蛋白磷酸酶1调节亚基14B对神经母细胞瘤细胞有丝分裂进程的调控作用

目的 研究蛋白磷酸酶1调节亚基14B(PPP1R14B)对神经母细胞瘤(NB)细胞有丝分裂进程的调控作用,为其治疗提供潜在新靶标。方法 在NB细胞SK-N-BE(2)-M17中转染2条不同序列小干扰RNA(siRNA)(PPP1R14B siRNA#1和#2)敲低PPP1R14B,实时定量PCR和Western印迹法检测PPP1R14B的敲低效果。在SK-N-BE(2)-M17 GFP-H2B细胞中转染PPP1R14B siRNA#1和#2,Time-lapse活细胞成像技术动态监测敲低PPP1R14B对该细胞有丝分裂进程的影响。采用酶切克隆法构建靶向PPP1R14B的2条不同序列短发夹RNA(shRNA)(sh PPP1R14B#1或#2)慢病毒质粒,并感染SK-N-BE(2)-M17细胞建立PPP1R14B稳定敲低细胞,Western印迹法检测其敲低效果,克隆形成实验观察敲低PPP1R14B对SK-N-BE(2)-M17细胞生长的影响。基于GEO数据库的临床数据,按NB不同临床分期分组,分析各组样本中PPP1R14B mRNA表达水平及其与预后的相关性。结果 与转染对照siRNA相比,转染PPP1R14B siRNA#1和#2均可有效敲低SK-N-BE(2)-M17细胞中PPP1R14B mRNA和蛋白表达(P<0.01)。Timelapse活细胞成像结果显示,与转染对照siRNA相比,转染PPP1R14B siRNA#1和#2组SK-N-BE(2)-M17GFP-H2B细胞有丝分裂期时间延长(P<0.05),且主要是有丝分裂前中期时间显著延长(P<0.01)。Western印迹法结果显示,与转染对照shRNA相比,转染sh PPP1R14B#1和#2均可有效敲低SK-N-BE(2)-M17细胞中PPP1R14B蛋白表达(P<0.01);克隆形成实验结果表明,转染sh PPP1R14B#1或#2稳定敲低组细胞克隆形成数亦明显降低(P<0.01)。GEO数据库分析显示,PPP1R14B mRNA表达水平与NB恶性程度呈正相关,与患者预后呈负相关。结论 敲低PPP1R14B导致SK-N-BE(2)-M17细胞有丝分裂期阻滞和生长减慢,PPP1R14B在NB发生发展中发挥重要作用。

上调Mg^(2+)/Mn^(2+)依赖性蛋白磷酸酶1F表达对鼻咽癌HONE-1细胞增殖和迁移的影响

目的:探讨上调Mg^(2+)/Mn^(2+)依赖性蛋白磷酸酶1F(PPM1F)对鼻咽癌HONE-1细胞增殖、迁移的影响,并阐明其作用机制。方法:鼻咽癌HONE-1细胞分为pcDNA3.1组(转染pcDNA3.1质粒)和pcDNA3.1-Flag-PPM1F组(转染pcDNA3.1-Flag-PPM1F质粒)。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法和Western blotting法检测2组细胞中PPM1F和E-钙黏蛋白(E-cadherin)mRNA及蛋白表达水平,CCK-8法和克隆形成实验检测2组细胞增殖活性和克隆形成率,细胞划痕实验检测2组细胞划痕愈合率,Transwell实验检测2组细胞中迁移细胞数。结果:与pcDNA3.1组比较,pcDNA3.1-Flag-PPM1F组细胞中PPM1F mRNA表达水平明显升高(P<0.01),且PPM1F蛋白表达量明显增加,细胞中E-cadherin mRNA和蛋白表达水平明显升高(P<0.01),细胞增殖活性、克隆形成率和划痕愈合率明显降低(P<0.05或P<0.01),迁移细胞数明显减少(P<0.05)。结论:上调PPM1F表达能够抑制鼻咽癌HONE-1细胞增殖和迁移,其机制可能与细胞间的黏附作用有关。

