模拟微重力对大鼠皮层神经元蛋白羰基化的影响

目的研究回转模拟微重力效应对Wistar大鼠皮层神经元蛋白质羰基化的影响。方法利用回转器模拟微重力 ,将原代培养的Wistar大鼠皮层神经元分别回转 0h、1 2h、2 4h、36h、48h。提取细胞总蛋白 ,酶联免疫吸附法 (EILSA)检测羰基化蛋白的水平。结果与 1G对照组相比 ,回转 2 4h、36h、48h显著增加皮层神经元羰基化蛋白的水平 (P <0 .0 5 )。结论回转显著增加皮层神经元羰基化蛋白的水平 ,这可能是神经元损伤的重要原因之一。

氨基胍抑制氧化应激致细胞骨架蛋白羰基化

目的探讨氧化应激对细胞骨架羰基化的作用及机制,并观察羰基化抑制剂氨基胍对细胞氧化损伤的抑制作用。方法应用0、100、200、300μmol/L的H2O2干预PC12细胞系建立细胞氧化损伤模型,测定GSH、脂质过氧化反应产物(Thiobarbituric acid reactive substance,TBARS)浓度,pull-down/Western blot检测细胞骨架蛋白β-actin和β-tubulin羰基化水平和溶解度。氨基胍预处理PC12细胞,检测其对β-actin和β-tubulin羰基化损伤的抑制作用。结果 H_2O_2处理后,PC12产生氧化损伤,β-actin和β-tubulin发生羰基化反应,骨架蛋白溶解度增高,氨基胍可抑制细胞骨架蛋白的羰基化,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论氧化应激损伤导致细胞骨架蛋白羰基化反应会破坏细胞骨架蛋白的稳定性,氨基胍可有效抑制氧化应激导致的羰基化反应。

蛋白质氧化羰基化和肌肽的保护作用

目的 探讨肌肽的抗氧化、抗衰老作用的途径和机制。方法 用 H2 O2 诱导小鼠新鲜脑组织使其产生氧化羰基化蛋白 ,用 DNPH法和定磷法检测羰基化蛋白的含量和氧化磷酸化水平。结果 在加入肌肽的保护组 ,羰基化蛋白含量低于损伤组 ,氧化磷酸化水平高于损伤组 ,各组差异明显。结论 肌肽对蛋白质氧化羰基化有明显的保护作用。

反复苯丙胺刺激对大鼠脑部蛋白羰基化的影响

目的:为了进一步研究苯丙胺神经毒性作用机制,我们对大鼠进行不同时长的反复苯丙胺刺激,检测大鼠部分脑区中蛋白羰基化的变化情况,我们的研究为苯丙胺的成瘾及治疗提供了新的理论依据。方法:分别对大鼠进行1d、3d、7d、10d及14d的苯丙胺反复刺激,进行旷场测试检测其活动量变化后,采用DNPH法检查的大鼠大脑前皮层、海马区、杏仁核三大脑区总蛋白的蛋白羰基化水平变化,探讨反复苯丙胺刺激对大鼠脑部蛋白羰基化的影响。结果:苯丙胺刺激7d及14d时,大鼠活动量出现了显著性增加,同时大鼠前皮层总蛋白的蛋白羰基化也出现了显著性增加,而海马区及杏仁核区域总蛋白的蛋白羰基化没有明显变化。结论:反复苯丙胺刺激能够增加大鼠活动量及大脑前皮层总蛋白蛋白羰基化水平。

