三种蛋白质生物素化化学方法的比较研究

本文以N-羟基丁二酰亚胺(N-Hydroxy succinimide,NHS)活化酯偶联法原理为基础,探究结晶偶联法、反应液直接偶联法及二环己基碳二亚胺(dicyclohexylcarbodiimide,DCC)偶联法之间的优劣。旨在为实验室安全有效、快捷便利地进行蛋白质生物素化提供更优选择。分别用上述三种方法对牛血清白蛋白(bovine albumin,BSA)进行生物素偶联实验,用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)以及紫外波谱扫描特征吸收峰鉴定偶联产物,用凝胶成像系统及Image Lab软件操作系统测定偶联产物相对分子质量,以此确定偶联比。结合上述定性、定量结果对三种偶联方法进行评价。结果显示,三种方法均可以将生物素偶联到BSA上。结晶偶联法首先通过化学合成活化酯并结晶,产率为37.28%,熔点为214~217,偶联比为8.9,单次反应成本128.71元;直接偶联法偶联比为7.0,单次反应成本34.01元;DCC偶联法偶联比为2.2,单次反应成本33.81元。综上可知,反应液直接偶联法相较于结晶法,其偶联效果与结晶偶联法相差无几;相较于DCC偶联法,其偶联反应进行过程中对载体蛋白的变性损失更小。且反应液直接偶联法操作简单,用时较短,过程安全,价格低廉。

蛋白质组亲和分离研究(Ⅰ) 蛋白质氨基生物素化反应条件的研究

运用SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳的方法,以马心肌红蛋白为代表研究蛋白质氨基生物素化的条件,包括蛋白质与生物素量的关系、反应物浓度、反应完全所需的时间以及蛋白质助溶剂对反应的影响等,为基于生物素 抗生物素蛋白质相互作用的亲和分离,简化复杂蛋白质组体系,实现蛋白质的分析鉴定奠定基础.