早产大鼠肺表面活性物质蛋白质B基因表达的调节

为了观察地塞米松、磷脂酰甘油、转化生长因子－β３（ＴＧＦ－β３）等对早产大鼠肺表面活性物质蛋白质Ｂ（ＳＰ－Ｂ）基因表达的调节。利用早产大鼠肺组织块无血清培养，逆转录聚合酶链反应和总ＲＮＡ抽提、杂交等方法。结果地塞米松使早产大鼠肺ＳＰ－Ｂ基因表达增加，随地塞米松浓度增加、时间增长作用明显。１００ｎｍｏｌ／Ｌ地塞米松，２４小时为最大效应。１００ｎｍｏｌ／ＬＴ４无明显作用。ＰＧ刺激４小时增加ＳＰ－Ｂ表达，５０～２５０μｍｏｌ／Ｌ范围内随浓度增加作用增强。ＴＧＦ－β３对ＳＰ－Ｂ基因表达无明显影响。但ＴＧＦ－β３可明显抑制１００ｎｍｏｌ／Ｌ地塞米松增加ＳＰ－Ｂ基因表达的效应。提示此研究为更有效预防和治疗新生儿呼吸窘迫综合征提供了实验与理论基础。

载脂蛋白质B mRNA编辑酶催化多肽3G抑制乙型肝炎病毒和鸭乙型肝炎病毒复制

目的了解载脂蛋白质B mRNA编辑酶催化多肽3G(APOBEC3G)对乙型肝炎病毒(HBV)和鸭乙型肝炎炎病毒(DHBV)复制的抑制作用。方法从健康人外周血单个核细胞提取RNA,逆转录聚合酶链反应扩增APOBEC3G,将产物克隆到pXF3H载体的EcoRⅠ和HindⅢ酶切位点以构建真核表达质粒；以ayw亚型HBV全长质粒构建具有复制能力的1．3倍HBV质粒(pHBV1．3)。不同剂量的APOBEC3G真核表达质粒与pHBV1．3共转染HepG2细胞；酶联免疫吸附法检测细胞培养上清液的乙型肝炎表面抗原和e抗原水平,Southern blot和Northem blot分析HBV核衣壳相关DNA和RNA的水平变化。不同剂量APOBEC3G真核表达质粒与头尾相接的2倍DHBV质粒共转染LMH鸡肝癌细胞,Southern blot分析DHBV核衣壳相关DNA水平变化。结果成功构建APOBEC3G真核表达质粒和具有复制能力的1．3倍HBV质粒。APOBEC3G抑制乙型肝炎表面抗原和e抗原的分泌,转染细胞内HBV核衣壳相关RNA表达水平下降,而对核心蛋白质的表达没有影响；APOBEC3G对转染细胞内HBV和DHBV核衣壳相关DNA水平具有剂量依赖的抑制效应。结论APOBEC3G对HBV和DHBV复制具有抑制作用。

抗苏云金芽孢杆菌Cry1B毒蛋白质单链抗体的筛选与鉴定

利用人源化噬菌体抗体库筛选抗Bt Cry1B毒蛋白质的单链抗体(Single-chain antibodies,scFv)。将扩增后的噬菌体抗体库与固相化包被的Cry1B毒蛋白质特异性结合,经4轮"吸附-洗脱-扩增"后,富集特异性识别Cry1B毒蛋白质的噬菌体单链抗体。从最后一轮筛选中随机挑取单菌落进行单克隆ELISA鉴定,对阳性克隆进行PCR扩增、DNA电泳鉴定及测序,成功筛选获得8个阳性噬菌体scFvs,经鉴定均有完整外源基因片段插入。挑取阳性值最高的scFv(1E2)建立了基于单链抗体的Cry1B毒蛋白质间接竞争ELISA检测方法。结果表明,Cry1B毒蛋白质对噬菌体scFv(1E2)的抑制中浓度(IC50)为1.075μg/ml,最低检测限(IC10)为0.013 4μg/ml,线性检测范围在0.5μg/ml至4.0μg/ml之间。

