RNA干扰对SKOV3卵巢癌细胞株Skp2表达的抑制作用

目的:探讨RNA干扰(RNAi)技术对SKOV3卵巢癌细胞株Skp2表达的抑制作用。方法:设计合成针对Skp2的小干涉RNA(siRNA)并进行转染。实验分为空白对照组、转染组1、转染组2、转染对照组及阴性对照组。采用Real time PCR和Western blotting技术检测各组Skp2mRNA和蛋白水平的变化,通过细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测各组卵巢癌细胞增殖情况。结果:应用Skp2-siRNA干扰SKOV3卵巢癌细胞株后,转染组1、转染组2的Skp2mRNA和蛋白表达水平明显降低,细胞增殖明显受限,与空白对照组相比较,差异有统计学意义(P<0.05),转染组1与转染组2之间差异无统计学意义(P>0.05)。转染组1与转染组2基因沉默效率分别为75.31%和76.86%,蛋白抑制率分别为62.10%和63.11%,细胞增殖抑制率分别为52.75%和53.06%。结论:RNAi技术能够抑制SKOV3卵巢癌细胞株Skp2的表达,从而抑制卵巢癌细胞的增殖。

血管紧张素Ⅱ诱导新生鼠心肌细胞凋亡及c-fos、PCNA表达意义

目的研究血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ AngⅡ)对新生鼠原代培养心肌细胞凋亡及c-fos、PCNA蛋白表达变化的影响。方法采用体外心肌细胞培养技术,培养Wistar新生鼠原代心肌细胞,将培养96h的心肌细胞随机分为两组,对照组:无血清培养2、6、12、24h。AngⅡ组:以10-7mol/LAngⅡ刺激2、6、12、24h,用TUNEL(terminal deoxynucleotidyl transferse-mediated dUTP nick-end labeling assay)方法检测凋亡细胞数,免疫组化方法观察c-fos、PCNA(proliterating cell nuclear angiten)蛋白染色。结果随着时间的延长AngⅡ组TUNEL染色凋亡心肌细胞数量与对照组相比显著增高;同时伴有早期c-fos、PCNA蛋白表达增加。结论AngⅡ可以诱导乳鼠心肌细胞凋亡,AngⅡ诱导心肌细胞凋亡早期可见c-fos、PCNA表达增强。