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多层开管毛细管酶反应器的制备及在蛋白质酶切中的应用
被引量:
5
1
作者
胡佳薇
申烨华
+2 位作者
秦伟捷
张养军
钱小红
《高等学校化学学报》
SCIE
EI
CAS
CSCD
北大核心
2012年第2期268-275,共8页
以石英毛细管作为酶固定化的载体,在毛细管内壁上逐步合成树枝形大分子聚酰胺-胺(PAMAM),再通过交联剂戊二醛将胰蛋白酶直接键合到该大分子的末端氨基上,并对酶固定化条件进行了优化,制备了多层酶反应器.利用该酶反应器对马心细胞色素C...
以石英毛细管作为酶固定化的载体,在毛细管内壁上逐步合成树枝形大分子聚酰胺-胺(PAMAM),再通过交联剂戊二醛将胰蛋白酶直接键合到该大分子的末端氨基上,并对酶固定化条件进行了优化,制备了多层酶反应器.利用该酶反应器对马心细胞色素C等蛋白质进行了酶切,并对酶切的条件进行了优化.实验结果表明,该固定化酶反应器具有较高的酶切效率、良好的重现性和稳定性,可用于蛋白质组学的研究.
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关键词
开管柱
固定
酶
反应器
蛋白质酶切
树枝形大分子
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职称材料
一种新的基于适体和酶切保护分析的超灵敏蛋白质检测方法
被引量:
2
2
作者
王先良
王小利
+8 位作者
苏艳华
张迟
张莉君
李芳
李柏生
李晓波
徐淑雷
李媛媛
徐顺清
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第3期421-426,共6页
以凝血酶适体(aptamer)为例,利用适体和核酸外切酶特性,通过定量PCR扩增建立一种高灵敏的蛋白质检测方法.首先合成3段寡核苷酸序列即凝血酶适体探针,上游连接子和下游连接子.将适体探针与凝血酶温育结合后,再加入核酸外切酶I降解未能结...
以凝血酶适体(aptamer)为例,利用适体和核酸外切酶特性,通过定量PCR扩增建立一种高灵敏的蛋白质检测方法.首先合成3段寡核苷酸序列即凝血酶适体探针,上游连接子和下游连接子.将适体探针与凝血酶温育结合后,再加入核酸外切酶I降解未能结合的探针.接着将保护下来的探针与连接子杂交、连接和对连接产物进行定量PCR .分别建立连接产物标准品浓度与Ct 值的标准曲线和凝血酶浓度与连接产物浓度的标准曲线,通过定量PCR对凝血酶进行定量.结果显示,基于适体的外切酶保护凝血酶检测方法灵敏度较高,连接产物标准品浓度的对数值和Ct 值之间的方程为y =- 2 95x + 33 6 5 (R2 =0. 990 ,P <0 .0 1) ;凝血酶浓度和连接产物浓度对数值之间的方程为y =0 94x - 0 . 2 9(R2 =0 . 998,P <0 . 0 1) ,还对可能影响检测的有关参数举行了探讨.
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关键词
蛋白质
检测
适体
酶
切
保护分析
实时PCR
凝血
酶
下载PDF
职称材料
蛋白质胶内酶切技术研究进展
被引量:
1
3
作者
姜超
张学文
潘映红
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第1期61-66,共6页
胶内酶切是蛋白质组研究中衔接电泳分离和质谱鉴定的重要环节,对最终的蛋白质定性和定量分析结果有显著的影响。该技术自1992年初步建立以来,一直处于不断完善中,出现了种类繁多的改进方案。为了更有效地利用胶内酶切技术,从凝胶脱色、...
胶内酶切是蛋白质组研究中衔接电泳分离和质谱鉴定的重要环节,对最终的蛋白质定性和定量分析结果有显著的影响。该技术自1992年初步建立以来,一直处于不断完善中,出现了种类繁多的改进方案。为了更有效地利用胶内酶切技术,从凝胶脱色、杂质去除、蛋白酶切、肽段提取4个方面归纳整理了近年来蛋白质胶内酶切技术的主要研究进展。
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关键词
蛋白质
胶内
酶
切
样品制备
质谱分析
电泳分离
技术进展
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职称材料
题名
多层开管毛细管酶反应器的制备及在蛋白质酶切中的应用
被引量:
5
1
作者
胡佳薇
申烨华
秦伟捷
张养军
钱小红
机构
西北大学合成与天然功能分子化学教育部重点实验室
蛋白质组学国家重点实验室
出处
《高等学校化学学报》
SCIE
EI
CAS
CSCD
北大核心
2012年第2期268-275,共8页
基金
国家“九七三”计划项目(批准号:2010CB912701,2012CB910603)
国家自然科学基金(批准号:30621063,20735005,20875101,20905077,20975059)资助
文摘
以石英毛细管作为酶固定化的载体,在毛细管内壁上逐步合成树枝形大分子聚酰胺-胺(PAMAM),再通过交联剂戊二醛将胰蛋白酶直接键合到该大分子的末端氨基上,并对酶固定化条件进行了优化,制备了多层酶反应器.利用该酶反应器对马心细胞色素C等蛋白质进行了酶切,并对酶切的条件进行了优化.实验结果表明,该固定化酶反应器具有较高的酶切效率、良好的重现性和稳定性,可用于蛋白质组学的研究.