过表达双特异性蛋白磷酸酶1通过调节自噬作用减轻阿霉素诱导的心肌细胞凋亡和心肌纤维化

目的探讨过表达双特异性蛋白磷酸酶1(dual-specificity protein phosphatase 1,DUSP1)对阿霉素(adriamycin,ADR)诱导的心肌细胞凋亡和心肌纤维化的影响及作用机制。方法将SD大鼠随机分为对照组、ADR组、ADR+Ad-DUSP1组、ADR+Ad-NC组,每组10只。采用超声心动图检测大鼠心功能参数左心室舒张末内径值(left ventricular end diastolic diameter,LVEDD)、左心室收缩末内径值(left ventricular end systolic diameter,LVESD)、左心室射血分数(left ventricular ejection fraction,LVEF)和左心室短轴缩短率(left ventricular fractional shortening,LVFS)。实时定量聚合酶链反应(quantitative real time polymerase chain reaction,qRT-PCR)法检测大鼠心肌组织中DUSP1 mRNA表达,苏木素-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色、TUNEL染色及Masson染色分别检测大鼠心肌组织病理形态学变化、心肌细胞凋亡和心肌纤维化,Western blot法检测大鼠心肌组织相关蛋白表达。结果对照组、ADR组、ADR+Ad-DUSP1组和ADR+Ad-NC组大鼠心肌组织中DUSP1 mRNA表达水平分别为1.00±0.10、0.23±0.02、0.22±0.02、0.76±0.08。与对照组比较,ADR组大鼠心肌组织中DUSP1 mRNA表达水平显著降低;心功能指标LVEDD、LVESD显著升高,LVEF和LVFS显著降低;心肌组织可见明显病理损伤,心肌细胞凋亡率和胶原容积分数(collagen volume fraction,CVF)显著升高;心肌组织中B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)蛋白表达量显著降低,B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(B-cell-lymphoma-2 related protein,Bax)、切割型半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3(cleaved caspase-3)、Ⅰ型胶原蛋白(typeⅠcollagen,COL-Ⅰ)、Ⅲ型胶原蛋白(typeⅢcollagen,COL-Ⅲ)、基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2,MMP-2)、转化生长因子-β1(transforming growth factorβ1,TGF-β1)蛋白表达量显著升高;心肌组织中微管相关蛋白轻链3(microtubule associated protein light chain 3,LC3)、Beclin-1蛋白表达量显著升高、P62蛋白表达量显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。与ADR组比较,ADR+Ad-DUSP1组大鼠心肌组织中DUSP1 mRNA表达水平显著升高,心功能指标LVEDD、LVESD显著降低,LVEF、LVFS显著升高;心肌组织病理形态明显改善,心肌细胞凋亡率和CVF显著降低;心肌组织中Bcl-2蛋白表达量显著升高,Bax、cleaved caspase-3、COL-Ⅰ、COL-Ⅲ、MMP-2、TGF-β1白表达量显著降低;心肌组织中LC3、Beclin-1蛋白表达量显著降低,P62蛋白表达量显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论过表达DUSP1可能通过抑制自噬作用减轻ADR诱导的大鼠心肌细胞凋亡和心肌纤维化。

蛋白磷酸酶1和蛋白磷酸酶2A在高脂饮食诱导的大鼠脂肪肝中的变化及姜黄素的干预作用

目的:研究蛋白磷酸酶1(Protein phosphatase1,PP1)及蛋白磷酸酶2A(Protein phosphatase 2A,PP2A)在高脂饮食诱导的大鼠脂肪肝中的变化及姜黄素的干预作用。方法:采用单纯高脂饮食诱导的大鼠脂肪肝模型,随机分正常组、模型组和姜黄素组。造模14周,其中姜黄素组在第9周起予以姜黄素灌胃干预6周。观察项目:(1)肝组织HE染色,观察各组肝脂肪变性程度变化;(2)肝组织甘油三酯(triglyceride,TG)、游离脂肪酸(free fatty acid,FFA)、PP1、PP2A含量;(3)肝组织PP1、PP2A mRNA水平;(4)血清空腹胰岛素(FINS)含量、空腹血糖(FBG)含量及胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)的变化;(5)肝组织TG、FFA、PP1、PP2A含量及血清FINS、FBG、HOMA-IR的相关性分析。结果:(1)模型组肝组织出现显著的肝细胞脂肪变性及空泡样变,血清FINS、FBG含量、HOMA-IR和肝组织TG、FFA、PP1、PP2A含量显著升高(P<0.01),肝组织PP1、PP2A mRNA水平亦显著升高(P<0.01)。姜黄素组的上述病理改变明显减轻,血清FINS、FBG含量、HOMA-IR和肝组织TG、FFA、PP1、PP2A含量较模型组显著降低(P<0.01),肝组织PP1、PP2A mRNA较模型组显著降低(P<0.01)。(2)肝组织PP1、PP2A含量与肝组织TG、FFA含量呈显著正相关,与血清FINS、FBG含量、HOMA-IR亦呈显著正相关。结论:(1)脂肪肝大鼠的肝组织PP1、PP2A含量和mRNA水平显著升高,在脂肪肝病理机制中有重要意义。(2)姜黄素可显著降低脂肪肝大鼠的PP1、PP2A含量和mRNA水平,这可能为该药防治脂肪肝作用的重要机制。

