pSS患者唇腺组织中Fas介导的凋亡信号蛋白的表达

目的:研究原发性干燥综合症(prim ary Sj gren’s syndrom e,pSS)唇腺组织细胞中Fas介导的细胞凋亡信号蛋白的表达,探讨导致干燥综合征的细胞信号转导的可能途径。方法:采用W estern b lotting法检测唇腺组织中Fas、FasL、FADD蛋白的表达;免疫组织化学法检测caspase-3蛋白表达;RT-PCR半定量检测CAD mRNA表达。结果:pSS患者唇腺组织细胞中Fas介导的细胞凋亡信号转导相关蛋白Fas、FasL、FADD、caspase-3及CAD mRNA表达都有不同程度高于对照组(P<0.05)。结论:导致干燥综合征患者唇腺组织凋亡的信号转导途径可能是:FasL与其受体Fas结合后,通过FADD激活caspase-8,级联激活ICE家族成员,最后通过caspase-3裂解ICAD释放CAD催化DNA降解导致细胞凋亡。

幽门螺旋杆菌感染和FasL蛋白表达在胃癌发生中的变化

目的探讨幽门螺旋杆菌(H.pylori)感染和Fas配体(FasL)蛋白表达在胃癌(GC)发生发展中的变化。方法选取2010年1月至2011年9月在上海浦东新区南汇中心医院诊断的胃部病变169例患者,其中慢性浅表性胃炎(CSG)25例、慢性萎缩性胃炎(CAG)28例、肠化生(IM)37例、异型增生(Dy)38例和胃癌(GC)41例。分别检测胃黏膜组织中H.pylori感染和FasL的蛋白表达,分析H.pylori感染和FasL的蛋白在GC发生发展中的相关性。结果 H.pylori感染率和FasL蛋白阳性表达率随着病情的加重而逐渐增高,Dy组及GC组H.pylori感染率比CSG组明显升高(65.8%和75.6%vs 16.0%)(P<0.05);IM组、Dy组及GC组FasL蛋白阳性表达率比CSG组明显升高(64.9%、78.9%和92.7%vs 28.0%)(P<0.05);GC组FasL蛋白阳性表达率比CAG组及IM组明显升高(92.7%vs 60.7%;92.7%vs 64.9%)(P<0.05)。除CSG外,H.pylori感染与CAG、IM、Dy和GC胃黏膜组织中的FasL蛋白表达具有一致性,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 FasL蛋白表达和H.pylori感染对评估胃黏膜癌前病变发展趋势有重要的临床价值,有助于早期发现和诊断GC。

Fas/FasL信号传导通路对NAFLD大鼠肝细胞凋亡的影响

目的通过研究肝细胞凋亡及死亡受体信号转导通路在大鼠非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)形成中的作用,探讨NAFLD的发病机制。方法将30只雄性SD大鼠随机分为对照组和高脂饲料(4、8、12周)组;HE染色观察肝组织光镜下的病理改变;电镜观察肝细胞超微结构变化;流式细胞仪检测肝细胞凋亡百分数;免疫组化法检测Fas、FasL在肝组织中的蛋白表达;实时荧光定量PCR法检测半胱天冬酶-8(Caspase-8)mRNA表达。结果 HE染色结果显示,对照组大鼠肝脏无异常发现,高脂组大鼠肝脏4周出现脂肪变,8周出现轻度脂肪肝,12周出现中、重度脂肪肝;电镜下观察高脂组大鼠肝细胞线粒体肿胀,嵴变短、减少甚至消失,粗面内质网减少,核型欠规则;流式细胞仪检测显示,与对照组比较,高脂组大鼠肝细胞凋亡百分数增加,随造模时间延长凋亡率增加更明显;免疫组化染色显示随着肝脏脂肪变加重,Fas、FasL蛋白染色加深,阳性细胞数增加;实时荧光定量PCR法显示Caspase-8 mRNA表达量在高脂组中显著高于对照组,且随肝脏脂肪变及炎症加重呈进行性上升。结论 NAFLD大鼠模型中,肝细胞凋亡促进NAFLD大鼠病情进展;肝细胞凋亡以及Fas、FasL、Caspase-8 mRNA相关调控蛋白的活化是引起NAFLD脂肪变性、炎症及纤维化的重要因素。

