猪囊尾蚴抗原cC1 DNA疫苗和蛋白质疫苗联合诱导小鼠免疫应答

目的 :观察 c C1 DNA疫苗和蛋白质疫苗联合免疫对诱导 BAL B/ c小鼠免疫应答的影响。 方法 :雌性 BAL B/ c小鼠随机分为 4组 :A组 (DNA疫苗组 ) ,质粒 DNA以 1 0 d间隔免疫 3次 ;B组 (联合免疫组 ) ,质粒 DNA以 1 0 d间隔免疫 2次后以 GST- c C1融合蛋白加强免疫 1次 ;C组 (蛋白质疫苗组 ) ,分别在第 0、3周免疫接种融合蛋白 ;D组 (pc DNA3对照组 ) ,以 1 0d间隔 ,3次免疫接种质粒 pc DNA3。 EL ISA法检测血清样品中的特异性抗体水平以及实验小鼠脾脏淋巴细胞分泌 IFN- γ和IL- 4水平 ,以 MTT法行脾脏淋巴细胞增殖实验。 结果 :C组可诱导相对较强的小鼠免疫应答 ,其特异性 Ig G和 Ig G1以及脾脏淋巴细胞分泌 IL- 4水平均高于其他各组 (P<0 .0 5 ) ,免疫的类型以 Th2应答为主。B组诱导的特异性抗体水平和淋巴细胞分泌细胞因子水平均明显高于 A组 (P<0 .0 5 ) ,B组和 A组诱导的免疫应答类型均以 Th1应答为主。结论 :以 DNA prim ing-protein boost的策略可有效诱导较 DNA疫苗单独使用更高的特异性抗体应答 ,且以

日本血吸虫SjC23蛋白质疫苗对核酸疫苗免疫增强作用的研究

目的 研究 Sj C2 3蛋白质疫苗对 Sj C2 3DNA疫苗增强小鼠的免疫保护作用的效果。方法 分别构建和制备 Sj C2 3DNA疫苗 (pc DNA3.1- Sj C2 3)和 Sj C2 3大亲水片段融合蛋白质 (GST-HD)疫苗。把 48只 BAL B/ c小鼠随机分为 A、B、C、D 4组 ,每组 12只。 A组 (DNA和蛋白质疫苗联合免疫组 )每只小鼠分别在第 0、2周经股四头肌注射 10 0μg Sj C2 3质粒 DNA,在第 4周经背部皮下多点注射 5 0 μg GST- HD+5 0 μg CFA;B组 (Sj C2 3DNA组 )每只小鼠分别在第 0、2、4周经股四头肌注射 10 0 μg Sj C2 3质粒 DNA;C组 (蛋白质疫苗组 )于第 4周每鼠经背部皮下多点注射 5 0 μgGST- HD+5 0 μg CFA1次 ;D组 (对照组 )每鼠分别在第 0、2、4周肌注 10 0 μg pc DNA3.1。各组在末次免疫后 4周每鼠以 45± 2条日本血吸虫尾蚴攻击感染 ,攻击后 45 d剖杀小鼠 ,计数成虫及肝内虫卵数。在免疫前、末次免疫后和攻击后从小鼠尾静脉采血 ,分离血清 ,用 Western- blot法检测抗体反应。结果 联合组与质粒对照组相比 ,获得了 42 .9%的减虫率和 6 0 .0 %的减卵率 ,均显著高于单独Sj C2 3DNA疫苗组 2 8.1%的减虫率和 37.9%的减卵率 ,及单独蛋白质疫苗组 (GST- HD) 2 3.8%减虫率和 39.5 %的减卵率 (P均 <0 .0 5 )。联合组抗体水平?

重组大肠杆菌菌蜕与幽门螺杆菌蛋白质疫苗协同免疫BALB/c小鼠

目的:考察重组菌蜕和蛋白质疫苗混合后对BAB/c小鼠机体免疫反应的影响。方法:首先构建展示尿素酶B抗原表位的大肠杆菌菌蜕,同时通过融合PCR构建分子内佐剂蛋白质疫苗rLTBKAT,然后分别利用该菌蜕和蛋白质疫苗免疫BAB/c小鼠。结果:当rLTBKAT和重组菌蜕联合口服免疫BAB/c小鼠时,其抗尿素酶B抗体的效价由单独免疫时的1∶(239±23)提高到1∶(681±76),二者差异极显著(P=0.009);而其抗过氧化氢酶抗体的效价则由单独免疫时的1∶(2800±275)下降至1∶(1800±400),二者差异不显著(P=0.08)。抗体分型试验表明,单独和联合免疫时,其抗尿素酶B抗体类型均以IgG1为主,而抗过氧化氢酶抗体类型则由单独免疫时的IgG1为主转变为联合免疫时的IgG2a为主。联合免疫时,小鼠抗尿素酶B和抗过氧化氢酶IgA抗体水平均高于单独免疫时。结论:重组菌蜕和蛋白质疫苗联合免疫,可提高机体对某些抗原的免疫水平或改变其反应类型。

