蛋白质聚丙烯酰胺凝胶电泳中常见故障及纠正方法

近几年来,聚丙烯酰胺凝胶电泳法广泛应用于农作物遗传育种及种子纯度鉴定等方面。它是根据种子内所含蛋白质种类的不同,通过分子筛效应和电泳分离的电荷效应,得到不同的电泳谱带来加以鉴别的。在电泳过程中,如操作不当,常会出现一些异常情况。

蛋白质聚丙烯酰胺凝胶电泳测定玉米纯度研究现状

为了促进蛋白质聚丙烯酰胺凝胶电泳测定玉米纯度方法的标准化进程，本文根据本单位的实验和近年来发表的文献，总结了该方法的必要性、可靠性，谱带关系和鉴定原则，概括了其不足和研究方向。

酸枣仁中蛋白质的聚丙烯酰胺凝胶电泳分析

目的:比较不同产地及生炒酸枣仁的蛋白质电泳结果,分析它们之间的共性和差异。方法:本实验采用垂直平板聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)的技术对40个不同酸枣仁样品进行分析评价。结果:根据电泳指纹图谱整理分析的数据得到对酸枣仁的初步聚类分析结果。结论:聚丙烯酰胺凝胶电泳可以大致定性区别不同产地的酸枣仁样品。

银杏营养贮藏蛋白质的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳研究

营养贮藏蛋白质在木本植物的生长发育过程中起着重要的作用。应用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳技术对银杏不同部位的营养贮藏蛋白质进行了研究,经分析初步确定了两种营养贮藏蛋白质组分的分子量,探讨了其季节性变化规律,结果表明银杏皮层中的营养贮藏蛋白质含量均高于木质部中的含量。

运用双向聚丙烯酰胺凝胶电泳和图像软件分析TPA处理NIH3T3细胞前后的蛋白质表达谱差异

目的建立及优化聚丙烯酰胺双向凝胶电泳技术,并应用图像软件分析伏波醇酯(TPA)刺激前后小鼠成纤维细胞NIH3T3系的蛋白质差异表达,为进一步鉴定与TPA生物学作用有关的蛋白质奠定基础。方法分别提取TPA处理前后的NIH3T3细胞总蛋白质,经双向电泳,硝酸银染色后用软件分析显示两者蛋白质的差异表达。结果软件分析显示TPA刺激前后的细胞蛋白质有明显的差异表达。结论高质量的双向电泳设备、熟练的电泳操作和图像处理技能是寻找稳定可信的功能蛋白质的必要条件。

聚丙烯酰胺凝胶电泳前活性染料与蛋白质共价染色的条件探索

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳前染色法,考察了多种类型活性染料与牛血清白蛋白共价染色的条件。实验发现,活性蓝KN-R型标记效果最佳,其优化标记条件为:pH10.0,60℃,50min,蛋白检出限达200ng,重复性和测试范围内的定量性较好,可在电泳时直接实时观测,作为蛋白标示剂有一定的应用前景。

用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳的方法提纯蛋白质

对于含有多种成分且各蛋白质成分的分子量相差较小的菌体蛋白质的提纯 ,用一般的沉淀法、层析法均达不到理想效果。作者选用SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳的方法进行提纯 ,并尝试电泳后不经过染色 ,直接从凝胶中分离所需要的蛋白质成分。该实验对制胶、电脉、染色、脱色等各个环节进行了适当的改进 ,取得了较好的提纯效果。

聚丙烯酰胺凝胶电泳快速鉴定牛乳蛋白质的研究

试验利用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳技术对牛乳进行快速质量检测研究,通过对样品稀释倍数、电压条件、染色时间、漂洗时间及次数等条件进行摸索,获得了条带清晰的牛乳蛋白电泳图谱。结果表明,快速聚丙烯酰胺凝胶电泳法鉴定牛乳蛋白质的最佳条件是,用8%分离胶在120V电压下电泳,使用超级灵敏度蛋白质电泳快速染液染色,煮沸染色1min,振荡10min,可实现快速鉴定牛乳蛋白的目的。