支气管哮喘患者外周血蛋白磷酸酶1A水平与气道重塑的关系

目的探讨支气管哮喘患者外周血蛋白磷酸酶1A(PPM1A)水平与气道重塑的关系。方法选择2017年8月至2020年1月广东省中山市博爱医院(以下简称“我院”)收治的114例支气管哮喘患者,参考全球哮喘倡议中哮喘分级标准将患者分为重度组(51例)和轻中度组(63例),另选择我院同期50名健康志愿者为对照组。检测血清PPM1A、白细胞介素(IL)-4、IL-17A、IL-13水平,肺功能和气道重塑指标。分析血清PPM1A水平与气道重塑、肺功能、IL-4、IL-17A、IL-13相关性。结果重度组和轻中度组血清PPM1A水平、第1秒用力呼气容积(FEV1)、FEV1与用力肺活量的比值(FEV1/FVC)、FEV1占预计值百分数(FEV1%pred)低于对照组,重度组血清PPM1A水平、FEV1、FEV1/FVC、FEV1%pred低于轻中度组,差异有统计学意义(P<0.05)。重度组和轻中度组IL-17A、IL-13、IL-4水平,气道壁厚度/气道外径百分比、气道壁面积占气道总面积百分比高于对照组,重度组IL-17A、IL-13、IL-4水平,气道壁厚度/气道外径百分比、气道壁面积占气道总面积百分比高于轻中度组,差异有统计学意义(P<0.05)。线性回归方程为PPM1A=2.035+0.492 IL-4-0.671 IL-17A-0.503 IL-13+0.586 FEV1+0.416 FEV1/FVC+0.356 FEV1%pred-0.725气道壁厚度/气道外径百分比-0.783气道壁面积占气道总面积百分比(R2=0.786,调整后R2=0.753,F=39.265,P<0.001),支气管哮喘患者PPM1A水平与FEV1、FEV1/FVC、FEV1%pred呈正相关(P<0.05),与气道壁厚度/气道外径百分比、气道壁面积占气道总面积百分比、IL-4、IL-17A、IL-13呈负相关(P<0.05)。结论支气管哮喘患者外周血PPM1A水平明显下降,PPM1A缺失可能参与了支气管哮喘气道重塑过程。

野生型P53诱导的蛋白磷酸酶1对卵巢癌细胞侵袭的影响

目的:探讨野生型p53诱导的蛋白磷酸酶1(Wip1)与卵巢癌细胞SKOV3侵袭力的关系,揭示Wip1对SKOV3细胞的侵袭和迁移等恶性生物学行为的影响。方法:采用划痕实验、Transwell小室法测定Wip1沉默后SKOV3细胞体外侵袭能力。实时荧光定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及Western blot方法检测SKOV3细胞中基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、组织金属蛋白酶抑制剂1(TIMP-1)、组织金属蛋白酶抑制剂2(TIMP-2)的表达。结果:细胞迁移距离Wip1-siRNA组(30.33±3.67)短于Control组(59.33±7.69),细胞侵袭到Transwell小室滤膜下细胞数Wip1-siRNA组(17.17±1.84)低于Control组(30.17±3.43),RT-PCR和Western blot检测Wip1-siRNA组MMP-2(0.51±0.01)和MMP-9(0.40±0.03)的表达较Control组(1.00±0.00)降低(均P<0.01);Wip1-siRNA组TIMP-1和TIMP-2的表达与Control组未见差异(P>0.05)。结论:沉默Wip1能够抑制人卵巢癌SKOV3细胞侵袭能力,可能是通过抑制MMP-2、MMP-9的表达实现的。