空气污染对皮肤角质层蛋白羰基化水平的影响及粉红胡椒木提取物和脂质混合物对皮肤损伤的防护作用

目的 研究空气污染对皮肤角质层蛋白羰基化水平的影响，评估粉红胡椒木提取物和脂质混合物对皮肤损伤的防护作用。方法 预实验分析影响因素后，荧光标记法检测34例健康受试者不同部位皮肤角质层蛋白羰基化水平。利用定制的污染模拟箱，以香烟烟雾模拟污染物， 将15名健康受试者前臂屈侧向上暴露于污染模拟箱中，分别于暴露后0、1、2、4、5 h用D？squame胶片采集角质层样本。选14例健康受试者，在单侧前臂屈侧选择相邻的3个区域分别外用1%粉红胡椒木提取物的水溶液（胡椒木组）、去离子水（对照组）或不涂任何样品（空白组），然后将手臂在污染模拟箱中暴露5 h，暴露前后采集各区域角质层样本。另选16例健康受试者，在单侧前臂屈侧选取3处区域分别外用含5% 脂质混合物的乳液（脂质混合物组）、不含脂质混合物的安慰剂乳液（对照组）或不涂任何样品（空白组），然后将手臂在污染模拟箱中暴露5 h，暴露前后采集各区域角质层样本。纳入20例健康受试者进行双盲半脸临床测试，即随机选择半脸外用含1%粉红胡椒木提取物的乳液，另外半脸外用安慰剂乳液，于产品使用前和使用56 d后，采用D？Squame胶片在受试者的面颊部分别采集角质层样本。采用荧光标记法检测上述角质层样本中皮肤蛋白羰基化水平。结果 对34名受试者检测显示，人体不同部位蛋白羰基化水平（平均荧光强度）存在显著差异（P 〈 0.001），其中，面颊（26.3 ± 7.1）和额部（22.9 ± 7.9）显著高于手臂（14.7 ± 4.9）和腰背部（12.6 ± 4.2）（均P 〈 0.001）,且手臂蛋白羰基化水平显著高于腰背部（P = 0.046）。短期模拟加速暴露实验中，蛋白羰基化水平随污染暴露时间的增加而持续升高（R2 = 0.995 9），暴露5 h后，胡椒木组和脂质混合物组皮肤角质层蛋白羰基化水平升高值分别为9.7 ± 5.2和5.8 ± 4.9，低于各自的空白组（19.0 ± 10.0、17.4 ± 8.8，均P 〈 0.005）和对照组（18.5 ± 7.3、15.9 ± 6.4，均P 〈 0.005），差异均有统计学意义。长期人体测试中，20名受试者使用含1%粉红胡椒木提取物的乳液8周后，与安慰剂侧相比，面部蛋白羰基化水平显著降低。结论 空气污染加剧皮肤角质层蛋白羰基化损伤，粉红胡椒木提取物和脂质混合物能有效降低蛋白羰基化水平。

羟基红花黄色素A对脑组织蛋白质羰基化影响的体外研究

目的研究羟基红花黄色素A(HSYA)对体外ONOO^-途径和亚铁血红素/亚硝酸钠/过氧化氢(heme/NaNO_2/H_2O_2)途径引起脑组织蛋白质羰基化的影响。方法分别模拟体内ONOO^-、heme/NaNO_2/H_2O_2羰基化途径,以脑组织蛋白为羰基化底物,分为空白对照组、对照组及低、高浓度组(以HSYA 0.1 mmol/L、1 mmol/L干预)。以2、4-二硝基苯肼(2、4-dinitrophenylhydrazine,DNPH)法检测蛋白质羰基化水平。结果 ONOO^-途径和heme/NaNO_2/H_2O_2途径均可以增加脑组织匀浆中羰基蛋白的含量。HSYA预处理可浓度依赖性地降低ONOO^-途径诱导的蛋白质羰基化水平,低、高浓度组羰基蛋白含量分别降低了26.13%、46.23%,差异有统计学意义(F=14.265,P<0.05)。HSYA预处理对体外heme/NaNO_2/H_2O_2途径诱导的蛋白质羰基化没有明显抑制作用,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 HSYA可剂量依赖性地抑制ONOO^-途径在体外对脑组织蛋白的羰基化修饰;提示HSYA抑制蛋白质羰基化反应可能是其对抗脑血管疾病与神经系统变性疾病的分子机制之一。

