酶联免疫吸附法与蛋白质免疫印迹法检测抗核小体抗体在SLE诊断中的价值对比

目的比较蛋白质免疫印迹法(WB)、酶联免疫吸附法(ELISA)检测抗核小体抗体(AnuA)在系统性红斑狼疮(SLE)诊断中的价值。方法306例自身免疫疾病患者,根据明确的临床诊断结果将患者分为SLE组(SLE患者,144例)和非SLE组(非SLE患者,162例);选取同期非自身免疫疾病患者100例作为对照组。所有研究对象均采用ELISA及WB检测AnuA。分别统计两种检测方法的AnuA检测结果。比较两种检测方法对AnuA的诊断价值,包括准确度、敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值,并进行统计学检验,分析两种检测方法的一致性。结果SLE组:ELISA检测AnuA阳性120例、阴性24例,WB检测AnuA阳性109例、阴性35例;非SLE组:ELISA检测AnuA阳性76例、阴性86例,WB检测AnuA阳性71例、阴性91例;对照组:ELISA检测AnuA阳性17例、阴性83例,WB检测AnuA阳性11例、阴性89例;两种检测方法在SLE组、非SLE组和对照组的AnuA检测阳性率比较无统计学意义(P>0.05);但两种检测方法的SLE组患者AnuA阳性率明显高于非SLE组和对照组,且非SLE组患者AnuA阳性率明显高于对照组(P<0.05)。ELISA检测AnuA的敏感度87.4%(180/206)高于WB检测的80.1%(165/206)(P<0.05);两种检测方法的特异度、阳性预测值、阴性预测值、准确度比较无统计学意义(P>0.05)。两种检测方法检测结果的总符合率为90.1%,判断具有较好的一致性(K值=0.516)。结论ELISA及WB检测AnuA在SLE中均具有较高的诊断效能,临床可在AnuA初步检测中运用WB,如有必要可在复检中运用ELISA,有效提高检测阳性率,为临床诊断SLE提供参考。

蛋白质印迹羧化多壁碳纳米管/CaAlg水凝胶膜及其修饰的电化学传感器

文中以牛血清白蛋白(BSA)为模板、海藻酸钠(NaAlg)为功能单体,掺杂羧化多壁碳纳米管,经CaCl2溶液交联制备了BSA分子印迹羧化多壁碳纳米管/海藻酸钙(CMWCNTs/CaAlg)复合水凝胶膜(MIP),同时不用模板制备了非印迹膜(NIP),研究了CMWCNTs含量对膜力学性能的影响;膜厚度、洗脱液pH值对BSA吸附性能的影响。研究了MIP膜的吸附选择性。结果表明,当CMWCNTs的质量为NaAlg的2%时,水凝胶膜同时具备良好的抗溶胀性能和力学性能。膜厚度控制在0.2mm,洗脱液pH值为7.4时,MIP膜对BSA的吸附量最大,为35.04mg/g。将MIP膜负载于裸碳电极表面,循环伏安法和差分脉冲伏安法测试表明,MIP膜修饰电极对BSA表现出较高的选择识别性。

间接免疫荧光法及蛋白质印迹法对肺癌患者体内自身抗体的分析

目的：了解肺癌患者血清自身抗体阳性率、细胞内定位及荧光图形特点，探索自身抗体作为肿瘤标志物的可能性。方法：应用间接免疫荧光法（ｉｎｄｉｒｅｃｔ ｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ，ＩＩＦ）检测 ７７份肺癌以及 １４０份不同年龄段正常人血清中自身抗体。提取人喉癌上皮细胞（Ｈｅｐ－２）蛋白抗原，采用蛋白质印迹法对８１份肺癌患者及５２份正常人血清进行分析。结果：肺癌组和对照组的自身抗体阳性率有显著差别，两组人群的自身抗体阳性率皆随年龄增长而增高（Ｐ＜０．０５），在不同年龄段，肺癌组皆显著高于对照组（Ｐ＜０．０１）。肺癌组和对照组在自身抗体荧光图形、靶抗原细胞内定位上均有明显不同。７４份肺癌患者血清中检测到阳性条带（７４／８１，９１．４％），显著高于对照组（３１／５２，６１．５％），其中大多数与自身免疫性疾病中常见的自身抗体不同，并发现８２．７％（６７／８１）的肺癌患者具有针对相对分子质量初步鉴定为６．５万的靶抗原的阳性条带，该条带仅在２２．２％（１２／５２）的正常人中查及。结论：肺癌患者血清的自身抗体谱与正常人生理性自身抗体谱及自身免疫性疾病中的自身抗体谱不同，进一步研究其靶抗原本质及其生物学意义。