FasL及FasL ASODN在舌鳞癌细胞免疫逃逸中的作用

目的研究Fas配体(FasL)及FasL反义寡脱氧核苷酸(ASODN)在舌鳞癌细胞免疫逃逸中的作用。方法对人舌鳞癌细胞中FasL表达及功能进行检测,设计合成特异FasL ASODN,转染舌鳞癌细胞,封闭舌鳞癌细胞的FasL表达。通过流式细胞术、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和四唑盐(MTT)等方法,观察基因-蛋白-细胞效应。结果通过RT-PCR检测提示在脂质体的量一定的情况下,在一定范围内,ASO的浓度越高,转染效率越高。MTT/FCM结果显示ASO对SCC-9细胞的增殖有明显的抑制作用(P<0.05)。FCM对细胞凋亡的检测结果显示反义链组与正义链组、空白对照组及脂质体组相比,总凋亡率有明显差异(P<0.05)。结论 Fas/FasL途径是口腔鳞癌细胞免疫逃逸的重要机制之一,可作为免疫治疗的新靶点。

神经节苷脂对脑缺血再灌注大鼠海马Fas表达的影响

目的探讨单唾液酸神经节苷脂(GM)1对脑缺血再灌注大鼠海马Fas表达的影响。方法 72只SD大鼠随机分为假手术组(8只)、GM1治疗组(32只)、缺血再灌注组(32只)。GM1治疗组和缺血再灌注组依据缺血后再灌注的不同时间点再分为6h、12h、24h、3d共4个小组。应用免疫组织化学方法和Western blot方法检测各组大鼠海马Fas蛋白的表达。结果免疫组织化学方法结果显示假手术组大鼠海马有一定量的Fas蛋白表达(0.17±0.02),而缺血再灌注组大鼠海马的Fas蛋白阳性表达显著升高,各时点分别为0.42±0.11、0.51±0.13、0.55±0.13及0.62±0.15,3d时表达最高;与相同时间点的缺血再灌注组比较,GM1治疗组的Fas蛋白阳性表达则明显降低,各时点分别为0.29±0.09、0.34±0.11、0.37±0.12、0.43±0.12(均P<0.05)。Western blot结果与此结果类似。结论 GM1很可能通过减少Fas蛋白的表达参与脑缺血再灌注损伤的神经保护作用。

大鼠FasL全长cDNA真核质粒的构建及转染HepG2细胞体外诱导细胞凋亡的作用

目的观察HepG2细胞过表达FasL介导细胞凋亡的作用。方法从大鼠睾丸细胞中扩增出rFasL全长cDNA,亚克隆到T载体中,再克隆到pDC315载体中。转染HepG2细胞后用RT-PCR、Wester blot检测rFasL mRNA和蛋白表达,培养48h后收集细胞计数,进行比较分析。结果 rFasL cDNA序列与其在Genbank中的序列完全一致。rFasL真核表达载体转染HepG2细胞后能表达rFasL mRNA和蛋白;转染pDC315-rFasL的实验组HepG2细胞大量死亡。结论成功克隆了rFasL基因并构建其真核表达载体,证明能有效表达于HepG2中,表达FasL的HepG2细胞通过Fas-FasL结合介导周围及自身表达Fas的HepG2细胞凋亡。

地鼠颊囊黏膜癌变过程中Fas的表达及意义

目的:研究Fas蛋白在口腔黏膜癌变过程中的表达及变化规律。方法:用DMBA诱导的金黄地鼠颊囊癌变模型,采用免疫组化SP法检测在黏膜上皮癌变过程(正常黏膜、单纯增生、轻度增生、中度增生、重度增生与鳞癌)中Fas蛋白的表达。结果:Fas在正常地鼠口腔黏膜中广泛表达,在黏膜癌变过程的不同阶段中Fas表达下调,尤其在鳞癌组织中明显降低(P<0.05),且表达部位由细胞胞膜转向胞浆内。结论:Fas参与口腔黏膜肿瘤癌变过程,对口腔癌的早期诊断及治疗提供研究方向。

