多层开管毛细管酶反应器的制备及在蛋白质酶切中的应用

以石英毛细管作为酶固定化的载体,在毛细管内壁上逐步合成树枝形大分子聚酰胺-胺(PAMAM),再通过交联剂戊二醛将胰蛋白酶直接键合到该大分子的末端氨基上,并对酶固定化条件进行了优化,制备了多层酶反应器.利用该酶反应器对马心细胞色素C等蛋白质进行了酶切,并对酶切的条件进行了优化.实验结果表明,该固定化酶反应器具有较高的酶切效率、良好的重现性和稳定性,可用于蛋白质组学的研究.

采用磁性载体制备的固定化酶反应器的载体粒径对蛋白质酶解性能的影响

研究了以不同粒径的磁性颗粒为载体的固定化酶反应器在蛋白质酶解过程中,其粒径大小对团聚、酶解效率和漏切位点等的影响。实验结果表明,纳米级颗粒的酶负载量为亚微米级的3.5倍左右。但当酶固定量相同时,酶解效率基本相当。而在一定程度上加大磁性颗粒的粒径后,团聚现象得到明显改善。选择磁性载体粒径为20nm的固定化酶反应器,对其性能进一步考察。结果显示胰蛋白酶与牛血清白蛋白(BSA)的质量比为1∶1时,即能于1 min内实现快速酶解;当酶解10 min时,其零漏切位点肽段数和蛋白质序列覆盖率基本达到稳定,并明显优于溶液酶解水平。通过对漏切位点的统计分析比较,发现固定化酶解与溶液酶解时的漏切位点规律基本类似。因此,采用不同粒径磁性载体制备的固定化酶反应器均可在蛋白质组学研究中提供快速、高效的酶解。

吲哚美辛对癌性恶病质小鼠肌肉泛素-蛋白质酶途径的影响

目的 :研究泛素 蛋白质酶途径在癌性恶病质小鼠骨骼肌中的表达以及吲哚美辛 (IND)对其的调控作用。 方法 :利用鼠结肠癌 2 6细胞株皮下接种BALB/c小鼠 ,建立癌性恶病质模型。将 30只BALB/c小鼠随机分为五组 :对照组、荷瘤 +等渗盐水组、荷瘤 +IND 0 .2 5mg/ (kg·d)组、荷瘤 +IND 0 .5mg/ (kg·d )组、荷瘤 +IND 2 .0mg/ (kg·d)组。监测各组小鼠去瘤体重和腓肠肌重量 ;测量血清TNF α和IL 6水平 ,体外腓肠肌肌蛋白降解速率以及泛素 蛋白质酶途径组分mRNA表达。 结果 :恶病质小鼠去瘤体重和腓肠肌重量明显下降 (P <0 .0 1) ,血清TNF α和IL 6水平明显升高 (P <0 .0 1) ,腓肠肌蛋白质降解速率以及泛素蛋白质酶组分mRNA表达 ,均明显升高(P <0 .0 1)。IND 0 .5mg/ (kg·d)可以明显缓解恶病质小鼠腓肠肌重量的下降 (P <0 .0 1) ,降低血清TNF α(P <0 .0 5 )和IL 6水平 (P <0 .0 1) ,抑制体外腓肠肌蛋白的降解以及泛素蛋白质酶组分mRNA表达 (P <0 .0 1)。 结论 :泛素 蛋白质酶途径在癌性恶病质的骨骼肌消耗中起重要作用 ,它受炎性细胞因子调控。适当剂量的IND可能通过减少炎性细胞因子产生 ,抑制泛素 蛋白质酶途径的激活 ,缓解肌蛋白的降解。

三种植物蛋白质酶解物对自发性高血压大鼠降血压效应的比较

目的:观察体外具有抑制血管紧张素转化酶(ACE)活性的绿豆、花生和大米分离蛋白的碱性蛋白酶alcalase酶解物的降血压效应。方法:通过模拟体内消化道环境研究经胃肠道消化酶处理对绿豆、花生和大米分离蛋白alcalase酶解物抑制ACE活性的影响,并利用自发性高血压大鼠(SHR)评定三种酶解物的体内降血压作用。结果:花生分离蛋白和大米分离蛋白alcalase酶解物经不同消化酶处理后活性均显著下降,绿豆分离蛋白酶解物经不同消化酶处理后其活性均有不同程度的提高。以600mg/kg bw的剂量灌胃后三种蛋白质酶解物对SHR均显示出降血压作用,绿豆最强,而花生最弱。三种蛋白质酶解物对SHR的心率均无影响。结论:绿豆、花生和大米分离蛋白质alcalase酶解物均具有降血压作用,但其体外抑制ACE活性与体内降血压效应不一致。