蛋白质溶胶-凝胶包埋法分子印迹复合膜的制备及渗透机理研究

分别以牛血红蛋白、牛血清白蛋白和溶菌酶3种蛋白质为模板分子,采用表面涂布的方法制备了在Nylon微孔滤膜表面覆盖有聚丙烯酰胺凝胶层的分子印迹复合膜,并用扫描电镜对制备的分子印迹膜的表面形态和孔结构进行了表征,发现支撑膜的表面及内部微孔表面均被一层丙烯酰胺凝胶所覆盖.对用不同蛋白为模板制备的分子印迹膜进行了这3种蛋白的单一组分和双组分混合溶液渗透实验.结果表明,各蛋白底物在印迹膜上的渗透规律是特异性的识别位点和尺寸效应共同作用的结果.特异性识别位点会选择性地识别模板分子,从而使其渗透速度减慢;尺寸效应主要体现在底物蛋白的体积越小其渗透越快.

蛋白质免疫印迹技术检测肺癌组织上皮钙粘蛋白的表达

目的探讨上皮钙粘蛋白(E-cad)与肺癌及其病理类型之间的相关性。方法应用蛋白质免疫印迹技术(W estern b lot)检测30例肺癌患者的癌、癌旁和远癌肺组织及5例肺良性对照标本中E-cad的表达,并对部分表达阴性的标本用免疫组化方法进行验证。结果癌组织、癌旁组织、远癌组织E-cad的阳性率分别为36.7%、70.0%、96.7%。癌组织E-cad阳性率明显低于癌旁组织(P<0.017),也明显低于远癌组织(P<0.017);癌旁组织E-cad阳性率明显低于远癌组织(P<0.017)。在30例肺癌患者鳞癌、腺癌及腺鳞癌的癌组织中E-cad阳性率分别为33.3%、40.0%、33.3%;鳞癌、腺癌及腺鳞癌的癌旁组织中的阳性率分别66.7%、73.3%、66.7%;鳞癌、腺癌及腺鳞癌的远癌组织中的阳性率分别为91.7%、100.0%、100.0%。癌、癌旁和远癌组织中E-cad的表达与肺癌组织学类型无关(P>0.05)。结论E-cad蛋白表达减少或缺失与肺癌有相关性,与肺癌的组织类型无相关性。

壳聚糖与羧甲基壳聚糖蛋白质印迹聚合物的制备及吸附性能

首先制备了壳聚糖的衍生物——羧甲基壳聚糖,再以壳聚糖与羧甲基壳聚糖的共混物为功能单体,牛血清白蛋白(BSA)为模板蛋白质,制备了一种壳聚糖与羧甲基壳聚糖共混物的蛋白质印迹聚合物。模板蛋白质吸附测试结果表明,该蛋白质印迹聚合物对BSA的吸附量是非印迹聚合物的30.8倍;对不同蛋白质的吸附测试结果表明,相比于其它对比蛋白质,该蛋白质印迹聚合物具有良好的选择性吸附模板蛋白质BSA的效果;并且该蛋白质印迹聚合物具有良好的可重复使用性能。

蛋白质免疫印迹技术在本科实验教学中的应用

蛋白质免疫印迹技术是生命科学研究领域的常用技术手段,尝试将其改造成适于本科教学实践的实验内容,即在基础性分子生物学实验的基础上开设"免疫印迹法检测目的基因在原核细胞中的表达"这一综合性实验。根据学生的理论和操作水平以及本科实验教学特点,对实验内容和实验方法进行了优化,并采取研讨式分组教学模式,使学生能够深入、全面、系统地理解和掌握蛋白质免疫印迹技术,提高了实验教学质量,并有助于培养学生的科学思维、科学素养以及综合实践能力。

