固醇调节元件结合蛋白(SREBP)在非酒精性脂肪性肝病中的作用机制及治疗靶点

非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)已成为全球范围内最常见的肝脏疾病,是肝癌发展的重要风险因素。然而,NAFLD的发病机制目前仍未被完全阐明,且尚无特异性的有效治疗措施。固醇调节元件结合蛋白(SREBP)是一类重要的核转录因子,主要通过激活胆固醇、脂肪酸和甘油三酯合成及摄取的相关基因来维持体内脂质代谢的平衡,是治疗代谢性疾病的靶点。本文对SREBP参与NAFLD发病机制的最新进展以及SREBP靶向治疗NAFLD的最新证据进行综述。值得注意的是,最近研究发现SREBP抑制与自噬受损共同引发肝损伤。因此,过度抑制脂肪生成对NAFLD的治疗可能起反作用。总体而言,SREBP是一个具有广阔前景的NAFLD治疗靶点,其对脂质代谢的分子机制受多种因素的调控,而这些因素正在被深入探索和分析,对NAFLD治疗具有重要的临床意义。

血清铁调节蛋白2、诱饵受体3水平与老年慢性阻塞性肺疾病急性加重期患者疾病转归的关系研究

目的探讨血清铁调节蛋白2(iron-regulated protein 2,IRP2)、诱饵受体3(decoy receptor 3,DcR3)水平与老年慢性阻塞性肺疾病急性加重期(acute exacerbation of chronic obstructive pulmonary disease,AECOPD)患者疾病转归的关系。方法选择AECOPD患者(AECOPD组)88例,检测血清IRP2、DcR3水平,追踪AECOPD患者临床疾病转归,根据临床疾病转归将其分为恶化组(22例)和好转组(66例)。多因素Logistic回归分析AECOPD患者疾病转归的影响因素。受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC)分析IRP2、DcR3预测AECOPD患者疾病转归的价值。结果恶化组近1年AECOPD发作次数、急性生理和慢性健康状况评分、合并休克、呼吸困难评分(modified medical research council,mMRC)分级3~4级高于好转组(P<0.05)。恶化组治疗前和治疗2周后血清IRP2、DcR3水平高于好转组,治疗2周后好转组血清IRP2、DcR3水平低于治疗前(P<0.05);恶化组血清IRP2、DcR3水平与治疗前比较差异无统计学意义(P>0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,近1年AECOPD发作次数、mMRC分级、治疗前IRP2、治疗前DcR3是AECOPD患者疾病恶化的危险因素(P<0.05)。治疗前IRP2、DcR3预测AECOPD患者疾病转归的曲线下面积为0.781、0.795,联合IRP2、DcR3预测AECOPD患者疾病转归的曲线下面积为0.918,大于单独IRP2、DcR3预测(P<0.05)。结论AECOPD患者血清IRP2、DcR3水平均显著增高,且与肺功能降低以及疾病恶化有关,检测血清IRP2、DcR3水平有助于对AECOPD患者疾病转归的预测。

泛素调节蛋白质——细胞控制化学过程的分子层认知

组成人类的一个人体细胞内包含有数十万种不同的蛋白质，它们各自有不同的功能：酶是化学反应的促进剂，激素是信号性物质，在免疫防御及细胞的形成和结构中起着重要的作用。今年获诺贝尔化学奖的三位科学家在化学知识界开创性的贡献在于，发现了在细胞中如何通过泛素蛋白质来标记出不需要的蛋白，由此调节某些蛋白质的存在与否。

食管癌患者临床病理特征与生存素及表皮生长因子受体蛋白质表达的关系

目的研究食管鳞癌组织中生存素(survivin)基因表达和临床病理特征的关系及与表皮生长因子受体(EGFR)表达的相关性。方法 51例食管鳞癌患者术后组织蜡块,取癌旁>5cm正常食管组织蜡块45例作为对照。所有患者术前未行放、化疗,用免疫组织化学方法检测survivin和EGFR蛋白质表达情况,分析survivin基因蛋白质表达与食管鳞癌组织的分化程度、浸润深度、肿瘤长度、临床分期及淋巴结转移之间的关系及与EGFR蛋白质表达的相关性。结果食管鳞癌组织中survivin基因阳性表达率88.2%(45/51),显著高于正常食管黏膜20.0%(9/45)(P<0.01)。Survivin基因表达与食管鳞癌组织的分化程度、浸润深度、肿瘤长度、临床分期及淋巴结转移情况无明显相关性(P>0.05)。Survivin和EGFR蛋白质表达差异无统计学意义(χ2=0.444,P>0.05)。结论生存素与EGFR在食管癌发生发展过程中可能有协同作用。

