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题名应用微量蛋白质定量分析评估临床样本炎性反应状态
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作者
叶雨昕
李慧娴
阎涛
张赟
孙玉琳
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机构
国家癌症中心/国家肿瘤临床医学研究中心/中国医学科学院北京协和医学院肿瘤医院分子肿瘤学国家重点实验室
国家癌症中心/国家肿瘤临床医学研究中心/中国医学科学院北京协和医学院肿瘤医院麻醉科
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出处
《基础医学与临床》
CAS
2024年第5期690-698,共9页
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基金
国家自然科学基金(82073327)
中国医学科学院医学与健康科技创新工程经费(2021-I2M-1-066)
国家重点研发计划“中医药现代化”重点专项(2023YFC3503225)。
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文摘
目的比较实时荧光定量PCR(qPCR)和微量蛋白质定量分析方法在乳腺癌患者外周血单核细胞中炎性相关因子caspase-1和IL-1β表达检测中的效果差异。方法收集10例乳腺癌患者的术前、术后2 h配对外周血样本各约6 mL,分离出外周血单核细胞并通过脂多糖活化;分别用qPCR和微量蛋白质定量分析方法,检测caspase-1和IL-1β在单核细胞中的mRNA和蛋白质表达水平,并使用了β-actin进行了数据归一化,比较两种检测方法结果的异同,并评估其优缺点。结果绝大部分患者经过手术应激后外周血单核细胞数量明显增加。在mRNA水平上,与术前相比,术后caspase-1和IL-1β在50%(5/10)和40%(4/10)的患者中呈现升高趋势,其余表现为降低(分别为40%和50%)或改变甚微无统计学意义(均为10%)。而微量蛋白质定量分析结果显示,与术前相比,术后caspase-1和IL-1β蛋白在60%(6/10)和60%(6/10)的患者中呈现升高趋势,其余表现为降低(分别为30%和20%)或改变较小无统计学意义(分别为10%和20%),且80%的患者在术后出现了明显增加的caspase-1和IL-1β活性切割电泳条带。重要的是,有30%和40%的患者手术前后caspase-1和IL-1βmRNA和蛋白质水平变化不一致。结论微量蛋白质定量分析方法具有样本用量少、灵敏度高、重复性好、操作相对简单等优点,更适于临床样本的炎性反应状态评估。
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关键词
炎性相关因子
CASPASE-1
IL-1Β
微量蛋白质定量分析系统
实时荧光定量PCR(qPCR)
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Keywords
inflammation-associated factors
caspase-1
IL-1β
trace-level proteins quantitative analysis
real-time quantitative polymerase chain reaction(qPCR)
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分类号
R331
[医药卫生—人体生理学]
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题名Western印迹中蛋白质定量分析的替代方法
被引量:6
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作者
王尧尧
税朝祥
方秋红
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机构
清华大学第一附属医院中心实验室和内科
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出处
《细胞生物学杂志》
CSCD
2007年第2期296-298,共3页
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基金
清华-裕元基金资助项目~~
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文摘
Western印迹广泛采用显像密度计法对特异性蛋白质表达进行定量,但是仍然存在敏感性的问题尚未解决。同时,昂贵的试剂与复杂的设备限制了其应用。建立了一种改良定量检测法,使用碱性磷酸酶标记的第二抗体,以萘酚磷酸盐和快红作反应底物。吸附膜上的终末显色用有机溶剂洗脱,通过测定光吸收值定量。结果显示该法更简便、快速、经济而不失其敏感性。
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关键词
WESTERN印迹
蛋白质定量分析
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Keywords
Western blotting
protein quantitative analysis
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分类号
Q51-33
[生物学—生物化学]
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题名蛋白免疫印迹和全自动蛋白质定量分析的比较研究
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作者
雷虹
胡峰瑞
陈妍珂
苟兴春
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机构
西安医学院基础与转化医学研究所
西安交通大学医学院
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出处
《生物医学》
CAS
2021年第2期113-119,共7页
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文摘
