基于原子转移自由基聚合反应的高灵敏度蛋白质印迹方法研究

目的探索基于金纳米颗粒(AuNPs)和原子转移自由基聚合反应(ATRP)的蛋白质印迹高灵敏度检测方法。方法将AuNPs通过ATRP附着到聚偏二氟乙烯(PVDF)膜上,通过PVDF膜对小分子的吸附作用,提高检测灵敏度。结果改进后的PVDF膜(PVDF-ATRP-AuNPs)对目标小分子的截留效率提高了80%左右,检测限显著降低。结论改进后的方法具有良好的稳定性、优异的灵敏度,能对超低浓度小分子待测物进行有效检测。

酶联免疫吸附法与蛋白质免疫印迹法检测抗核小体抗体在SLE诊断中的价值对比

目的比较蛋白质免疫印迹法(WB)、酶联免疫吸附法(ELISA)检测抗核小体抗体(AnuA)在系统性红斑狼疮(SLE)诊断中的价值。方法306例自身免疫疾病患者,根据明确的临床诊断结果将患者分为SLE组(SLE患者,144例)和非SLE组(非SLE患者,162例);选取同期非自身免疫疾病患者100例作为对照组。所有研究对象均采用ELISA及WB检测AnuA。分别统计两种检测方法的AnuA检测结果。比较两种检测方法对AnuA的诊断价值,包括准确度、敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值,并进行统计学检验,分析两种检测方法的一致性。结果SLE组:ELISA检测AnuA阳性120例、阴性24例,WB检测AnuA阳性109例、阴性35例;非SLE组:ELISA检测AnuA阳性76例、阴性86例,WB检测AnuA阳性71例、阴性91例;对照组:ELISA检测AnuA阳性17例、阴性83例,WB检测AnuA阳性11例、阴性89例;两种检测方法在SLE组、非SLE组和对照组的AnuA检测阳性率比较无统计学意义(P>0.05);但两种检测方法的SLE组患者AnuA阳性率明显高于非SLE组和对照组,且非SLE组患者AnuA阳性率明显高于对照组(P<0.05)。ELISA检测AnuA的敏感度87.4%(180/206)高于WB检测的80.1%(165/206)(P<0.05);两种检测方法的特异度、阳性预测值、阴性预测值、准确度比较无统计学意义(P>0.05)。两种检测方法检测结果的总符合率为90.1%,判断具有较好的一致性(K值=0.516)。结论ELISA及WB检测AnuA在SLE中均具有较高的诊断效能,临床可在AnuA初步检测中运用WB,如有必要可在复检中运用ELISA,有效提高检测阳性率,为临床诊断SLE提供参考。

Western印迹中蛋白质定量分析的替代方法

Western印迹广泛采用显像密度计法对特异性蛋白质表达进行定量,但是仍然存在敏感性的问题尚未解决。同时,昂贵的试剂与复杂的设备限制了其应用。建立了一种改良定量检测法,使用碱性磷酸酶标记的第二抗体,以萘酚磷酸盐和快红作反应底物。吸附膜上的终末显色用有机溶剂洗脱,通过测定光吸收值定量。结果显示该法更简便、快速、经济而不失其敏感性。

蛋白质酪氨酸磷酸化-免疫沉淀及Western印迹两种方法的比较

为了深入了解在细胞信息传递中蛋白质酪氨酸磷酸化研究的较佳方法，采用免疫沉淀法及Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹法对电离辐射诱导的小鼠胸腺细胞蛋白质磷酸化进行了比较分析。免疫沉淀结果表明，照射后１７５００、２２０００、２８０００、３２０００、４００００、４３０００及５３０００蛋白分子发生酪氨酸磷酸化。Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹结果表明，照射后２８０００、３２０００蛋白分子发生酪氨酸磷酸化。提示在蛋白质酪氨酸磷酸化的研究中，免疫沉淀法优于Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹法。

