人参皂苷代谢产物衍生物对HepG2细胞凋亡及相关蛋白表达的影响

目的探讨人参皂苷代谢产物衍生物对HepG2细胞凋亡的影响及机制。方法 MTT法检测不同浓度人参皂苷代谢产物衍生物对HepG2细胞增殖的作用;流式细胞仪分析肿瘤细胞凋亡周期及细胞凋亡率;Western Blot法测定药物对HepG2细胞凋亡相关蛋白表达的影响。结果人参皂苷代谢产物衍生物抑制肝癌HepG2细胞生长,呈浓度依赖关系。用50mg/L和100mg/L人参皂苷代谢产物衍生物处理细胞24h后,凋亡率与对照组比明显升高。流式细胞术分析显示S期和G2/M期细胞周期阻滞。Western Blot结果显示,人参皂苷代谢产物衍生物使细胞中Bax、Caspase-3蛋白表达增强,Bcl-2蛋白表达降低。结论人参皂苷代谢产物衍生物促进肝癌HepG2细胞凋亡,可能与下调Bcl-2蛋白表达,上调Bax、Caspase-3蛋白表达有关。

日粮蛋白水平和叶酸补充方式对奶公牛营养物质消化率、氮平衡以及血液代谢产物的影响

为了揭示日粮蛋白水平和叶酸补充方式对奶公牛营养物质消化率、氮平衡以及血液代谢产物的影响。试验选用8头9月龄、体重为(286.8±2.3) kg的中国荷斯坦奶公牛,随机分为4组,采用2[正常日粮(NPD)与高蛋白日粮(HPD)]×2[日粮补充3.6 mg/kg的叶酸(FA)或过瘤胃叶酸(RPFA)]因子的4×4拉丁方设计。结果显示,HPD显著提高了干物质、有机物、粗蛋白、粗脂肪、粗纤维、中性洗涤纤维和酸性洗涤纤维的消化率(P<0.05),RPFA较FA仅提高了粗脂肪的消化率(P<0.05)。采食氮、消化氮、沉积氮和沉积氮/消化氮随着日粮蛋白水平的提高而显著增加(P<0.05)。RPFA显著提高了采食氮、粪氮和沉积氮(P<0.05),降低了尿氮和尿氮/总排泄氮(P<0.05)。HPD和RPFA均提高了血清中葡萄糖、白蛋白、总蛋白和叶酸(P<0.05),降低了游离脂肪酸、乙酰乙酸和同型半胱氨酸(P<0.05)。HPD显著提高了血清中尿素氮和甘油三酯(P<0.05),而RPFA有相反的结果(P<0.05)。HPD对血清β-羟丁酸浓度无影响(P>0.05),但RPFA显著降低了其浓度(P<0.05)。结果提示,在添加叶酸的前提下日粮蛋白水平为15.02%时可提高营养物质消化率和利用率,过瘤胃叶酸较叶酸提高了蛋白质利用率。

晚期氧化蛋白产物表达水平对冠心病介入治疗后发生再狭窄的影响

目的探讨晚期氧化蛋白产物(AOPP)表达水平对冠心病介入治疗后发生再狭窄的影响。方法选取2017年4月—2019年4月于河南医学高等专科学校附属医院接受介入治疗的300例冠心病患者,记录患者年龄、性别、心血管病家族史、吸烟史等基本资料。对患者进行AOPP水平测定,根据测定结果将AOPP水平≤50.51μmol/L作为低AOPP组,>50.51μmol/L作为高AOPP组,比较不同AOPP水平患者指标及再狭窄发生率。用logistic回归法分析患者发生再狭窄的危险因素。结果AOPP测定结果显示,≤50.51μmol/L患者有158例,>50.51μmol/l有142例。两组年龄、心血管病家族史差异无统计学意义(P>0.05);高AOPP组吸烟史例数、Gensini积分、支架数≥3比例、支架直径及长度均高于低AOPP组(P<0.05)。随访1年期间,高AOPP组再狭窄发生率显著高于低AOPP组(P<0.05)。经logistic回归分析,AOPP>50.51μmol/L、支架数≥3、Gensini积分>20分及有吸烟史为患者介入治疗后发生再狭窄的危险因素。结论AOPP高水平表达是冠心病患者介入治疗后发生再狭窄的独立危险因素之一,可作为预测患者治疗后发生心脏不良事件的生化标记物,对临床具有参考价值。

