦谷蛋白亚基能增强熟面条的硬度、粘合性、咀嚼性、回复性、拉断力和拉伸应变.

小麦麦谷蛋白与烘焙品质的关系

麦谷蛋白在面包制作品质中具有重要的作用 ,本文旨在论述小麦麦谷蛋白、麦谷蛋白大聚合体及麦谷蛋白亚基与烘焙品质之间的关系 .指出高相对分子质量麦谷蛋白亚基的质量评分可作为预测面包烘焙品质的重要指标 .

解读蛋白质的几类计算

纵观十几年的高考和模拟考,蛋白质的计算主要有以下几个考向:考向1:某(链状、环状或链状+环状)蛋白质中肽键数(形成肽键,脱去2个H和1个O,可默认为形成的肽键数=脱去的水分子数)、二硫键数(—SH+HS→—S—S—+2H)、游离的(没有形成肽键的)氨基或羧基数和蛋白质相对分子质量的计算;考向2:蛋白质不同水解情况下(彻底水解的产物氨基酸和不彻底水解的产物短肽),某原子的个数计算(一个核心:原子数目平衡)、短肽中某氨基酸个数等;考向3:多肽的种类计算(排列组合).

中国海南黎族人群LMP2/LMP7基因多态性与肺结核病的关联性

目的:探讨低相对分子质量蛋白酶体(LMP)基因单核苷酸多态性(SNP)与肺结核病(PTB)易感性的关系,了解海南省黎族人群中LMP基因多态性的情况,为我国人类基因组多样性的研究提供理论依据。方法:应用PCR-RFLP技术对205例海南黎族PTB患者(病例组)和217例海南黎族健康人群(对照组)LMP2/LMP7 2个多态性位点(Codon60/Codon145)进行检测,并对其易感性进行分析。结果:LMP基因多态性位点在2组人群中具有多态性,LMP7均为C→A,LMP2均为C→T;病例组LMP7Codon145多态性位点纯合型Lys/Lys和杂合型Gln/Lys的基因型频数明显高于对照组。野生纯合型Gln/Gln的基因型频数与纯合型Lys/Lys比较,OR=3.77,95%CI[1.60,8.89](P<0.05);与杂合型Gln/Lys比较,OR=2.97,95%CI[1.80,4.90](P<0.01)。病例组LMP2基因多态性位点的基因频数与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05);LMP7基因的多态性对于PTB感染的发生有着显著的易感关联,在海南黎族人群中,其纯合、杂合形式分别增加结核患病风险为3.77和2.97倍。结论:对于结核杆菌感染的发生,LMP7基因的多态性是一个重要的易感危险因素。

利用间接凝集方法检测唾液ABH血型物质的初步研究

建立一种新的检测唾液中ABH血型物质(均属于唾液粘蛋白MG1)的方法。利用间接凝集反应通过黏附于含钙微粒上的唾液粘蛋白MG1与相应血型抗体结合而呈现明显的凝集现象,来检测唾液中相应血型物质的存在。以传统方法为金标准,本方法检测ABH物质的准确度分别为87.8%(72/82)、89.0%(73/82)和30.5%(25/82);灵敏度分别为64.3%(18/28)、71.9%(23/32)和9.5%(6/63);特异性均为100%。本实验初步建立了利用间接凝集反应检测唾液中A、B、H血型物质的不同于传统的新方法,对于唾液血型物质检测方法学的研究具有重要意义,同时为利用相应的特异性抗体定性检测唾液粘蛋白MG1提供了参考依据。

LMP/TAP基因多态性与甲状腺癌易感的相关性研究

目的为探讨低相对分子质量蛋白酶体(LMP)和抗原处理相关载体(TAP)基因单核苷酸多态性(SNP)与甲状腺癌易感性的关系,为我国人类基因组多样性的研究提供理论依据。方法124例甲状腺癌患者设为病例组,另选取111例健康人群设为对照组,采用聚合酶链式反应(PCR)酶切片段长度多态性(RFLP)对LMP2/LMP7/TAP1-1/TAP1-2基因中研究最多的四个多态性位点片段(Codon60/Codon145/Codon333/Codon637)进行检测,并对其易感性进行分析。结果遗传多态性分析和单倍型联合分析结果均表明,四种多态性位点与甲状腺癌的发生无显著相关性(P>0.05)。结论说明选择分析的Codon60/Codon145/Codon333/Codon637这四种多态性位点片段与甲状腺癌的发生可能不存在关联性。

血清胱抑素C对早期肾损害的临床诊断价值

肾脏是人体主要的排泄器官,在物质的排泄、体液的控制、电解质平衡以及激素内环境的稳定等方面均起重要作用。由于其解剖与生理上的特点,是体内特别容易受药物毒副作用影响的器官之一。氯氮平为广谱抗精神病药。

液质联用(LC／MS)技术在单克隆抗体(曲妥珠单抗)结构表征上的应用

目的:应用LC/MS(液质联用)和LC/MSE方法(液相色谱/非数据依赖二级质谱数据采集方法,等频率切换高与低碰撞能量进行质谱数据扫描)对单克隆抗体(曲妥珠单抗,人源化单克隆免疫球蛋白IgG1)的结构进行深度表征。方法:先用LC/MS对曲妥珠单抗完整蛋白及其亚基(轻链和重链)的相对分子质量进行测定;然后用多种酶(胰蛋白酶和AspN)酶解蛋白并用LC/MSE肽图分析法对曲妥珠单抗的氨基酸全序列进行解析和确定,同时对可能发生的翻译后修饰(PTMs)进行定性和定量分析。再通过PNGase F酶来释放抗体上的糖链并应用LC/FLR/MS(液相色谱荧光检测与质谱联用)方法对其糖基化修饰进行结构分析及确认。结果:对曲妥珠单抗的完整蛋白及其亚基(轻链和重链)的相对分子质量测定得到良好的质量准确度,由此可判定特定蛋白修饰在轻链和重链上的分布。通过对曲妥珠单抗酶解后的氨基酸全序列确认,可对其翻译后修饰以及可能的错误氨基酸序列进行解析。该抗体肽图分析的氨基酸序列覆盖率是100%。糖基化分析是通过对游离的N-链接寡糖进行2-AB荧光标记后再用LC/FLR/MS(液相色谱荧光检测与质谱联用)方法来进行的。联合使用这些分析方法,能够有效地对不同批号和不同工艺的抗体药物进行常规质量检测和深度表征,控制药物质量,为患者提供安全可靠的生物治疗药品。结论:结合液质联用(LC/MS和LC/MSE)技术,通过完整蛋白相对分子质量的测量,肽图分析测定氨基酸序列以及翻译后修饰的定性和定量分析,结合游离N-链接寡糖的分析表征,对单克隆抗体曲妥珠单抗进行了全面的结构表征,并建立了一套单克隆抗体结构表征的平台化方案。