五龄家蚕若干组织器官蛋白质数据库构建

为构建家蚕蛋白质数据库，达到从蛋白质水平研究基因的表达及表达产物的加工修饰 的目的，采用五龄家蚕体壁、中肠和脂肪为材料获取蛋白质样品，用蛋白质双向电泳技术分 离、纯化蛋白质，对其中的４０个蛋白质斑点进行了氨基酸序列分析及同源性检索，发现其中 ５８．５％的蛋白质与果蝇的有关蛋白质具有较高同源性，３６．５％与其他生物的蛋白质具有较高 同源性，只有５％与家蚕已知蛋白质具有较高同源性。研究发现有２７个蛋白质的Ｎ－末端氨基 酸序列在家蚕中是第一次被检测到，并通过互联网向ＳＷＩＳＳ－ＰＲＯＴ数据库进行了登录。研究 证明利用蛋白质数据库的结果，可以得到基因表达及其产物修饰的信息。

利用INTERNET进行蛋白质结构的检索、图象显示和模型构建

生物大分子的三维结构是了解生物分子功能的前提,对于分子生物学家、细胞生物学家和生物化学家建立生物过程的分子机制越来越重要。近年来生物大分子的三维结构信息增长极快。据纽约Brookhaven国家实验室Protein Data Bank(PDB)统计的数据,从1992至1995年该库收集的生物大分子结构的数目分别是1007,1727,2921和3821,平均年递增50％。面对如此大量而且不断增加的结构数据。

水稻脂质转移蛋白基因的分离和分析

用水稻脂质转移蛋白（ｌｉｐｉｄｔｒａｎｓｆｅｒｐｒｏｔｅｉｎ，ＬＴＰ）的ｃＤＮＡ（ｐＦＤＲＳＣ１１０）为探针，从水稻（ＯｒｙｚａｓａｔｉｖａＬ．ｓｐ．ｉｎｄｉｃａ）“广陆矮４号”基因文库中筛选出ＬＴＰ基因，完成了１．８ｋｂ长片段的序列测定。该基因编码一个１２１个氨基酸组成的肽，编码区中间有一个９０ｂｐ的内含子，基因的调控区除有２个ＴＡＴＡｂｏｘ和ｐｏｌｙＡ加工信号外，还存在多个回文序列和逆向重复序列。该基因编码的蛋白质Ｎ端是由２８个氨基酸组成的信号肽，同源性比较表明它具有典型的植物ＬＴＰ特征。

SARS-CoV与SARS-CoV-2结构蛋白辅助T细胞表位的预测及比较

目的通过预测分析严重急性呼吸综合征冠状病毒(SARS-CoV)与SARS-CoV-2结构蛋白中潜在的辅助性T细胞(Th细胞)表位,为新型冠状病毒疫苗的开发设计寻找合适的靶点。方法在美国国家生物技术信息中心的GenBank数据库中检索SARS-CoV与SARS-CoV-2病毒的参考序列,利用序列对比软件MEGA7和GeneDoc对2种病毒的刺突蛋白(S蛋白)、包膜蛋白(E蛋白)、膜蛋白(M蛋白)和核衣壳蛋白(N蛋白)的氨基酸序列进行比较分析。利用SYFPEITHI、IEDB和NetMHCIIpan在线生物信息学工具预测筛选SARS-CoV和SARS-CoV-2可能的Th细胞表位,并在此基础上寻找2种病毒同源的潜在表位。最后利用ProtScale对含同源表位的蛋白质进行疏水性分析比较。结果2种病毒S蛋白同源性为75%,其他蛋白同源性分别为E蛋白94%、M蛋白90%及N蛋白90%。在线软件预测到SARS-CoV-2有22个潜在的Th细胞表位,SARS-CoV有25个潜在的Th细胞表位。进一步对比获得2对完全同源表位和6对高度同源表位,位于3对蛋白中,且ProtScale对比分析2种病毒相应蛋白的疏水性差异微小。结论对比分析得到8对完全同源或高度同源表位,且含差异氨基酸的对应肽段疏水性差异较小,同源性较高的Th细胞表位可考虑作为SARS-CoV-2疫苗设计的候选表位。

信号转导和转录活化因子3与磷酸酶及张力蛋白同源物基因在大肠癌组织中的表达及意义

目的 探讨信号转导与转录活化因子3（stat3）及磷酸酶及张力蛋白同源物基因（PTEN）在大肠癌患者体内的表达情况和临床意义.方法 采用免疫组化SP法检测88例大肠癌组织和20例正常结直肠组织中stat3和PTEN蛋白的表达.结果 88例大肠癌组织中49例stat3表达阳性,43例PTEN表达阳性;而20例正常结直肠组织中2例stat3表达阳性,20例PTEN表达阳性.Stat3在大肠癌组织中的表达显著高于其在正常结直肠组织中的表达（χ2=11.87,P＜0.05）,PTEN在大肠癌组织中低表达（χ2=15.49,P＜0.05）.Stat3和PTEN的表达与肿瘤组织学分型、Dukes分期、淋巴结是否转移相关（P＜0.05）.结论 Stat3和PTEN在大肠癌组织中的表达与肿瘤组织学分型、Dukes分期及淋巴结转移相关,是评估大肠癌生物学行为及预后的重要指标.

HIPK3基因3'UTR双荧光素酶报告质粒的构建及其与靶向miR-146的验证

目的构建HIPK3基因3'非编码区(3'UTR)双荧光素酶报告质粒,分析miR-146对HIPK3的调控作用。方法通过miRDB数据库和DIANA TOOLS数据库预测miR-146与HIPK3基因的结合位点。将HIPK3基因的3'UTR序列以及其突变体插入至荧光素酶报告质粒psi CHECK-2,构建野生型(HIPK3-WT)及突变型HIPK3-MU)重组双荧光素酶报告质粒。将培养的293T细胞分为6组,1)HIPK3-WT+NC阴性对照;2)HIPK3-WT+miR-146a mimics;3)HIPK3-WT+miR-146b mimics;4)HIPK3-MU+NC阴性对照;5)HIPK3-MU+miR-146a mimics;6)HIPK3-MU+miR-146b mimics,48 h后检测6组细胞中荧光素酶活性。结果成功构建了HIPK3-WT及HIPK3-MU重组双荧光素酶报告质粒;HIPK3-WT和miR-146b mimics共转染293T细胞后,荧光素酶活性降低(P<0.05)。结论 miR-146a与HIPK3基因不存在靶向关系,miR-146b可以调控HIPK3基因3'UTR。