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胃癌SGC-7901细胞中人RIPX—GFP融合蛋白载体构建及表达定位
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作者 王桂玲 王孝会 +2 位作者 周颖 陈薇 姜佩佳 《医学分子生物学杂志》 CAS CSCD 2011年第1期36-39,共4页
目的构建真核表达载体pEGFP—RIPX,并鉴定RIPX在胃癌细胞中的定位,并检测外源性RIPX的表达。方法以pBluescriptR—RIPX为模板,采用PCR法进行人RIPX编码序列(CDS)的扩增,并将其克隆至真核表达载体pEGFP—C1中。将pEGFP—RIPX质粒... 目的构建真核表达载体pEGFP—RIPX,并鉴定RIPX在胃癌细胞中的定位,并检测外源性RIPX的表达。方法以pBluescriptR—RIPX为模板,采用PCR法进行人RIPX编码序列(CDS)的扩增,并将其克隆至真核表达载体pEGFP—C1中。将pEGFP—RIPX质粒瞬时转染到胃癌SGC-7901细胞中,用Western印迹方法检测GFP—RIPX融合蛋白的表达;用激光扫描共聚焦显微镜观察RIPX的定位。结果人的RIPX编码序列被成功克隆至真核表达载体pEGFP—C1中;证实了GFP—RIPX融合蛋白的表达;转染pEGFP.RIPX后,在胃癌SGC-7901细胞胞质内可见明亮的绿色荧光。结论成功地构建了pEGFP-RIPX载体,鉴定了外源性RIPX的表达;同时证实在胃癌SGC-7901细胞中RIPX主要定位于细胞质,为进一步研究RIPX的生物学特性及其信号转导通路奠定了基础。 展开更多
关键词 RIPX 绿色荧光蛋白 蛋白表达及定位 胃癌SGC-7901细胞
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