α-淀粉酶蛋白类抑制剂的研究进展

α-淀粉酶的蛋白类抑制剂在控制内源性α-淀粉酶和植物病虫害方面起着天然的防御作用;有一些还具有一定的抗营养作用。本文简要综述α-淀粉酶的蛋白类抑制剂分类,常用的分离纯化技术及其活性测定方法;其次重点介绍和讨论其结构和作用机理;最后概述α-淀粉酶抑制剂在病虫害防治及营养、健康和疾病防治方面的应用。

金属蛋白酶类及其抑制剂在椎间盘退变中作用研究进展

椎间盘退变(intervertebral disc degeneration,IVDD)可导致多种脊柱相关疾病的发生。细胞外基质(extracellular matrix,ECM)的降解被认为是IVDD的主要病理过程。基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)及含凝血酶敏感蛋白模体的解整合素样金属蛋白酶(a disintegrin and metalloproteinase with thrombospondin motif,ADAMTSs)是参与ECM降解的主要蛋白酶类。本文总结在IVDD中MMPs、ADAMTSs及金属蛋白酶组织抑制剂(tissue inhibitors of metalloproteinases,TIMPs)的基因表达调控相关研究。研究发现人IVDD中MMP-1、2、3、7、8、10、13,ADAMTS-1、4、5出现表达上调,TIMP-3下调、TIMP-1上调。MMPs、ADAMTSs的表达受多因素共同调节,包括机械应力、炎症、氧化应激等,部分参与P38途径。遗传因素也在MMP-1、2、3、9的表达中起重要作用。MMPs、ADAMTSs蛋白表达及酶活性的上调导致ECM降解,进一步导致IVDD的发展。未来的治疗将靶向于导致ECM病理降解的特定MMPs及ADAMTSs。

类胰蛋白酶抑制剂对人大肠肥大细胞组胺释放的影响

目的 :研究类胰蛋白酶抑制剂 (TPI)对人大肠肥大细胞释放组胺的影响。方法 :大肠组织经胶原酶和透明质酸酶消化后 ,将细胞成分用全HBSS重新悬浮。肥大细胞在LP4试管中于37℃条件下与各种刺激剂反应 15min而完成激发过程。激发液中的组胺水平用以玻璃纤维为基础的荧光方法测定。结果 :4种TPI中 ,高浓度的亮抑酶肽素和鱼精蛋白可刺激人大肠肥大细胞释放组胺 ;而TLCK和乳铁蛋白则无明显的刺激作用。 4种TPI均可以剂量依赖的方式抑制抗IgE抗体诱导的大肠肥大细胞释放组胺。最大浓度的亮抑酶肽素(2 0 0mmol/L)、TLCK(10 0mmol/L)、乳铁蛋白 (30mmol/L)和鱼精蛋白 (10 0mg/L) ,可分别抑制 4 8.7%、36 .7%、4 0 .2 %和 34.1%的组胺释放。在 37℃条件下 ,将 4种TPI同大肠肥大细胞预培养 2 0min ,与未进行预培养相比较 ,它们对抗IgE抗体诱导的组胺释放无明显改变。 4种TPI还可抑制CI诱导的组胺释放 ,抑制范围在 2 5 %～ 32 %之间。与抗IgE抗体诱导的组胺释放则不同 ,与大肠肥大细胞预培养 2 0min ,与未进行预培养相比较 ,亮抑酶肽素和TLCK对CI诱导的组胺释放的抑制作用明显增强 ;而鱼精蛋白则无此作用。结论 :我们首次发现TPI可抑制人大肠肥大细胞IgE抗体依赖和非IgE抗体依赖的组胺释放 。