利用荧光分光光度计定量分析GFP基因的表达水平

以 3种表达水平高低不一的绿色组织特异性启动子驱动绿色荧光蛋白 ( greenfluorescentprotein ,GFP)基因转化烟草植株。设计了一种利用荧光分光光度计对组织中GFP的表达水平进行定量分析的新方法 ,利用该方法对获得的 10 2株转基因烟草中不同部位叶片中的GFP表达水平进行了定量分析。其结果与荧光显微镜观察结果高度一致 ,从而证实利用这种新方法对GFP基因进行定量分析是可行的。

糖尿病合并动脉粥样硬化患者糖化血红蛋白及血糖、血脂水平分析

目的:观察糖尿病合并动脉粥样硬化(DM+AS)患者糖化血红蛋白(HbAlc)及血糖、血脂水平的变化。方法:测定32例DM+AS患者、36例单纯糖尿病(DM)患者和55例健康对照者HbAlc、空腹血糖(FBG)和血脂指标,并进行对比分析。结果:DM+AS组与单纯DM组之间FBG水平无显著性差异,HbAlc水平有显著性差异(P<0.05),且两组两指标均较正常对照组显著增高(P<0.01);总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL)和脂蛋白(a)[Lp(a)]水平DM+AS组比正常对照组显著增高(P<0.01)。结论:DM+AS患者血脂水平明显升高;HbAlc作为反映血糖控制好坏的有效指标,对DM合并AS及血管病变的监测有重要作用。

高脂血症患者载脂蛋白E基因多态性与血脂水平分析

目的:分析载脂蛋白E基因多态性和高脂血症患者的血脂水平。方法:应用等位基因特异性多重PCR技术对高脂血症患者和健康对照者载脂蛋白E基因多态性进行分析,并测定所有样本血清载脂蛋白E等血脂指标水平。结果:高脂血症患者总胆固醇、甘油三脂、低密度脂蛋白胆固醇、载脂蛋白E水平明显高于健康对照组(P<0.05),而高密度脂蛋白胆固醇,载脂蛋白AI明显低于正常对照组(P<0.05);血浆中载脂蛋白E含量顺序是E2/3>E3/3>E3/4,两两比较具有统计学差异(P<0.05);在载脂蛋白E的基因型中以载脂蛋白E3/3型多见;高脂血症患者中载脂蛋白Eε4等位基因频率明显高于健康对照组(P<0.05)。结论:载脂蛋白Eε4等位基因与高脂血症有关,载脂蛋白E基因多态性可能是高脂血症患者的遗传因素。

重组β-CPP二聚体真核表达载体的构建及表达产物的结构分析

β- CPP作为一种促进 Ca2 + 等离子吸收和细胞融合的活性短肽有着广泛的应用前景。为深入研究其生物学功能 ,采用基因工程方法得到β- CPP的二聚串联体基因并以此为基础构建真核表达载体 ,对其结构进行分析 ,为进一步表达重组β- CPP二聚体蛋白奠定基础。

尿毒症患者同型半胱氨酸及超敏C反应蛋白水平分析

研究发现,心血管疾病（CVD）是终末期肾脏病（ESRD）患者的首要并发症和主要致死原因[1]。导致ESRD患者并发CVD的因素很多,除了传统的危险因素如高血压、贫血、家族史、高血脂、糖尿病、吸烟等以外,近年逐渐认识到某些非传统性因素在其发病机制中起了重要的作用。同型半胱氨酸（Hcy）是一种的非必需氨基酸,为蛋氨酸转甲基后形成的中间代谢产物,肾脏是其重要的代谢场所。

广聚萤叶甲Vg基因的鉴定及表达分析

卵黄原蛋白(vitellogenin,Vg)作为雌性多功能生殖蛋白,为卵黄发生提供所需的储备能源。为明确Vg基因在广聚萤叶甲Ophraella communa生殖过程中的潜在作用,本研究通过RT-PCR技术克隆得到广聚萤叶甲的3个Vg基因,其OcVg1,OcVg2和OcVg3开放阅读框(ORF)分别为5310、5322 bp和5298 bp,对应编码1768、1772和1764个氨基酸。其OcVgs蛋白具有LLTP超家族的保守结构域:LPD_N、DUF1943和VWD结构域;多位于N-端的多聚丝氨酸区(polyserine domains),保守的GL/ICG、R/KXXR/K、DGXR基序和C-端半胱氨酸残基等。构建系统进化树发现,OcVgs与鞘翅目昆虫聚为一支。时空表达分析发现,OcVgs基因在不同组织及发育阶段的表达动态相似,在脂肪体中特异性高表达(P<0.05);在成虫羽化后的性成熟阶段的表达量最高,幼虫期的表达水平可以忽略不计(P<0.05)。研究结果为深入理解广聚萤叶甲生殖作用的分子机制奠定基础。

