人蛋白质二硫键异构酶cDNA基因的克隆及在大肠杆菌中的表达

从人胚胎肝组织中分离纯化出总ＲＮＡ，在总ＲＮＡ中提取ｍＲＮＡ，经逆转录得到ｃＤＮＡ第一条链，并以之为模板和相应寡聚脱氧核苷酸为引物，进行ＰＣＲ合成人蛋白质二硫键异构酶（Ｐｒｏｔｅｉｎｄｉｓｕｌｆｉｄｅｉｓｏｍｅｒａｓｅ，ＰＤＩ）ｃＤＮＡ基因，将所得ｃＤＮＡ克隆到质粒ｐＵＣ１８上，转化大肠杆菌ＤＨ５α细胞，进行诱导表达筛选和活性筛选。将筛选的基因克隆到载体ｐＢＶ２２０上，在大肠杆菌细胞中表达，产物以溶解形式在胞浆中表达。表达产物经硫酸铵分级沉淀和ＤＥＡＥＳｅｐｈａｒｏｓｅＦａｓｔＦｌｏｗ柱层析分离，产物的纯度与活性分别为９０％、１１００ｕ／ｇ。