特异性类胰蛋白酶抑制剂双苯甲脒对肥大细胞分泌的调控作用

目的:研究新型的特异性类胰蛋白酶抑制剂双苯甲脒,对肥大细胞稳定性的影响。方法:扁桃体组织经酶消化后,将细胞成分用全HEPES缓冲盐溶液(HBSS)重新悬浮。肥大细胞 激发和抑制剂作用的试验在试管中37℃条件下完成。类胰蛋白酶水平用ELISA法测定。结果:同时加入扁桃体细胞悬液中的双苯甲脒,可以剂量依赖的方式抑制抗IgE诱导的类胰蛋白酶释放。仅1 mg/L(1.54μmol/L)的双苯甲脒,即可抑制肥大细胞释放类胰蛋白酶达52％,10 mg/L则能抑制76％的释放。将预培养时间延长30 min,对双苯甲脒的抑制作用无明显影响。在培养到45 min时,双苯甲脒可抑制高达47％的基础类胰蛋白酶释放。与细胞培养15 min后,抗IgE抗体(1g/L)或钙离子导入剂(CI,1 μmol/L)引起的类胰蛋白酶释放的量,分别为基础分泌量的3.2和2.6倍。但是,当细胞与全HBSS预培养超过10 min后,肥大细胞对抗IgE抗体或CI的反应性明显降低。结论:双苯甲脒能够抑制人类扁桃体肥大细胞的IgE依赖性类胰蛋白酶释放。因此,有望开发成为一种新型的肥大细胞稳定剂。

类糜蛋白酶抑制剂对人结肠肥大细胞组胺释放的影响

目的 研究类糜蛋白酶抑制剂对人结肠肥大细胞释放组胺的影响。方法 用酶消化人结肠组织并分离细胞成份。激发过程在LP4试管中、37℃条件下完成。组胺水平用以玻璃纤维为基础的荧光方法测定。结果 类糜蛋白酶抑制剂ZIGPFM、TPCK和α1 抗胰蛋白酶无明显刺激人类结肠肥大细胞释放组胺的作用。 3种类糜蛋白酶抑制剂均可以剂量依赖性方式抑制抗IgE抗体诱导的组胺释放 ,最大浓度的ZIGPFM(1mmol·L-1)、TPCK(80mmol·L-1)和α1 抗胰蛋白酶(30mmol·L-1)可分别抑制 37%、2 6 %和 36 8%的组胺释放。在 37℃条件下同结肠细胞预培养 2 0min与无预培养相比 ,ZIGPFM和TPCK抑制抗IgE抗体诱导的组胺释放的作用略有增强。 3种类糜蛋白酶抑制剂均可以剂量依赖性方式抑制CI诱导的组胺释放 ,最大抑制范围在 2 3 6 %～ 35 %之间。在 37℃条件下同结肠细胞预培养 2 0min与无预培养相比 ,TPCK对CI诱导的组胺释放的抑制作用略有增强 ,但ZIGPFM则无此特点。结论 我们发现了类糜蛋白酶抑制剂可抑制人结肠肥大细胞IgE依赖性和非依赖性组胺释放 ,提示类糜蛋白酶抑制剂可能有抗炎症性肠病的作用 。

昆虫淀粉酶蛋白质类抑制剂研究进展

近年来,昆虫淀粉酶蛋白质类抑制剂成为一个新的研究热点,取得了令人瞩目的成果。综述了昆虫淀粉酶蛋白质类抑制剂研究的最新进展。对昆虫淀粉酶蛋白质类抑制剂的分布、分离纯化、活性测定、物理化学特性和抑制特性以及结构与功能的关系等作了概述,并对其应用前景作了展望。

