汉、藏族肺结核患者血清差异蛋白质的质谱分析

目的用表面增强激光解析电离-飞行时间质谱(SELDI-TOF MS)技术比较汉、藏族肺结核患者之间及其与相应的非结核对照者之间的血清差异蛋白,以寻找各自的质谱诊断模型并比较两个民族肺结核的蛋白质差异。方法收集2008年6月至2009年3月四川大学华西医院呼吸科结核病区、西藏自治区驻成都办事处医院内科、成都市传染病医院和成都市结核病防治研究院内科住院患者及门诊健康体检者共154份血清样本,其中87例活动性肺结核患者(汉族38例,藏族49例),67例非结核对照(汉族36例,藏族31例)。SELDI-TOF MS质谱分析分为训练组和测试组:训练组包含53例肺结核(汉族23例,藏族30例)和42例非结核对照(汉族20例,藏族22例),所获得的血清质谱用决策树的学习算法来进行分析,得到的诊断模型再用另一个独立的测试组来进行准确性验证,测试组包含59份血清样本:34例肺结核(汉族15例,藏族19例),25例非结核对照(汉族16例,藏族9例)。结果训练组中得到的诊断模型质荷比(m/z)为3193.61、4592.11可以诊断出20/23例汉族肺结核和17/20例汉族对照,准确度86.04%(敏感性为86.95%,特异性为85.00%),模型m/z为4821.45能够诊断出28/30例藏族肺结核和19/22例藏族对照,准确度90.38%(敏感性93.33%,特异性86.36%),而模型m/z为4091.98、3398.27、7970.44、4965.51、7970.44则能够将藏族肺结核从汉族患者中区分出来(准确度92.45%)。在相应的验证组中,3个诊断模型的准确度分别为70.96%、71.42%和67.92%。同时发现藏、汉族肺结核之间有16个差异蛋白峰。结论SELDI-TOF MS对汉、藏族肺结核的诊断均具有较高价值,两个民族的肺结核患者存在一定的蛋白质表达差异。

电泳技术在蛋白质分析中的应用进展

随着人类基因组计划的逐步完成,人类进入了后基因组时代,蛋白质组则是其中的重要方面,寻求一种快速、高效的蛋白检测技术已成为时代的需求。毛细管电泳-质谱（capillary electrophoresis-mass spectrometry,CE-MS）技术综合了CE的高灵敏度、高分离效率所需的样品量少、

胆道闭锁和淤胆型肝炎患儿血清蛋白质指纹图谱比较

目的比较胆道闭锁与淤胆型肝炎患儿血清蛋白质指纹图谱,以发现二者的差异蛋白质分子。方法收集60日龄前就诊、经手术证实为胆道闭锁和经过治疗、随访排除胆道闭锁的其他淤胆型婴儿肝炎患儿各21例的血清,采用弱阳离子交换蛋白质芯片（WCX2）为检测介质,经表面加强激光解离-飞行时间-质谱（SELDI-TOF-MS）测定,得到蛋白质指纹图谱,并运用BioMarker Wizard软件分析比较。结果在质荷比（m/z）1500～30000,检测出的25个蛋白峰中,强度变异系数15%;比较二者血清蛋白质指纹图谱,发现质荷比为8677的蛋白质峰在胆道闭锁患儿组下调（P〈0.05）。该蛋白质的减少可能在胆道闭锁的形成中起到一定作用,可能是胆道闭锁的蛋白质分子标志。根据发现的差异蛋白的分子质量及等电点,在Swiss蛋白质数据库中检索,发现与载脂蛋白AⅡ非常接近。结论SELDI-TOF-MS是一种快速、简便和高通量的分析方法,重复性好,与主要针对大分子质量的双相电泳研究在技术上形成互补,能直接筛选出胆道闭锁与淤胆型肝炎患儿的血清蛋白质指纹图谱中的差异蛋白质分子,可望用于胆道闭锁的早期鉴别诊断。