全唾液中蛋白质含量检测及其等电聚焦、聚丙烯酰胺凝胶电泳分析

目的 :探讨唾液成分的变化 ,观察其与疾病发生、发展的关系。方法 :收集无口腔疾患的健康人 10 3例、牙周炎患者 2 6例、口腔颌面部恶性肿瘤患者 41例全唾液标本 ,采用Lowry法、等电聚焦 (IEF)和聚丙烯酰胺凝胶 (SDS PAGE)电泳方法进行分析。结果 :①正常人组、牙周炎和肿瘤组全唾液中蛋白质含量 (mg/ml)分别为 1.0 9± 0 .2 4、1.11± 0 .0 9和 1.0 5± 0 .0 5(P >0 .0 5) ,牙周炎组及肿瘤组与正常人组相差不显著。②肿瘤组蛋白质等电点区带较正常人组数量略有增加 ,但其区带的分布与正常人组未见明显差异 ;正常人组和牙周炎组蛋白质的等电点区带总数分别为 3 0条和 3 9条 ,其等电点区带与正常人在数量和区带分布上均不相同。当pH偏酸或偏碱的情况下 ,其数量均相应发生变化 ,其中 pH偏碱时表现更为显著 ,少量增加表现在 pH偏酸区域。③正常人与肿瘤全唾液的SDS PAGE样本区带数量分别为 6.4和6.2 4,其区别主要在于 50 0 0 0～ 52 0 0 0、770 0 0、3 80 0 0等不同相对分子质量区域以及 3 0 0 0 0以下相对分子质量附近区域可见新的区带分布。结论 :牙周炎状态以及肿瘤发生时 ,唾液蛋白质总含量虽变化不显著 ,但SDS PAGE、IEF图谱蛋白质区带的等电点及相对分子质量的分布区域发生改变 ,表明唾液分泌蛋白质?

纳米基质辅助聚丙烯酰胺凝胶电泳分离人血清蛋白质

血清蛋白分析是一项重要临床检验，某些蛋白质可以作为疾病诊断的标志物。但由于血清蛋白的种类繁多、组成复杂，给血清蛋白的深入研究工作带来难度。目前，对人血清蛋白的分离主要采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳。然而，由于普通聚丙烯酰胺凝胶电泳利用蛋白质的电荷／质量比以及分子大小的差异，实现对血清中蛋白质的分离，对于电荷／质量比以及分子大小都相近的蛋白质就无法分开。

癸基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析非变性蛋白质分子量的适用性鉴定

目的:鉴定癸基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDecS-PAGE)是否适于分析非变性蛋白质的分子量。方法:以不同SDecS-PAGE凝胶、电泳缓冲液分析5种非变性标准分子量蛋白质,观察蛋白质亚基解离情况,测定分子量对数值(log Mr)与迁移率x之间的相关性。结果:5种标准分子量蛋白质的四级结构完整,log Mr与x线性相关性较低;但其中的α-牛乳白蛋白、鸡蛋清白蛋白、牛血清白蛋白的log Mr与x线性相关性较好,相关系数平方值(R2)>0.94。结论:SDecS-PAGE可用于测定有限种类的非变性蛋白质的分子量。

辣椒疫霉菌蛋白质的聚丙烯酰胺凝胶电泳法鉴定

本文以辣椒疫霉菌(Phytophthora capsici)A^1和A^2两个交配型及寄生疫霉菌(P.micotianae Var.parasitica)A^1和A^2两个交配型为标准菌株,对从新疆石河子、塔城、吐鲁番、伊犁、哈密和昌吉六个不同地区辣椒病株上分离的疫霉菌株(分别编号为Ph—2、Ph—11、Ph—14、、Ph—15、Ph—16、Ph—17)的蛋白质,用聚丙烯酰胺凝胶电泳法进行了分析和比较。结果证明,这6个菌株的蛋白质电泳图谱与辣椒疫霉菌标准菌株一致,它们都有相同的5条重带和基本相同的3～4条弱带,而与寄生疫霉菌完全不同。说明该法可做为疫霉菌鉴定的重要辅助手段之一,实验中同一菌种不同交配型间的蛋白质电泳图谱完全相同,但6个菌株中Ph—2、Ph—14和Ph—16的弱带与标准菌株间稍有差异,是属于菌株间的差异还是其它原因有待进一步研究。

