表面等离子体共振光谱研究蛋白质-高分子结合体在金表面的自组装

研究了蛋白质-高分子结合体在金片表面的自组装行为.首先制备了一种引发剂2-溴-2-甲基丙酸-2-氨氧基乙酯(ABM),该引发剂可以与5′-磷酸吡哆醛(PLP)活化的牛血清白蛋白(BSA)的氮端相连,进而得到大分子引发剂BSA-Br.最后以甲基丙烯酸寡聚乙二醇酯(OEGMA)为单体,利用原子转移自由基聚合法(ATRP)制备BSA-POEGMA结合体.利用红外光谱(FTIR)、紫外可见分光光度计(UV-Vis)、基质辅助激光解析串联飞行时间质谱仪(MALDI-TOF-MS)对各步产物进行表征.利用表面等离子体共振光谱(SPR)研究BSA-POEGMA结合体在金片表面的自组装行为,以及金片表面吸附的BSA-POEGMA结合体对其他蛋白质包括溶菌酶(Lys)和纤维蛋白原(Fib)的吸附效果影响.

水稻籽实中蛋白质-Cd、Pb结合体及其稳定性

通过凝胶层析方法 ,对水稻籽实中的蛋白质 Cd、Pb结合形态特征及其稳定性进行了研究 .结果表明 :水稻籽实Tris HCl提取液经SephadexG 75分离 ,洗脱液得到 3个紫外吸收峰 ,在第 1、3峰处出现了Cd、Pb浓度峰 ,其蛋白质 Cd、Pb结合体的表观分子量为 5 4.5KD和 5 .5KD .在蒸煮加热处理后 ,水稻籽实中蛋白质 Cd、Pb结合体发生变性 ,使分子量为 5 4.5KD的蛋白质 Cd、Pb结合体完全破坏 ,分子量为 5 .5KD的结合体也部分地被破坏 ,与蛋白质结合的Cd、Pb被释放出来 .胃蛋白酶和胰蛋白酶消化处理后 ,也能够破坏蛋白质 Cd、Pb结合体的形态 ,洗脱液中Cd、Pb的浓度分布也发生了变化 ,在第 1、3紫外吸收峰处的Cd、Pb浓度也明显降低 .另外 ,在第 3峰以后的洗脱液中也检测到Cd。

蛋白质高分子结合体

蛋白质高分子结合体是蛋白质与高分子化合物以特定位置或方式结合的产物。其中,蛋白质(包括酶和多肽)分子中氨基酸残基上的氨基、巯基和羧基是常用的结合位点。本文主要对蛋白质高分子结合体的制备方法进行了综述。聚乙二醇是合成高分子中能够有效改善蛋白质性能的修饰剂,而多糖则是用于制备蛋白质高分子结合体较成功的天然高分子化合物。"点击化学"、活性聚合技术等技术已经被成功应用于蛋白质高分子结合体的制备。某些具有特异结合功能基团的化合物(如金属卟啉、生物素等)与高分子共价结合后也可制备蛋白质高分子结合体。在研究蛋白质高分子结合体制备方法的基础上,近年来开始了这类大分子的自组装行为研究,尤其是对巨型双亲性分子自组装行为的研究,这为设计和构筑先进功能材料提供了新的思路。与高分子化合物的结合是改善蛋白质性能和拓宽蛋白质应用范围的重要技术之一。蛋白质高分子结合体不但可用于生物医药领域,而且在纳米技术和材料科学等领域具有潜在的优势。

角蛋白组氨酸金属结合体的制备及其对SOD酶的模拟

本文将羽毛角蛋白(FK)与组氨酸(His)复合,再与金属离子M(Cu^(II)、Zn^(II)、Ni^(II)、Mn^(II)络合成功制得了角蛋白组氨酸金属结合体FK-HisM_x(M=Cu、Zn、Ni、Mn)。采用紫外光谱(UV-Vis)、红外光谱(IR)、圆二色谱(CD)、热重分析(TGA)、扫描电镜(SEM)等手段对FK-HisM_x(M=Cu、Zn、Ni、Mn)的结构进行了表征。用核黄素/DL-甲硫氨酸-NBT还原法考察了FK-HisM_x对超氧阴离子自由基(O_2·^-)的清除作用,研究了其清除机理。结果发现:FK-His M_x均具有清除O_2·^-的能力。其中,FK-HisCu_x具有较高的O_2·^-清除活性,FK-HisCu_(60)的O_2·^-清除活性最好,其抗O_2·^-的EC_(50)值为0.0115μmol·L^(-1),对Cu,ZnSOD的模拟度高达356.5%。

