类黄酮化合物对糖基化反应终产物AGE的抑制作用

本研究比较了芸香苷 (G Rutin)、地奥明糖苷 (G Diosmin)、柚苷 (G Naringin)、橘皮苷 (G Hes peridin)对蛋白质糖基化反应的终产物AGE包括荧光性AGE、CML、Pentosidine的抑制作用。结果表明 ,各种类黄酮化合物对荧光性AGE、CML均有抑制作用 ,其抑制效果依次为芸香苷、地奥明糖苷、柚苷、橘皮苷 ,且比氨基胍的抑制作用相对持久。在对Pentosidine的抑制作用中 ,地奥明糖苷、柚苷、橘皮苷仅有微弱的抑制作用 ,而芸香苷则相反有一个促进作用。这可能是由于Pentosidine的生成路径与荧光性AGE和CML有所不同 ,有待进一步探讨。类黄酮化合物对AGE的抑制机理与其抗氧化性、消自由基作用有关。根据实验结果 ,笔者认为 ,芸香苷、地奥明糖苷、柚苷、橘皮苷等化合物对蛋白质的糖基化反应有抑制作用 。

晚期糖基化终产物对心肌细胞p57、p27、p21及hhLIM蛋白表达的影响

目的 探讨晚期糖基化终产物 (advancedglycationendproducts ,AGEs)对体外培养乳鼠心肌细胞p5 7、p2 7、p2 1及hhLIM蛋白表达的影响。方法 采用酶消化法体外培养乳鼠心肌细胞 ,实验前换用含 1%胎牛血清的DMEM培养液饥饿培养 2 4h。应用Western蛋白印迹法检测不同浓度AGEs(5 0mg L、10 0mg L)对心肌细胞刺激 12、2 4、4 8h后细胞中p5 7、p2 7、p2 1及hhLIM蛋白表达情况。结果 不同浓度的AGEs刺激心肌细胞 12h均可使p2 7蛋白表达增加 ,以 5 0mg L浓度作用更为明显 ,刺激 2 4、4 8h无影响。AGEs对p5 7蛋白的表达呈动态变化 :刺激 12h时表达下降 ,2 4、4 8h呈增加趋势。p2 1蛋白在心肌细胞表达较弱 ,AGEs对其表达无显著影响。AGEs增加hhLIM蛋白的表达 ,以 5 0mg L浓度作用 12h最为显著。结论 AGEs通过增加心肌细胞细胞周期素依赖性激酶抑制因子p5 7和p2 7蛋白及hhLIM蛋白的表达 ,参与心室重塑的发生和发展。

晚期糖基化终产物受体胞外段的原核表达及其相互作用蛋白的筛选

目的构建晚期糖基化终产物受体(receptor for ad-vanced glycation end-product,RAGE)胞外段基因的原核表达载体并诱导表达,应用噬菌体展示技术筛选其相互作用蛋白。方法用RT-PCR方法扩增人RAGE胞外段cDNA,构建于原核表达载体pET14b,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导RAGE胞外段融合蛋白表达,用Ni2+-NTA亲和层析柱进行纯化并行Western blot鉴定。以重组RAGE胞外段蛋白为靶分子,进行3轮噬菌体展示环七肽库的筛选,从第3轮洗脱物中随机挑选分隔良好的噬菌体克隆扩增后进行ELISA鉴定。对获得的阳性噬菌体克隆分别进行扩增、纯化,提取DNA测序后翻译为氨基酸序列,用BLAST软件搜索Gen-Bank中的同源序列。结果成功构建并表达、纯化了RAGE胞外段融合蛋白。经过3轮筛选后,随机挑取的24个噬菌体克隆中11个可与RAGE胞外段结合。对11个噬菌体测序后用BLAST软件搜索同源序列,得到14个编码蛋白。结论应用噬菌体展示技术筛选到与RAGE胞外段相互作用的蛋白,为进一步研究其功能和作用机制提供新线索。

茶多酚对蛋白质糖基化作用的影响

采用葡萄糖与谷氨酸在90℃下反应以及葡萄糖与牛血清白蛋白37℃反应模拟体外糖基化作用,通过在激发波长350nm,发射波长440nm测定荧光强度,探讨了不同浓度茶多酚对糖基化反应产物的影响。另外,腹腔注射链脲菌素(STZ)建立小鼠糖尿病模型,每天灌胃200mg/kg体重的茶多酚溶液,通过测定小鼠血清中糖化血红蛋白及糖基化终产物荧光强度的变化观察茶多酚对高糖机体内蛋白质糖基化的影响。结果表明:茶多酚对体外糖基化反应有抑制作用,而且存在剂量-效应关系;同时能降低糖尿病小鼠机体内糖化血红蛋白的含量,缓解由糖基化引起的糖尿病肾脏损伤。