蛋白质酪氨酸磷酸酶1B(PTP1B)与2型糖尿病及肥胖的关系

蛋白质酪氨酸磷酸酶 1B(PTP1B)是一种在体内广泛表达的胞内蛋白质酪氨酸磷酸酶 ,在调节胰岛素敏感性和能量代谢的过程中起着重要作用。通过抑制PTP1B可增加胰岛素和瘦蛋白 (leptin)的活性 ,为寻找 2型糖尿病。

微小RNA-204-5p靶向蛋白质酪氨酸磷酸酶1B基因对缺氧复氧诱导的大鼠心肌细胞氧化应激的影响

目的探讨miR-204-5p对缺氧复氧诱导大鼠心肌细胞H9C2氧化应激的调控作用机制。方法体外培养大鼠胚胎心肌细胞H9C2,构建心肌细胞缺氧/复氧模型。实验分为空白组、缺氧复氧组、缺氧复氧+miR-con组、缺氧复氧+miR-204-5p组、缺氧复氧+miR-204-5p+pcDNA组、缺氧复氧+miR-204-5p+pcDNA-蛋白质酪氨酸磷酸酶1B(PTP1B)组。实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)和蛋白质印迹法(Westernblotting)检测miR-204-5p和PTP1B的表达。双荧光素酶报告基因实验和Westernblotting验证miR-204-5p和PTP1B的靶向调控关系。四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色(MTT)法检测心肌细胞存活率。试剂盒检测乳酸脱氢酶(LDH)、心肌肌钙蛋白(cTnT)、超氧化物歧化酶(SOD)、活性氧簇(ROS)和丙二醛(MDA)水平变化。流式细胞术检测心肌细胞凋亡情况。结果缺氧复氧处理可显著抑制心肌细胞miR-204-5p表达,促进PTP1B表达。PTP1B是miR-204-5p的靶基因,miR-204-5p可负性调控PTP1B的表达。缺氧复氧处理显著抑制细胞存活,降低SOD水平,提高LDH、ROS和MDA水平,促进细胞凋亡。过表达miR-204-5p可降低LDH、ROS和MDA水平,促进细胞存活,降低细胞凋亡;过表达PTP1B可部分削弱miR-204-5p过表达对缺氧复氧诱导心肌细胞凋亡和氧化应激的影响。结论miR-204-5p通过靶向下调PTP1B抑制心肌细胞氧化应激,促进细胞存活,抑制细胞凋亡,对心肌细胞发挥保护作用。

重组人白细胞介素-6对脂肪细胞蛋白质酪氨酸磷酸酶1B、白细胞介素-6及抵抗素基因表达的影响

目的观察重组人白细胞介素-6(rhIL-6)对SW872脂肪细胞蛋白质酪氨酸磷酸酶1B(PTP1B)、抵抗素及IL-6基因表达的影响,探讨rhIL-6对脂肪细胞分泌功能的调节作用。方法体外培养,油酸诱导SW872前脂肪细胞分化为成熟的脂肪细胞,在培养液中加入不同水平rhIL-6(0、1、5、10、20、50μg/L)作用24 h,加入20μg/L rhIL-6后分别作用不同时间(0、4、8、12、24 h)。收集细胞提取总RNA,采用半定量反转录酶聚合酶链反应方法检测SW872脂肪细胞PTP1B、抵抗素、IL-6 mRNA水平。结果rhIL-6 1μg/L作用24 h,对SW872脂肪细胞IL-6 mRNA的表达无影响;随着rhIL-6水平的增加,SW872脂肪细胞IL-6 mRNA的表达水平逐渐增加,但以20μg/L rhIL-6的作用最强(F=233.9 P<0.01);20μg/L rhIL-6作用4 h即可促进SW872脂肪细胞IL-6 mRNA的表达,随着作用时间的延长,其促进作用更加明显(F=247.8 P<0.01)。1μg/L rhIL-6作用24 h,对SW872脂肪细胞PTP1B mRNA的表达无影响;5μg/L rhIL-6即可促进SW872脂肪细胞PTP1B mRNA表达,50μg/L rhIL-6作用24 h,对PTP1B mRNA的表达促进作用更明显(F=515.58 P<0.01);20μg/L rhIL-6作用4 h对脂肪细胞PTP1B mRNA的表达无影响,作用8 h即可促进PTP1BmRNA的表达,随着作用时间的延长其作用更加明显(F=498.62 P<0.01)。不同水平、不同作用时间下,rhIL-6对SW872脂肪细胞抵抗素mRNA的表达无明显影响(F=9.6,10.5 Pa>0.05)。结论rhIL-6以剂量和时间相关的方式促进SW872脂肪细胞PTP1B及IL-6 mRNA表达,对抵抗素mRNA的表达无影响。