脑膜炎奈瑟菌的候选蛋白质疫苗

脑膜炎奈瑟菌是引起脑膜炎、菌血症等侵袭性疾病的重要病原菌，也可以无症状的鼻咽部带菌状态存在。分为13个血清群，但只有6个群（A，B，C，W-135，Y和X）与其致病性有关。目前应用的疫苗主要是荚膜多糖疫苗和多糖蛋白结合疫苗。两者本质上都属荚膜多糖抗原，覆盖的血清群有限，无法做到对B群脑膜炎奈瑟菌的预防，因此发展通用蛋白质疫苗势在必行。能作为候选疫苗的具有免疫原性的蛋白质需具备以下特点：在大多数菌株中都表达且结构保守；可诱生杀菌抗体或保护性抗体。

人丙型肝炎工程蛋白质疫苗

国内外概况: 人丙型肝炎是世界性病毒性肝炎,可导致肝硬化和肝癌,丙型肝炎在我国和东南亚远比乙肝严重,据上海初步普查,老年人口中30%为丙肝血清学阳性,中青年人中也有17%阳性。丙肝可通过输血、使用血液制品、密切的社会接触而传播。

CpG免疫刺激序列对DNA及蛋白质疫苗的免疫增强作用

CpG免疫刺激序列是一些以CpG为核心的具有很强免疫激活功能的核苷酸序列 ,对DNA疫苗及蛋白质疫苗均有极强的免疫增强作用。其作用机制可能与增强局部抗原提呈、诱发辅助T细胞活化及激活转录因子有关。CpG序列安全、经济、有效 。

蛋白质亚单位疫苗的前沿设计

疫苗的产生对人类健康的保障起着重大作用。从历史的角度而言，疫苗应用先于对免疫系统本身认识，并帮助人们对该系统进行深人的了解。随着科学的发展，特别是医学生物学。

弓形虫重组蛋白质疫苗和DNA疫苗的试验研究

目的:研究分析弓形虫重组蛋白质疫苗和DNA疫苗的实验研究方法。方法:拟分别构建含弓形虫靶抗原SAGl和GRA2的重组蛋白质疫苗和DNA疫苗,辅以合适的佐剂,优化免疫策略,选择合适途径免疫BALB/c小鼠,检测疫苗诱导小鼠的细胞免疫和体液免疫水平,最后进行免疫鼠抗攻击感染实验,观察小鼠生存时间,评价疫苗和佐剂的免疫保护效果,探讨疫苗和佐剂的作用性质与机理。结果:重组酵母表达载体pGAP-SAGl.GRA2成功构建,经PCR、酶切和测序鉴定正确;重组蛋白SAGl-GRA2在毕赤酵母中分泌表达,经Western blotting鉴定具有免疫原活性。弓形虫重组DNA疫苗pVAXl-GRA2、pVAXl-SAGl和pVAXl-SAGl-GRA2以及基因佐剂pVAXl-SPreS2成功构建,分别在HFF细胞中瞬时表达目的蛋白,经RT-PCR鉴定mRNA正确转录,Wester boltting鉴定表达产物具有免疫活性。结论:以SAG1-GRA2作为弓形虫蛋白质疫苗能够诱导小鼠产生体液免疫,同时也能够诱导小鼠产生Th1型细胞免疫,具有一定程度的抗弓形虫感染保护作用。

举足轻重的蛋白质药物

人工合成的蛋白质制品正风行全球。其开发、应用研究亦日趋成熟和深入。 提起蛋白质药物,我们并不陌生。乙肝疫苗、治疗肿瘤的IL-2和转移因子(TF)都是蛋白质。

Ag43/FGFR-1嵌合蛋白疫苗抗小鼠纤维肉瘤血管生成的实验研究

目的:利用Antigen43(Ag43)/成纤维细胞生长因子Ⅰ型受体(FGFR-1)重组嵌合蛋白作为疫苗,了解其是否具有抑制小鼠肿瘤生长的作用,并初步探讨其作用机理。方法:40只BALB/c雌性小鼠接种Meth A细胞后第7天,随机分为Ag43/FGFR-1蛋白免疫组(AF组)、Ag43蛋白免疫组(Ag43组)、FGFR-1蛋白免疫组(FGFR-1组)和生理盐水对照组(NS组)4组,每组10只,观察免疫治疗后的荷瘤小鼠肿瘤体积和生存曲线,分别用免疫组织化学方法检测肿瘤组织微血管密度(MVD),免疫印迹(W est-ern blot)方法检测抗自身FGFR-1的抗体,酶联免疫斑点试验(ELISPOT)检测分泌抗自身FGFR-1抗体的B淋巴细胞的数量。结果:Ag43/FGFR-1组与FGFR-1蛋白、Ag43蛋白、生理盐水对照组肿瘤组织MVD计数分别为11.9±2.3、59.6±3.8、60.6±1.2和61.9±3.4(P<0.01);与对照组相比,Ag43/FGFR-1组肿瘤体积明显变小(P<0.01),存活时间明显延长(P<0.01),血清中发现含有抗自身FGFR-1的抗体且发现小鼠脾脏中分泌抗自身FGFR-1抗体的B淋巴细胞数目明显增多(P(0.01)。结论:Ag43/FGFR-1蛋白质疫苗能够诱导荷瘤鼠产生特异性免疫反应,从而抑制肿瘤血管生成和肿瘤的生长。