1α,25-二羟维生素D_3对体外培养人输卵管上皮细胞VDR、CaBP-D28k表达的影响

目的:探讨1α,25-二羟维生素D3[1α,25-(OH)2D3]对体外培养人输卵管上皮细胞活性及细胞维生素D受体(VDR)、钙结合蛋白calbindin-D28k(CaBP-D28k)表达的影响。方法:以不同浓度(0,10-10,10-9,10-8,10-7mol/L)1α,25-(OH)2D3处理体外培养人输卵管壶腹部上皮细胞,分别于不同时间收集细胞。应用溴化四唑蓝比色法检测细胞活性,逆转录聚合酶链反应法、免疫印迹法检测细胞VDR、CaBP-D28k mRNA及其蛋白表达。结果:1α,25-(OH)2D3对体外培养人输卵管上皮细胞增殖无影响。以不同浓度1α,25-(OH)2D3处理细胞12 h,与对照组比较,10-7mol/L 1α,25-(OH)2D3组细胞VDR、CaBP-D28k mRNA表达显著增加(P均<0.05)。以10-7mol/L1α,25-(OH)2D3处理细胞不同时间,与对照组比较,处理6h,12h后细胞VDR、CaBP-D28k mRNA表达显著增加(P均<0.05);处理24h,48h后细胞VDR、CaBP-D28k蛋白表达显著增加(P均<0.05)。结论:在体外培养条件下,1α,25-(OH)2D3不影响人输卵管上皮细胞增殖,1α,25-(OH)2D3可能通过VDR上调人输卵管上皮细胞CaBP-D28k的表达。

蛋白质-POEGMA结合体的合成与表征

首先利用5'-磷酸吡哆醛酯(PLP)对牛血清白蛋白(BSA)的氮端进行定位活化,之后与2-溴-2甲基丙酸-2-氨氧基乙酯(ABM)反应形成大分子引发剂(BSA-Br).最后以寡聚乙二醇甲基丙烯酸酯(OEGMA)为单体,通过原子转移自由基聚合法(ATRP)制备带有2条POEGMA高分子链的蛋白质高分子结合体(BSAPOEGMA).利用红外(FTIR)、核磁共振谱(1H-NMR)、紫外分光光度计(UV-Vis)、基质辅助激光解析串联飞行时间质谱仪(MALDI-TOF-MS)等分析技术对所合成化合物进行表征.实验结果表明各步骤的化合物及最终的蛋白质高分子结合体都具有预期结构.

金属卟啉蛋白质结合体的结构与功能

在生命活动中起重要作用的蛋白质和金属卟啉是典型的生物高分子和金属配合物,而且绝大部分蛋白质与金属卟啉是通过形成结合体共同发生作用的,因此,研究天然金属卟啉蛋白质结合体的结构与功能并进行人工模拟受到关注并取得了很大进展。本文在对蛋白质与金属卟啉的结构与类型进行简单介绍的基础上,综述了金属卟啉与蛋白质的天然结合体,如细胞色素P450、过氧化物酶、血红蛋白、肌红蛋白及脑红蛋白等。总结了金属卟啉与蛋白的人工结合体,如原卟啉、血卟啉及其衍生物与血清白蛋白的结合体;合成水溶性与不溶性金属卟啉与白蛋白的结合体。介绍了人工合成蛋白,即基因重组蛋白与合成金属卟啉的结合体,如用作人工合成血液的栏式铁卟啉白蛋白结合体。到目前为止,不但金属卟啉可以合成,而且白蛋白、血红蛋白也可以通过基因重组进行人工合成。金属卟啉蛋白质结合体已应用于制备人工血液、疾病检测、治疗,及光解水产氢等多个领域。