Rab27B和HPV16/18蛋白质在宫颈鳞癌表达的意义

目的通过免疫组织化学实验探讨Rab27B和HPV16/18蛋白质在宫颈鳞癌组织中表达的意义。方法收集慢性宫颈炎组织和宫颈鳞癌组织连续石蜡切片,采用免疫组织化学实验检测慢性宫颈炎组织和宫颈鳞癌组织中HPV16/18和Rab27B蛋白质的表达水平。通过统计学分析分别研究HPV16/18和Rab27B蛋白质在宫颈鳞癌组织的表达意义。结果HPV16/18在慢性宫颈炎组织中感染率为13.5%,而在宫颈鳞癌组织中为46.2%,差异有统计学意义(P<0.05)。Rab27B蛋白质表达水平在慢性宫颈炎组织中,中、强阳性表达为32.4%。在宫颈鳞癌组织中,中、强阳性表达为63.3%。两者比较具有统计学意义(P<0.05)。宫颈鳞癌组织中Rab27B表达水平高,HPV16/18表达水平也高;慢性宫颈炎组织中Rab27B表达水平较低,HPV16/18表达水平也低(P<0.05)。结论宫颈鳞癌组织中Rab27B蛋白质的高表达结合HPV16/18蛋白质的表达,可能和宫颈鳞癌的发生和发展相关。

溶酶体相关4次跨膜蛋白质基因多态性与肝癌易感性的关系

目的：探讨溶酶体相关4次跨膜蛋白质B（lysosome-associated protein transmembrane 4 beta，LAPTM4B）基因多态性与肝癌易感性的关系．方法：应用病例对照研究方法，收集190例肝癌患者、190例慢性乙型肝炎患者、175例健康献血者全血，分离白细胞，提取基因组DNA，采用特异性引物PCR方法，扩增LAPTM4B第一外显子5′UTR内的部分序列，对三组人群进行分析研究．x^2检验分析肝癌组与对照组LAPTM4B的基因多态性和其他相关因素的相关性．结果：LAPTM4B等位基因在三组观察对象中的分布，^＊1和^＊2在健康对照组的频率分别是75．71％和24．29％，慢肝组73．16％和26、84％，肝癌组中66．84％和33.45％，三组比较等位基因分布频率有统计学意义，健康对照组与肝癌组比较有统计学意义（x^2=6．979，P=0．008）．LAPTM4B的基因型LAPTM4B1^＊1型、LAPTM4B^＊1／2混合型和LAPTM482^＊2型在肝癌组中的频率分别是37.9％、57.9％和4．2％、慢肝组50．5％、45．3％和4．2％、健康对照组56．6％、38.3％和5．1％，三组间三种基因型分布频率比较有统计学意义（x^2=14．854，P〈0．005）.结论：基因型^＊1／2和等位基因^＊2可能与肝癌的发生有关．

蛋白质酪氨酸磷酸酯酶1B(PTP1B)抑制剂研究进展

蛋白质酪氨酸磷酸酯酶1B(PTP1B)在胰岛素信号传导过程中起负调节作用,是治疗糖尿病和肥胖症的潜在靶点。本文按作用位点对近年来研究的PTP1B抑制剂进行综述,分析了N-草酰胺苯甲酸类化合物、水杨酸类化合物、取代苯乙酮及肉桂酸类化合物、氨基磺酸类化合物、拟肽类物质、噻吩及苯并噻吩类化合物、苯并呋喃磺酰胺类化合物和哒嗪类化合物八大类抑制剂的结构及药理活性。