放疗对子宫内膜癌中Fas/FasL,P53表达影响的分析

目的:探讨子宫内膜癌术前放疗对癌组织中Fas/FasL、P53蛋白表达的影响及放疗与细胞凋亡、临床效果的关系。方法:50例子宫内膜癌患者,用免疫组化法检测术前诊刮病理切片中Fas/FasL、P53。放疗手术后,用免疫组化法检测子宫内膜癌切片中Fas/FasL、P53。结果:P53蛋白表达放疗后较放疗前减弱,Fas蛋白表达放疗后较放疗前增强,FasL蛋白表达放疗前后未发现有明显变化。结论:子宫内膜癌术前放疗对癌组织中Fas、P53表达有显著影响(P<0.01),促进肿瘤细胞凋亡。

慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞膜表面Fas配体检测及意义

目的检测慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞(PBMC)膜表面Fas配体(FasL)水平,并探讨其在慢性肝炎发病机制中的作用。方法用免疫组织化学法分别检测42例慢性乙型肝炎患者和20例健康人PBMC细胞膜表面FasL表达,并与其他实验室指标作相关性比较。结果慢性乙型肝炎患者外周血PBMC膜表面FasL阳性百分率为(64.0±7.8)%,明显高于健康对照组(40.7±8.6)%。结论PBMC膜表面FasL表达异常可能在慢性乙型肝炎发病过程中起重要作用。

来氟米特对佐剂关节炎大鼠血清及滑膜Fas系统的影响

目的通过观察来氟米特(leflunomide,LEF)治疗前后佐剂关节炎(adjuvant arthritis,AA)大鼠外周血T淋巴细胞及滑膜中Fas/Fas L水平的变化情况,了解LEF对AA大鼠外周血T淋巴细胞及滑膜细胞凋亡的影响。方法选用Wistar大鼠60只,随机分为5组:空白组,模型组,甲氨蝶呤(methotrexate,MTX)治疗组(MTX组),LEF治疗组(LEF组),MTX+LEF治疗组(MTX+LEF组)。分别观察各组大鼠关节炎指数、血清Fas/Fas L水平,免疫组织化学方法检测滑膜组织Fas/Fas L表达。结果第60天各实验组大鼠关节炎指数下降,MTX组6.83±1.93 vs3.38±1.61(P<0.01);LEF组7.35±2.16 vs 3.25±1.17(P<0.01);MTX+LEF组7.21±1.82 vs 2.13±1.18(P<0.01),模型组无明显变化(7.12±1.67 vs 6.25±1.46,P>0.05)。各实验组治疗后血清Fas、Fas L水平下降,Fas,MTX组(55.3±7.5)%vs(27.3±6.8)%(P<0.01);LEF组(58.3±8.1)%vs(25.9±7.2)%(P<0.01);MTX+LEF组(54.6±7.4)%vs(18.2±4.9)%(P<0.01)。Fas L,MTX组(4.1±0.5)%vs(2.4±0.5)%(P<0.01);LEF组(3.7±0.6)%vs(2.5±0.4)%(P<0.01);MTX+LEF组(3.8±0.6)%vs(1.7±0.4)%(P<0.01),模型组无变化,Fas(57.1±7.9)%vs(64.2±8.4)%(P>0.05);Fas L(4.0±0.7)%vs(4.1±0.6)%(P>0.05),各实验组及模型组滑膜组织Fas蛋白表达的IRS积分较空白组均上调,MTX组(7.5±2.2)分vs(4.2±1.0)分(P<0.01);LEF组(7.7±2.1)分vs(4.2±1.0)分(P<0.01);MTX+LEF组(9.4±2.1)分vs(4.2±1.0)分(P<0.01);模型组(5.6±1.9)分vs(4.2±1.0)分(P<0.01)。各实验组滑膜组织Fas L蛋白表达较空白组均上调,MTX组(7.8±2.1)分vs(5.2±1.0)分(P<0.01);LEF组(7.9±1.8)分vs(5.2±1.0)分(P<0.01);MTX+LEF组(9.4±1.8)分vs(5.2±1.0)分(P<0.01),模型组下调(2.0±0.9)分vs(5.2±1.0)分(P<0.01)。结论LEF可以通过下调AA大鼠外周血淋巴细胞和关节滑膜Fas系统的表达来达到抗风湿作用。