棘球蚴特异性抗原的蛋白质印迹分析

目的 寻找细粒棘球蚴 (Eg)和多房棘球蚴 (Em)特异性抗原组分用于免疫诊断。 方法 对Eg、Em的囊液、原头节、囊壁角质层、囊壁生发层及犬泡状带绦虫、犬豆状带绦虫、羊细颈囊尾蚴、猪囊尾蚴等 4种异源性绦虫 ,共14种粗抗原进行免疫学分析。采用蛋白质印迹试验 (Westernblotting)、Genesnap和Genetool分析软件比较分析不同抗原蛋白条带分别与囊型棘球蚴病 (CE)及泡型棘球蚴病 (AE)患者血清反应的差异。 结果 14种粗抗原中与CE、AE患者血清发生交叉反应的 11条蛋白条带相对分子质量 (Mr)为 13 0 0 0 0、10 0 0 0 0、940 0 0、80 0 0 0、75 0 0 0、660 0 0、62 0 0 0、5 2 0 0 0、3 80 0 0、3 2 0 0 0及 2 40 0 0 ;与CE患者血清有特异性反应的 5条蛋白条带Mr为 410 0 0、40 0 0 0、2 2 0 0 0、160 0 0和12 0 0 0 ;与AE患者血清具有特异性反应的 8条蛋白条带Mr为 12 0 0 0 0、10 90 0 0、860 0 0、5 90 0 0、43 0 0 0、2 80 0 0、2 0 0 0 0及 180 0 0。 结论 确定了Eg和Em共有的交叉反应性抗原和具有进一步研究价值的特异性抗原组分 。

RNA-蛋白质印迹筛选HBsAg转录后调节因子表达克隆

RNA结合蛋白是基因表达的重要调节因子.RNA蛋白质印迹(Northwesternblot)是近年来国外建立的筛选这类因子的重要方法之一.应用这一方法从肝细胞株HepG2cDNA文库中成功筛选到乙型肝炎病毒表面抗原转录后调节片段互相作用蛋白表达克隆.结果显示:该蛋白与探针结合特异性强,经三轮筛选后,100%克隆为阳性克隆;PCR和EcoRⅠ酶切初步鉴定,编码该蛋白的cDNA长约1kb.

高灵敏的蛋白质免疫印迹新方法用于β-淀粉样蛋白检测

目的:对抗体进行改进,降低传统蛋白质免疫印迹方法的检出限。方法:在传统蛋白质免疫印迹方法的基础上,将一抗和二抗分别与纳米金和氧化石墨烯结合,以提高其对痕量样本的检测灵敏度,降低检测限。结果:优化后的方法对β-淀粉样蛋白的检测限从原来的432 pg/mL降低至16 pg/mL,为原来的1/27。结论:改进后的蛋白质免疫印迹新方法性能稳定,重复性好,可用于生物样本中痕量被检测物的测定。

蛋白质印迹法检测GIRK4在SD大鼠肾脏组织的表达

目的探讨GIRK4基因在健康SD大鼠肾脏组织的表达水平。方法采用蛋白质印迹法(Western-blot-ting)对健康SD大鼠肾脏组织GIRK4蛋白表达进行定量分析。结果 GIRK4基因蛋白在健康SD大鼠肾脏组织相对表达量为3.37±0.68。结论从蛋白质水平对GIRK4基因在健康SD大鼠肾脏组织表达的定量研究,将为探索GIRK4基因与肾脏生理功能及其相关临床疾病的关系奠定基础。

蛋白质分子印迹技术研究进展

蛋白质分子印迹聚合物具有高度选择吸附性,能专一性识别蛋白质模板分子.本文综述了蛋白质分子印迹聚合物的制备、选择性识别机制及其选择性吸附的影响因素,并对蛋白质分子印迹技术的应用前景进行了展望.