野生型p53-诱导的蛋白磷酸酶1过表达与胶质瘤患者预后的关系

目的探讨野生型p53-诱导的蛋白磷酸酶1(wild-type p53-induced phosphatase 1,Wip1)与脑胶质瘤患者预后相关性。方法通过免疫组织化学方法检测81例不同级别和类型胶质瘤组织与15例正常脑组织中Wip1表达阳性与患者不同临床病理类型的关系,包括性别、年龄、胶质瘤的病理分级、肿瘤大小、肿瘤位置、KPS评分、病理分级、PCNA表达p53表达。应用Kaplan-Meier生存曲线法分析Wip1表达与患者预后的相关性。结果 Wip1在脑胶质瘤组织的阳性表达率为55.6%(45/81),明显高于正常脑组织的0.0%(0/15)(x^2=15.686,P<0.01),Wip1阳性表达的胶质瘤患者生存率低于Wip1阴性表达患者。Wip1的表达与PCNA表达呈正相关,低KPS评分、高Wip1表达和高病理分级是胶质瘤患者预后差的危险因素。结论 Wip1在人脑胶质瘤组织中呈高表达,与患者预后差有关。

稳定敲低Mg^(2+)/Mn^(2+)依赖性蛋白磷酸酶1A(PPM1A)的BV2细胞系建立

目的构建Mg^(2+)/Mn^(2+)依赖性蛋白磷酸酶1A(PPM1A)基因的短发卡RNA(shRNA)慢病毒表达载体,并建立稳定敲低PPM1A表达的BV2小鼠脑小胶质细胞系。方法针对PPM1A基因的编码序列(CDS)区,设计合成2对短发卡RNA(shRNA)序列shRNA1、shRNA2,分别将其克隆到GV493载体中,并转化至感受态大肠杆菌DH5α菌株,培养后挑取阳性克隆子进行测序,最后包装慢病毒并进行滴度测定。将2组慢病毒分别转染BV2小鼠脑小胶质细胞,并给予嘌呤霉素筛选,使用荧光显微镜及流式细胞术观察绿色荧光蛋白(GFP)的表达,评估转染结果,分别采用实时定量PCR和Western blot法检测PPM1A的mRNA和蛋白水平。结果 PPM1A基因shRNA慢病毒表达载体经过测序鉴定构建成功,转染BV2小鼠脑小胶质细胞后GFP表达率大于80%;与对照组相比,shRNA1及shRNA2敲低组PPM1A mRNA及蛋白水平均显著降低。结论利用慢病毒shRNA方法成功构建PPM1A敲低的BV2细胞系。

条件恐惧记忆形成中大鼠海马CA1区钙调蛋白激酶Ⅱ和蛋白磷酸酶1蛋白表达及活性变化

目的探讨大鼠恐惧记忆形成过程中海马CA1区钙调蛋白激酶Ⅱ(CAMKⅡ)和蛋白磷酸酶1(PP1)表达的变化。方法将大鼠随机分成电击组(n=9)和对照组(n=9),24 h后处死动物,提取海马CA1区蛋白,用anti-CAMKⅡ、anti-p-CAMKⅡ(T286)和anti-PP1、anti-PP1α(T320)抗体作蛋白印迹,检测电击对CAMKⅡ和PP1蛋白表达及活性的影响。结果电击组的大鼠在1 h和24 h海马CA1区CAMKⅡ蛋白表达较对照组增加了4.4±1.2倍,并且其286位的苏氨酸磷酸化的CAMKⅡ蛋白表达较对照组增加了3.3±0.8倍(P<0.05)。电击组PP1蛋白表达较对照组增加了3.6±1.1倍,并且PP1α320位的苏氨酸磷酸化信号较对照组增加2.3±0.6倍(P<0.05)。结论大鼠条件恐惧记忆形成过程中海马CA1区CAMKⅡ和PP1蛋白的表达增加,活性增强。CAMKⅡ和PP1介导的磷酸化信号参与了条件恐惧长时记忆的形成。