胃癌FasL的表达及其意义

①目的 探讨FasL在分化程度不同胃癌组织中的表达 ,及其与胃癌间质浸润淋巴细胞 (TIL)、胃癌浸润及转移的关系。②方法 采用免疫组化方法 ,检测高中分化、低分化胃癌组织各 30例及胃良性病变 2 0例标本中FasL的表达 ,并计数CD45标记的TIL。③结果 胃癌组织FasL表达程度高于胃良性病变组织 ,高中分化胃癌FasL表达程度低于低分化胃癌 ,胃癌Ⅰ、Ⅱ期FasL表达程度低于Ⅲ、Ⅳ期 ,高中分化胃癌及低分化胃癌Ⅰ、Ⅱ期FasL表达程度均低于Ⅲ、Ⅳ期 ,差异均有显著性 (uc=2 .70～ 6 .4 9,P <0 .0 5 )。高中分化胃癌TIL数少于低分化胃癌 ,差异有统计学意义(t=3.93,P <0 .0 5 )。④结论 FasL高表达介导更多的浸润淋巴细胞凋亡 。

金雀异黄素抑制单核细胞趋化蛋白-1诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡

目的:研究金雀异黄素对单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)诱导人脐静脉内皮细胞(hUVECs)凋亡的影响及可能机制。方法:培养并鉴定人脐静脉内皮细胞;用不同浓度金雀异黄素(0.1μmol、1μmol、10μmol、50μmol)和终浓度为10μg/L的MCP-1作用24h;先用MTT比色法观察细胞存活率、流式细胞技术检测细胞DNA含量及细胞周期,观察其对hUVECs生长的影响,流式细胞技术及Western印迹法检测凋亡相关蛋白Fas、Bcl-2、Bax的表达,探讨金雀异黄素对MCP-1诱导hUVECs凋亡干预的可能机制。结果:金雀异黄素抑制单核细胞趋化蛋白-1诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡,抑制效应随剂量增加而增强(P<0.01,P<0.01,P<0.01)。MTT值明显增高;凋亡细胞明显少于对照组(10μg/LMCP-1),Bcl-2表达明显高于对照组,Fas、Bax表达明显低于对照组。结论:金雀异黄素能抑制单核细胞趋化蛋白-1诱导的人脐静脉内皮细胞的凋亡,抑制作用有量效相关性,抑制机制可能与下调Fas、Bax蛋白及上调Bcl-2蛋白的表达有关。

强精片对不育大鼠睾丸内FasL、ABP及Occludin蛋白表达影响的实验研究

目的观察强精片对不育大鼠睾丸生精微环境血．睾屏障（BTB）的影响及可能的机制。方法70只雄性SD大鼠随机分为空白组（BG组）20只和雷公藤多甙片（GTW）灌胃的造模组50只，灌胃3周后两组各取10只进行模型验证。其余40只造模大鼠随机分为模型组（MG组）和强精片低剂量组（QJPL组）、中剂量组（QJPM组）、高剂量组（QJPH组），灌胃4周后处死分离睾丸，检测相关指标。结果与BG组相比，MG组睾丸组织中FasL、ABP表达量明显上调（P〈0．01），而紧密连接蛋白Occludin表达降低（P〈0．01）。应用药物强精片干预后，FasL、ABP蛋白在睾丸内表达降低，其中高剂量组更为显著（P〈0．01）；Occludin蛋白较MG组表达上调，差异具统计学意义（P〈0．05）。结论通过上调睾丸组织内FasL、ABP蛋白的表达，改变支持细胞功能，同时抑制Occludin蛋白的表达，破坏BTB完整性，增加其通透性，最终影响生精微环境，这可能是GTW致不育的原因之一。而强精片能够降低睾丸内FasL、ABP表达量，提高Occludin蛋白表达，修复BTB功能，可能是中药制剂改善精子功能的机制之一，但在这一过程中中药介导的具体机制尚需进一步研究。