蛋白质芯片技术与电化学发光技术检测多肿瘤标志物结果的评价

目的:研究蛋白质芯片法与电化学发光法检测多肿瘤标志物结果的差异。方法:分别用蛋白质芯片法和电化学发光法对69例肿瘤患者和65例正常对照组进行12项指标的检测,即糖类抗原199(CA199)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、癌胚抗原(CEA)、糖类抗原242(CA242)、铁蛋白(ferritin)、β-人绒毛膜促性腺激素(β-HCG)、甲胎蛋白(AFP)、游离前列腺特异性抗原(F-PSA)、前列腺特异性抗原(PSA)、糖类抗原125(CA125)、人生长激素(HGH)和糖类抗原153(CA153)。结果:蛋白质芯片法和电化学发光法检测12项指标的符合率均大于85%,总符合率为90.4%。2种方法有相关性(P<0.05)。结论:蛋白质芯片能正确反映肿瘤标志物的水平,且较电化学发光法简单、方便,适合中小型医院开展。电化学发光法能更精确检测高含量肿瘤标志物。

多囊卵巢综合征蛋白质指纹谱研究

目的:探讨用蛋白质芯片技术筛选多囊卵巢综合征(polycysticovarysyndrome,PCOS)患者血清蛋白质表达谱,寻找血清中的标志性蛋白。方法:采用表面增强激光解离飞行时间质谱技术(surfaceenhancedlaserdesorption/ionizationtimeofflightmassspectrometry,SELDITOFMS),运用WCX2(weakcationexchange)蛋白质芯片检测31例PCOS患者和30例正常对照血清蛋白质谱,获得的蛋白质谱采用BiomarkerWizard软件分析,初步筛选蛋白质峰,结合生物信息学的支持向量机(supportvectormachines,SVM)方法建立并测试PCOS患者的蛋白质指纹图谱模型。结果:在芯片上捕获到225种蛋白质,用质谱仪筛选出PCOS患者与正常对照组相比的23种差异蛋白,从中再次筛选出4种蛋白质组成PCOS的蛋白质谱最优化模型,PCOS患者中质荷比(m/z)分别为6628,6430,6834的3种蛋白质表达上调,m/z为3954的蛋白质表达下调。模型经三倍交叉验证后用盲法测定,其敏感性和特异性分别为83.3%和86.7%,阳性预测值为87.2%。结论:蛋白质芯片技术可以快速、有效地筛选出PCOS患者血清差异蛋白,结合SVM可建立一个由4种蛋白质组成的蛋白质指纹图谱模型,可对PCOS做很好的诊断预测,对这4种蛋白质尤其是m/z为6628的蛋白质进行研究,有助于PCOS病因学进展及诊断标记物的发现。

表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱及其在结直肠癌蛋白质组学研究中的应用

结直肠癌是威胁人类健康的常见肿瘤之一,目前缺乏敏感度、特异度高的早期诊断方法。蛋白质组学为结直肠癌许多研究领域拓开了新视野,表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)是蛋白质芯片和质谱技术的结合,主要由蛋白质芯片、芯片阅读器和生物信息学3大部分组成,可直接分析患者血清、淋巴液、脑脊液、尿液、细胞分泌液等样品而无需复杂的样品制备,具有快速、简便、易行高通量平行分析等特点,是蛋白质组学的主要技术平台之一,目前已经初步应用于结直肠癌早期诊断、术后随访及标志物鉴定等方面的研究。作者综述了SELDI-TOF-MS的基本原理、技术特点及其在结直肠癌蛋白质组学研究中的应用和展望。