神经病理性疼痛对大鼠脊髓背角蛋白磷酸酶1的表达调控作用

目的 明确双侧坐骨神经松结扎（bCCI）大鼠脊髓背角蛋白磷酸酶1催化亚基β异构体（PPP1 CB）的表达水平及其与miR-203之间的关系,以及加巴喷丁的干预效果.方法 48只雌性大鼠,被随机分为Naive组、Sham组、bCCI组和bCCI＋加巴喷丁组,建立bCCI模型.加巴喷丁干预组分别于术前15 min 1次、术后第7天起每日2次腹腔注射给予加巴喷丁100 mg/kg,连续7d.术后第14天处死大鼠,留取脊髓背角（L4～L6）标本,分别利用real-timePCR与Western blot技术检测PPP1CB mRNA及蛋白质表达,并进行生物信息学分析.结果 PPP1 CB mRNA表达显著下降约80％,而大鼠脊髓背角PPP1 CB蛋白表达水平则较对照组和假手术组上升约2倍;加巴喷丁干预组大鼠脊髓背角PPP1 CB蛋白表达水平较未干预组显著回落（P＜0.05）,但未恢复到对照组和假手术组水平,而PPP1CB mRNA表达水平则较未干预组有显著回升（P＜0.05）,恢复到与正常对照组、假手术组相同水平;利用生物信息学验证了 miR-203对PPP1CB的调控关系.结论 bCCI大鼠脊髓背角PPP1 CB蛋白的表达量上升可能受到了miR-203的调控作用,并可能通过多种途径参与了神经病理性疼痛的发生发展.

DNMT1、DNMT3A和蛋白磷酸酶1γmRNA在低氧预适应晚期相小鼠海马组织变化

目的研究小鼠低氧预适应模型中DNA甲基化和PP1γ基因表达伴随低氧后时间的变化机制,阐明低氧是否通过DNA甲基化来调控PP1γ表达,发挥其脑保护作用。方法小鼠侧脑室注射5-aza-cdR(10μM,5μl),之后进行低氧处理,分别于低氧后0、1、2、3、4天处死小鼠,利用实时荧光定量PCR检测甲基转移酶DNMTs和PP1γmRNA的表达变化。结果低氧后1天DNMT1和低氧后2天DNMT3A的mRNA表达受到抑制(P<0.05),且不受甲基转移酶活性的影响。5-aza-cdR对DNMT1的表达没有影响(P>0.05);但明显抑制DNMT3A的表达(P<0.05)。低氧抑制PP1γmRNA表达(P<0.05),且有低氧后时间依赖性。甲基转移酶对PP1γ表达有抑制作用(P<0.05),且与低氧后时间有关。结论随着低氧后时间的延长,低氧通过改变DNA甲基化,尤其是DNMTs表达变化,调控PP1γ基因表达,实现其脑保护作用。

蛋白磷酸酶1与Ca^(2+)/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ在心肌病中研究进展

蛋白质的磷酸化与去磷酸化是细胞信号转导过程中最重要的调控方式,其循环过程就像调控分子的开关一样,参与众多生理活动。负责这一修饰调节的是蛋白激酶与蛋白磷酸酶。报道显示人类染色体编码多达500个蛋白激酶,这些蛋白激酶满足人类高度多样性与差异性调控蛋白磷酸化作用,而有趣的是人类编码的蛋白磷酸酶却仅仅约为150个,其中约有40个是丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶。越来越多的证据表明蛋白磷酸酶/蛋白激酶调控异常在心肌病中起关键作用。蛋白磷酸酶1(protein phosphatase 1,PP1)是一多功能的丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶,研究显示PP1在心肌肥厚和心衰的发生发展过程中起重要作用。而Ca2+/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(Ca2+/calmodulin-dependent protein kinaseⅡ,CaMKⅡ)是一种多功能的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,它作为Ca2+信号转导的关键因子,调节细胞的多种生物学功能,其功能异常可引起肥厚心肌胞内钙稳态失衡进而引起心律失常等心肌病。该文就PP1与CaMKⅡ的功能和心肌病的关系作一综述。

