运用蛋白质指纹图谱技术建立系统性红斑狼疮诊断模式的研究

目的运用蛋白质指纹图谱技术筛选系统性红斑狼疮(SLE)患者血清中的特异性蛋白标志物,建立SLE疾病相关的蛋白质组学诊断模型。方法联用弱阳离子磁珠与蛋白质芯片阅读仪绘制64例SLE患者组及168例对照组的血清蛋白质指纹图谱,用Biomarker Patterns Software5.0(BPS)软件筛选特异性的血清蛋白标志物并建立SLE诊断模型。结果在SLE患者组和对照组之间找到60个差异蛋白峰(P<0.05),其中28个蛋白峰在SLE患者表达增高,32个蛋白峰表达降低。由BPS软件筛选的4个蛋白标志物(质荷比为3376.02、4070.09、7770.45、28045.10)建立的诊断模型能很好的把SLE患者与其他自身免疫性疾病和健康对照者区分出来,经过盲法验证,其对SLE的诊断敏感性为78%,特异性为96%。结论采用蛋白质指纹图谱技术能筛查识别出与SLE疾病相关的特异性血清蛋白标志物,由4个质荷比分别为3376.02、4070.09、7770.45和28045.1的SLE特异性血清蛋白标志物建立的SLE疾病诊断模型具有高敏感性及特异性。

用超敏感银染SDS-PAGE方法绘制黄瓜、菜豆蛋白质指纹图谱

利用超敏感银染SDS -PAGE方法对黄瓜胚轴和菜豆胚轴、胚根组织的全蛋白指纹图谱作了初步分析 ,黄瓜胚轴至少有 4 0条蛋白质谱带被检测到 ;菜豆胚轴中有 50多条、胚根 60多条蛋白质谱带被检出 ,谱带清晰、稳定 ,个体间谱型一致 ,且分离过程短 ,减少了蛋白质的部分变性和损失 。

利用SELDI-TOF-MS蛋白质指纹图谱技术建立肺腺癌诊断模型

目的:寻找肺腺癌患者血浆(清)蛋白特异性生物标志物,用最佳的标志蛋白组合建立肺腺癌诊断模型,并探讨其用于肺腺癌筛查的可行性。方法:应用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术及CM10芯片,检测45例肺腺癌患者和40例正常人血清蛋白质指纹图谱,用Biomark Wizrd和Biomark Patterns Software软件对结果进行分析,建立肺腺癌诊断模型;双盲法分析另外19例肺腺癌和20例正常人血清的SELDI质谱数据,验证该模型诊断肺腺癌的准确度。结果:肺腺癌患者和正常人血清蛋白质指纹图谱间有31个差异蛋白(P<0.05),其中以分子量为11.66kD的蛋白在两组血清中的差异最为显著(P<10-7),该蛋白对诊断肺腺癌有很强的敏感性和特异性;软件自动筛选出分子量为11.66kD的标志蛋白为主根结点,联合3882.9、4673.2、3158.2和2047.2等4个标志蛋白建立了最佳的肺腺癌诊断模型,对肺腺癌诊断(盲法)的敏感性为84.2%(16/19),特异性为90.0%(18/20)。结论:SELDI-TOF-MS技术建立的肺腺癌血清检测法,快速、简单、特异和敏感,为肺腺癌诊断和筛查提供了一个可行的途径和方法。

蛋白质指纹图谱模型在肝癌诊断中的应用

目的:建立基于人工神经网络的血清蛋白质指纹图谱模型,并探讨其在肝癌诊断中的应用。方法:应用表面增强激光解析-电离-飞行时间质谱仪(SELDI-TOF-MS),测定了52例肝癌和32例健康人血清标本的蛋白质指纹图谱,并结合人工神经网络方法进行数据分析。将84例标本随机分成训练组56例(肝癌35例,健康人21例)和盲法测试组28例(肝癌17例,健康人11例)。利用从训练组得出的基于人工神经网络的血清蛋白质指纹图谱模型,对28例未知血清进行检测,并与甲胎蛋白(AFP)判断结果进行比较。结果:应用该方法对肝癌进行诊断的准确率、敏感性和特异性均为100%(17/17,11/11)。AFP检测结果准确率为77.4%(65/84),灵敏度和特异性分别为69.2%(36/52)和90.6%(29/32)。结论:该方法在肝癌的诊断中较AFP具有更高的敏感性和特异性。