江西地方黑鸡血清蛋白质SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳

对泰和乌黑鸡及南城五黑鸡血清的SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳后发现，同一品种内，相同日龄的不同个体之间的血清电泳图谱不完全相同。泰和乌黑鸡4月龄的1份、3月龄的2份、5月龄的1份与南城五黑鸡3月龄的1份血清电泳图谱一样，都为5条区带，各蛋白质亚基所处位置也相同，其蛋白质组成相同。南城五黑鸡3月龄的1份。

发光探针-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测人血清蛋白质

人血液组成复杂，其中所含蛋白质种类繁多且在临床检验中具有重要意义。聚丙烯酰胺凝胶电泳是目前为止普遍使用的分析分离血液蛋白的方法，在血清蛋白质组学研究中是一个非常重要的分离手段。电泳后血清蛋白的检测方法很多，有考染法、银染法、有机荧光探针法、免疫方法等，但这些方法中，有的灵敏度低、选择性差、费时费力，有的设备复杂而且昂贵、步骤繁杂，

铁棒锤种子蛋白质提取及聚丙烯酰胺凝胶电泳研究

目的构建适合铁棒锤种子蛋白质研究的聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)体系,为铁棒锤种子纯度检测及鉴别研究提供技术支撑。方法采用6种蛋白质提取法提取伏毛铁棒锤种子蛋白质,并筛选出最佳提取方法,在此基础上研究不同分离胶浓度、料液比、上样量对伏毛铁棒锤种子蛋白电泳分离效果的影响,并采用筛选出的蛋白质最佳提取分离方法对铁棒锤和伏毛铁棒锤种子进行鉴定。结果巯基乙醇法提取的伏毛铁棒锤种子蛋白质电泳图谱效果较佳,电泳谱带数最多(14条)、最清晰,适合于其种子纯度检测;分离胶浓度为15%、料液比为1∶10(M/V)、蛋白上样量稀释5倍时,其种子蛋白质电泳分离效果较好;铁棒锤和伏毛铁棒锤种子蛋白质电泳图谱在蛋白质谱带位置和强弱上有一定差异。结论本研究建立的铁棒锤种子蛋白样品制备方法及SDS-PAGE技术可用于铁棒锤种子纯度检测,其蛋白质图谱可作为铁棒锤与伏毛铁棒锤种子的鉴别依据。

山猪血清蛋白质多态性聚丙烯酰胺凝胶电泳分析研究

运用聚丙烯酰胺凝胶电泳分析了山猪血清蛋白质生化位点多态性的分布.结果表明,前白蛋白Pa、白蛋白Alb、后白蛋白Po可分离出4～6条区带,转铁蛋白Tf分离出2～3条区带.白蛋白的平均分子量约为69000Da,转铁蛋白的平均分子量约为88000Da.用聚丙烯酰胺凝胶电泳分离血清蛋白质重复性较好,分辨较高,测定蛋白质的多态性和分子量的变化对分析猪的遗传特征、选育优良品种和诊断诸多疾病有重要意义.

非聚丙烯酰胺凝胶电泳(Non-PAGE)的复杂蛋白质组表达分析:一种新的二维液相技术用于完整蛋白质的高通量分离分析

揭示基因组-转录子组-蛋白质组(Genome-transcriptome-proteome)的关系、描绘蛋白质翻译后修饰(PTM)的途径、常规地运用质谱(MS)技术进行蛋白质的定性和识别,这三方面的力量和需求将推动日后的新药开发.在过去的几年里,蛋白质定性和蛋白质组学研究的突飞猛进有赖于这三方面发展的相结合,这种整合成为生物技术研发(R&D)工作流程的一个典范.正如人类基因组计划的经验,研究生物相关体系中的复杂蛋白的表达同样亟待新的分析技术和手段.

聚丙烯酰胺凝胶电泳体系中蛋白质的荧光标记分析

在室温下,采用聚丙烯酰胺凝胶电泳法,分离经荧光胺或对氯荧光胺荧光标记的蛋白质样品,可在2.5小时内完成蛋白质样品的分离和其区带的鉴定。耗时是传统方法的四分之一,而且荧光图象清晰、灵敏度较高。