类糜蛋白酶抑制剂对人大肠肥大细胞类胰蛋白酶释放的影响

目的:研究类糜蛋白酶抑制剂对人大肠肥大细胞释放类胰蛋白酶的影响。方法:人大肠组织经酶消化后,细胞成份有全HBSS重新悬浮。激发过程在LP4试管中、37℃条件下完成。类胰蛋白酶水平用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法测定。结果:促分泌剂抗IgE抗体和CI在培养15分钟和35分钟时可明显刺激人大肠肥大细胞类胰蛋白酶的释放,在相同实验体系中,类糜蛋白酶抑制剂ZIGPFM、TPCK和α1抗胰蛋白酶无明显刺激人大肠肥大细胞释放类胰蛋白酶的作用。类糜蛋白酶抑制剂均可以剂量依赖性的方式抑制抗IgE抗体诱导的类胰蛋白酶的释放,最大浓度的ZIGPFM(1μmolml)、TPCK(80μmolml)和α1抗胰蛋白酶(30μmolml)可分别抑制37%、40%和36.6%的类胰蛋白酶释放。在37℃条件下同大肠细胞预培养20分钟与无预培养相比,ZIGPFM和TPCK对抗IgE抗体诱导的类胰蛋白酶释放的抑制作用略增强。Amastatin对抗IgE抗体诱导的类胰蛋白酶的释放无作用。类糜蛋白酶抑制剂均可以剂量依赖性的方式抑制CI诱导的类胰蛋白酶的释放,抑制范围在23%～35.3%。在37℃条件下同大肠细胞预培养20分钟与无预培养相比,ZIGPFM对CI诱导的类胰蛋白酶释放的抑制作用有增强,TPCK则无此特点。结论:类糜蛋白酶抑制剂可抑制人大肠肥大细胞IgE依赖性和非依赖性类胰蛋白酶的释放,提示类糜蛋白酶抑制剂可望成为炎症性肠病或其它肥大细胞相关疾病的一个新的治疗途径。

谷物蛋白类α-淀粉酶抑制剂及其功能特性的研究进展

谷物是人类重要的食物,含有丰富的淀粉、蛋白质等营养物质,同时也是蛋白类α-淀粉酶抑制剂的良好来源。α-淀粉酶抑制剂(α-amylase inhibitor,α-AI)是一类具有抑制糖苷酶水解作用的物质,具有降血糖、降血脂、减肥及抗虫等作用,在医学与农业方面都有广泛的应用。该文对谷物中蛋白类α-AI的分离纯化、检测方法、功能特性等进行综述,并对其在食品及其它领域的应用前景进行展望。

水蛭源性类胰蛋白酶抑制剂表达载体的构建与表达

目的:构建水蛭源性类胰蛋白酶抑制剂(leech derived tryptase inhibitor,LDTI)原核表达载体,并在大肠埃希菌[BL21(DE3)]中高效表达重组蛋白。方法:以含有目的核酸序列的质粒为模板,通过PCR技术扩增出LDTI蛋白编码序列,构建含目的片段的T克隆载体以及原核表达载体pET28a-LDTI重组质粒亚克隆,进行限制性内切酶双酶切鉴定和核酸序列分析,然后将该质粒转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导,以Tricine-SDS-PAGE和蛋白质印迹方法分析和鉴定重组蛋白的表达。结果:成功构建了水蛭源性类胰蛋白酶抑制剂原核表达载体pET28a-LDTI,并获得相应的融合蛋白;本实验证明,LDTI在大肠埃希菌工程菌中高效表达,在温度为33℃,IPTG浓度为0.7 mmol,诱导时间为1 h,所表达的目的蛋白约占菌体总蛋白的15%左右。结论:成功构建了LDTI原核表达载体并使其在原核系统中高效表达,为进一步研究水蛭源性类胰蛋白酶抑制剂的生化特性和生物学功能奠定了良好的基础。

环肽类蛋白酶体抑制剂TMC-95的研究进展

环肽类化合物TMC-95是以蛋白酶体为靶点的新型抗肿瘤先导化合物,目前受到越来越多药物化学家的关注。本文通过收集近年来国内外的相关文献对环肽类蛋白酶体抑制剂TMC-95的作用机制、构效关系等方面研究进行综述,为进一步研究此类化合物提供参考。