蛋白质指纹图谱技术在肺癌分子标志物研究中的应用

目的分析肺癌与肺部良性疾病及正常人血浆蛋白质指纹图谱的变化,建立肺癌血浆标志物诊断模型。方法应用蛋白质指纹图谱(SELDI-TOF-Ms)技术检测108例肺癌患者、40例肺部良性疾病患者和22例正常人血浆标本,采用层次聚类分析和主成分分析建立决策树模型,应用该模型盲筛21例肺部良性疾病和47例Ⅰ期肺癌。结果筛选到23个差异蛋白峰(P<0.001)。盲筛分析显示决策树模型诊断敏感性和特异性分别为72.34%和71.43%,阳性预测值和阴性预测值分别为85.0%和78.95%,诊断正确性为72.06%。结论应用SELDI-TOF-Ms技术初步建立的蛋白质模型为肺癌的早期诊断提供了新的技术平台。

蛋白质指纹图谱技术在诊断白血病四种分型中的应用

目的对白血病典型的4种分型血清样本进行检测分析,建立白血病分型的蛋白质指纹图谱诊断模型。方法应用蛋白质指纹图谱技术检测16例急性粒细胞白血病M2a、18例慢性粒细胞白血病、14例急性淋巴细胞白血病及16例急性粒细胞白血病M3,采用Biomarker Wizard及Biomarker Patterns 5.0软件进行标记物的比较判别,建立决策树诊断模型。结果由m/z 3 376、8 055及9 421建立决策树诊断模型,其中16例急性粒细胞白血病M2a检出率为75.0%(12/16)、9例慢性粒细胞白血病检出率为100.0%(18/18)、14例急性淋巴细胞白血病检出率71.4%(10/14)、16例急性粒细胞白血病M3检出率为87.5%(12/14)。结论由3个蛋白标记峰构成的蛋白质指纹图谱诊断模型为白血病4种分型的诊断提供了新的借鉴和参考。

利用蛋白质指纹图谱技术检测硒诱导金属硫蛋白实现大鼠肝纤维化防护作用

【目的】探索硒诱导金属硫蛋白及其对大鼠肝纤维化防护作用的蛋白质指纹图谱改变。【方法】利用表面增强的激光解析离子化-飞行时间-质谱(SELDI-TOF-MS)技术测定硒对金属硫蛋白的诱导,寻找大鼠肝纤维化的异常蛋白表达标志并评估硒代金属硫蛋白的防护作用。【结果】IMAC-Cu蛋白质芯片6279 Da和6650Da处特征性MT蛋白质表达增强证实硒对MT的高诱导作用;肝组织点样的WCX2芯片5 140Da综合峰的两峰与正常组相对应处比较明显倒置,血清点样的H4芯片7 105 Da左右的蛋白质出现高表达,4 820Da左右的蛋白质表达受抑,三种图谱变化是大鼠酒精性肝纤维化的相关信号蛋白;硒诱导MT增高后上述异常表达均有改善,说明有机硒对肝纤维化有防护作用。【结论】组织和血清的蛋白质指纹图谱可以作为肝纤维化疗效监测和评价的一类标志物,为今后进行更多的药物或方法筛选奠定了一种可以尝试的试验模式。