七宝美髯口服液对小鼠脑组织SOD活力及羰基化蛋白含量的影响

目的观察七宝美髯口服液(制何首乌、当归、补骨脂等)对SAMP8小鼠学习记忆功能、海马组织病理形态及SOD活力、羰基化蛋白含有量的影响。方法 27只SAMP8小鼠随机均分为模型对照组、盐酸多奈哌齐组及七宝美髯口服液组,另取9只SAMR1小鼠作为正常对照组,连续灌胃60 d,在给药第56天进行避暗训练,5 d后测定学习记忆能力;HE染色观察病理形态;ELISA法检测脑组织中SOD活力和羰基化蛋白含有量。结果与模型对照组比较,七宝美髯口服液组小鼠的逃避潜伏期显著延长,错误次数明显降低(P<0.01),海马组织的病理形态显著改善,SOD活力显著升高,羰基化蛋白含有量明显降低(P<0.01)。结论七宝美髯口服液能改善SAMP8小鼠的学习记忆功能,减轻海马组织的退行性病变程度。

蛋白质氧化羰基化和枸杞多糖的保护作用

目的:研究枸杞多糖对老年大鼠肝组织蛋白质氧化羰基化的影响。方法:选用D-半乳糖致衰大鼠,随机分为两组:衰老模型组和枸杞多糖用药组,检测肝组织羰基化蛋白含量、M DA及G SH含量,观察枸杞多糖对老年大鼠上述指标的影响。结果:衰老模型组羰基化蛋白及M DA含量较高,G SH含量较低;而枸杞多糖用药组羰基化蛋白及M DA含量降低,G SH含量升高。结论:枸杞多糖通过降低蛋白质羰基化而发挥抗衰老作用。

依达拉奉对下肢碾压脱套伤患者血浆中蛋白质羰基化、丙二醛含量的影响及疗效

目的研究依达拉奉(自由基清除剂)对下肢碾压脱套伤患者皮瓣的保护作用。方法将因各种外伤导致下肢碾压脱套伤的住院患者22例,随机分为治疗组和对照组,对照组仅进行常规的抗凝、抗炎、抗痉挛及营养支持治疗;在此基础上,治疗组再加用依达拉奉注射液30 mg,1次/日,7日为1个疗程。分别记录2组进行清创缝合术后出现的张力水泡面积、瘀血斑面积、经换药后伤口逐渐愈合例数等,并测定患者血浆蛋白质羟基化(PC)、丙二醛(MDA)在再灌注前后的含量变化,并进行统计学分析。结果各组患者张力水泡面积、瘀血斑面积,经清创换药后伤口逐渐愈合例数等有显著性差异(P<0.05)。治疗组与对照组相比,再灌注后24 h及1周的血浆中PC和MDA含量有显著性差异(P<0.05)。结论依达拉奉能减轻下肢碾压脱套伤患的缺血再灌注损伤,提高脱套组织的存活率。

羰基化蛋白质组学分析进展

蛋白质羰基化作为一种不可逆的翻译后修饰,与诸多疾病和衰老密切相关。有关蛋白质羰基化的各项研究受制于其低丰度、低电离效率及化学相对不稳定性而发展较慢。基于质谱的蛋白质组学分析技术的进步,使蛋白质羰基化的规模化研究成为可能,进而为蛋白质羰基化的相关调控通路研究提供了数据支撑。该综述介绍了蛋白质羰基化的概念、途径、检测方式,并重点介绍了蛋白组学技术应用于蛋白质羰基化分析的进展。

蛋白质羰基化及茶多酚的预防作用研究进展

羰基化蛋白质是机体发生氧化损伤的副产物,其介导了多种疾病的发生与发展,茶多酚作为一种优异的抗氧化剂可以很好的抑制羰基化蛋白质的产生。本文综述了羰基化蛋白质形成的原因及其与疾病发病之间的相关性以及茶多酚的抗氧化能力与其对蛋白质羰基化过程的抑制作用的机制,为防治蛋白质羰基化相关疾病及茶叶高质化利用提供参考。