糖基化终产物对培养的人脐静脉内皮细胞巨噬细胞炎性蛋白-1α表达的影响

目的 :探讨糖基化终产物 (AGEs)对人脐静脉内皮细胞巨噬细胞炎性蛋白 - 1αmRNA及蛋白表达的影响。方法 :将培养的人脐静脉内皮细胞 (HUVEC)用不同浓度 (10 0mg/L、2 0 0mg/L、4 0 0mg/L)的AGEs孵育 2 4h及同一浓度 (40 0mg/L)AGEs孵育 0h、12h、2 4h及 36h。采用原位杂交方法及Westernblot检测巨噬细胞炎性蛋白 - 1αmRNA及蛋白的表达水平。结果 :BSA组内皮细胞内巨噬细胞炎性蛋白 - 1α呈弱表达 ;10 0mg/L、2 0 0mg/L及 4 0 0mg/LAGEs孵育 2 4h后 ,各组内皮细胞内巨噬细胞炎性蛋白 - 1αmRNA表达的平均积分吸光度值分别为 18 76±3 17、2 6 5 8± 1 6 1及 34 2 3± 2 2 5 (BSA组为 13 83± 1 2 4 ,P <0 0 5 ) ;4 0 0mg/LAGEs孵育 12h、2 4h及 36h后 ,各组内皮细胞内巨噬细胞炎性蛋白 - 1αmRNA表达的平均积分吸光度值分别为 2 2 6 7± 1 4 6、34 2 3± 2 2 5及 4 2 2 8± 3 14 (0h组为 12 5 6± 1 2 4 ,P <0 0 5 )。 10 0mg/L、2 0 0mg/L及 4 0 0mg/LAGEs孵育 2 4h后 ,各组内皮细胞内巨噬细胞炎性蛋白 - 1α蛋白的表达量分别为BSA组的 1 34倍、1 87倍及 2 4 6倍 (P <0 0 5 ) ;4 0 0mg/LAGEs孵育 12h、2 4h及 36h后 ,各组内皮细胞内巨噬细胞炎性蛋白 - 1α蛋白的表达量分别为 0h组的 1 82倍?

糖基化终产物—牛血清白蛋白的制备和纯化

目的 制备高纯度的糖基化终产物(AGEs) 用作免疫原或检测标准品。方法 牛血清白蛋白(BSA) 与葡萄糖在体外共同孵育制备AGEs - BSA,经凝胶层析纯化后,应用荧光光谱和SDS- 聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定。结果 纯化后AGEs - BSA 与标准的AGEs - BSA 电泳图谱基本一致;激发和发射光谱均为单峰,分别位于360 nm 和446 nm 。结论 应用凝胶层析纯化AGEs - BSA

过敏性哮喘诱导痰中高迁移率族蛋白B1、晚期糖基化终产物受体表达与血清总免疫球蛋白E水平的相关性

目的检测过敏性哮喘病儿诱导痰中高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、晚期糖基化终产物受体(RAGE)表达及血清中免疫球蛋白E(IgE)水平,并探讨过敏性哮喘病儿诱导痰中HMGB1、RAGE表达与血清总IgE水平的相关性。方法选取2015年4月至2018年9月因过敏性哮喘于聊城市第二人民医院免疫专科门诊及病房接受治疗的148例病儿(哮喘组);同期选取136例健康体检儿童作为对照组。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测两组诱导痰中HMGB1、RAGE表达及血清总IgE水平;检测两组肺功能指标、粒细胞水平;分析哮喘组HMGB1、RAGE、IgE与肺功能指标、粒细胞水平相关性;分析哮喘组诱导痰中HMGB1、RAGE表达与血清总IgE水平相关性;分析影响过敏性哮喘的因素。结果哮喘组诱导痰中HMGB1(273.23±86.39)ng/L、RAGE表达(469.54±121.35)ng/L、血清总IgE水平(557.73±156.87)IU/mL、中性粒细胞(33.46±8.73)%、嗜酸粒细胞(7.48±2.64)%均显著高于对照组[(164.83±49.36)ng/L、(309.43±93.68)ng/L、(271.70±89.43)IU/mL、(25.47±6.14)%、(3.46±1.05)%](P<0.05),第一秒用力呼气量(FEV1)(63.19±8.27)%、用力肺活量(FVC)(65.42±6.93)%、最大呼气峰流速(PEF)(63.54±8.42)%水平均显著低于对照组[(89.38±13.21)%、(94.86±13.47)%、(103.24±14.17)%](P<0.05);过敏性哮喘病儿HMGB1、RAGE、IgE与FEV1、FVC、PEF水平均呈现负相关,与中性粒细胞、嗜酸粒细胞水平均呈现正相关(P<0.05);过敏性哮喘病儿诱导痰中HMGB1、RAGE表达与血清总IgE水平均呈现正相关(r=0.454、0.522,均P<0.05);HMGB1、RAGE、IgE、嗜酸性粒细胞是影响过敏性哮喘发生的危险因素。结论过敏性哮喘病儿诱导痰中HMGB1、RAGE表达与血清总IgE水平均呈现正相关,三者与过敏性哮喘病情密切相关。HMGB1、RAGE、IgE结合肺功能指标、粒细胞水平对评价过敏性哮喘的早期危险性有重要意义。