人幽门螺杆菌热休克蛋白A编码基因的克隆、表达及抗原性研究

目的:构建含人幽门螺杆菌(Hpylori)热休克蛋白A编码基因的重组载体、进行核甘酸序列分析,并在E.coli BL21中表达,研究其抗原性,为疫苗的开发奠定基础方法:利用分子克隆技术从Hpylori DNA染色体中,扩增热休克蛋白A编码基因片段;将目的基因与载体pET32a(+)同时经kpn Ⅰ、BamH Ⅰ双酶切、纯化、连接后,转化含有目的基出的重组载体;以含目的基因片段的重组载体转化大肠杆菌BL21(DE30)并表达;表达产物经纯化后,用Western blot法检测其抗原性结果:经酶切、测序分析表明,插入的基出片段为Hpylori热休克蛋白A编码基因,与GenBank报道的相比较,有1.6％的碱基(bp)发生变异,1.6％的氨基酸残基改变.经SDS-PAGE分析发现,融合基因表达的蛋白M_r为33×10~3。其中pET32a(+)表达的蛋白Mr约为20×10~3,可溶性表达产物占全菌总蛋白的18.96％,重组蛋白经Ni^+-NTA琼脂糖树脂纯化后,其纯度达95％以上.用Westernblot方法检测显示,该重组蛋白可被Hpylori阳性患者的血清所识别,具有良好的抗原性。结论:成功地克隆并表达了Hpylori热休克蛋白A码基因,为Hpylori蛋白质疫苗的研制和快速诊断试剂盒的研究奠定了良好的基础。

胰腺癌疫苗研究现状

基于疫苗为基础的免疫机理,利用天然免疫系统,尤其是对TAA的识别和对新抗原产生效应。抗癌疫苗接种的目的是激活和扩大肿瘤特异性T细胞,作为引发或增强原先存在的抗肿瘤免疫应答手段。根据胰腺癌疫苗的分类对细胞疫苗(肿瘤或免疫细胞);蛋白质/肽疫苗;基因疫苗(李斯特菌疫苗)各类疫苗最新研究进展进行综述。

肺炎链球菌疫苗的研究

肺炎链球菌是细菌性肺炎的主要致病菌,当机体自身状态改变或伴有其他疾病时,肺炎链球菌可以发展为侵袭性疾病导致中耳炎、细菌性大叶肺炎、脑膜炎、菌血症等疾病。

肺炎链球菌疫苗研制进展

肺炎链球菌导致的疾病已成为全球一个重要的公共卫生问题。疫苗开发及使用成为重要的预防策略,目前肺炎球菌疫苗主要有多糖疫苗和多糖蛋白结合疫苗二类。对肺炎链球菌病原学、流行病学、所致疾病、疫苗研发进展及疫苗使用情况进行了综述。

新型结核病疫苗研究进展

本文从蛋白质亚单位疫苗、DNA疫苗、重组卡介苗、新型减毒活疫苗和以非致病性分枝杆菌为载体的重组疫苗几方面概括地介绍了目前新型结核病疫苗研制的现状。

肺炎链球菌新型疫苗研发进展

肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae,Spn)是近年来人们所重视的超级细菌之一,于1881年首次由美国陆军医师乔治·斯特恩伯格和法国化学家路易斯·巴斯德尔从患者痰液中分离获得。作为一种有荚膜的革兰阳性双球菌,肺炎链球菌是引起脓毒症、肺炎、脑膜炎、鼻窦炎的主要病原体。现有针对Spn感染的肺炎球菌多糖疫苗(Pneumococcal polysaccharide vaccine,PPV)和肺炎链球菌结合疫苗(Pneumococcal conjugate vaccine,PCV),但具有生产成本高、血清覆盖率有限等局限性。近年来疫苗的研发方向开始逐步转向改变疫苗的有效成分的方向,并因此出现了以蛋白质疫苗、全细胞疫苗、DNA疫苗为代表的新型肺炎球菌疫苗。本文对肺炎链球菌疫苗发展至今的研究进展进行总结,以期为未来的疫苗研制事业提供灵感与方向。