结核病患者与健康人血清蛋白质谱的比较研究

目的 比较结核病患者与健康人血清蛋白质谱,寻找结核病相关特异血清蛋白质,以期发现新型结核病血清学诊断标志物.方法 应用弱阳离子交换蛋白质芯片(WCX)和表面增强激光解吸-电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术对包括54例菌阳肺结核(菌阳组)、45例菌阴肺结核(菌阴组)、18例肺外结核(肺外组)共117例结核病患者(结核组)及62例健康对照者(对照组)进行了血清蛋白质谱检测,并应用ClinProTools分析软件进行分析,找出差异蛋白质.结果 菌阳组-对照组、菌阴组-对照组、肺外组-对照组和结核组-对照组间分别存在19、14、26和30个差异血清蛋白质,其中分别有11、9、15和15个蛋白质在患者血清中表达上调；相对分子质量分别为1060、1944、2081和3954的4个血清蛋白质为各患者组与对照组间共同存在的差异血清蛋白质,其中相对分子质量为1060的蛋白质在患者血清中表达下调.结论 结核病患者与健康人之间血清蛋白质谱存在差异,有望通过血清蛋白质谱的比较分析,寻找到结核病相关特异血清蛋白质而发现新型结核病血清学诊断标志物.但尚需大样本量、多对照系的进一步研究予以确证.

联合应用蛋白质芯片技术和前列腺特异抗原早期诊断前列腺癌的研究

目的应用表面增强激光解析电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)蛋白质芯片技术探讨联合前列腺特异抗原(PSA)早期诊断前列腺癌的方法。方法以病理确诊的45例前列腺癌和45例良性前列腺增生患者血清为研究对象,采用SELDI蛋白质芯片技术检测血清的蛋白表达图谱,分析差异蛋白,用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清PSA,对所得差异蛋白联合PSA进行分析。结果在前列腺癌和良性前列腺增生患者血清中检测到9个差异蛋白(P<0.01),前列腺癌患者差异蛋白7个高表达,2个低表达。联合相对分子质量3771.14和4481.59两个差异蛋白诊断前列腺癌,其敏感性为86.67%,特异性为88.89%。3771.14蛋白与血清PSA诊断前列腺癌具有很强的互补性。结论通过SELDI蛋白质芯片技术可以筛选出前列腺癌的潜在标志蛋白,多个差异蛋白联合检测可以提高前列腺癌诊断的敏感性和特异性;联合3771.14蛋白与血清PSA可以更好地早期诊断前列腺癌。

创伤性颅脑损伤患者血清LGT蛋白质组动态变化及临床意义探讨

目的探讨创伤性颅脑损伤(TBI)患者血清LGT蛋白质组的动态变化规律,初步分析其在TBI患者病情判断及预后评估中的临床意义。方法将我院收治的69例TBI患者和30名门诊体检者血清用蛋白质指纹仪及WCX2蛋白质芯片检测血清LGT蛋白质组,共检测212人次。在指纹图上,质荷比(M/Z)为相对分子质量11100～11900之间出现一峰簇样指纹标志且蛋白峰值>5%为阳性诊断标准,依据LGT蛋白质组动态变化共分为4组,观察4组中的病死率。计量资料采用SNK-q检验和Wilcoxon秩和检验,计数资料采用χ2检验,相关性分析采用Spearman相关分析。结果入院初LGT蛋白质组丰度在重度颅脑损伤组[(13.5±9.3)%]和轻中度颅脑损伤组[(5.2±4.9)%]明显高于健康对照组[(1.6±0.5)%,P均<0.01];重度颅脑损伤组LGT蛋白质组丰度明显高于轻中度颅脑损伤组(P<0.01),而健康对照组血清中无表达。LGT蛋白质组丰度与预后呈负相关(r=-0.415,P<0.01),死亡组LGT蛋白质组丰度[(15.2±12.2)%]明显高于存活组[(8.5±6.4)%,P<0.01]。LGT蛋白质组持续阳性组病死率70%,持续阴性组病死率为5%,LGT蛋白质组经治疗由阳性转成阴性组病死率为8%,LGT蛋白质组经治疗由阴性转成阳性组病死率为43%。结论 LGT蛋白质组为TBI患者病理状态下合成的一组蛋白质,与病情严重程度及预后密切相关,对TBI患者病情判断及预后评估可能有重要的临床指导意义。