芝麻叶多酚的纯化及对蛋白质非酶糖基化的抑制作用

从D101、AB-8、NKA-9、S-8、ADS-5大孔吸附树脂中通过静态实验筛选出AB-8树脂,研究其对芝麻叶粗提物中多酚的静态吸附和解吸性能,并通过单因素实验确定AB-8树脂柱的最佳纯化工艺条件;然后,考察了芝麻叶多酚对体外蛋白质非酶糖基化终末产物(AGEs)生成的抑制作用。结果表明:AB-8大孔吸附树脂对芝麻叶多酚粗提物具有较好的分离纯化效果;AB-8树脂柱对芝麻叶多酚粗提物的最佳纯化条件为:上柱液体积12mL,上柱液浓度3.5mg/mL,pH5.0,洗脱体积为3BV(柱体积),依次以30%(v/v)和50%(v/v)乙醇溶液进行梯度洗脱,多酚纯度从16.88%分别提高到28.43%和45.71%,纯化产物分别命名为SPP1和SPP2。芝麻叶多酚粗提物、SPP1、SPP2对蛋白质非酶糖基化终产物的生成具有明显的抑制作用,抑制效果均优于阳性对照品氨基胍。

溶菌酶及其晚期糖基化终产物(AGEs)与糖尿病并发症的研究

溶菌酶又称胞壁质酶或N-乙酰胞质聚糖水解酶,其广泛分布于自然界各种生物体内,是一种无毒、无害、安全性很高的蛋白酶,被广泛应用于食品、饲料、医药等行业。本文重点介绍其在医药方面的应用,主要介绍溶菌酶如何通过去除晚期糖基化终产物来达到治疗糖尿病并发症效果的研究进展。

牛蒡子提取物的高效液相分析及其对蛋白质非酶糖基化的作用研究

目的：研究牛蒡子水提物和醇提物对蛋白质糖基化形成晚期糖基化终产物（advanced glycation end—products，AGEs）的作用。方法：1．牛蒡子提取物对AGEs形成的作用：分别采用水提法、醇提法对牛蒡子进行提取，并采用体外蛋白质非酶糖基化反应生成AGEs的模型，予系列浓度的牛蒡子水提物和醇提物孵育，用荧光分光光度计测定AGEs荧光强度的变化。

糖化和氧化产物修饰的蛋白质促进兔主动脉粥样斑块形成

目的 :探讨晚期糖基化终产物 (AGE)和晚期蛋白质氧化产物 (AOPP)对动脉粥样硬化斑块形成的影响。方法 :5 0只 1 2周龄新西兰白兔被随机分为 5组 (每组 1 0只 ) ,除对照组外均以高胆固醇饲料喂养并分别注射或不注射兔血清白蛋白及AGE或AOPP修饰的兔血清白蛋白。 1 0周后处死动物 ,取血清测血脂、AGE和AOPP水平 ;取主动脉全段 ,以苏丹IV染色 ,PHOTOSHOP○R软件分析粥样斑块占主动脉壁的相对面积 ;显微镜下测量粥样斑块的平均厚度。结果 :(1 )AGE和AOPP组主动脉全段的动脉粥样斑块相对面积 (5 0 .1 %± 7.4 %和 6 2 .4 %±8.8% )均明显大于单纯胆固醇喂饲组 (2 9.8%± 6 .3% )和白蛋白组 (2 0 .9%± 6 .4 % ) (P均 <0 .0 5 )。 (2 )AGE和AOPP组胸主动脉段粥样斑块的平均厚度 [(1 4 7.7± 1 3.1 ) μm和 (1 38.1± 1 3.0 ) μm]均明显大于单纯胆固醇喂饲组 [(85 .7± 1 5 .0 ) μm和白蛋白组 [(95 .5± 1 5 .7) μm](P均 <0 .0 5 ) ;(3) 4个喂饲高胆固醇饲料组的血脂水平无明显差异 ,注射AGE或AOPP的动物血清中AGE或AOPP水平明显增高 ,且与斑块相对面积呈正相关 (AGE与斑块相对面积 :r=0 .4 0 8,P =0 .0 0 5 ;AOPP与斑块相对面积 :r =0 .5 95 ,P =0 .0 0 0 )。结论 :AGE和AOPP促进高胆固醇动物动脉粥样斑块?