基质金属蛋白酶-2,9及其抑制剂在骨肉瘤中表达的意义

[目的]探讨基质金属蛋白酶-2,9(MMP-2,9)及其特异性抑制剂TIMP-2,1在骨肉瘤中的表达情况及其与骨肉瘤侵袭、转移、复发的关系。[方法]采用免疫组织化学链酶菌抗生物紊一过氧化酶(SP)法检测了62例骨肉瘤(初发性骨肉瘤51例、复发性骨肉瘤11例,确诊时即伴有肺转移者9例、不伴有肺转移者53例)和正常对照组织中MMP-9、MMP-2、TIMP-1、TIMP-2的表达,并根据阳性瘤细胞占肿瘤细胞总数的比率进行半定量量化分析和非参数检验。[结果]MMP-9、TIMP-1在骨肉瘤中的阳性表达率分别为76％、18％,与二者在正常对照组织中的阳性率相比,MMP-9表达明显升高,TIMP-1表达明显降低(P均<0.01)。MMP-2、TIMP-2在骨肉瘤中的阳性表达率分别为69％、52％,与二者在正常对照组织中的阳性率相比差异无显著性(P均>0.05)。MMP-9在肿瘤细胞的胞浆及胞膜中均有表达,且在肿瘤的侵袭边缘阳性细胞数目较多,染色强度较高。MMP-2,9及TIMP-1,2在初发性和复发性骨肉瘤之间以及在伴有肺转移和不伴有肺转移的骨肉瘤之间的表达差异无显著性。Spearman相关分析表明骨肉瘤中MMP-9与MMP-2、MMP-2与TIMP-2以及TIMP-1与TIMP-2之间的表达均显著性相关。[结论]骨肉瘤组织中MMP-9表达升高、TIMP-1表达降低,二者协同促进肿瘤细胞的生长和局部的侵袭破坏。骨肉瘤?

膝骨关节炎患者血清和关节液中基质金属蛋白酶1，3、基质金属蛋白酶抑制剂1及白细胞介素1β含量与补肾通络方的干预

背景:研究表明,软骨破坏是膝骨关节炎的主要病理特征,而关节软骨细胞外基质的均衡是维持关节软骨活性和功能的重要条件。目的:观察补肾通络方干预前后膝骨关节炎患者血清和关节液中基质金属蛋白酶1,3、基质金属蛋白酶抑制剂1及白细胞介素1β的含量变化。设计、时间及地点:分子生物学水平的随机对照观察,于2006-03/06在新疆医科大学附属中医医院完成。对象:收集于新疆医科大学附属中医医院行关节镜诊治的膝骨关节炎患者40例(40膝),按信封随机法分为补肾通络方组和对照组,每组20例。方法:补肾通络方组在关节镜检查清理术后第2日开始服用补肾通络方,每天1剂,早晚分服,15d为1个疗程,连续观察2个疗程。补肾通络方由熟地12g,山萸肉9g,杜仲12g,怀牛膝9g,寄生9g,防风10g,秦艽9g,独活9g,细辛3g,当归12g,地龙6g,甘草6g组成,同时根据患者中医证候类型在本方基础上进行加减。对照组仅行关节镜检查清理术。主要观察指标:分别于治疗前后采用酶联免疫吸附双抗体夹心法测定两组患者血清和关节液中基质金属蛋白酶1,3、基质金属蛋白酶抑制剂1及白细胞介素1β含量。结果:与治疗前相比,2个疗程后补肾通络方组患者的血清及关节液中基质金属蛋白酶1、基质金属蛋白酶抑制剂1和白细胞介素1β含量均明显下降(P<0.05);对照组仅关节液中白细胞介素1β含量下降(P<0.05)。结论:与单纯关节镜治疗相比,补肾通络方加关节镜治疗对膝骨关节炎患者软骨细胞外基质以及基质金属蛋白酶的调节作用更加广泛;补肾通络方对膝骨关节炎的防治作用可能是通过调控关节软骨细胞外基质的降解完成的。