SELDI蛋白质芯片平台在结直肠癌蛋白质组学研究中的应用

表面增强激光解吸/离子化飞行时间质谱(surface enhanced laser desorption ionization-time of flight-mass spectroscopy,SELDI-TOF-MS)蛋白质芯片平台是蛋白质组学的主要技术平台之一,笔者综述了SELDI蛋白质芯片平台的基本原理及其在结直肠癌蛋白质组学研究中的应用和展望。

蛋白质芯片检测技术的研究进展

蛋白质芯片为快速、高效、高通量地分析和检测蛋白质提供了强有力的工具。在后基因组时代,它已成为人们研究的热点之一。本文就近年来蛋白质芯片的检测现状及新进展作一简要综述。

SELDI蛋白质芯片平台及其在结直肠癌蛋白质组学中的应用

结直肠癌是威胁人类健康的常见肿瘤之一,目前缺乏敏感度、特异度高的早期诊断方法。蛋白质组学为结直肠癌的许多研究领域开拓了新的视野,表面增强激光解吸/离子化飞行时间质谱(surface enhanced la-ser desorption ionization-time of flight-mass spectroscopy,SELDI-TOF-MS)蛋白质芯片平台是蛋白质组学的主要技术平台之一,本文综述了SELDI蛋白质芯片平台的基本原理、技术特点及其在结直肠癌蛋白质组学研究中的应用和展望。

蛋白质芯片SELDI-TOF-MS技术与泌尿系肿瘤研究

蛋白质芯片SELDI-TOF-MS技术是蛋白质组学研究的全新技术平台,具有广阔的应用前景。现就其技术原理及在泌尿系肿瘤研究中的应用进展作一综述。

荧光检测孕妇感染蛋白质芯片制备的初步研究

目的:建立一种用蛋白质芯片检测血清中弓形虫、巨细胞病毒、风疹病毒、单纯疱疹病毒(TORCH)抗体的新方法。方法:采用玻片表面修饰琼脂糖膜制备蛋白质芯片,以荧光标记抗体,检测血清中TORCH IgM抗体。结果:所制备的蛋白质芯片可检测到血清中微量TORCH抗体的存在,荧光强度和抗原质量浓度呈线性关系,抗体之间交叉反应可忽略不计。该芯片法与ELISA试剂盒检测阴阳性符合率均100%。结论:蛋白质芯片技术检测孕妇TORCH感染,具有高通量、微型化、操作简便等优点,可望应用于临床中。

人精子的蛋白质组学研究进展

随着质谱技术不断发展,精子蛋白质的检测已实现高通量化,蛋白质组学也成为研究精子的重要工具之一。概述人正常精子的蛋白质组学、精子获能相关的蛋白质组学及临床上少、弱、畸形等异常精子的蛋白质组学三个方面的研究进展。蛋白质组学对睾丸组织特异的三磷酸甘油醛脱氢酶(glyceraldehyde-3phosphate dehydrogenase,testis specific,GAPDHS)、外致密纤维蛋白(outer dense fiber protein,ODF)、A激酶锚定蛋白(A kinase anchoring protein,AKAP)及热休克蛋白(heat shock proteins,HSP)等蛋白结构、功能及丰度改变的深入研究,有助于增进对精子发生、精子功能及受精机制的理解;同时筛选出部分关键蛋白,如人可溶性半乳糖凝集素3结合蛋白(lectin galactoside-binding,soluble 3 binding protein,LGALS3BP)、组蛋白丛1 H2ba(histone cluster1,H2ba,HIST1H2BA)、苹果酸脱氢酶2(mitochondrial malate dehydrogenase 2,MDH2)等可能成为男性不育病因分析及研究的靶标,对探索男性不育机制、探索男性避孕新靶点有潜在的意义。