西红花酸对晚期糖化终产物诱导内皮细胞晚期糖基化终产物受体表达的抑制作用(英文)

目的:研究西红花酸对晚期糖基化终产物(AGE)诱导牛内皮细胞(BEC)中晚期糖基化终产物受体(RAGE)mRNA表达的抑制作用,并探讨其可能机制。方法:不同浓度的西红花酸(1、0.1、0.01μmol/L)预孵BEC细胞12h后,用AGE(100mg/L)刺激细胞12h,RT-PCR法测定RAGEmRNA的表达水平;ELISA法测定细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的表达;试剂盒分别检测胞外超氧阴离子和硫代巴比妥酸反应产物(TBARS)浓度;同时,还用2,7-二氯荧光素(DCFH)测定了胞内H2O2的浓度,并用罗丹明123(Rh123)荧光法及MTT法分别检测细胞线粒体膜电位(MMP)水平和其琥珀酸脱氢酶(MSDH)的活性。结果:与AGE模型组相比,西红花酸能显著抑制RAGE mRNA的表达(P<0.05),降低胞外超氧阴离子和TBARS(P<0.01或P<0.05)及胞内H2O2水平;结果还显示,西红花酸能提高细胞MMP水平和MSDH活性。对ICAM-1蛋白表达也有抑制作用,且呈时间和剂量依赖性。结论:西红花酸可能通过清除AGE与RAGE结合产生的活性氧(ROS)来抑制RAGE mRNA的高表达。提示西红花酸对糖尿病血管病变有潜在的治疗价值。

高度糖基化终产物对破骨细胞酸性磷酸酶和抗酒石酸酸性磷酸酶活性的影响

目的 观察高度糖基化终产物 (AGE)对破骨细胞酸性磷酸酶 (ACP)和抗酒石酸酸性磷酸酶 (TRACP)活性的影响。方法 用人血清白蛋白和葡萄糖恒温孵育制备人AGE蛋白 ,应用酶消化法从人髂骨松质骨分离培养破骨细胞。将AGE蛋白与培养的破骨细胞共同孵育 ,通过酶动力学法测定培养液ACP和TRACP活性。结果 低浓度AGE蛋白 (50～ 2 0 0 μg ml)对破骨细胞ACP和TRACP活性无显著影响 ,而高浓度 (50 0～ 1 0 0 0 μg ml)则使ACP和TRACP活性显著增高 ,且ACP活性的增高主要来自TRACP活性的增高。结论 上述结果提示AGE蛋白可能促进破骨细胞的破骨功能。

非酶糖化、晚期糖基化终产物与阿尔茨海默病

许多证据显示非酶糖化及其晚期产物-晚期糖基化终产物(AGEs)在阿尔茨海默病(AD)发病中的重要作用。AGEs促进蛋白交联;糖化β-淀粉样蛋白与AGEs受体相互作用激活小胶质和星形胶质细胞,促进氧化应激、分泌诱导型一氧化氮合酶和前炎症细胞因子,并损伤神经元,促进AD的发生发展。AGEs及其受体在AD中的可能作用机制为开发预防、治疗AD的新药提供理论基础。

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糖尿病一被世界卫生组织（WHO）列为继肿瘤、心脑血管病之后的第三大慢性非传染性疾病，是遗传因素与环境因素长期共同作用而导致的一种内分泌代谢紊乱性疾病，是人类的又一“杀手”。

重组大鼠溶菌酶N端多肽的原核表达及其对晚期糖基化终产物的结合作用

目的:探讨溶菌酶N端多肽片段基因的重组并在原核中表达,研究该片段与晚期糖基化终产物(advanced glycation end products,AGEs)的结合作用。方法:从SD大鼠外周血白细胞中抽提总RNA,经逆转录并扩增大鼠溶菌酶N端基因片段,以质粒pET-30 a(+)为载体构建表达质粒pLY77。含pLY77的工程菌Rosetta(DE3)经IPTG诱导,对该重组多肽进行高效表达。表达产物经N i+-NTA琼脂糖柱层析纯化后,得到的溶菌酶N端多肽片段LY77经SDS-PAGE和W estern印迹法鉴定,ELISA法分析体外结合活性。结果:LY77在Rosetta(DE3)中高效表达,主要以可溶性蛋白的形式存在,相对分子质量约为11 000;LY77对体外制备的晚期糖基化蛋白BSA-AGEs具有显著的结合活性。结论:LY77对AGEs具有很高的亲和力,为进一步探讨LY77可能应用于体内促进AGEs的清除和参与免疫调节作用奠定基础。