Fas相关死亡结构域蛋白基因沉默对帕金森病模型鼠黑质凋亡相关蛋白的影响

目的探讨Fas相关死亡结构域蛋白（FADD）基因沉默对帕金森病（PD）大鼠行为学变化及黑质死亡受体和半胱氨酸蛋白酶8（caspase-8）表达的影响。方法应用化学修饰的干扰RNA及立体定向技术等，在制作PD模型前黑质内注入FADD siRNA、FADD siRNA阳性对照物或FADD siRNA阴性对照物。观察正常对照组、PD组、FADD siRNA组、FADD siRNA阳性对照组和FADD siRNA阴性对照组（每组各15只）大鼠阿朴吗啡诱导的旋转行为的改变；采用Western blot分析和RT-PCR等方法，检测以上5组大鼠黑质FADD、Fas和caspase-8蛋白及mRNA的半定量表达。结果正常对照组大鼠阿朴吗啡诱导下无旋转行为，其余4组旋转次数超过6r／min（持续30min）的大鼠（只）分别为12（12／14）、3（3／13）、4（4／15）、11（11／14），组间比较差异具有统计学意义（χ^2=18．56，P=0．000）；与正常组比较，PD组各个蛋白及mRNA的表达均明显升高；与PD组比较，FADD siRNA组FADD和caspase-8蛋白及mRNA的表达受到明显抑制，差异具有统计学意义，但PD组和阴性对照组间及其余3组间比较差异均无统计学意义。与正常组比较，其余4组Fas蛋白及mRNA的表达均明显升高，差异具有统计学意义，但4组问比较差异无统计学意义。结论死亡受体凋亡通路在PD发病机制中起重要作用，而FADD siRNA能够有效抑制此通路，从而在一定程度上具有神经保护作用。

Fas相关死亡结构域蛋白增强5-氟尿嘧啶抑制结肠癌细胞生长作用的研究

目的通过体外和体内实验研究结肠癌细胞在稳定转染Fas相关死亡结构域蛋白（FADD）基因后对5氟尿嘧啶的敏感性，探讨FADD基因与5-氟尿嘧啶联合治疗结肠癌的可行性。方法①RTPCR和Western印迹法检测稳定转染FADD基因的结肠癌细胞SW480／FADD、稳定转染空载体的结肠癌细胞SW480／neo和正常结肠癌细胞SW480中FADD基因的mRNA和蛋白表达水平。②MTT法检测3种细胞对5-氟尿嘧啶的敏感性。TUNEI。法和流式双染法检测细胞凋亡率。Western印迹法检测caspase8和caspase-3的表达。③裸鼠成瘤实验观察瘤体生长曲线，病理学和TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡。结果 （1）SW480／FADD细胞FADD基因mRNA和蛋白表达水平明显较SW480和SW480／neo增高（P〈0．05）。②5氟尿嘧啶对SW480／FADD的抑制率明显高于SW480和SW480／neo，差异有统计学意义（P〈0．05）。③5-氟尿嘧啶（10mg／L）干预48h后，SW480／FADD凋亡率达（33．3±4．5）％，与SW480[（13．9±3．2）％]和SW480／neo[（14．1±3．4）％]间差异有统计学意义（P〈0．05）。④5氟尿嘧啶（10mg／L）干预48h后，SW480、SW480／neo的procaspase-8和procaspase-3表达比SW480／FADD增高，而cleavedcaspase-8和cleavedcaspase-3的表达比SW480／FADD降低（P〈0．05）。⑤SW480／FADD对5氟尿嘧啶更加敏感，瘤体体积增加幅度明显小于8W480和SW480／neo，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论稳定转染FADD基因可明显增加结肠癌细胞对5氟尿嘧啶的敏感性，二者联合应用在结肠癌治疗中有潜在的价值。