蛋白质酶解混合物的动态修饰毛细管电泳-质谱联用分析

利用羟丙基纤维素溶液动态涂层技术修饰毛细管管壁 ,改善了分离效率 .在不影响质谱检测的条件下 ,将动态涂层毛细管电泳与质谱检测联用 ,有效地提高了对蛋白质的鉴定能力 .将该技术应用于对复杂蛋白质样品的酶解产物的分析鉴定 。

大麦虫蛋白质酶解产物对小鼠学习记忆能力和抗疲劳能力的影响

为探讨大麦虫蛋白质酶解产物对KM小鼠学习记忆能力和抗疲劳能力的影响,本文采用Morris水迷宫法、爬竿实验和负重游泳实验分别测试灌胃了不同剂量该酶解产物30d后小鼠学习记忆与抗疲劳的情况。结果显示,Morris水迷宫实验中,未灌胃大麦虫蛋白质酶解产物的对照组潜伏期比低、中、高剂量组长17.2%-62.8%,反应次数少19.7%-164.3%,且中剂量组的潜伏期和反应次数与对照组差异均极显著（p〈0.01）。爬竿实验和负重游泳实验中,未灌胃该酶解产物的对照组负重游泳成绩比其他三组低1.9%-16.4%;爬竿成绩低6.2%-29.8%,其中,中剂量组的这两项实验成绩均极显著高于低、高剂量组（p〈0.01）。表明大麦虫蛋白质酶解产物具有提高小鼠学习记忆能力和抗疲劳能力的功效,且影响程度与其剂量有关,中剂量（1.67g/（kg·d））为较适剂量。

蛋白质酶水解物的功能特性及其生物活性的研究进展

蛋白质的酶水解产物主要是氨基酸和多肽,其中多肽的含量最高。多肽不仅具有与蛋白质相类似的功能特性,而且还有蛋白质无可比拟的生物活性。综述了蛋白质酶水解物所具有的溶解性、乳化性和起泡性等功能性质,以及所具有的抗氧化、降血压、抗菌等生物活性,并为今后的研究进行了展望。

蛋白质酶解物预防动脉粥样硬化研究进展

中国心血管疾病患病率处于持续上升阶段,其中动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)是引起冠心病、中风、脑梗死等疾病的主要原因,因此,对AS的预防显得尤为重要。常用的阿司匹林和他汀类药物虽能在一定程度上缓解AS的形成,但部分人群长期服用可能会导致大出血、肌痛等并发症。大量研究发现,多种食源性蛋白质酶解物具有预防AS的功效,且安全有效、来源广泛、易于吸收,有望作为膳食补充剂长期应用于AS的一级或二级预防中。该文总结了AS形成的不同病理学说,重点综述了近年发表的蛋白质酶解物基于不同病理学说预防AS的体内外研究,并阐述了蛋白质酶解物在防治AS的研究现状及前景。

球孢白僵菌蛋白质酶、几丁质酶和β-N-乙酰葡萄糖苷酶产生水平及其与毒力关系的研究

本文研究球孢白僵菌产蛋白质酶、几丁质酶及N-乙酰葡萄糖苷酶水平,同时研究了其产酶水平与其对马尾松毛虫毒力之间的关系。结果表明:球孢白僵菌12个菌株都不同程度的分泌蛋白质酶、几丁质酶和β-N-乙酰葡萄糖苷酶,同时蛋白酶产生水平(P)、β-N.乙酰葡糖苷酶产生水平(B)、几丁质酶产生水平(C)之间存在显著的直线相关性;RP,C=0.7655,RP,B=0.7651,RC,B=0.8266,说明几丁质酶是一种诱导酶。比较球孢白僵菌产酶水平与其对马尾松毛虫毒力,结果表明毒力水平与其产蛋白酶、β-N-乙酰葡萄糖苷酶水平存在一定的相关性:LT50=53.6809／(P-10.2066)+5.2549(R=0.7903>R0.01=0.7079);LT50=11.6385／(B-2.8733)+4.0506(R=0.8502>R0.01=0.7079)。