“活性”/可控自由基聚合反应制备聚合物-蛋白质/多肽生物结合物

将蛋白质或多肽连接到高分子链上,能够改善蛋白质/多肽的稳定性、生物相溶性和溶解性而赋予其优异的应用性能,所得聚合物-蛋白质/多肽生物结合物已经被广泛应用于药物载体、生物材料、纳米材料等领域。本文介绍借助"活性"/可控自由基聚合反应制备新型功能高分子材料的原理与方法,以及其合成聚合物-蛋白质/多肽生物结合物的国内外研究进展。

PM_(2.5)通过激活NLRP3/Caspse-1通路诱导大鼠子宫炎症反应

颗粒物(PM)对呼吸系统、心血管系统、神经系统和免疫系统均有损害,但目前关于吸入颗粒物对生殖损伤的研究较少。本研究旨在探讨细颗粒物(PM_(2.5))短期暴露对大鼠子宫炎症损伤及其作用机制。PM_(2.5)暴露30 d后,高剂量组大鼠的子宫脏器系数、内膜上皮细胞厚度和腺上皮高度均明显高于对照组(P<0.05),抑制剂MCC950则能明显降低PM_(2.5)对子宫的影响。子宫组织免疫荧光双染色结果显示,PM_(2.5)暴露组子宫内CD45白细胞和CD11b巨噬细胞均明显增加(P<0.05)。Elisa法检测子宫组织和血清中白介素1β(IL-1β)和转化生长因子-β1(TGF-β1),暴露组子宫组织和血清中IL-1β和TGF-β1含量明显升高(P<0.05)。Western印迹法检测结果显示,PM_(2.5)上调核苷酸结合低聚体结构域样受体3(NLRP3)、凋亡相关斑点样蛋白质(ASC)、pro-IL-1β、pro-Caspase-1和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)的蛋白质表达量(P<0.05)。与高剂量组相比,NLRP3抑制剂MCC950能明显降低NLRP3/Caspase-1通路中关键蛋白质表达水平(P<0.05)。综上,PM_(2.5)通过激活NLRP3/Caspase-1信号,诱导大鼠子宫炎症反应,为PM_(2.5)生殖毒性预防和治疗提供理论基础。

PRRSV 2b蛋白与LGALS1相互作用的验证研究

旨在研究猪繁殖与呼吸综合症病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)2b蛋白与宿主细胞蛋白之间的相互作用。本研究利用酵母回返试验、GST-pull down试验、免疫共沉淀试验3种方法对LGALS1与PRRSV 2b蛋白间是否相互作用进行验证。结果表明:在酵母回返试验中,含有LGALS1与2b基因的杂交酵母菌株在SD/-Trp-Leu-His-Ade/AbA/X-α-gal的平板上生长出蓝色菌落;在GST-pull down试验中,LGALS1与2b蛋白反应的样品经Western blot可检测到融合蛋白带;在免疫共沉淀试验中,LGALS1与2b蛋白反应的样品经HA单抗沉淀后,经Western blot可检测到相应蛋白带。该研究证明了LGALS1与PRRSV 2b蛋白间发生相互作用,为研究PRRSV感染途径和增殖过程提供了理论基础。

蛋白质组学在大肠癌气血亏虚证中的应用研究

目的:探讨蛋白质组学在大肠癌气血方虚证中的研究情况,筛选大肠癌气血亏虚证、瘀血证及平和体质大肠癌患者血清差异表达的蛋白质。方法:收集大肠癌姑息期气血亏虚证、瘀血证和大肠癌平和体质患者外周血清各6例,通过双向凝胶电泳以及质谱鉴定和生物信息学分析,寻找在大肠癌姑息期气血亏虚证患者血清中特异表达的蛋白质。结果:选择表达差异明显的3个蛋白质点进行质谱鉴定和生物信息学分析,其中的白细胞介素-8(IL-8)、纤维结合蛋白在大肠癌姑息期气血亏虚证患者血清中均为高表达;血清载脂蛋白A-I前体在大肠癌姑息期气血亏虚血清中为低表达。结论:三种蛋白差异表达蛋白质的组合性变化可能是大肠癌气血亏虚证的物质基础,具有潜在的诊断、预后标志物或治疗靶点的意义。