中国对虾蛋白磷酸酶1催化亚基β基因的克隆表达及特性分析

本论文利用RACE（Rapid-amplification of cDNA ends）技术克隆获得中国对虾（Fenneropenaeus chinensis）蛋白磷酸酶1催化亚基β（Protein phosphatase 1catalytic subunit beta isoform,PP1β）基因cDNA序列全长。该基因全长1 214bp,包含一个987bp的开放阅读框,编码328个氨基酸。同源性分析显示,中国对虾PP1β氨基酸序列与不同物种PP1β的相似性高达90%~91%,表现出高度保守性。多序列比对结果显示,不同物种PP1β均含有丝氨酸/苏氨酸特异性蛋白磷酸酶家族的特征基序GDxHG、GDxVDRG和GNHE。系统进化树分析显示,甲壳动物PP1β聚为一大支,中国对虾PP1β和凡纳滨对虾（Litopenaeus vannamei）聚为一小支。实时荧光定量PCR分析显示,PP1β在健康的中国对虾各组织中均有不同程度的表达,其中在性腺中表达最高,血细胞次之。白斑症病毒（White spot syndrome virus,WSSV）注射感染健康中国对虾后,血细胞和性腺中PP1β基因均呈上调表达,并在12h达到峰值,且在血细胞中上调表达更显著。构建了中国对虾PP1β基因原核重组表达载体pET28a-PP1β,转化大肠杆菌后成功诱导表达重组PP1β蛋白（rPP1β）,分子量为41kDa。将亲和层析纯化的rPP1β免疫BALB/c小鼠制备抗血清,通过制备中国对虾血细胞滴片,应用间接免疫荧光法检测PP1β在血细胞中的分布情况,结果显示,中国对虾PP1β在血细胞的核区及细胞质内均有分布。本研究结果为进一步解析中国对虾PP1β与WSSV感染的相互关系提供了数据。

急性重复低氧预适应小鼠海马组织蛋白磷酸酶1γ表达的变化

目的:检测急性重复低氧预适应小鼠海马脑组织中蛋白磷酸酶(protein phosphatase,pp)1γ的变化,探讨pp1γ的变化在低氧预适应脑保护中的作用。方法:成年昆明小鼠随机分成低氧暴露1次组(H1)或低氧暴露4次(H4)组和常氧组(H0)。低氧结束后取海马组织,应用Real-time PCR技术和蛋白印记技术检测pp1γ表达的变化;应用磷酸酶活性实验对pp1活性的变化进行检测;应用甲基化测序实验对pp1γ启动子区(95~321 bp)甲基化变化进行检测。结果:pp1γ的mRNA在H4组表达较H0组降低,差异有统计学意义(P<0.01);pp1γ的蛋白质变化与mRNA变化一致,在H4组的表达较H0组降低,差异有统计学意义(P<0.05);pp1γ水解磷酸的活性在H4组和H1组均低于H0组(P<0.05);pp1γ启动子区(95~321 bp)DNA甲基化情况在三组间未见差异。结论:pp1γ变化可能参与了低氧预适应小鼠获得的脑保护,但该变化可能与其启动子区(95 bp^321 bp)的甲基化无关。

蛋白磷酸酶1在D-半乳糖诱导老化小鼠耳蜗中的表达

目的观察D-半乳糖诱导老化小鼠耳蜗中蛋白磷酸酶1(protein phosphatase 1,PP1)的定位表达及作用。方法 40只昆明小鼠随机分为对照组和D-半乳糖组,每组20只。D-半乳糖组颈背部皮下注射D-半乳糖(800mg·kg^(-1)·d^(-1)),对照组每日皮下注射等量生理盐水,连续给药8w;停药后检测血浆总超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活力和丙二醛(Malondialdehyde,MDA)水平;免疫荧光法定位PP1在耳蜗的表达,real-time PCR法检测耳蜗中PP1mRNA水平,Western blot法检测小鼠蛋白磷酸酶1核目标亚基(protein phosphates 1nuclear targeting subunit,PNUTS)、PP1及caspase-3的表达。结果与对照组比较,D-半乳糖组小鼠总SOD活力降低而MDA水平升高(均为P<0.01);PP1主要定位表达于小鼠耳蜗毛细胞、螺旋神经节细胞及血管纹细胞的胞核和胞浆中,且给予D-半乳糖后,小鼠耳蜗中PP1mRNA及其蛋白表达水平显著升高,而PNUTS表达减少,caspase-3表达增加(均为P<0.05)。结论 PP1在D-半乳糖诱导老化小鼠耳蜗毛细胞、螺旋神经节及血管纹细胞中表达,且参与了其耳蜗老化过程。