血清蛋白质酪氨酸磷酸酶1B、雌二醇水平与青少年脾虚肝郁型闭经病人肥胖的关系

目的检测青少年脾虚肝郁型闭经病人血清蛋白质酪氨酸磷酸酶1B(PTP1B)、雌二醇(E2)水平,并探讨其与肥胖的关系。方法选取2019年1―8月于张家口市中医院妇科门诊确诊的青少年脾虚肝郁型闭经病人110例作为研究对象,按照青少年肥胖诊断标准分为青少年脾虚肝郁型闭经发生肥胖60例(闭经肥胖组)和青少年脾虚肝郁型闭经未发生肥胖50例(闭经未肥胖组)。另选取同期健康体检者60例作为对照组。收集研究对象的体质量、肥胖度、体质量指数(BMI)、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)等资料。酶联免疫吸附法(ELISA)检测受试者外周血血清中PTP1B、E2水平。logistic回归分析青少年脾虚肝郁型闭经病人发生肥胖的影响因素。受试者工作特征曲线(ROC)分析二者对青少年脾虚肝郁型闭经病人发生肥胖的诊断效能。结果与对照组、闭经未肥胖组相比,闭经肥胖组体质量[(77.25±12.43)kg比(49.65±7.13)kg、(51.89±8.27)kg]、肥胖度[(41.64±13.26)%比(16.75±2.85)%、(17.75±3.26)%]、BMI[(29.75±5.36)kg/m2比(20.86±4.13)kg/m2、(21.26±4.35)kg/m2]、TC[(4.62±0.93)mmol/L比(3.25±0.65)mmol/L、(3.34±0.81)mmol/L]、TG[(1.94±0.26)mmol/L比(0.86±0.12)mmol/L、(0.88±0.18)mmol/L]、LDL[(2.75±0.53)mmol/L比(1.87±0.35)mmol/L、(1.95±0.42)mmol/L]水平明显升高(P<0.05);对照组、闭经未肥胖组、闭经肥胖组PTP1B[(53.63±12.56)ng/mL、(72.16±16.42)ng/mL、(85.24±21.35)ng/mL]、E2水平[(283.76±73.15)ng/mL、(357.46±83.81)ng/mL、(426.63±95.52)ng/mL]均依次升高(P<0.05)。TC、LDL、PTP1B、E2水平均是青少年脾虚肝郁型闭经病人发生肥胖的独立危险因素(P<0.05),PTP1B、E2联合检测对青少年脾虚肝郁型闭经病人发生肥胖的ROC曲线下面积为0.750。结论PTP1B、E2水平在青少年脾虚肝郁型闭经发生肥胖病人体内均升高,二者均是致病的独立危险因素,有一定的诊断效能,可能为临床诊断青少年脾虚肝郁型闭经病人发生肥胖提供一定参考。

浅谈蛋白质隆丁区分

本文对蛋白质隆丁区分的测定方法以及测定值对生产的指导意义作了深入的阐述.