蛋白质指纹图谱技术探索硒诱导金属硫蛋白对小鼠肺纤维化的防护作用

【目的】利用蛋白质指纹图谱技术探索硒诱导金属硫蛋白(metallothionein,MT)对小鼠肺纤维化的防护作用。【方法】利用表面增强的激光解析离子化-飞行时间-质谱(SELDI-TOF-MS)技术测定硒对MT的诱导,寻找小鼠肺纤维化的异常蛋白表达标志并评估硒代MT的防护作用。【结果】IMAC-Cu芯片表达的蛋白质中发现分子量为6277 Da的一组脱金属MT2蛋白表达增强证实硒对MT的高诱导作用;在WCX2和H4芯片中,发现肺纤维化小鼠中肺组织和血清中存在分子量分别为3880 Da和3 364 Da的两蛋白的表达与正常组比较明显受到抑制,硒诱导MT增高后上述异常表达均有改善,说明有机硒可能对肺纤维化诱导产生的蛋白异常具有一定的防护作用。【结论】利用蛋白质指纹图谱技术分析组织和血清的蛋白特异性表达可以作为肺纤维化疗效监测和评价的一类标志物,为今后进行更多的药物或方法筛选提供了一种可以尝试的实验模式。

蛋白质指纹图谱技术及其在骨科中的应用

蛋白质组学从整体角度分析细胞内动态变化的蛋白质组成成分、表达水平与修饰状态,了解蛋白质之间的相互作用与联系。蛋白质组学研究技术主要以分离技术和生物质谱技术为支撑平台,生物信息学为桥梁,对蛋白质表达进行研究分析,通过肿瘤患者体液中蛋白质组的变化,发现特异的肿瘤标志物,以达到对肿瘤的早期诊断;对早期状态的肿瘤蛋白质组学分析,可进一步了解肿瘤早期发生,并为发现早期诊断的候选标志物提供可能;分析体液的蛋白质指纹图谱技术(SELDI-TOF-MS)的研究,可为骨肿瘤的早期发现、骨关节疾病及创伤骨科疾病的疗效判断提供有力依据。

脑脊液蛋白质指纹图谱技术在结核性脑膜炎诊断中的作用

[目的]研究脑脊液蛋白质指纹图谱技术在结核性脑膜炎(tubercular meningitis,TBM)诊断中的作用。[方法]应用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱技术(surface-enhanced laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry,SELDI-TOF-MS)检测80例脑脊液标本,其中TBM30例、化脓性脑膜炎30例及同期排除中枢感染的上呼吸道感染病例20例,用Biomarker Wizard软件分析找出差异蛋白峰,蛋白峰差异的比较使用Biomarker Patterns 5.0软件进行统计判别,建立决策树诊断模型,并通过盲法验证评价其准确性和有效性。[结果]蛋白质组谱图分析发现有9个差异显著的蛋白峰(P<0.01),4个在TBM组中高表达,m/z分别为15920.00,32540.50,7967.66,8046.85;有4个在TBM组中低表达,其m/z为8762.66,9411.40,6840.92,6649.47。由m/z为8046.85,15920.00及32540.50建立的决策树模型对TBM的诊断准确率为90%。通过盲法验证模型对TBM的诊断准确率为85%。[结论]由3个差异蛋白峰构成的TBM蛋白质指纹图谱诊断模型为TBM的诊断提供了新的借鉴和参考。

恶性肿瘤患者病情缓解后与持续稳定时蛋白质指纹的比较分析

目的比较分析恶性肿瘤患者病情缓解后与持续稳定时的蛋白质指纹。方法选择109例恶性肿瘤患者,1年后对其进行随访,在随访前后,应用CM10弱阳离子芯片结合表面增强飞行时间质谱(surface enhanced laserdesorption/ionization time of flight mass spectrometry,SELDI-TOF-MS)技术对其血清各进行1次检测。其中95例患者在1年后随访时,病情稳定,体检、影像学及肿瘤标志物检查均未显示肿瘤生长迹象(A组)。而另外14例患者在首次进行SELDI检测时,肿瘤标志物或影像学检查提示肿瘤生长,病情进展,并对其进行干预治疗(手术、放疗、化疗等),1年后随访时,患者病情达到稳定(B组)。其中A组第1次检测结果设为A1组,末次检测结果设为A2组;B组第1次检测结果设为B1组,末次检测结果设为B2组。采用Protein Chip 3.2.0和Biomarker Wizard 3.1软件比较各组间有无差异指纹。结果 A1组-A2组:M/Z:2073、4116、2901表达上调,M/Z:3568表达下调;A1组-B2组:M/Z:18548、5335表达上调,M/Z:5315、2154表达下调;A2组-B2组:M/Z:4677、3242、5335、4629、9502、6104、18548、9336表达上调,M/Z:8604、5135、2154表达下调。结论恶性肿瘤病情缓解的患者,与病情持续稳定的患者,在蛋白质水平仍有一定差异,其长期预后可能有所不同,仍需进行1年的随访,来明确其病情变化。