内质网应激和蛋白质羰基化在心力衰竭恶病质中的作用

目的探讨内质网应激(ERS)和蛋白质羰基化在大鼠心力衰竭恶病质发生发展中的作用。方法 90只雄性SD大鼠,随机分为异丙肾上腺素(ISO)组、ISO+肼苯哒嗪(HYD)组和对照组,每组各30只。ISO组和ISO+HYD组大鼠注射ISO,同时ISO+HYD组大鼠用HYD进行灌胃,对照组注射等量生理盐水。6周后,根据大鼠的超声心动图和体质量变化评估大鼠造模成功率。ELISA试剂盒测定大鼠血清脑钠肽(BNP)、C/EBP环磷酸腺苷反应元件结合转录因子同源蛋白(CHOP)及葡萄糖调节蛋白78(GRP78)的浓度;紫外分光光度计检测蛋白质羰基浓度;RT-PCR法检测CHOP、GRP78 mRNA的相对表达量;免疫荧光检测蛋白质羰基的表达情况。结果 (1) ISO组大鼠血清中BNP、CHOP、GRP78浓度最高,ISO+HYD组其次,对照组最低(P<0.05);(2) ISO组心肌和骨骼肌中总蛋白质羰基浓度最高,ISO+HYD组其次,对照组最低(P<0.05);(3) ISO组心肌和骨骼肌中CHOP、GRP78 mRNA相对表达量最高,ISO+HYD组其次,对照组最低(P<0.05);(4) ISO组蛋白质羰基表达最高,ISO+HYD组其次,对照组最低(P<0.05)。结论 ERS和蛋白质羰基化参与了心力衰竭恶病质的发生发展过程,且ERS和蛋白质羰基化与体内氧化应激水平有关,使用HYD抑制氧化应激可降低ERS和蛋白质羰基化的表达,阻止心力衰竭恶病质的发生发展。

蛋白质羰基化与大鼠心衰恶病质发生的相关性

目的探讨蛋白质羰基化是否参与了大鼠心衰恶病质的发生、发展。方法90只12个月龄的清洁级雄性SD大鼠,随机分为异丙肾上腺素(ISO)组、肼苯哒嗪(HYD)+ISO组和对照组,每组各30只。分别给予ISO组和HYD+ISO组大鼠注射异丙肾上腺素,同时HYD+ISO组大鼠用肼苯哒嗪灌胃,对照组注射生理盐水。6周后,根据大鼠的超声心动图和体质量的变化评估大鼠造模成功率。采用全自动生化分析仪检测大鼠血清中总白蛋白、三酰甘油、胆固醇、血糖水平;酶联免疫吸附测定试剂盒测定大鼠血清中的脑钠肽(BNP)的水平;紫外分光光度计检测心肌及骨骼肌中蛋白质羰基水平;免疫组化染色检测心肌及骨骼肌中蛋白质羰基表达情况。结果对照组、HYD+ISO组及ISO组血清总白蛋白及血糖依次降低,血清三酰甘油、胆固醇、BNP、心肌和骨骼肌中蛋白质羰基浓度依次升高(P<0.05),大鼠心肌和骨骼肌中蛋白质羰基化阳性细胞百分率依次增高(P<0.05)。结论ISO所致的心衰恶病质大鼠模型蛋白质羰基化水平升高;HYD会抑制心衰恶病质大鼠体内蛋白质羰基化的形成,可阻止心衰恶病质的发生、发展。