蛋白质酶水解物功能特性及其在食品工业应用

介绍蛋白质酶水解物功能特性,总结蛋白质酶水解物在老年食品,运动员食品、减肥食品、疗效食品和普通食品中应用。

血清解整合素-金属蛋白质酶12-S在异位妊娠早期诊断中的价值探讨

目的观察解整合素-金属蛋白质酶12-S(ADAM12-S)在异位妊娠及正常妊娠过程中的变化特点,探讨ADAM12-S在异位妊娠早期诊断中的临床价值。方法将146例异位妊娠患者设为异位妊娠组,263例正常孕妇为对照组,观察两组研究对象不同孕周的ADAM12-S检测情况,以及ADAM12-S与孕周相关性。结果异位妊娠组平均ADAM12-S对数值在不同孕周均低于同期正常妊娠组,差异有统计学意义(P<0.05);正常对照组ADAM12-S对数值与孕周呈线性关系(r=0.926,P=0.000,P<0.01),回归方程Y=0.3147X-0.3099,ADAM12-S对数值随孕周增加而上升;异位妊娠组ADAM12-S对数值与孕周经直线相关回归性分析,无线性关系(r=-0.119,P=0.140,P>0.05)。结论 ADAM12-S在妊娠早期阶段能较好地反映胎盘功能情况,可作为异位妊娠诊断的辅助检查指标。

蛋白质酶解产物苦味的形成及脱除的研究进展

蛋白质水解物苦味肽的苦味是长期困扰其应用的问题 ,本文对苦味肽的产生。

血清解整合素-金属蛋白质酶12在异位妊娠早期诊断中的价值

目的探讨血清解整合素-金属蛋白质酶12（ADAM12）在异位妊娠早期诊断中的价值。方法选择2012年9月至2014年9月荆州市第二人民医院收治的40例异位妊娠孕妇作为研究组，孕周5～10周，另外选取同期产检的50例正常孕妇作为对照组，孕周5—10周。采用荧光免疫分析法检测两组孕妇各孕周血清ADAM12-S水平，并分析血清ADAM12-S水平与孕周的相关性。结果研究组各孕周血清ADAM12-S水平显著低于对照组（P〈0．05）。对照组孕妇血清ADAM12-S水平随孕周增加而显著增加（r=0．589，P=0．021）；研究组孕妇血清ADAM12-S水平随孕周变化无明显线性关系（r=0．088，P=0．567）。结论异位妊娠孕妇血清ADAM12-S水平显著低于正常妊娠妇女，检测血清ADAM12-S水平有助于异位妊娠的诊断，为患者治疗赢得宝贵时间。

基于反相有机整体柱的新型蛋白质酶反应器

以牛血清白蛋白(BSA)为标准样品,以鉴定的独立肽段数目、蛋白质鉴定覆盖率和漏切率为考察指标,通过考察酶解缓冲液、反相柱基质的多孔结构、酶解反应时间和整体柱的疏水性对反相蛋白质酶反应器酶解效率的影响,构建了一个基于反相有机整体柱的新型酶反应器,此反应器具有制备简单、通透性好、酶解时间短和蛋白质鉴定覆盖率高等特点。

蛋白质酶解实验教学中的实践探索

在蛋白质一级结构鉴定实验中将传统蛋白质酶解技术联用质谱技术是当前蛋白质研究所必需,通过探索和实践,使本科教学渗入科研第一线,激发学生的科研兴趣。

蛋白质精氨酸甲基转移酶调控骨形成与骨愈合的研究进展

蛋白质精氨酸甲基化是由蛋白质精氨酸甲基转移酶(PRMTs)介导的调控蛋白质功能的重要翻译后修饰(PTM),其与众多疾病的发生发展密切相关。精氨酸的甲基化修饰与炎症相关疾病及骨折愈合关系密切,PRMTs表达下降可导致骨折延迟愈合甚至不愈合。PRMT5、PRMT6在骨折愈合方面均有重要意义,其与PI3K-AKT通路、NF-κB通路息息相关。探讨蛋白质精氨酸甲基化与骨折愈合之间的联系,可为预防骨折延迟愈合甚至不愈合提供新思路。