基质金属蛋白酶及其抑制剂在乳腺癌中的表达及意义

目的 :探讨乳腺癌组织中基质金属蛋白酶 2 ( MMP- 2 )、基质金属蛋白酶 9( MMP- 9)及金属蛋白酶 1组织抑制剂 ( TIMP- 1 )、金属蛋白酶 2组织抑制剂 ( TIMP- 2 )的表达及它们与乳腺癌生物学行为的关系。方法 :应用免疫组织化学 SP法 ,检测 49例乳腺癌、1 0例癌旁正常组织中MMP- 2、MMP- 9、TIMP- 1及 TIMP- 2的表达及分布。结果 :乳腺癌组织中 MMP- 2、MMP- 9、TIMP- 1及 TIMP- 2的表达明显高于癌旁正常组织 ,二者之间差异具有显著性 ( P<0 .0 1 ) ;乳腺癌组织中 MMP- 2、MMP- 9及 TIMP- 1主要在肿瘤细胞胞质内表达 ,而 TIMP- 2表达于瘤细胞和间质细胞胞质 ;乳腺癌组织中 MMP- 2、MMP- 9的表达与组织学分级、淋巴结转移密切相关( P<0 .0 5 ) ,能促进乳腺癌的侵袭和转移 ,而 TIMP- 1、TIMP- 2的表达与肿瘤生物学行为无相关性( P>0 .0 5 )。结论

基质金属蛋白酶及其抑制剂在非小细胞肺癌组织中的表达及临床意义

目的:探讨MMP-2、MMP-9、TI MP-1和TI MP-2在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织中的表达及临床意义。方法:用免疫组化法测定124例NSCLC组织、124例癌旁组织和10例良性肺病组织(错构瘤)中MMP-2、MMP-9、TI MP-1和TI MP-2的表达。结果:在NSCLC组织中,MMP-2、MMP-9、TI MP-1和TI MP-2表达水平显著高于癌旁组织和良性肿瘤(P均<0.05)。MMP-2在鳞癌组织中的表达水平显著高于腺癌和腺鳞癌(P<0.05);TI MP-2在鳞癌中的表达水平显著高于腺癌(P<0.05);MMP-9和TI MP-1在腺癌组织中的表达水平显著高于鳞癌(P<0.05)。在NSCLC组织中,随着TNM分期增加,MMP-2、MMP-9、TI MP-1和TI MP-2的表达水平增加(P均<0.05)。MMP-2、MMP-9、TI MP-1和TI MP-2在淋巴结转移组中的表达水平显著高于无淋巴结转移组(P均<0.05)。MMP-2、MMP-9、TI MP-1和TI MP-2在低分化组中的表达水平显著高于高分化组(P均<0.05)。MMP-9在女性组中的表达水平显著高于男性组(P<0.05)。MMP-2、MMP-9、TI MP-1和TI MP-2之间的表达水平呈显著性正相关(P均<0.05)。结论:MMP-2、MMP-9、TI MP-1和TI MP-2均参与NSCLC的形成且与NSCLC临床病理特征关系密切,同时可能是判断预后的较好评价指标。