抗凝活性肽RGD226基因构建、表达、产物纯化及活性分析

通过PCR法 ,将来源于蛇毒蛋白质eristostatin中的一段含有RGD(Arg Gly Asp)序列的十三肽(SRVARGDWNDDYS)的基因 ,以一个无胰岛素活性但保留天然免疫原性的胰岛素原突变体(PJG4 0 1)基因为模板 ,置换其B2 8和A1位之间的连接肽基因 ,构建成了能展示RGD功能序列的人源化分子 (RGD2 2 6 )的基因 .通过该基因在大肠杆菌中的表达、产物分离纯化 ,得到高纯度RGD2 2 6 .该RGD肽对由ADP诱导的体外人血小板聚集的半抑制浓度IC50 为 2 2 3μmol L .其胰岛素免疫活性是PJG4 0 1的 15 1% ,提示其在一定程度上保留了胰岛素原的免疫原性 .其受体结合活性不到PJG4 0 1的 0 1% ,说明其胰岛素的生物活性基本丧失 .动物实验证实 ,RGD2 2

重组蓖麻毒素A链蛋白的可溶性表达、纯化与抗原性分析

用PCR方法从克隆质粒pUC19-RTA中扩增出蓖麻毒素A(RTA)链基因,序列分析正确后, 亚克隆到原核表达质粒pET-His中,构建重组表达质粒pET-HisRTA,再转化到E.coli BL21(DE3) plysS中获得表达工程菌株BL21/pET-HisRTA。该工程菌在30℃经0.4mmol／L IPTG诱导4h后获 得可溶性表达的目的蛋白,约占菌体总蛋白的18.45％,SDS-PAGE分析显示表达的蛋白区带与 RTA相对分子量相符,约32kDa左右。表达产物经Ni-NTA亲和层析法一步纯化,蛋白纯度约达 97.53％,并可得到约18mg/L重组RTA蛋白。Western印迹和间接ELISA结果证明,重组RTA蛋 白与抗天然蓖麻毒素多抗可发生特异性的抗原抗体反应,具有良好的抗原性,这为制备RT特异 性抗体及建立RT的检测方法奠定了基础。

ras P21癌蛋白在颊粘膜上皮癌前及癌变中表达的定量分析

ｒａｓＰ２１癌蛋白在颊粘膜上皮癌前及癌变中表达的定量分析通过建立图像分析系统对免疫组化染色结果进行定量，观察了ｒａｓＰ２１在口腔颊粘膜上皮由正常、炎症、癌旁上皮到鳞癌的变化过程的表达并进行分析。结果显示，Ｐ２１由癌旁上皮开始表达水平明显提高，到高分化...

血液透析患者血清中骨硬化蛋白和DKK1蛋白表达与腹主动脉钙化程度的相关性分析

血管钙化是终末期肾病（ESRD）患者心血管疾病发病和死亡的独立危险因素,与心血管事件的发生存在密切的关系。传统观念认为,血管钙化是一个被动过程：即机体内钙磷代谢紊乱使细胞和组织间钙磷结晶沉积。近年来大量研究认为血管钙化是一种类似于骨和软骨形成的主动的调节过程。

分蘖洋葱-番茄套作系统中番茄叶片差异蛋白表达分析

目的：明确套作对番茄叶片差异蛋白表达的影响，从蛋白质水平进一步揭示套作分蘖洋葱减轻番茄连作障碍的机理，探明套作控病增产的原因，推动番茄高效优质栽培模式的建立和推广。