喉鳞癌组织Fas和FasL蛋白表达及临床意义

目的 :探讨Fas、FasL蛋白在喉鳞癌 (LSCC)组织中的表达及意义。方法 :采用SABC免疫组化法检测 4 2例LSCC及 2 0例手术切缘正常组织中Fas及FasL ,并与LSCC病理分级、临床分期及颈淋巴结转移相比较。结果 :Fas及FasL在LSCC中阳性率分别为 4 7.6 %和 6 4 .3% ,与在正常喉组织阳性率 90 .0 %和 2 0 .0 %相比 ,差异有显著性意义 (P <0 .0 5 )。Fas阳性率与肿瘤分级分期无显著相关性 (P >0 .0 5 ) ,与肿瘤转移有关 (P <0 .0 5 ) ;FasL阳性率与肿瘤分级、分期及转移密切相关 (P <0 .0 5 )。Fas与FasL的表达无显著相关性。结论 :Fas及FasL表达异常可能参与喉鳞癌的发生和发展 ;检测Fas与FasL可望作为判定喉鳞癌预后的潜在指标。

三氧化二砷抑制人神经胶质瘤细胞生长及其机制

目的:探讨三氧化二砷(As2O3)对人神经胶质瘤细胞株U251的生长抑制作用及对基因表达和钙含量的影响。方法:MTT法观察As2O3对U251细胞的生长抑制作用;流式细胞仪测定不同浓度As2O3处理后U251细胞周期、增殖细胞核抗原(PCNA)、凋亡相关蛋白Fas和Bcl-2阳性细胞百分率及细胞内钙离子(IECa2+)含量变化。Annexin V-FITC+PI双参数检测细胞凋亡。结果:(1)As2O3可显著抑制U251细胞生长,且剂量-效应和时间-效应关系显著(P<0·05),其24h、48h和72h的IC50值分别为14·28μmol/L、13·63μmol/L和2·34μmol/L。(2)As2O3能显著增加Fas蛋白表达和IECa2+含量(P<0·01),下调PCNA蛋白表达(P<0·01),并使细胞周期阻滞在G2M期,但对Bcl-2表达无影响(P>0·05)。(3)U251细胞经As2O3处理后可出现凋亡。结论:As2O3在体外可显著抑制人神经胶质瘤U251细胞生长并引起凋亡,其机制可能与上调Fas表达和IECa2+含量、降低PCNA蛋白表达及阻滞细胞周期有关。

蛴螬提取物对MCF-7人乳腺癌细胞株凋亡的影响

目的:研究蛴螬提取物对MCF-7人乳腺癌细胞株凋亡通路的影响,为天然药物蛴螬的开发提供实验和理论依据。方法:应用MTT法检测蛴螬提取物对MCF-7人乳腺癌细胞株的抗增殖作用及细胞毒活性;通过倒置显微镜、HE染色、吖碇橙(AO)/溴化乙啶(EB)荧光染色方法观察肿瘤细胞的形态学改变;应用流式细胞仪检测细胞凋亡率的变化;应用免疫细胞化学技术(S-P法)检测用药前后凋亡通路中Bcl-2、Fas、caspase-9、caspase-3的表达改变,探讨蛴螬提取物对凋亡通路的影响。结果:(1)用MTT法检测结果表明,蛴螬提取物在体外对MCF-7人乳腺癌细胞株有明显的抑制增殖作用,实验组与对照组相比其生长抑制率有显著差异(P<0.01),而且这种抑制作用呈现浓度和时间的依赖性;(2)倒置显微镜观察表明,实验组可见胞核固缩、碎裂、凋亡小体形成等凋亡形态学变化;(3)HE染色表明实验组胞核浓缩呈蓝黑色、胞浆呈淡红色、核染色质浓缩、呈碎块状,有凋亡小体形成;(4)经AO/EB荧光染色观察结果表明,实验组出现凋亡细胞;(5)流式细胞仪结果表明实验组凋亡率明显增加,呈时间依赖性;(6)免疫细胞化学染色结果表明,实验组Bcl-2表达下调,Fas、caspase-3、caspase-9表达均上调,与对照组比差异显著(P<0.01)。结论:①蛴螬提取物在体外显著抑制MCF-7人乳腺癌细胞株增殖;②蛴螬提取物对MCF-7人乳腺癌细胞株凋亡通路的影响机制可能是通过下调Bcl-2,上调Fas、caspase-3、caspase-9的蛋白表达而起作用,是经由细胞凋亡的线粒体途径和死亡受体途径来完成凋亡的启动和执行。