蛋白质芯片技术在矽肺早期血清生物标志物筛选中的应用

目的寻找可对矽肺患者进行早期诊断的血清特异性生物标志物。方法选择接触矽尘未患病者(0组)、接触矽尘有可疑矽肺者(0+组)、接触矽尘后患I期矽肺者(I组)以及未接触矽尘的正常人(正常对照组)各20例,利用表面加强激光解析电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术检测各组血清蛋白质指纹图谱。结果质荷比(M/Z)为2746、3269、3402、3941、4184、5488、5914、6122、7572、7937的10个标志分子在矽尘暴露人员(0、0+、I组)和正常人的血清中差异表达,相对含量变化具有统计学意义(P<0.05)。其中M/Z为2746的分子在矽尘暴露人员血清中高表达,而在正常人血清中低表达;相反,M/Z为4184、5914和6122的分子在正常人血清中高表达,而在矽尘暴露人员血清中低表达。M/Z为2938、3269、3821、4095、5071、5483、5640的7个标志分子在矽尘暴露人员各组血清中差异表达,相对含量变化具有统计学意义(P<0.05),其中M/Z为5071、5483和5640的分子在矽尘暴露人员0组和0+组中均为低表达,而在I组中高表达。结论M/Z为2746、4184、5914和6122的分子可能成为矽肺患者与正常人的鉴别诊断指标,而M/Z为5071、5483和5640的分子可能成为矽肺的早期诊断指标。

蛋白质组学的研究现状及其在2型糖尿病中的应用

蛋白质组学是对基因编码蛋白质进行大规模分析的一门新兴学科。本文概述蛋白质组学的基本技术:双相凝胶电泳、多维液相色谱、生物质谱技术及蛋白质芯片在2型糖尿病(T2DM)中的应用,从而探讨T2DM中与炎症及脂代谢紊乱相关的生物蛋白:C反应蛋白、α2-巨球蛋白、载脂蛋白A1、Clusterin及锌-α-2糖蛋白的研究进展,发现早期诊断T2DM新的特异性标志物及药物作用靶点。

蛋白质芯片检测法在过敏原特异性抗体检测中的应用

目的探讨蛋白质芯片技术诊断过敏性疾病的可行性。方法应用蛋白质芯片方法,将10种常见过敏原抗原集成到活化的玻璃芯片上,并保持蛋白质活性,通过与202例患者标本的反应,同时得到10种过敏项目的检测结果。结果蛋白质芯片法检测结果与对照方法间符合率较高,差异无统计学意义(P>0.05)。结论蛋白质芯片方法可以高通量、即时地检测过敏原血清中IgE的变化,灵敏度达0.5IU/mL,可满足临床上对变态反应性疾病的诊断要求。

蛋白质芯片技术及其在临床检测中的应用

随着人类基因组(genome)排序工作的完成,从基因水平向蛋白质水平深化已成为生命科学研究的迫切需要和新的任务。蛋白质芯片技术是一种高通量、高灵敏度、高特异性且缩型化的蛋白质分析技术。现将其在临床检测中的应用作一综述。

伤寒、副伤寒分型诊断蛋白质芯片法的建立和应用

目的探讨应用蛋白质芯片技术诊断伤寒、副伤寒的可行性。方法利用蛋白质芯片方法,将伤寒抗原(To、Th)和副伤寒抗原(Ta、Tb、Tc)及伤寒Vi荚膜多糖抗原集成到已经活化处理的玻璃芯片上,使其保持蛋白质活性和立体结构不变。对86例经血培养确认的已知标本和100例健康体检标本进行检测,并与肥达氏反应作比较。结果蛋白质芯片法检测结果与血培养结果符合率高,灵敏度为97.6%,特异度为98.0%,而肥达氏反应灵敏度为60.4%,特异度98.0%,两方法之间差异有统计学意义(P<0.01)。结论蛋白质芯片法具有高通量、可并行检测伤寒、副伤寒多种抗体的优势,为伤寒、副伤寒的诊断提供了有效手段。