目的:比较传统的蛋白免疫印迹和全自动蛋白质定量分析检测特异性蛋白质相对含量的差异,并进行方法学优化,为蛋白质定量分析提供技术参考。方法:分别使用两种系统对不同分子量的目标蛋白进行检测,比较两种系统的灵敏度、重复性和适用范围。结果:相比传统WB系统,全自动系统灵敏性、重复性和稳定性更高,并且可进行多分子同时检测,尤其在检测微量蛋白、分子量较大或较小的蛋白以及高通量方面具有优势。结论:全自动蛋白检测是一种灵敏、高效的检测特异性蛋白丰度变化的系统,值得在科研和医学检验中推广。
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关键词
蛋白免疫印迹
全自动蛋白质定量分析
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分类号
R73
[医药卫生—肿瘤]
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题名集成化蛋白质组定量分析平台的构建及应用
被引量:1
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作者
周愿
张珅
袁辉明
张丽华
张玉奎
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机构
中国科学院大连化学物理研究所 中国科学院分离分析化学重点实验室 国家色谱研究分析中心
中国科学院大学
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出处
《色谱》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第4期355-360,共6页
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基金
国家重大科学研究计划(2012CB910604)
国家重大科学仪器设备开发专项(2012YQ120044-2)
国家自然科学基金项目(21190043)
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文摘
为提高蛋白质组定量分析的准确度、通量和自动化程度,构建了由微升级混合离子交换色谱、亲水型固定化酶反应器(hIMER)和纳升级反相色谱-电喷雾串级质谱(nanoRPLC-ESI-MS/MS)组成的集成化蛋白质定量分析平台。该平台实现了二甲基化标记蛋白质样品在线分离、酶解、肽段分离鉴定和定量分析。采用质量比为1∶1的轻、重标记的蛋白质样品考察该平台的定量性能,发现蛋白质水平二甲基化标记效率为90%;蛋白质经hIMER在线酶解10 min产生的漏切及酶解产物在hIMER柱上的非特异性吸附对定量准确度的影响较小,所有定量到的重/轻标记的蛋白质质量比的平均值为1.01。最后将该平台应用于小鼠腹水型肝癌淋巴道高、低转移细胞系差异蛋白质的分析,发现了12种蛋白质在高转移细胞系中低表达,15种蛋白质在高转移细胞系中高表达。以上结果证明了该平台可以实现高准确度和高通量的蛋白质组定量分析。
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关键词
集成化蛋白质组定量分析平台
蛋白质标记
定量蛋白质组学
亲水型固定化酶反应器
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Keywords
integrated proteome quantification platform
protein labeling
quantitative pro-teomics
hydrophilic immobilized enzymatic reactor(hIMER)
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分类号
O658
[理学—分析化学]
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题名吖啶类荧光探针用于微量蛋白质测定的研究
被引量:2
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作者
张丽娟
吴文强
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机构
福建生物工程职业技术学院药学系
福建广生堂药业股份有限公司
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出处
《化学工程师》
CAS
2014年第11期23-26,共4页
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文摘
目的:利用合成的3种新型的蛋白质分子荧光探针N-(2-二甲氨基)乙基-9-氯吖啶-4-甲酰胺(NCAF)、9-[(N-2-二甲氨乙基)吖啶-4-甲酰胺]-α-丙氨酸(NAFA)和4,9-二[N-(2-二甲氨基)乙基]-9-吖啶胺-4-甲酰胺(DNAF)结合荧光发射光谱,建立了3种新的微量蛋白质测定方法。方法:通过建立适宜的NCAF-SDS(十二烷基硫酸钠)、NAFA-SDS和DNAF-SDS荧光猝灭体系,牛血清白蛋白(BSA)的加入对体系的荧光具有恢复作用,并随着BSA加入浓度的增大,荧光恢复程度逐渐增强,并在一定的浓度范围内呈线性关系,由此建立了用新型吖啶类荧光探针测定BSA的荧光分析新方法。结果:从NCAF、NAFA到DNAF测定线性范围分别为5.0×10-9~6.8×10^-7,9.0×10^-9~8.2×10^-8和5.0×10^-9~8.3×10^-7mol·L^-1;测定灵敏度(3σ/K)分别为1.1×10^-10,3.8×10^-10和1.0×10^-10mol·L^-1。结论:该测定方法具有良好的荧光响应和稳定性,为微量蛋白质定量分析提供了新的技术体系。
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关键词
吖啶类荧光探针
蛋白质定量分析
荧光分析法
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Keywords
acridine fluorescence probes
quantitative protein analysis
fluorescence analysis method
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分类号
O657
[理学—分析化学]
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