间接免疫荧光法及蛋白质印迹法对肺癌患者体内自身抗体的分析

目的：了解肺癌患者血清自身抗体阳性率、细胞内定位及荧光图形特点，探索自身抗体作为肿瘤标志物的可能性。方法：应用间接免疫荧光法（ｉｎｄｉｒｅｃｔ ｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ，ＩＩＦ）检测 ７７份肺癌以及 １４０份不同年龄段正常人血清中自身抗体。提取人喉癌上皮细胞（Ｈｅｐ－２）蛋白抗原，采用蛋白质印迹法对８１份肺癌患者及５２份正常人血清进行分析。结果：肺癌组和对照组的自身抗体阳性率有显著差别，两组人群的自身抗体阳性率皆随年龄增长而增高（Ｐ＜０．０５），在不同年龄段，肺癌组皆显著高于对照组（Ｐ＜０．０１）。肺癌组和对照组在自身抗体荧光图形、靶抗原细胞内定位上均有明显不同。７４份肺癌患者血清中检测到阳性条带（７４／８１，９１．４％），显著高于对照组（３１／５２，６１．５％），其中大多数与自身免疫性疾病中常见的自身抗体不同，并发现８２．７％（６７／８１）的肺癌患者具有针对相对分子质量初步鉴定为６．５万的靶抗原的阳性条带，该条带仅在２２．２％（１２／５２）的正常人中查及。结论：肺癌患者血清的自身抗体谱与正常人生理性自身抗体谱及自身免疫性疾病中的自身抗体谱不同，进一步研究其靶抗原本质及其生物学意义。

Western blot方法中不同电流强度对较大分子蛋白质转膜效率的影响

目的研究Western blot方法中不同电流强度对较大分子蛋白质转膜效率的影响。方法利用(36～250)×103标志蛋白质,以8%SDS-PAGE凝胶分离,然后分别以100、200、300、400、500mA恒流湿法电转2h。结果 100、200mA恒流2h不能使250×103较大分子蛋白质全部转膜,凝胶有残留。300mA以上则可使大部分或全部转膜,胶上未见残留。结论电流强度对较大蛋白质转膜有影响。300～400mA可作为250×103左右较大分子蛋白质从8%SDS-PAGE凝胶转膜的最佳恒流强度。

光接枝表面修饰法制备温敏型蛋白质分子印迹微球

本研究采用一种新颖简便的方法在水相中成功制备了溶菌酶（Lysozyme）温敏型分子印迹微球。首先将二乙基二硫代氨基甲酸钠（引发转移终止剂Iniferter）修饰到介孔氯甲基聚苯乙烯微球（MPCbeads）上，然后以修饰有Iniferter的介孔氯甲基聚苯乙烯微球（modified MPCbeads）作为载体，

蛋白质印迹法检测GIRK4在SD大鼠肾脏组织的表达

目的探讨GIRK4基因在健康SD大鼠肾脏组织的表达水平。方法采用蛋白质印迹法(Western-blot-ting)对健康SD大鼠肾脏组织GIRK4蛋白表达进行定量分析。结果 GIRK4基因蛋白在健康SD大鼠肾脏组织相对表达量为3.37±0.68。结论从蛋白质水平对GIRK4基因在健康SD大鼠肾脏组织表达的定量研究,将为探索GIRK4基因与肾脏生理功能及其相关临床疾病的关系奠定基础。

乙醇固定对肿瘤细胞的蛋白质提取及Western印迹的影响

为研究乙醇固定后肿瘤细胞的蛋白质提取及 Western印迹的可行性。于低温 (4℃ )或常温条件下裂解经75 %冷乙醇固定的肿瘤细胞 (HL- 6 0细胞和 Molt- 4细胞 ) ,提取细胞蛋白质进行 SDS- PAGE凝胶电泳和 Western印迹。结果显示经预处理后的肿瘤细胞中提取的蛋白质不论是在 SDS- PAGE后的考马斯亮蓝染色 ,还是转膜后的 Western印迹均可得到可分析的蛋白质条带。提示 75 %冷乙醇固定的肿瘤细胞仍适用于 SDS- PAGE和 Western印迹 ,并可结合流式细胞术对肿瘤细胞蛋白质进行细胞周期定性、定量和定时相的同步分析。

蛋白质印迹法检测小鼠不同器官中细胞色素C的含量

目的探讨细胞色素C在不同脏器中的差异。方法采用蛋白质印迹法(Western Blot)测定小鼠肝、肾、心中细胞色素C的含量。结果细胞色素C含量在肝组织中最高,心肌组织中最低。结论细胞色素C含量具有组织器官差异性。

用于免疫印迹法的生物素化标准分子量蛋白质的制备

免疫印迹技术目前已被广泛应用。确定抗原分子量通常使用标准分子量蛋白平行电泳并转移至NC膜,切下相应条带用氨基黑等染料染色,不但费时,敏感性低,而且在染色和脱色时易引起NC膜的皱缩。1986年Della-Penna等报告用生物素化蛋白作为蛋白质印迹(Western blots)的分子量标准品。目前国外已有商品出售,但价格较贵。本文利用国产低分子量标准蛋白质和自制N-羟基琥珀酰亚胺生物素酯制备生物素化蛋白取得满意结果。

