阻断ERK途径对PTH培育的大鼠系膜细胞分泌纤维连接蛋白的影响

目的 探讨阻断蛋白激酶(ERK)途径对甲状旁腺素(PTH)培育大鼠系膜细胞上清的纤维连接蛋白(FN)的影响。方法 采用酶联免疫吸附(ELISA)法观察PTH培育的大鼠系膜细胞的上清液中FN的变化。结果 PTH10^-8mol／L培育的大鼠系膜细胞上清液中FN呈现时间依赖性增加；而ERK酶抑制剂能够明显抑制PⅢ培育的大鼠系膜细胞上清FN的浓度。在一定的范围内呈剂量(5～50μmol／L)以及时间(6～48h)依赖性。结论 ERK途径对PTH培育的大鼠系膜细胞上清液的FN有影响；对探讨慢性肾功能衰竭的高PTH血症对机体的毒性作用，特别对肾小球系膜细胞外基质的形成及硬化的机制可能有一定价值。

氧化-低密度脂蛋白诱导系膜细胞转录激活蛋白1活化的信号转导通路

目的 观察氧化-低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导系膜细胞转录激活蛋白1(AP-1)活化的作用,探讨AP-1活化的上游信号转导机制。方法 大鼠肾小球系膜细胞随机分为正常细胞组,ox-LDL处理组和ox-LDL+蛋白激酶抑制剂组。采用Western blot测定丝裂原激活的蛋白激酶(MAPK)家族磷酸化水平,采用凝胶迁移率实验观察蛋白激酶抑制剂bisindolylmaleimide I、H89、genistein、PD98059及SB203580对ox-LDL诱导系膜细胞AP-1活性的影响。结果 ox-LDL呈浓度和时间依赖性激活JNK1/SAPK(stress activated protein kinase)、p38MAPK磷酸化(P<0.05),而ox-LDL对p44/42MAPK磷酸化无影响(P>0.05)。bisindolylmaleimide I浓度为50、100、200 nmol/L时均显著抑制ox-LDL诱导系膜细胞AP-1活性。H89剂量为0.5、5 μmol/L时,AP-1活性显著受抑制。genistein浓度为25、50 μmol/L时并不抑制ox-LDL诱导AP-1活性,浓度达100 μmol/L时则显著抑制ox-LDL诱导系膜细胞AP-1活性。SB203580和PD98059均不能抑制ox-LDL诱导AP-1活性。结论 PKC、PKA及PTK等多种蛋白激酶参与对ox-LDL诱导系膜细胞AP-1活性的调控。

辛伐他汀通过上调Smac表达诱导高糖培养下肾小球系膜细胞的凋亡

目的探讨辛伐他汀诱导高糖培养下肾小球系膜细胞凋亡是否与上调第二线粒体源半胱天冬氨酸蛋白酶激活物(Smac)表达有关。方法用不同浓度辛伐他汀刺激高糖培养下的系膜细胞,采用Hoechst 33258荧光染色观察细胞凋亡形态,碘化丙啶染色(PI)、流式细胞术(FCM)定性及定量检测细胞凋亡率,免疫荧光法观察Smac蛋白表达。结果高糖+辛伐他汀组与高糖组相比,12、24、48 h细胞凋亡荧光强度、细胞凋亡率、免疫荧光示Smac蛋白表达均明显增加(P<0.05),且均呈时间、浓度依赖性;各组相应时间段内Smac荧光强度与细胞凋亡荧光强度间呈正相关(r=0.9353,P<0.05)。结论高糖环境下辛伐他汀能通过上调Smac蛋白表达抑制系膜细胞增殖、诱导系膜细胞凋亡;其作用呈浓度和时间依赖性。