维生素E琥珀酸酯诱导MDA-MB-435乳腺癌细胞的凋亡

目的:检测维生素E琥珀酸酯(vitaminEsuccinate,VES)对MDAMB435乳腺癌细胞增殖抑制和凋亡诱导作用并分析凋亡诱导分子Fas表达的变化。方法:以VES刺激人乳腺癌细胞MDAMB435(雌激素受体阴性)12、24和48h,VES浓度为5、10和20μg/mL,以MTT法测定对细胞增殖的抑制作用,以流式细胞仪分析细胞周期和细胞表面Fas表达,TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡指数变化,Westernblot法检测VES作用后Fas蛋白水平变化。结果:VES对MDAMB435乳腺癌细胞增殖具有显著的抑制作用并表现为时间和剂量依赖关系。流式细胞仪分析细胞凋亡,MDAMB435细胞的自然凋亡率为1.5%,5、10和20μg/mLVES分别作用48h后凋亡率升高至13.1%、20.2%和46.5%。TUNEL法检测VES作用后乳腺癌细胞凋亡指数由1.1±0.4升高至10.8±1.0、30.4±2.7和51.4±4.7,细胞Fas蛋白水平分别升高1.3、1.9和4.3倍,细胞表面Fas平均荧光强度由46.29升高至59.66、84.54和103.41。结论:VES对MDAMB435乳腺癌细胞具有显著的增殖抑制作用,并诱导细胞的凋亡,其机制与细胞表面Fas表达上调有关。

贝那普利对糖尿病大鼠心肌细胞凋亡及左心室重构的影响

目的探讨贝那普利对糖尿病大鼠心肌细胞凋亡及左心室重构的作用及其机制。方法 SD大鼠ip给予链脲佐菌素制备糖尿病模型。实验分为正常对照组、糖尿病模型组和贝那普利治疗组。贝那普利治疗组大鼠ig给予贝那普利10mg.kg-1,每天1次,连续12周。测定心脏质量指数、左心室内压最大上升和下降速率(±dp/dtmax)、左心室压(LVP)、左心室舒张末压(LVEDP)、血浆血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)水平;取左心室心肌,用TUNEL方法检测心肌细胞凋亡及凋亡相关基因Fas配体(FasL)mRNA及蛋白表达。结果与正常对照组相比,糖尿病模型组大鼠血浆AngⅡ水平明显增高,从440±20增高到(863±38)ng.L-1(P<0.05);LVP从19.3±0.5明显降低到(14.7±1.2)kPa(P<0.05);+dp/dtmax从1020±55降低到(778±80)kPa.s-1(P<0.05);-dp/dtmax从705±44降低到(420±62)kPa.s-1(P<0.01);LVEDP从0.13±0.06升高到(0.50±0.09)kPa(P<0.05);心脏质量指数明显升高,从2.93±0.10升高到(4.13±0.18)mg.g-1(P<0.01);心肌细胞凋亡数目增多,凋亡率从(0.5±0.3)%明显增加到(23.1±1.6)%(P<0.01),FasL基因和蛋白表达显著增强(P<0.01)。与模型组相比,贝那普利组大鼠连续12周ig给予贝那普利后,AngⅡ水平从863±38明显降低到(619±24)ng.L-1(P<0.05);LVP从14.7±1.2明显升高到(17.6±0.8)kPa(P<0.05);+dp/dtmax从778±80明显升高到(913±58)kPa.s-1(P<0.05),-dp/dtmax从420±62明显升高到(574±54)kPa.s-1(P<0.05),LVEDP从0.50±0.09明显降低到(0.28±0.47)kPa(P<0.05),心脏质量指数从4.13±0.18明显降低到(3.42±0.13)mg.g-1(P<0.05);心肌细胞凋亡数目减少,从(23.1±1.6)%降低到(17.1±1.0)%(P<0.05);FasL基因和蛋白表达均明显下调(P<0.05)。结论贝那普利的干预可以抑制糖尿病心肌细胞凋亡,改善心室重构,保护心脏功能。其机制可能与下调凋亡相关基因FasL表达有关。