包埋法蛋白质分子印迹的材料和洗脱方式

本文总结了蛋白质分子印迹技术中包埋法常用印迹材料的特点,及各种洗脱方式在分子印迹技术中的应用情况。引用文献63篇。

PBL结合翻转课堂教学法在蛋白质免疫印迹教学中的实践探索

学习蛋白质免疫印迹对培养医学生基础科研能力具有重要意义。本文探讨基于雨课堂智慧教学平台,PBL结合翻转课堂教学法在蛋白质免疫印迹实验教学中对提高学生自学能力、动手能力及科研能力的作用。

液相沉积法制备蛋白质印迹聚合物及吸附性能表征

本文采用液相沉积法制备蛋白质印迹聚合物,并对其形貌、吸附性能、特异性、选择性吸附进行表征。实验结果表明:用液相沉积法制备的蛋白质印迹聚合物具有规则球形形貌;通过与非印迹聚合物吸附性能的对比,结果表明蛋白质印迹聚合物具有较好的特异性、选择性吸附能力。以上实验结果说明液相沉积法是一种制备蛋白质印迹聚合物的良好方法。

间接免疫荧光法与蛋白质免疫印迹试验检测自身免疫性肝炎抗体的效果

目的分析采用间接免疫荧光法与蛋白质免疫印迹试验(Western blotting)检测自身免疫性肝炎(AIH)抗体的效果。方法选择2017年2月—2018年6月云南省滇南中心医院(红河哈尼族彝族自治州第一人民医院)收治的231例肝炎患者作为研究对象,包括AIH组(33例)、病毒性肝炎组(136例)、原发性胆汁性肝硬化(PBC)组(59例)和原发性硬化性胆管炎(PSC)组(3例);另选择同期63名健康体检者作为健康对照组。采用间接免疫荧光法检测AIH中抗核抗体(ANA),采用Western blotting检测抗线粒体抗体M2(AMA-M2)、抗肝/肾微粒体抗体Ⅰ型(LKM-1)、抗可溶性肝抗原抗体/肝胰抗原抗体(SLA/LP)、抗平滑肌抗体(ASMA)与抗肝细胞溶质抗原Ⅰ型抗体(LC-1)等。结果ANA在AIH组、PBC组、PSC组的阳性检出率明显高于病毒性肝炎组和健康对照组〔72.73%(24/33)、88.14%(52/59)、66.67%(2/3)比30.15%(41/136)、6.35%(4/63),均P<0.05〕;AIH组中LKM-1、LC-1、SLA/LP、ASMA的阳性率以及PBC组中AMA-M2的阳性率均明显高于病毒性肝炎组和健康对照组〔LKM-1:15.15%(5/33)比0.74%(1/136)、0.00%(0/63),LC-1:9.09%(3/33)比0.00%(0/136)、0.00%(0/63),SLA/LP:3.03%(1/33)比0.00%(0/136)、0.00%(0/63),ASMA:57.58%(19/33)比0.74%(1/136)、0.00%(0/63),AMA-M2:93.22%(55/59)比4.41%(6/136)、0.00%(0/63),均P<0.05〕。结论临床上针对AIH抗体采用间接免疫荧光法联合Western blotting检测,具有较高的诊断效率,值得推广应用。

蛋白质印迹法在氟中毒研究中的应用

氟是机体必需的微量元素,如果体内氟蓄积增多,可以引起氟中毒。蛋白质印迹法是生物医学科研中鉴定目的蛋白表达的常用手段,本文对蛋白质印迹法在氟中毒研究中的应用进行介绍。

用双向电泳及蛋白质印迹技术筛选乳腺癌相关抗原

目的:应用双向电泳及免疫印迹技术分析乳腺癌MCF-7细胞总蛋白,寻找乳腺癌相关抗原。方法:提取乳腺癌MCF-7细胞总蛋白,双向电泳技术(2-DE)对总蛋白进行分离后转膜,将健康人血清(对照组)和乳腺癌患者血清(实验组)作为一抗进行蛋白质印迹(Western blotting)分析,寻找杂交蛋白点的差异。结果:MCF-7总蛋白双向电泳考马斯亮蓝染色图谱共检测到248个蛋白质斑点,Western blotting显示实验组抗原抗体反应点23个,对照组为13个,找到10个差异蛋白点。结论:乳腺癌患者血清中的抗体表达水平有改变,这10个差异蛋白点有可能是乳腺癌相关抗原。

抗虫转基因欧洲黑杨的Western印迹法分析

抗虫转基因欧洲黑杨的Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹法分析陈颖，李强，李玲，韩一凡，田颖川（中国林业科学研究院林业研究所北京１０００９１）（中国科学院微生物研究所北京１０００８０）关键词Ｂｔ．基因，转基因欧洲黑杨，Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹法ＷＥＳＴＥＲＮＢＬＯＴＡＮＡＬ...