蛋白质羰基化与慢病伴发的骨骼肌萎缩

慢性心力衰竭、慢性阻塞性肺疾病(COPD)、癌症等老年慢性病患者晚期均可能伴发恶病质,其特征是体重减轻及骨骼肌功能障碍。无论这些老年患者基础的心肺功能如何,其骨骼肌功能障碍和肌肉受损的程度,可以预测患者的死亡率[1]。维持足够的肌肉数量和保持肌肉良好的性能,有助于维持老年患者的日常活动并且提高其生存率。尽管造成老年慢性病患者恶病质发生的原因还未明确,但氧化应激、炎症、低氧、低营养状态、心血管系统功能失调等因素已被证实与其有关。氧化应激是指体内氧化剂增多,导致氧化剂和抗氧化剂不平衡,研究发现其是导致老年COPD患者呼吸肌和肢体肌肉功能障碍的主要原因,也是癌症、败血症、老年患者肌肉功能障碍发生的主要原因[2]。体内氧化剂的增高会改变蛋白质、DNA和脂质等分子的结构和功能,最终导致细胞的损伤和死亡。蛋白质氧化特别是蛋白质羰基化,会使酶活性、转录因子等发生变化,使蛋白质更易发生降解[3]。蛋白质羰基化贯穿于老年慢性病及其并发症发生、发展的始终,在COPD,失用性肌肉萎缩,癌症恶病质,败血症,生理老化等的动物模型中,已得到证实。本文将对蛋白质羰基化在生理、病理状态下的发生机制及检测方法做以综述。

激活乙醛脱氢酶2抑制糖尿病小鼠心肌羰基应激和缺血/再灌注损伤

目的:观察乙醛脱氢酶2(ALDH2)激动剂Alda-1对Ⅰ型糖尿病(DM)小鼠心肌缺血/再灌注(I/R)损伤的影响,探讨羰基应激在DM心脏缺血性损伤易感性增高中的作用。方法:以C57BL/6雄性小鼠为实验对象,腹腔注射链脲佐菌素(STZ)制备Ⅰ型DM小鼠模型。将正常C57BL/6小鼠(20只)和DM小鼠(20只)随机分为I/R组和I/R+Alda-1治疗组,每组10只。采用冠状动脉左前降支结扎缺血30 min再灌注4 h建立在体小鼠急性心肌I/R模型,于再灌注前5 min经静脉以2 ml/(kg·h)速度分别输注生理盐水(NS)或Alda-1(16 mg/kg)并持续到再灌注结束。再灌注结束后取血检测血清乳酸脱氢酶(LDH)水平,取心肌组织检测ALDH2活性、心肌内活性氧簇(ROS)水平,蛋白羰基化程度和心肌梗死(MI)面积。结果:检测心肌ALDH2活性显示,DM小鼠心肌ALDH2活性较对照组显著降低。与对照组相比,DM小鼠心肌I/R损伤显著加重,表现为MI面积增大,血清LDH水平显著增加(均P<0.05)。再灌注期Alda-1治疗可有效提高DM小鼠I/R心肌ALDH2活性(P<0.05),并显著抑制DM小鼠的上述心肌I/R损伤(均P<0.05)。DM组I/R心肌中蛋白质羰基化程度和ROS生成较对照组I/R心肌显著增加(均P<0.05)。Alda-1治疗可有效改善DM小鼠I/R心肌中的蛋白质羰基化和ROS水平。结论:激活心肌ALDH2可显著改善DM小鼠心肌抗I/R损伤能力,其机制可能与减轻DM小鼠在I/R过程中导致的蛋白质氧化损伤有关。

抑制羰基应激改善老龄鼠心肌缺血预处理的保护作用

目的：本研究旨在探讨激活乙醛脱氢酶2（ALDH2）对老龄小鼠缺血预处理（IPC）心肌保护作用的影响。通过观察成年和老龄小鼠心肌沉默信息调节因子相关酶1（SIRT1）活性在IPC过程中的差异，分析老龄鼠心肌IPC保护作用减退的可能机制。方法成年（2月龄）和老龄（20月龄）雄性C57小鼠（每组各6只）在体给予3个5min缺血/5min再灌注循环的IPC处理后，以冠状动脉左前降支结扎缺血30min再灌注4h建立在体小鼠急性心肌I/R模型。离体心脏行Langendorff灌流给予3个循环的5min停流/5min再灌注以模拟全心IPC，同时记录心功能变化。在体或离体再灌注结束后取心肌组织检测ALDH2和SIRT1活性，及蛋白质羰基化程度。结果与成年组相比，IPC处理并不能有效地改善衰老心肌的I/R损伤和SIRT1活性。检测心肌ALDH2活性显示，老龄鼠心肌ALDH2的活性较成年组显著降低并导致衰老心肌在I/R后出现羰基应激增强（均P＜0.05）。IPC并不能有效改善老龄鼠心肌ALDH2活性和羰基应激程度。预先激活老龄鼠心肌的ALDH2可显著抑制衰老心肌的羰基应激，改善IPC对老龄鼠I/R心肌SIRT1有激活作用（P＜0.05），进而促进老龄鼠心肌I/R后收缩舒张功能的恢复。结论激活心肌ALDH2可显著改善老龄鼠心肌IPC的保护作用，其机制可能与抑制羰基应激引起的SIRT1失活有关。