蛋白质谷氨酰胺酶在毕赤酵母中的异源表达

蛋白质谷氨酰胺酶(protein glutaminase,PG)可水解蛋白质侧链的谷氨酰胺残基,生成氨和蛋白质-L-谷氨酸,从而增加负电荷、降低蛋白等电点,进而改善蛋白质的功能特性。但其生产菌株解朊金黄杆菌的产酶量较低,仅有0.258 U/mL,且基因操作效率低,故近年来多采用异源表达的方法,以提高其产量。该实验成功实现蛋白质谷氨酰胺酶酶原(Pro-PG)在毕赤酵母GS115中异源表达,还进行了培养基优化及重组酶学性质的研究。结果表明:重组毕赤酵母pPIC9K-Pro-PG/GS115在摇瓶水平经1%(体积分数)甲醇诱导120 h,表达出的Pro-PG经胰蛋白酶加工后,PG酶活力达到0.878 U/mL。酶学性质研究发现,重组的PG最适作用温度为60℃,在不超过60℃时孵育1 h其相对酶活力可保持在80%以上;该酶作用的最适pH为6.0,在pH 3.0~8.0条件下孵育1 h其相对酶活力可保持在70%以上。

蛋白质精氨酸甲基转移酶5和PD-L1在非小细胞肺癌组织中的表达及其对预后的评估价值

目的 蛋白质精氨酸甲基转移酶5(PRMT5)和程序性细胞死亡配体1(PD-L1)在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达及其对预后的评估价值。方法 选取2015年10月至2019年10月我院收治的106例NSCLC患者为研究对象,均经过病理诊断确诊为NSCLC,在手术中切除其癌组织和癌旁组织(距离癌组织大于5cm)即为NSCLC组和癌旁组。采用免疫组织化学染色法检测PRMT5和PD-L1的表达;利用Kaplan-Meier法分析PRMT5和PD-L1与NSCLC患者预后的关系;Cox回归分析影响NSCLC患者预后的危险因素。结果 与癌旁组相比,NSCLC组PRMT5和PD-L1阳性表达率显著升高(P<0.05)。PRMT5和PD-L1的表达与淋巴结转移、TNM分期、分化程度有关(P<0.05)。对NSCLC患者进行3年时间的随访,PRMT5和PD-L1阳性表达组患者生存率均低于阴性表达组(P<0.05)。多因素Cox回归分析结果显示,PRMT5和PD-L1表达水平是影响NSCLC患者预后的危险因素(P<0.05)。结论 NSCLC组织中PRMT5和PD-L1阳性表达率显著升高,与临床病理特征存在密切关系,对NSCLC患者的预后有一定的评估价值。

蛋白质精氨酸残基化学修饰酶PADs与PRMTs在人肝癌细胞系中的表达

目的探究蛋白质精氨酸脱亚胺酶(PADs)和蛋白质精氨酸甲基转移酶(PRMTs)在肝癌细胞系中的表达水平,并分析PADs催化的蛋白瓜氨酸化水平是否与PRMTs表达有关。方法通过RT-qPCR检测肝癌细胞系中PADs和PRMTs的mRNA转录水平,Western blot检测PADs、瓜氨酸化蛋白和PRMTs蛋白表达水平。利用生物信息学分析TCGA数据库中肝癌组织PADs和PRMTs的mRNA相关性,免疫组化检测肝癌组织PADs、瓜氨酸化蛋白和PRMTs表达。结果与正常肝细胞LX-2相比,PAD2和PRMT1在Huh7细胞中mRNA转录水平升高(P<0.001),PAD4、PRMT1、PRMT5和PRMT7在HepG2细胞中mRNA转录水平升高(P<0.01)。PAD2和PAD4在HepG2和Huh7中的蛋白水平显著高于LX-2(P<0.01)。瓜氨酸化蛋白在HepG2和Huh7中的水平低于LX-2。肝癌组织中PADs和PRMTs的表达强于癌旁组织,但瓜氨酸化蛋白几乎呈阴性。PAD2和所有PRMTs家族成员在临床大样本中呈显著正相关性(P<0.05)。结论肝癌细胞中PADs有较高的表达水平,而PADs催化的蛋白瓜氨酸化水平较低,可能是受胞内高水平表达的PRMTs酶竞争性影响。

微波/超声波及固定化酶技术在食品蛋白质高效水解中的应用研究进展

近年来,微波/超声波物理辅助技术和固定化酶技术在蛋白质高效水解制备多肽中得到越来越多的应用。综述了微波/超声波辅助酶解技术及新型固定化酶技术的原理、优点及其在食品蛋白质水解中的应用。同时展望了这两种技术在油料作物蛋白质高效/连续化酶解生产活性多肽工业中的应用前景。