中国地鼠26S蛋白酶体非ATP酶调节亚基13的表达鉴定及生物信息学分析

目的鉴定26S蛋白酶体非ATP酶调节亚基13(PSMD13)在Ⅱ型糖尿病中国地鼠的表达及对其理化性质、信号肽、亚细胞定位、功能结构域等进行分析,为深入研究其功能提供理论依据。方法荧光定量PCR法检测PSMD13 mRNA在中国地鼠和糖尿病地鼠肝、骨骼肌、脂肪和小肠组织的表达;PSMD13氨基酸序列从NCBI网站下载,氨基酸同源性分析采用DNAman软件;PSMD13蛋白的理化性质分析采用Prot Param在线工具;PSMD13蛋白的亲疏水性、信号肽、亚细胞定位采用Prot Scale软件分析;PSMD13蛋白结构域、二级结构分别采用Conserved Domain数据库和SOPMA工具分析;PSMD13蛋白质的互作蛋白及功能网络采用STRING数据库分析。结果RT-qPCR结果显示PSMD13 mRNA在糖尿病地鼠脂肪组织中表达下降;PSMD13位于中国地鼠第3号染色体,含有13个外显子,相对分子质量为42942.48,含有378个氨基酸残基;PSMD13理论等电点为6.1,属酸性蛋白;其与小鼠、大鼠、果蝇、猩猩和人PSMD13的氨基酸序列同源性高达97.78%;PSMD13蛋白质无信号肽、无跨膜结构,主要位于细胞质中;PSMD13蛋白质羧基端含有一个PCI结构域,与PSMD7、PSMD8、PSMA3、PSMC1和USP14等相互作用,参与泛素依赖性蛋白质分解代谢过程。结论PSMD13在糖尿病中国地鼠脂肪组织中表达下降,该蛋白质在进化上高度保守,参与蛋白质的蛋白酶体降解途径,其表达下调可能参与糖尿病的发生发展。

受翻译调节的肿瘤蛋白在PRL-3促进结肠癌转移中的作用

目的:研究受翻译调节的肿瘤蛋白(TCTP)在肝再生磷酸酶-3(PRL-3)促进结肠癌细胞增殖、迁移和侵袭中的作用。方法:构建载体pAcGFP-C3-PRL-3及pAcGFP-C3并分别转染至结肠癌LoVo细胞中,获得稳定表达PRL-3的LoVo-PRL-3细胞及对照细胞LoVo-control。Western blotting及real-time PCR检测2种细胞PRL-3及TCTP表达。设计并合成特异性干扰TCTP mRNA的siRNA序列(TCTP-siRNA)和阴性对照序列(control-siRNA),并将siRNA瞬时转染至LoVo-PRL-3细胞。在转染siRNA后24 h、48 h和72 h,Western blot-ting及real-time PCR检测LoVo-PRL-3细胞TCTP表达。CCK8-8和Transwell方法检测LoVo-control、LoVo-PRL-3及转染TCTP-siRNA和转染control-siRNA的LoVo-PRL-3细胞间增殖、迁移和侵袭能力差异。结果:转染PRL-3可以显著上调LoVo细胞TCTP mRNA和蛋白的表达(P<0.05)。TCTP-siRNA在转染后的24 h、48h和72 h可以有效抑制LoVo-PRL-3细胞TCTP mRNA表达(P<0.01),同样TCTP蛋白在转染后的48 h和72 h也显著受到抑制(P<0.01)。转染PRL-3能显著促进LoVo细胞增殖、迁移和侵袭能力(P<0.05),然而siRNA干扰抑制上调的TCTP表达后又能显著抑制LoVo-PRL-3细胞增殖、迁移和侵袭能力(P<0.05)。结论:PRL-3通过上调TCTP表达促进结肠癌细胞增殖、迁移和侵袭。用siRNA靶向抑制TCTP表达可能是预防和治疗结肠癌转移的有效手段。

铁调节蛋白与白细胞介素6在铁代谢中的研究进展

铁是机体必需的微量元素,主要储存在肝脏、脾脏及骨髓,参与机体的生物代谢、肌红蛋白合成、血红蛋白合成,还参与细胞的呼吸、各种酶的合成以及生物氧化过程中的电子转运等,对于细胞保持稳定性有重要作用。机体铁代谢的异常可引发多种疾病,如因铁缺乏引起的免疫力下降、缺铁性贫血、生育障碍等症状,若铁负荷过重可能会引起肝脏疾病、心脏疾病、糖尿病等疾病。近些年研究发现存在一种调节铁代谢的蛋白,即铁调素,又称铁调节蛋白(hepatic bactericidal protein,hepcidin)。Hepcidin是由肝脏合成的具有丰富二硫键的多肽,主要作用是调节哺乳动物全身铁代谢。Hepcidin在肝脏中高表达,这可能是许多贫血包括炎症和慢性病贫血的根本原因 [1] ,而hepcidin的诱导依赖白细胞介素6(interleukin-6,IL-6),在各种炎症和感染中IL-6对hepcidin调节起到关键的作用 [2] 。