蛋白质印迹法检测小鼠不同器官中细胞色素C的含量

目的探讨细胞色素C在不同脏器中的差异。方法采用蛋白质印迹法(Western Blot)测定小鼠肝、肾、心中细胞色素C的含量。结果细胞色素C含量在肝组织中最高,心肌组织中最低。结论细胞色素C含量具有组织器官差异性。

PP纤维支撑蛋白质印迹海藻酸钙凝胶膜的制备和表征

以海藻酸钠(Na Alg)为印迹材料,以牛血清白蛋白(BSA)为模板分子,以聚丙烯(PP)无纺布为支撑体,制备了PP无纺布支撑的BSA分子印迹海藻酸钙水凝胶膜(PP-s-Ca Alg MIP).同时不加蛋白质制备了非印迹膜,记为PP-s-Ca Alg NIP.通过扫描电镜(SEM)、红外光谱(FT-IR)对PP-s-Ca Alg凝胶膜进行表征,测定了其在生理盐水中的溶胀性能.讨论了不同Na Alg浓度制备的PP-s-Ca Alg水凝胶膜在不同缓冲液中对BSA的释放.研究了不同缓冲液下不同Na Alg浓度制备的PP-s-Ca Alg MIP膜和NIP膜对BSA的吸附性能.结果表明:PP-s-Ca Alg MIP膜对BSA的吸附量明显优于PP-s-Ca Alg NIP膜;与对比蛋白质相比,PP-s-Ca Alg MIP对模板蛋白质的吸附量更多,表明其具有一定的吸附选择性;PP-s-Ca Alg MIP膜制备简单,成本低,生物相容性好,可用于细胞培养和组织工程领域.

用双向电泳及蛋白质印迹技术筛选乳腺癌相关抗原

目的:应用双向电泳及免疫印迹技术分析乳腺癌MCF-7细胞总蛋白,寻找乳腺癌相关抗原。方法:提取乳腺癌MCF-7细胞总蛋白,双向电泳技术(2-DE)对总蛋白进行分离后转膜,将健康人血清(对照组)和乳腺癌患者血清(实验组)作为一抗进行蛋白质印迹(Western blotting)分析,寻找杂交蛋白点的差异。结果:MCF-7总蛋白双向电泳考马斯亮蓝染色图谱共检测到248个蛋白质斑点,Western blotting显示实验组抗原抗体反应点23个,对照组为13个,找到10个差异蛋白点。结论:乳腺癌患者血清中的抗体表达水平有改变,这10个差异蛋白点有可能是乳腺癌相关抗原。

凝胶电泳与蛋白质印迹技术实验方法的改进和探索

凝胶电泳与蛋白质印迹技术是生命医学研究领域的常用技术,但因此项技术步骤较多、操作复杂,学生在实验过程中出现的问题较多,结果不稳定,重复性差。为使学生能熟练且稳定地掌握该技术,对十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)及蛋白质印迹技术进行了长期的实践和探索,通过改进凝胶各成分配比方案,不断完善和优化实验条件,有效增强了凝胶配制的时效性,大大提高了凝胶电泳后续实验的稳定性和成功率。通过优化蛋白印迹过程中抗体的使用浓度,印记杂交结果目标蛋白质条带更加清晰可见,易分析,重复性好。

应用双向电泳及蛋白质印迹分析弓形虫特异性抗原

将感染弓形虫速殖子的SD大鼠血清和健康大鼠血清作为一抗进行蛋白质印迹(Western blotting)分析,比较杂交蛋白点的差异,分析弓形虫速殖子特异性抗原。弓形虫速殖子总蛋白双向电泳考马斯亮蓝染色图谱(7cm×8cm,pH3～10)共检测到209个蛋白质斑点。Western blotting显示实验组抗原抗体反应点17个,对照组仅2个非特异性的蛋白结合点。

壳聚糖金属离子配合物蛋白质印迹聚合物的制备与表征

利用壳聚糖与金属离子形成的配合物为功能单体,以环氧氯丙烷为交联剂,在模板分子牛血清白蛋白的存在下,采用简单方便的滴加成球法制备出牛血清白蛋白印迹聚合物。通过环境扫描电镜对其形貌结构进行了表征,并用蛋白质吸附实验对其印迹效果进行了评价。测试结果表明,用该方法制备的印迹聚合物对牛血清白蛋白具有较好的选择性,对模板蛋白质的吸附量是非印迹聚合物的21.9倍,显示出较明显的选择性吸附分离效果。