蛋白磷酸酶1γ2及其与精子功能的研究进展

蛋白磷酸酶1γ2(PP1γ2)是精子特异性蛋白磷酸酶,它是丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶1的4种异构体中的一种,它对调控精子的发生和精子的功能具有重要的作用。精子内源性的调节因子糖原合成激酶-3(GSK-3)、蛋白激酶A锚定蛋白4(AKAP4)、sds22及外源性的调节因子花萼海绵诱癌素A(OA)和冈田酸(CA)都能够通过激活和抑制精子PP1γ2来调节精子的发生、运动等相关功能的发挥。作者对蛋白磷酸酶1γ2与精子功能之间的关系进行了综述。

Mg^(2+)依赖性蛋白磷酸酶1δ的生物信息学分析

Mg2+依赖性蛋白磷酸酶1δ(protein phosphatase magnesium-dependent 1δ,PPM1D)作为肝癌潜在的预后标志物和治疗靶点,其致癌机制和预后价值仍未完全阐明。为了全面认识PPM1D,使用生物信息学方法,对PPM1D蛋白的序列同源性、组织表达、亚细胞定位、理化性质、空间结构及蛋白质相互作用网络进行分析。结果表明:人PPM1D基因编码605个氨基酸组成的多肽,与物种进化程度一致,属于PP2C蛋白超家族,是碱性不稳定的亲水蛋白,无信号肽和跨膜区域;PPM1D蛋白主要定位于细胞核内,其主要二级结构为随机卷曲,存在磷酸化、乙酰化、甲基化和泛素化位点,与PPM1D相互作用的蛋白主要是细胞周期检查点蛋白和细胞损伤修复相关蛋白。根据分析结果阐述了PPM1D蛋白与癌症的相关性以及PPM1D蛋白作为癌症标志物的理论基础,为进一步研究该蛋白及其参与的信号通路提供一定的借鉴和参考。

蛋白磷酸酶1及其去磷酸化与抑郁症的关联研究

近年来发现蛋白磷酸酶家族在不同的脑区进行的生物调控在抑郁症研究中一直很受重视,其中丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶1(proteinphosphatase 1,PP1)可通过其在突触处催化细胞中大部分磷酸丝氨酸和磷酸苏氨酸的去磷酸化来控制突触可塑性。尽管PP1及其去磷酸化参与了许多关键的生物过程,但与抑郁症的相关性研究较少。本文通过综述各种证据,支持PP1及其去磷酸化在抑郁症的发病机制与疾病进展中可能发挥重要的作用。

热休克蛋白70、镁依赖性蛋白磷酸酶1D和肿瘤坏死因子-α在甲状腺乳头状癌中的表达及其与临床病理特征的关系

目的探讨热休克蛋白70(heat shock protein 70,HSP70)、镁依赖性蛋白磷酸酶1D(protein phosphatase magn e sium-dependent 1 delta,PPM1D)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)在甲状腺乳头状癌中的表达及与临床病理特征的关系。方法选取2016年4月至2019年3月深圳市人民医院来源的甲状腺组织病理标本92份,其中甲状腺乳头状癌组织45份、甲状腺滤泡性腺瘤组织32份、正常甲状腺组织15份。采用免疫组织化学法检测三组标本组织中HSP70、PPM1D、TNF-α表达情况,分析HSP70、PPM1D、TNF-α与临床病理特征的关系。结果甲状腺乳头状癌组织中HSP70、PPM1D、TNF-α阳性表达率均显著高于甲状腺滤泡性腺瘤组织和正常甲状腺组织(均P<0.05);甲状腺滤泡性腺瘤组织与正常甲状腺组织中HSP70、PPM1D、TNF-α阳性表达率比较均无统计学意义(均P>0.05)。TNM分期为Ⅲ~Ⅳ期、低分化、有淋巴结转移的患者甲状腺乳头状癌组织中HSP70、PPM1D、TNF-α阳性表达率均显著升高(均P<0.05)。结论HSP70、PPM1D、TNF-α表达与甲状腺乳头状癌的发生、发展有关,有望成为潜在的临床诊疗靶点。

蛋白磷酸酶1是一种具有抑制学习和记忆作用的分子

学习中要保持精确和长久记忆的建立,重复是一个必要的条件,练习的间隔时间较长比间隔短和集中练习在多数情况下效果要好。但即使经过有效的学习如果不经常使用,大多数的记忆也会散失。这种对学习和记忆的时间依赖性抑制,其分子机制尚不明确。为确定训练的间隔是否影响啮齿动物的学习,对老鼠进行物体认知作业的测验,此作业中,记忆追踪的不同能力通过改变对象的数目和训练的时间来实现。