固醇调节元件结合蛋白2在软骨细胞退变过程中的表达(英文)

背景:近期研究证实了固醇调节元件结合蛋白2基因在骨关节炎发生过程中起重要作用,但其具体发病机制尚未完全清楚。目的:通过白细胞介素1β体外诱导关节软骨细胞退变,观察固醇调节元件结合蛋白2在软骨细胞退变过程中的表达变化。方法:体外分离培养C57BL/6J小鼠关节软骨细胞,将第2代软骨细胞随机分为4组:对照组、白细胞介素1β24,48,72 h组。后3组细胞分别以10μg/L白细胞介素1β干预细胞。结果与结论:软骨细胞经白细胞介素1β刺激后呈肥大化表现,软骨细胞活性随白细胞介素1β刺激时间的延长而逐渐降低。与对照组相比,白细胞介素1β24,48,72 h组软骨细胞中固醇调节元件结合蛋白2与固醇调节元件结合蛋白裂解激活蛋白mR NA表达水平增加,而蛋白聚糖和Ⅱ型胶原mR NA表达水平降低。提示白细胞介素1β能抑制软骨细胞增殖和细胞重要基质成分表达,诱导其出现肥大化退行性改变,且在退变的过程中,固醇调节元件结合蛋白2表达逐渐上调,与软骨关键基因的表达呈负向变化关系。

佛波醇酯对MES 23.5细胞铁调节蛋白1表达的影响

目的探讨蛋白激酶C（PKC）激动剂佛波醇酯（PMA）对MES 23.5细胞中铁调节蛋白1（IRP1）的激活作用。方法采用MTT法观察细胞的存活率,Western Blot法检测IRP1和铁转出蛋白（Fpn1）的表达变化。结果 0.01~2.00μmol/L的PMA作用MES 23.5细胞24 h后,细胞存活率无明显变化（F=3.050,P〉0.05）。0.20μmol/L的PMA作用MES 23.5细胞24 h后,IRP1表达明显上调（t=4.501,P〈0.01）,Fpn1表达明显下调（t=5.174,P〈0.01）。结论 PMA在多巴胺能神经细胞系MES 23.5细胞中能明显激活IRP1。

铁调节蛋白2高表达对PC12细胞活力及铁调节蛋白1表达水平的影响

目的探讨铁调节蛋白2(IRP2)高表达对PC12细胞的细胞活力及铁调节蛋白1(IRP1)表达水平的影响。方法培养具有分泌多巴胺性能的PC12细胞,分别转染Vector空载质粒(Vector组)和携带IRP2基因的质粒(IRP2组)。通过MTT法检测两组细胞的存活率,通过免疫印迹法检测两组细胞中IRP1蛋白的表达情况。结果与Vector组相比,IRP2组细胞存活率显著降低(t=3.97,P<0.01);与Vector组相比,IRP2组IRP1蛋白的表达水平显著升高(t=2.59,P<0.05)。结论IRP2高表达导致PC12细胞存活率降低,同时导致细胞中的IRP1表达升高,但具体生理机制有待进一步研究。

CV-1细胞中固醇调节元件结合蛋白-1c对Ⅰ型葡萄糖载体mRNA稳定性及蛋白表达的影响

[目的]探讨在CV-1细胞中固醇调节元件结合蛋白-1c(SREBP-1c)对Ⅰ型葡萄糖载体mRNA稳定性和蛋白表达的影响.[方法]利用DNA克隆技术,将SREBP-1c和其阴性表达体(ADDN)DNA序列重组到表达载体pSV-sport上.用SREBP-1c转染CV-1细胞,应用Northern Blot方法观察SREBP-1c对Ⅰ型葡萄糖载体mRNA的表达及其稳定性的影响,应用Western Blot方法观察SREBP-1c对Ⅰ型葡萄糖载体蛋白表达的影响.[结果]SREBP-1c可增加Ⅰ型葡萄糖载体的mRNA表达水平及稳定性,可提高Ⅰ型葡萄糖载体的蛋白表达水平.[结论]SREBP-1c可增强Ⅰ型葡萄糖载体的蛋白表达,可能通过调节Ⅰ型葡萄糖载体的表达水平而参与胰岛素对血糖的调节过程.