益骨胶囊含药血清对大鼠成骨细胞雌激素受体mRNA及其蛋白表达的影响

目的从mRNA及蛋白水平研究益骨胶囊含药血清对成骨细胞雌激素受体(ER)表达的影响,从雌激素调控途径探讨益骨胶囊防治骨质疏松症的机理。方法分离、培养新生大鼠成骨细胞,传代后分为3组,即含药血清组、空白血清对照组、DMEM对照组。采用RT- PCR法检测ERα和ERβ的mRNA相对表达量,采用放射性配基结合分析检测ER的亲和力(以平衡解离常数KD表示)和受体数量(以RT表示)。结果益骨胶囊含药血清组和两对照组比较,ERβmRNA的相对表达量增加,差异有显著性(P <0 .0 5 ) ;ERαmRNA表达差异无显著性(P >0. 0 5 ) ;益骨胶囊含药血清组和两对照组比较KD值差异无显著性(P >0 . 0 5 ) ,但RT有提高,差异有显著性(P <0. 0 1)。结论益骨胶囊含药血清能上调成骨细胞ERβmRNA表达,能增加雌激素受体数量。通过雌激素调控途径防治骨质疏松症可能是益骨胶囊的药理机制之一。

番鸭呼肠孤病毒MW9710σC蛋白基因克隆及其在E.coli中表达

应用RT2PCR扩增出番鸭呼肠孤病毒MW9710株的σC基因,序列分析表明σC基因核苷酸数为810bp,编码269个氨基酸,相对分子量为29.4ku,DNAstar软件分析MW9710株的σC核苷酸序列和法国番鸭呼肠孤病毒89026株有93%的同源性,而与禽呼肠孤病毒的同源性仅在21%～25%之间,表明番鸭呼肠孤病毒是一类不同于禽呼肠孤病毒的新病毒。将σC基因片段亚克隆到原核表达载体pET32a中,经IPTG诱导后在大肠杆菌BL21(DE3)中得到高效表达,Western2blot进一步验证了表达产物与番鸭呼肠孤病毒阳性血清反应,表明σC基因表达产物具有免疫原性,为下一步研制番鸭呼肠孤病毒诊断试剂盒和基因工程疫苗奠定基础。

山核桃种子脂肪代谢期EST序列的初步分析

山核桃Carya cathayensis为重要的油料干果树种,其非同一般的高含油率必定有其特殊的成油机制。为探索其成油机制,在已构建的山核桃脂肪代谢相关c DNA文库基础上,对c DNA进行随机克隆测序,对序列进行拼接、功能注释,基因本体论(gene ontology,GO)分类及基于拟南芥Arabidopsis thaliana的Fun Cat分类,并对与脂肪代谢相关的全长c DNA序列进行蛋白性质分析。结果共得到1 010条山核桃表达序列标签(ESTs),经拼接获得188个编码蛋白质的基因(unigene),其中92个contigs和96个singlets。GO分类将这些unigene分成细胞组分、分子功能和生物过程等3类,并发现各序列编码的基因并不承担单一的功能,有些序列在功能上有重叠;同时参照拟南芥的基因功能分类,将unigene序列在功能上分成9类,得到了143个全长c DNA序列,其中包括14个与脂肪代谢相关的c DNA序列。对12个与脂肪代谢相关的全长c DNA序列进行蛋白性质分析,发现它们均具有磷酸化位点;除油质蛋白外都没有跨膜区域,且不具信号肽结构,为非分泌蛋白,属于某个蛋白家族;不同的油体蛋白具有不同的跨膜区,且均具有信号肽结构,属于Oleosin super family蛋白家族。

半边旗提取物5F对人高转移卵巢癌细胞HO-8910PMETS-1mRNA和VEGF蛋白表达的影响

目的:研究半边旗提取物5F(以下简称5F)对HO-8910PM细胞内VEGF蛋白及ETS-1mRNA表达的影响,探讨其抗肿瘤侵袭转移的作用机制.方法:RT-PCR分析ETS-1mRNA的表达;Western blot分析VEGF蛋白的表达.结果:25～100 μmol/L 5F作用HO-8910PM细胞24 h后,明显下调ETS-1mRNA的表达;5F明显下调VEGF蛋白表达水平.结论:5F抗肿瘤侵袭转移能力与ETS-1mRNA和VEGF蛋白的表达有关.

2型糖尿病患者糖化血红蛋白与血脂测定的意义及相关性分析

糖尿病是当前严重的世界性问题,已成为严重影响人民健康的常见疾病之一,而同时伴有的血脂代谢紊乱,是引发多种并发症的原因。由于糖化血红蛋白（HbAlc）检测能反映出一段时间血糖平均水平,在临床受到日益重视。本文通过回顾分析2型糖尿病患者糖化血红蛋白与血脂的水平,以探讨相关性及意义。