关键词
开管柱
固定
酶
反应器
蛋白质酶切
树枝形大分子
Keywords
Open-tubular capillary
Immobilized enzyme reactor
Protein digestion
Dendritical macromolecule
分类号
O657 [理学—分析化学]
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职称材料
题名
一种新的基于适体和酶切保护分析的超灵敏蛋白质检测方法
被引量:
2
2
作者
王先良
王小利
苏艳华
张迟
张莉君
李芳
李柏生
李晓波
徐淑雷
李媛媛
徐顺清
机构
华中科技大学同济医学院环境医学研究所
出处
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第3期421-426,共6页
基金
国家自然科学基金资助项目(No.30170051
No.30170903)~~
文摘
以凝血酶适体(aptamer)为例,利用适体和核酸外切酶特性,通过定量PCR扩增建立一种高灵敏的蛋白质检测方法.首先合成3段寡核苷酸序列即凝血酶适体探针,上游连接子和下游连接子.将适体探针与凝血酶温育结合后,再加入核酸外切酶I降解未能结合的探针.接着将保护下来的探针与连接子杂交、连接和对连接产物进行定量PCR .分别建立连接产物标准品浓度与Ct 值的标准曲线和凝血酶浓度与连接产物浓度的标准曲线,通过定量PCR对凝血酶进行定量.结果显示,基于适体的外切酶保护凝血酶检测方法灵敏度较高,连接产物标准品浓度的对数值和Ct 值之间的方程为y =- 2 95x + 33 6 5 (R2 =0. 990 ,P <0 .0 1) ;凝血酶浓度和连接产物浓度对数值之间的方程为y =0 94x - 0 . 2 9(R2 =0 . 998,P <0 . 0 1) ,还对可能影响检测的有关参数举行了探讨.
关键词
蛋白质
检测
适体
酶
切
保护分析
实时PCR
凝血
酶
Keywords
protein detection, aptamer, exonuclease protection assay, realtime-PCR, thrombin
分类号
Q503 [生物学—生物化学]
Q51 [生物学—生物化学]
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职称材料
题名
蛋白质胶内酶切技术研究进展
被引量:
1
3
作者
姜超
张学文
潘映红
机构
湖南农业大学生物科学技术学院
中国农业科学院作物科学研究所
出处
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第1期61-66,共6页
基金
国家“863”计划项目(2008AA10Z115)
国家自然科学基金项目(30971874)
+1 种基金
转基因生物新品种培育科技重大专项(2009ZX-08012-011B)
中国农业科学院科技创新工程(作物分子标记技术及其应用科研创新团队)
文摘
胶内酶切是蛋白质组研究中衔接电泳分离和质谱鉴定的重要环节,对最终的蛋白质定性和定量分析结果有显著的影响。该技术自1992年初步建立以来,一直处于不断完善中,出现了种类繁多的改进方案。为了更有效地利用胶内酶切技术,从凝胶脱色、杂质去除、蛋白酶切、肽段提取4个方面归纳整理了近年来蛋白质胶内酶切技术的主要研究进展。
关键词
蛋白质
胶内
酶
切
样品制备
质谱分析
电泳分离
技术进展
Keywords
in-gel protein digestion
sample preparation
mass spectrometry
electrophoretic separation
technical progress
分类号
Q51 [生物学—生物化学]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
多层开管毛细管酶反应器的制备及在蛋白质酶切中的应用
胡佳薇
申烨华
秦伟捷
张养军
钱小红
《高等学校化学学报》
SCIE
EI
CAS
CSCD
北大核心
2012
5
下载PDF
职称材料
2
一种新的基于适体和酶切保护分析的超灵敏蛋白质检测方法
王先良
王小利
苏艳华
张迟
张莉君
李芳
李柏生
李晓波
徐淑雷
李媛媛
徐顺清
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2005
2
下载PDF
职称材料
3
蛋白质胶内酶切技术研究进展
姜超
张学文
潘映红
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2015
1
下载PDF
职称材料
已选择
0
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参考文献
引证文献
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