沉默调节蛋白1在酒精性肝病中的作用机制及相关药物研究进展

酒精性肝病(ALD)是全球慢性肝病的主要病种之一,我国ALD发病率正逐年上升且呈年轻化发展态势。沉默调节蛋白1(SIRT1)是一种烟酰胺腺嘌呤二核苷酸依赖性的脱乙酰化酶,在细胞代谢、氧化应激、炎症反应等方面作用显著,有望成为ALD治疗新靶点。本文总结了SIRT1在ALD中的作用机制及相关药物研究,以期为进一步研究ALD发病机制及其潜在治疗靶标提供参考和策略。

PPARα、固醇调节元件结合蛋白和腺苷酸活化蛋白激酶在酒精性脂肪肝发病中作用的研究进展

酒精性脂肪肝(AFLD)为酒精性肝损伤的最初症状,对其发生机制的深入研究有助于AFLD的预防和治疗。迄今研究发现,AFLD的发生发展主要与细胞色素P450 2E1、过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)、固醇调节元件结合蛋白(SREBP)、腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、去乙酰化酶1、脂联素和胰岛素等通路相关。研究发现,酒精及代谢产物乙醛直接或间接抑制PPARα和AMPK并激活SREBP蛋白通路,导致肝脂质代谢紊乱、脂肪酸氧化能力降低和脂质堆积,最终形成AFLD。此外,本综述对这3个蛋白作为AFLD治疗靶点的治疗前景予以展望。

nNOS在6-OHDA诱导MES23.5细胞铁调节蛋白上调中作用

目的观察经6-羟基多巴胺(6-OHDA)诱导的MES23.5细胞神经元型一氧化氮合酶(nNOS)表达的变化,以及其在6-OHDA诱导的铁调节蛋白(IPR1)mRNA上调中的作用。方法应用10μmol/L的6-OHDA处理MES23.5细胞24h,制备帕金森病(PD)细胞模型,采用Western blots方法检测细胞中nNOS蛋白的表达,采用实时荧光定量PCR方法检测细胞中IRP1 mRNA的表达。结果 10μmol/L 6-OHDA处理的MES23.5细胞nNOS蛋白的表达水平较对照组明显增高,差异有显著性(t=16.72,P<0.001);6-OHDA处理组IRP1mRNA的表达水平较对照组明显增高,差异有显著性(F=6.07,q=4.84,P<0.0),而100μmol/L的nNOS抑制剂盐酸亚精胺预处理组IRP1表达较6-OHDA组明显降低,差异有显著性(q=4.02,P<0.05);盐酸亚精胺单独作用不影响IRP1mRNA的表达。结论 nNOS在6-OHDA制备的PD细胞模型中表达增高,且nNOS抑制剂盐酸亚精胺能明显抑制6-OHDA引起的IRP1上调。

铁调节蛋白2高表达对MPP^(+)诱导的PC12细胞损伤的影响

目的探讨铁调节蛋白2(IRP2)高表达对1-甲基-4-苯基吡啶阳离子(MPP^(+))损伤的PC12细胞存活率的影响。方法以MPP^(+)诱导PC12细胞损伤,依据对细胞的处理方式不同分为vector组(转染Myc-vector质粒)、IRP2组(转染Myc-IRP2质粒)、vector/MPP^(+)组(转染Myc-vector质粒并以MPP^(+)诱导细胞损伤)和IRP2/MPP^(+)组(转染Myc-IRP2质粒并以MPP^(+)诱导细胞损伤),采用免疫印迹法检测各组细胞中IRP2的表达水平,采用CCK-8测定法检测各组细胞的存活率。结果免疫印迹法检测结果显示,IRP2组和IRP2/MPP^(+)组细胞中IRP2的相对表达量较vector组和vector/MPP^(+)组均明显升高(F=15.38,P<0.05)。CCK-8法检测结果显示,IRP2和MPP^(+)可协同诱导PC12细胞损伤(F_(转染类型*损伤处理)=4.34,P<0.05);各组间细胞存活率比较差异均有显著性(P<0.05)。结论IRP2高表达和MPP^(+)均可致PC12细胞损伤,且IRP2高表达可加剧MPP^(+)对PC12细胞的损伤作用。