肝细胞癌组织中DEPDC1B和KIF23的表达及其预后预测价值

目的探究肝细胞癌(HCC)组织中DEP结构域蛋白1B(DEPDC1B)和驱动蛋白家族成员23(KIF23)的表达及其预后预测价值。方法选择2018年3月至2019年3月湖南中医药高等专科学校附属第一医院诊治的126例HCC患者作为研究对象,收集其HCC组织、癌旁组织及临床资料。采用免疫组织化学法检测组织中DEPDC1B和KIF23的蛋白表达情况。分析癌症基因组图谱(TCGA)数据库中HCC组织和癌旁组织中DEPDC1B和KIF23的mRNA表达水平差异。分析HCC组织中DEPDC1B和KIF23的蛋白表达与患者临床病理特征的相关性。采用Kaplan-Meier曲线(Log-rank检验)分析DEPDC1B和KIF23的蛋白表达与患者预后的关系。采用单因素及多因素COX比例风险模型分析HCC患者预后的危险因素。结果TCGA数据分析结果显示,HCC组织中DEPDC1B和KIF23的mRNA相对表达量均显著高于癌旁正常肝组织(1.861±1.271比0.314±0.116,1.652±1.089比0.218±0.157,P均<0.0001)。HCC组织中DEPDC1B阳性表达主要位于细胞质和细胞膜,KIF23阳性表达主要位于细胞质和细胞核。HCC组织中DEPDC1B和KIF23的蛋白表达阳性率均显著高于癌旁组织[71.43%(90/126)比10.32%(13/126),χ^(2)=97.355,P=0.000;75.40%(95/126)比11.90%(15/126),χ^(2)=103.252;P=0.000]。HCC组织中DEPDC1B和KIF23的蛋白表达均与肿瘤分期、组织学分级及有无血管侵犯有关(P均<0.05)。HCC组织中DEPDC1B与KIF23的mRNA表达呈显著正相关(r=0.913,P=0.000),DEPDC1B与KIF23的蛋白表达亦呈显著正相关(Rs=0.811,P=0.000)。DEPDC1B阳性表达组的3年累积生存率显著低于DEPDC1B阴性表达组(χ^(2)=4.433,P=0.035)。KIF23阳性表达组的3年累积生存率显著低于KIF23阴性表达组(χ^(2)=6.125,P=0.013)。肿瘤分期Ⅱ~Ⅲ期、组织学分级Ⅲ级、血管侵犯、DEPDC1B阳性表达及KIF23阳性表达均是HCC患者预后的独立危险因素。结论HCC组织中DEPDC1B和KIF23的表达上调,两者均与肿瘤分期、组织学分级及有无血管侵犯有关,DEPDC1B、KIF23阳性表达均是HCC患者预后的独立危险因素。

AP2M1抑制弥漫性大B细胞淋巴瘤细胞增殖和侵袭

目的探究接头相关蛋白质复合体2亚基μ1(AP2M1)对弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)细胞增殖和侵袭的调控作用。方法将人弥漫性大B细胞淋巴瘤细胞系OCI-LY8分为对照组、NC-LV组、AP2M1-LV组。用Lipofectamine 2000进行细胞转染。四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,Transwell小室法检测细胞迁移和侵袭。Western blot检测AP2M1、表皮生长因子受体(EGFR)、p-磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)和p-蛋白质激酶B(AKT)蛋白表达。结果与对照组相比,AP2M1-shRNA组细胞中AP2M1的mRNA和蛋白相对表达量均降低(P<0.05),相对细胞活力升高(P<0.05),细胞凋亡率降低(P<0.05),迁移和侵袭细胞数量均升高(P<0.05);EGFR的蛋白相对表达量及PI3K和AKT的磷酸化水平均升高(P<0.05)。与对照组相比,AP2M1-LV组细胞中AP2M1的mRNA和蛋白相对表达量均升高(P<0.05),相对细胞活力降低(P<0.05),细胞凋亡率升高(P<0.05),迁移和侵袭细胞数量均降低(P<0.05),EGFR的蛋白相对表达量及PI3K和AKT的磷酸化水平均降低(P<0.05)。结论AP2M1的过表达部分通过抑制EGFR/PI3K/AKT信号通路来抑制DLBCL细胞的增殖和侵袭。

肺表面活性蛋白B在足月新生儿呼吸窘迫综合征中的作用

新生儿呼吸窘迫综合征(RDS)多见于早产儿,通常足月RDS不会因为肺发育不成熟而引起肺表面活性物质(PS)缺乏,足月RDS是一种多因子、多基因疾病。目前认为,RDS与PS中肺表面活性物质相关蛋白质类(SP)的减少有关。相关蛋白质类共有4种,分别为SP-A,SP-B,SP-C,SP-D,肺表面活性物质相关蛋白质B(SP-B)在PS中尤为重要,其直接减少肺泡表面张力,对生后呼吸的调节至关重要,应密切关注。