基于人工神经网络的血清蛋白质指纹图谱模型在先天性巨结肠患儿诊断中的应用

目的建立蛋白质芯片技术检测血清蛋白质指纹图谱的方法,探讨基于人工神经网络(ANN)的血清蛋白质指纹图谱模型在先天性巨结肠(HD)患儿诊断中的应用价值。方法应用蛋白质指纹图谱分析仪测定HD患儿64例、巨结肠类缘病患儿25例和健康儿童23例血清标本的蛋白质指纹图谱,并结合ANN方法进行数据分析。112例标本随机分成训练组66例(HD40例,巨结肠类缘病14例,健康儿童12例)和盲法测试组46例(HD24例,巨结肠类缘病11例,健康儿童11例)。利用从训练组得出的基于ANN的血清蛋白质指纹图谱模型,对46例未知血清进行检测,并与X线影像学检查结果进行比较。结果筛选出质荷比(m/z)位于7211.6和2864.8的蛋白质标志物2个。在HD组表达强度分别为6.15±2.21和2.78±1.21,巨结肠类缘病组表达强度分别为12.82±7.56和4.86±0.91(Pa<0.01)。筛选出m/z位于6884.2和5639.2的蛋白质标志物2个。HD组表达强度分别为4.09±1.78和15.57±8.87,健康对照组表达强度分别为8.31±3.07和30.31±6.18(P<0.01)。应用该方法对HD患儿进行诊断的准确率、敏感度和特异度分别为89.13%(41/46例)、87.50%(21/24例)和90.91%(20/22例),明显高于X线影像学检查68.8%(77/112例)、82.8%(53/64例)和50.0%(24/48例)。结论在HD患儿的诊断中,利用从训练组得出的基于ANN的血清蛋白质指纹图谱模型较传统方法有更高的敏感性和特异性。

类风湿关节炎患者血清蛋白质指纹图谱检测及其临床意义

目的初步探讨基于判别分析建立的血清蛋白质指纹图谱模型在类风湿关节炎(RA)诊断中的临床意义。方法用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱技术及配套蛋白质芯片检测60例RA患者和31例健康人的血清蛋白质指纹图谱,并采用SPSS12.0软件判别分析处理数据和筛选标志物,以建立诊断模型。结果质荷比(m/z)为3 975 Da,6 433 Da和15 129 Da的3个蛋白质峰组合构建的诊断模型鉴别RA患者和健康人的敏感性为80.0%(48/60),特异性为80.6%(25/31)。结论血清蛋白质指纹图谱在筛选RA患者血清中特异性蛋白标志物及其诊断方面具有一定价值。

正常产妇羊水、血浆蛋白质指纹图谱分析的研究

目的比对羊水、血浆蛋白质指纹图谱,寻找羊水特异性表达蛋白,为产科学的临床研究提供分子依据。方法应用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱仪采用4种不同原理的蛋白芯片检测了12名正常足月产妇的羊水、血浆蛋白质指纹图谱。结果羊水和血浆标本分别测得蛋白信号(信噪比大于3)150个和250个。4种芯片检出羊水特异性蛋白30个,相对分子质量为11 198、12705 Da的蛋白是比较确定的羊水特异性蛋白。结论羊水中存在特异性表达蛋白,其在妊娠相关生理、病理学中可能起重要作用。