蛋白质羰基化的研究进展

蛋白质羰基化水平在很长一段时间内只是被用于评价生物有机体的氧化程度,作为衡量蛋白质氧化损伤的一种指标。然而,最新研究表明由活性氧引起的蛋白质羰基化参与了衰老、凋亡以及多种神经退行性疾病病理生理过程。

镉对河南华溪蟹副性腺抗氧化酶活性及脂质、蛋白质和DNA的影响

随着现代工业化的发展,重金属对水生生物的毒性影响已经引起了广泛的关注。其中,镉作为一种广泛存在的重金属污染物,具有一定的生殖毒性。研究发现,雄性生殖系统是其作用的重要靶器官,镉对精巢、精子的运动能力、成活率和受精能力均能产生影响。副性腺是溪蟹雄性生殖系统的重要组成部分。关于副性腺的研究主要集中在昆虫和哺乳动物类。

从氧化应激途径探讨低蛋白饮食加复方α–酮酸治疗Ⅳ期糖尿病肾病的机制

以糖尿病肾病Ⅳ期患者为研究对象,从氧化应激的途径来探讨复方α–酮酸加低蛋白饮食的治疗机制。方法入选糖尿病肾病Ⅳ期患者45例,随机分组为正常蛋白饮食组(A)15例,低蛋白饮食加复方氨基酸胶囊组(B)15例,低蛋白饮食加复方α–酮酸组(C)15例。三组分别于治疗前、治疗12周后测定四项氧化应激指标:硝基酪氨酸、羰基化蛋白、共轭双烯、8-羟基脱氧鸟苷。结果①组内比较:A组四项指标治疗后均较治疗前略有提高,其差异统计学意义(P>0.05);B组四项指标水平均较治疗前略有降低,有统计学意义(P<0.01)。C组四项水平均较治疗前明显降低,有统计学意义(P<0.01)。②组间比较:治疗前,三组各指标水平差异无统计学意义(P>0.05),治疗后,A组水平高于其他两组,C组降低比B组显著,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论复方α–酮酸加低蛋白饮食治疗可延缓糖尿病肾病Ⅳ期患者氧化应激过程。

妊娠期糖尿病肾病低蛋白饮食加复方α-酮酸治疗机制的探讨

目的以妊娠期糖尿病肾病患者为研究对象,从氧化应激的途径来探讨低蛋白饮食加复方α-酮酸的治疗机制。方法入选妊娠期糖尿病肾病患者3例,随机分组为正常蛋白饮食组(A)1例,低蛋白饮食加复方氨基酸胶囊组(B)1例,低蛋白饮食加复方α–酮酸组(C)1例。3组分别于治疗前、治疗12周后测定四项氧化应激指标。结果 (1)组内比较:A组四项指标治疗后均较治疗前略有提高,其差异有统计学意义(P>0.05);B组四项指标水平均较治疗前略有降低,差异有统计学意义(P<0.01)。C组四项水平均较治疗前明显降低,差异有统计学意义(P<0.01)。(2)组间比较:治疗前,3组各指标水平差异无统计学意义(P>0.05),治疗后,A组水平高于其他两组,C组降低比B组显著,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论复方α-酮酸加低蛋白饮食治疗可延缓妊娠期糖尿病肾病IV期患者氧化应激过程。