基质金属蛋白酶及其组织型抑制剂活性及表达失衡与高血压性左心室重塑的关系

目的:探讨慢性压力负荷增高时,大鼠左心室(LV)基质金属蛋白酶(MMPs)/组织型基质金属蛋白酶抑制剂(TIMPs)失衡与LV重塑的关系。方法:40只6周龄雄性卒中易感性自发性高血压大鼠(SHR-SPs)作为研究对象,10只同周龄雄性Wistar-Kyoto(WKY)大鼠作为对照。6个月后,以Millar压力容积导管评价2组大鼠的在体LV血流动力学,并对2组大鼠的心脏进行组织病理学、明胶酶谱和免疫印迹法分析。结果:反映LV收缩与舒张功能的血流动力学参数在2组间有显著差异(P<0.05);SHR-SPs心脏胶原容积分数、血管周胶原面积/管腔面积、心肌横断面积、心室壁动脉中膜面积/管腔面积均增高(P<0.05);心肌MMP-2活性、蛋白含量及TIMP-1蛋白含量在SHR-SPs中明显增高(P<0.05)。结论:慢性压力超负荷能够导致心脏细胞外基质代谢失调及MMPs/TIMPs系统失衡,继而产生心室腔扩张、LV收缩与舒张功能障碍。

基质金属蛋白酶及其抑制剂与食管癌浸润转移的研究进展

正常体内基质金属蛋白酶 (MMPs)及其抑制剂 (TIMPs)保持平衡状态 ,许多研究表明MMPs与TIMPs系统在食管癌的浸润及转移方面发挥重要作用 。

基质金属蛋白酶及其组织抑制剂与滋养细胞侵袭性生长关系的研究

目的了解基质金属蛋白酶(MMPs)和组织抑制剂(TIMPs)在滋养细胞中的定位及其在不同滋养细胞病变中的表达和相互调节作用。方法采用免疫组化方法检测MMP-2、MMP-9和TMP-1、TIMP-2在绒毛膜癌、侵袭性水泡状胎块、水泡状胎块、胎盘植入和超常反应胎盘部位等病变以及胎盘着床部位中的表达。结果MMP-2、9和TIMP-1、2主要在中间滋养细胞和合体滋养细胞表达。滋养细胞在胎盘着床部位仅表达MMP-2;超常反应胎盘部位和胎盘植入不但表达MMP-2,而且多数病例MMP-9(+),但阳性强度弱,TIMP-1和TIMP-2(-);水泡状胎块较强表达MMP-2,伴持续性滋养细胞疾病MMP-9和TIMP-1、2(+);侵袭性水泡状胎块和绒毛膜癌MMP-2和MMP-9表达明显增强,TIMP-1和TIMP-2多数(+)。结论在病理性妊娠中MMP-9活性增强可导致滋养细胞发生过度浸润。MMP-9的过度表达和TIMP-1、2的轻微增加,可能共同增强了肿瘤细胞的侵袭能力。

基质金属蛋白酶及其抑制剂与子宫内膜癌

基质金属蛋白酶是迄今发现最重要的一种降解细胞外基质的蛋白水解酶,其含量变化与肿瘤侵袭转移关系最为密切。基质金属蛋白酶及其组织抑制剂共同参与细胞外基质的合成与降解,两者之间比例失衡将导致肿瘤的侵袭和转移。子宫内膜癌是女性常见的恶性肿瘤之一,研究基质金属蛋白酶及其抑制剂与子宫内膜癌的关系,对于子宫内膜癌早期诊治、预后评估及其预防均具有重要意义。

基质金属蛋白酶组织抑制剂:肺动脉高压治疗的潜在靶点

肺动脉高压(PAH)是严重威胁人类健康的致命性疾病,其特点是肺血管阻力逐渐增高,最终导致右心衰竭和死亡。PAH的病理改变包括肺动脉的内皮功能障碍和血管重构。在这一过程中,基质金属蛋白酶(MMPs)及其组织抑制剂(TIMPs)之间的失衡起到了重要作用,尤其是在血管壁局部区域TIMPs过度表达而抑制MMPs活性,参与了内皮功能障碍的发生,并促进了细胞外基质过度沉积,最终导致血管重构。那么,如果减弱甚至抑制病变血管内TIMPs的过度表达会发生什么情况呢?由此,本文提出一个PAH治疗的新观点:对于已经发生严重重构的肺血管,减弱TIMPs的表达或许可以改善血管重构和血管内皮修复功能,最终有利于减轻甚至逆转重症PAH。