丙型肝炎病毒非结构蛋白NS4B诱导细胞非折叠蛋白反应

用RT-PCR和免疫印迹的方法检测稳定表达NS4B的HeLa细胞中的XBP1;通过RT-PCR的方法在表达NS4B的HeLa和Huh-7细胞中检测ATF6,Grp78和caspase-12的转录,并且通过报告基因的方法分析XBP1和Grp78启动子活性。实验结果表明:在表达NS4B的HeLa细胞中检测到XBP1的两种形式(剪接和未剪接),此外,在细胞中ATF6、Grp78的转录水平和XBP1、Grp78启动子的荧光素酶活性较没有表达NS4B的HeLa和Huh-7细胞中的量有所增加;通过染色质免疫沉淀实验(ChIP)分析,这些增加可能是由于XBP1结合到了这些基因的启动子上引起的。总之,实验结果可提示HCVNS4B通过ATF6或XBP1途径引起内质网压力,导致UPR反应。NS4B可能在HCV的致病性中起着重要的作用,特别是在慢性肝炎,甚至肝细胞癌中。

传染性支气管炎病毒青岛腺胃分离株(SD/97/02)基质蛋白、5a、5b蛋白基因的克隆和序列分析

参考 Gen Bank上的传染性支气管炎病毒 (IBV)序列 ,自行设计合成了 3条引物 ,对 IBV青岛腺胃分离株 (SD/97/ 0 2 ) RNA进行 RT- PCR扩增 ,扩增含基质蛋白 (M)及 5 a、5 b蛋白基因的约 1.6 5 kb的片段 ,对 PCR产物进行克隆后测序。序列分析显示 ,M蛋白基因与其他 IBV相应的基因同源性在 90 .33%～ 92 .75 %之间 ,氨基酸序列比较 ,同源性在 89.82 %～ 94.2 5 %之间 ;5 a基因与其他 IBV的基因同源性在 84.34 %～ 87.37%之间 ,氨基酸同源性在 81%～82 %;5 b基因与其他 IBV的基因同源性在 91%～ 92 %之间 ,氨基酸同源性在 93%左右。

糖尿病合并重度颈动脉狭窄患者支架植入后认知功能改变和血清S100B蛋白水平的关系

目的探讨颈动脉支架成形术(CAS)治疗严重颈动脉狭窄合并糖尿病患者及认知功能的改变及与血清S100B蛋白水平的关系。方法128例重度颈内动脉狭窄的患者分为合并糖尿病与无糖尿病两个亚组,对患者CAS术前及术后3个月的S100B血清蛋白水平及MMSE、MoCA、ADAS-Cog、CDT量表评分等数据进行分析比较。结果非糖尿病组CAS术后血清S100B蛋白水平较术前明显降低(P=0.000),认知功能相关的MMSE(P=0.003),Mo CA(P=0.000),CDT(P=0.034)评分均较术前有明显改善。但在糖尿病组手术后患者血清S100B蛋白水平及认知功能评分与术前比较并无明显差异。此外,S100B蛋白水平的递减与MMSE(r=0.38,P<0.01)、MoCA(r=0.39,P<0.01)评分的增加和ADAS-Cog(r=0.19,P<0.05)评分的递减呈正相关。结论 CAS术后对患者认知功能影响的机制可能是由于改善了脑组织的血流灌注,认知功能的改善程度与血清S100B蛋白水平降低有关。糖尿病和非糖尿病患者导致认知功能障碍的机制可能不同,单纯改善缺血情况不能改善糖尿病患者的认知功能障碍。

蛛网膜下腔出血后血清S-100B蛋白水平的临床意义

S-100B蛋白是一种反映脑损伤的血清标志物,其特异性很高。研究发现:动脉瘤性蛛网膜下腔出血(SAH)后,血清S-100B蛋白水平不但能反映脑损伤的程度,还能根据其预测脑血管痉挛的发生,对临床判断SAH病人的预后有一定参考价值。本文主要就S-100B蛋白在上述方面的研究作一综述。

大剂量甲氨蝶呤治疗急性淋巴细胞性白血病血清中S100B蛋白含量和血药浓度的相关分析

S100B蛋白是神经组织蛋白,在神经组织中含量丰富,高浓度、特异性地存在于中枢神经系统和周围神经系统的神经胶质细胞及某些神经元细胞中,被称为脑特异性蛋白。血清S100B蛋白升高可作为脑损伤的指标。本研究通过检测大剂量甲氨蝶呤（HD-MTX）治疗儿童急性淋巴细胞白血病（ALL）血清中S100B蛋白及MTX血药浓度的含量的变化,从而早期判断HD-MTX导致的神经系统的毒性作用。