α-突触核蛋白高表达对PC12细胞ferroportin、铁调节蛋白1和铁调素表达的影响

目的探讨PC12细胞高表达野生型(WT)α-突触核蛋白(α-Syn)对ferroportin(FPN)、铁调节蛋白1(IRP1)蛋白表达以及铁调素mRNA表达的影响。方法PC12细胞用基础培养液处理24 h(对照组)或用2 mg/L多西环素(DOX)处理24 h(DOX处理组)。采用免疫印迹法检测α-Syn、FPN和IRP1蛋白表达情况,采用实时荧光定量PCR检测铁调素mRNA表达情况。结果2 mg/L DOX可诱导PC12细胞α-Syn高表达(t=5.245,P<0.05)。与对照组相比,DOX处理组细胞铁调素mRNA表达水平显著升高(t=4.162,P<0.05),但FPN和IRP1蛋白表达水平没有明显变化(t=0.092、0.268,P>0.05)。结论α-Syn高表达不影响PC12细胞FPN和IRP1蛋白表达,但可以诱导铁调素mRNA水平升高。

程序性细胞死亡蛋白5在米非司酮诱导前列腺癌细胞凋亡中的协同作用

目的:观察程序性细胞死亡蛋白5(programmed cell death 5,PDCD5)在米非司酮(mifepristone,MIF)诱导的前列腺癌细胞凋亡中的作用,并探讨其机制。方法:MTT法检测不同浓度(5、10、20、50、100μmol/L)的MIF作用前列腺癌PC-3M细胞24～96 h后的吸光度(D)值,找到最佳作用时间及浓度。将真核表达载体PCI-neo-PDCD5用脂质体介导的方法转染入PC-3M细胞后,采用细胞免疫荧光法检测PDCD5蛋白的表达水平。在转染PDCD5基因的细胞中加入最佳作用浓度的MIF,继续培养24、48 h后,采用TUNEL和吖啶橙(acrine orange,AO)/溴化乙锭(ethidium bromide,EB)法检测细胞凋亡情况,Western印迹法检测凋亡相关蛋白caspase-3的表达变化。结果:MTT检测结果显示,与对照组相比,5、10μmol/L MIF组的D值没有显著变化(P>0.05),20、50和100μmol/L MIF组的D值显著降低(P<0.05),说明MIF对前列腺癌PC-3M细胞的抑制作用呈时间和剂量依赖性。PDCD5基因真核表达载体成功转染入PC-3M细胞,并得到高表达。TUNEL和AO/EB检测结果显示,与对照组及单独应用MIF组相比,转染PDCD5基因并加入MIF后的细胞凋亡率显著增加(P<0.01);Western印迹结果显示,caspase-3蛋白在PDCD5与MIF联合作用时的表达明显增加(P<0.01)。结论:外源性PDCD5在MIF诱导的前列腺癌细胞凋亡中有明显的正协同作用,推测其有望成为前列腺癌临床治疗的一个辅助药物。

凋亡相关蛋白Fas及caspase-3在膀胱移行细胞癌中表达及临床意义

目的:探讨凋亡相关蛋白Fas及caspase-3在膀胱移行细胞癌中的表达及其临床意义。方法:应用SP免疫组织化学法检测45例膀胱移行细胞癌及10例正常膀胱黏膜组织石蜡切片中Fas和caspase-3表达的情况,并结合临床资料进行分析。结果:Fas在膀胱移行细胞癌标本中的表达阳性率为46.7%(21/45),而在正常对照组中阳性表达率为100%;caspase-3在膀胱移行细胞癌标本中的表达阳性率为37.8%(17/45),与对照组阳性率为90%(9/10)相比差异有统计学意义(P<0.05)。Fas的表达与膀胱移行细胞癌的组织学分级,初发和复发及肿瘤数目之间差异有统计学意义(P<0.05),但与临床病理分期无关;Caspase-3的表达与膀胱移行细胞癌的初发和复发相关(P<0.05),但与组织学分级,肿瘤数目,临床分期均无关。相关性分析表明,膀胱移行细胞癌中Fas的表达与caspase-3表达呈正相关。结论:Fas在膀胱癌组织中选择性表达降低且与膀胱移行细胞癌的分化程度密切相关的,caspase-3蛋白在膀胱移行细胞癌中表达下降,因此Fas及caspase-3蛋白对于判断膀胱移行细胞癌预后有重要临床指导意义。

儿童非霍奇金淋巴瘤X-连锁凋亡抑制蛋白和Caspase-3的相关性研究

X-连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）是凋亡抑制蛋白家族中作用最强的一员,能明显抑制Fas和半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶（Caspase）诱发的内源和外源细胞凋亡过程,已经在多种恶性肿瘤中均发现高表达。Caspase家族在细胞凋亡的过程中起重要作用,Caspase-3是主要的效应因子,