蛋白质指纹图谱在胃癌新辅助化疗疗效评价中的应用

【目的】探讨蛋白质指纹图谱与胃癌新辅助化疗疗效的关系。【方法】采用SELDI-TOF蛋白质芯片技术,检测胃癌化疗前血清蛋白指纹图谱,通过比较分析发现差异蛋白质,进一步筛选与新辅助化疗疗效相关的血清蛋白质指纹图谱差异。【结果】17 162、22 331、29 901M/Z蛋白质在无效组中均高表达(P<0.01),有效组和健康组比较无统计学意义。【结论】17 162、22 331、29 901M/Z3种蛋白质有可能成为筛选胃癌新辅助化疗疗效的蛋白分子。血清蛋白质指纹图谱对筛选胃癌新辅助化疗疗效预测分子有潜在应用前景。

基于图象处理的蛋白质指纹图谱分析系统

醇溶蛋白质电泳分析法与计算机技术相结合正逐渐应用于农作物种子品种的鉴别。介绍一个基于图象处理的蛋白质指纹图谱分析系统，着重从图象处理、样品匹配及聚类分析等方面介绍该系统的功能、特点、技术实现及使用情况。

半夏属植物蛋白质指纹图谱的凝胶电泳分析

采用PAGE及SDS-PAGE法,分析了绵阳本地半夏属植物圆叶半夏的5个居群、狭叶半夏5个居群和中间过渡型半夏2个居群及虎掌等几个品种,以及采自湖北、平武半夏样品的POD同工酶、可溶性蛋白谱带及不同样品的POD活性;在此基础上通过对块茎可溶性蛋白谱带的UPGMA聚类分析,对15个样品的亲缘关系进行了初步探讨。

难治性癫癎患者血清蛋白质指纹图谱及与预后的临床研究

目的：探讨初发癫癎患者与难治性癫癎患者血清中蛋白质指纹图谱的差异性，并观察其与难治性癫癎患者预后的关系。方法：对我院神经内科门诊2008年10月至2010年10月就诊的1653例癫癎患者，根据国际抗癫癎联盟（ILAE）癫癎发作的分类方案，结合中华医学会《临床诊疗指南一癫癎病分册》癫癎的诊断原则和方法，筛选初发癫癎患者20例，难治性癫癎患者20例，抽取患者血清标本，用美国Ciphergen Biosystem公司的蛋白质指纹仪及WCX2蛋白质芯片，经蛋白质指纹图谱技术（SEL-DI-TOF-MS）检测两组患者血清的蛋白指纹图谱，比较其间的差异性；并对难治性癫癎的蛋白指纹图谱与其预后的相关性进行分析。结果：在指纹图上，质荷比（M／Z）为11100Da至11900Da之间出现一峰簇样指纹标志，且蛋白峰值大于5％。该质谱峰簇丰度在难治性癫痫患者中明显高于初发癫癎患者（P〈0．01）；采用Spearman相关分析难治性癫癎患者质谱峰簇丰度与其预后呈负相关（r=-0．528，P〈0．01），难治性癫癎预后不良者的丰度明显高于预后良好者（P〈0．01）。结论：难治性癫癎患者血清中有特异性质谱峰簇，且与难治性癫癎患者的预后密切相关，提示其可作为难治性癫癎病情和预后评估的重要指标，具有一定的临床指导意义。

用蛋白质指纹技术预测局部晚期胰腺癌伽玛刀治疗疗效的研究报告

目的:使用蛋白质指纹技术(SELDI)预测伽玛刀治疗局部晚期胰腺癌治疗效果的临床应用价值。方法:选择2010年2月-2014年10月本院35例行伽玛刀胰腺癌患者,于治疗前抽血保存于-80℃低温冰箱,伽玛刀治疗后2个月,按WHO实体间质谱技术(SELDE-TOF-MS),通过分析血清特异性蛋白质质谱图,寻找差异蛋白指纹。结果:有效组与无效组中共检测出56个蛋白质峰,其中丰度(M/Z)为3337、9234、11 650的蛋白质组指纹两组比较,差异有统计学意义(P<0.05),其中无效组上调的峰M/Z为3337、11 650,下调的峰M/Z为9234。结论:使用SELDI可以预测伽玛刀治疗局部胰腺癌的临床疗效,为临床治疗提供指导。