青钱柳多糖调节胰岛和肝脏葡萄糖转运蛋白4转位干预2型糖尿病大鼠的作用机制

目的 观察青钱柳多糖调节胰岛和肝脏葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)转位改善2型糖尿病(T2DM)大鼠外周胰岛抵抗的作用。方法 建立T2DM大鼠模型(给予高脂饲料后注射链脲佐菌素35 mg·kg^(-1)),将造模成功的大鼠随机分为模型对照组,青钱柳多糖提取物小、大剂量组(5,10 g·kg^(-1))和盐酸二甲双胍组(0.25 g·kg^(-1)),每组9只,给药8周。测定空腹血糖、血脂变化;苏木精-伊红染色法观察胰岛和肝脏病理形态的改变;免疫组化法观察胰岛磷酸化磷酯酰肌醇3激酶(p-PI3K)、磷酸化丝氨酸苏氨酸蛋白激酶1(p-Akt1)、GLUT4蛋白的表达;免疫荧光观察肝脏和胰岛GLUT4转位。结果 与模型对照组比较,青钱柳多糖提取物小、大剂量组和盐酸二甲双胍组大鼠胰岛和肝脏结构较完整,血糖下降(P<0.05),高密度脂蛋白升高(P<0.05),胰岛p-PI3K、p-Akt1、GLUT4蛋白表达升高(P<0.05),肝脏和胰岛GLUT4转位增强(P<0.05)。结论 青钱柳多糖可调节T2DM大鼠糖脂紊乱,其机制可能是增强胰岛p-PI3K、p-Akt1、GLUT4蛋白的表达,促进肝脏和胰岛GLUT4转位,从而调节外周胰岛抵抗。

转位分子蛋白和创伤后血清游离线粒体预测创伤性休克患者病情及预后的价值

目的探讨转位分子蛋白(TSPO)和创伤后血清游离线粒体DNA(cf-mtDNA)预测创伤性休克患者病情及预后的价值。方法选取创伤性休克患者(创伤性休克组)和无创伤性休克患者(无创伤性休克组)各80例。收集患者完整的人口统计学资料和临床实验室数据。收集入院后即刻(T_(1))以及入院后第1(T_(2))、3(T_(3))、7(T_(4))天创伤性休克患者的血液样本,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测TSPO水平,采用定量实时聚合酶链式反应(qPCR)检测cf-mtDNA水平。比较创伤性休克与无创伤性休克患者的TSPO、cf-mtDNA水平;将创伤性休克患者按预后结局的不同分为预后不良组和预后良好组,比较2组的TSPO、cf-mtDNA水平。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析TSPO、cf-mtDNA对创伤性休克患者预后的预测价值。结果与无创伤性休克组比较,创伤性休克组T_(1)~T_(4)的血清TSPO较高,T_(2)~T_(3)的血清cf-mtDNA较高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与预后良好组比较,预后不良组T_(1)~T_(4)的血清TSPO、cf-mtDNA较高,差异有统计学意义(P<0.05)。以创伤性休克患者预后作为状态变量进行ROC曲线分析,结果显示,预后不良组T_(1)~T_(4)的TSPO预测预后的曲线下面积(AUC)依次为0.825、0.829、0.695和0.869,预后不良组T_(1)~T_(4)的cf-mtDNA预测预后的AUC为0.766、0.766、0.837和0.783,差异均有统计学意义(P<0.001)。结论创伤性休克患者TSPO及cf-mtDNA水平升高,其中预后不良者TSPO及cf-mtDNA水平升高更为显著,而第7天的TSPO水平以及第3天的cf-mtDNA水平评估预后价值最高。

转位蛋白基因在FLT3-ITD/DNMT3A R882双突变急性髓系白血病疗效评估中的价值

目的:观察转位蛋白(TSPO)基因在FLT3-ITD/DNMT3A R882双突变急性髓系白血病(AML)疗效评估中的价值。方法:纳入2018年6月至2020年6月在宁波大学附属人民医院血液科住院治疗的初发AML患者76例,其中伴有FLT3-ITD突变34例,伴有DNMT3A R882突变27例,伴有FLT3-ITD/DNMT3A R882双突变15例,对照组为同期住院治疗的免疫性血小板减少症(ITP)患者19例。骨髓穿刺留取骨髓3 ml,常规提取RNA,通过转录组测序方法检测TSPO基因的表达量(使用2^(-ΔΔCT)法计算)。结果:FLT3-ITD单突变组和DNMT3A R882单突变组初诊时TSPO基因表达量分别为2.02±1.04、1.85±0.76,均高于对照组的1.00±0.06,但比较差异无统计学意义(P=0.671,P=0.821);双突变组初诊时TSPO基因表达量为3.98±1.07,明显高于FLT3-ITD单突变组和DNMT3A R882单突变组(P=0.032,P=0.021);双突变组化疗后达到完全缓解的患者,达到完全缓解时的TSPO基因表达量为1.19±0.87,明显低于其初诊时的水平(P=0.011)。结论:TSPO基因或许可以作为评估FLT3-ITD/DNMT3A R882双突变AML治疗疗效的一个指标。

丹参酮ⅡA通过调节线粒体转位蛋白诱导HepG2细胞凋亡

目的探讨丹参酮ⅡA(tanshinoneⅡA,TanⅡA)通过调节线粒体转位蛋白(translocator protein,TSPO)诱导HepG2细胞凋亡中的作用及可能存在的作用机制。方法采用MTT比色法检测TanⅡA对HepG2细胞增殖的影响,Annexin V-PE/7-氨基-放线菌素D双染色法和Hochest染色法观察细胞凋亡率,荧光素酶发光法检测HepG2细胞中ATP的含量,Clark氧电极法测定细胞耗氧率,JC-1荧光探针法检测细胞线粒体膜电位变化,免疫荧光染色法观察转位蛋白在细胞内的表达及定位,免疫印迹法检测线粒体内细胞色素C、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3以及半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-9的表达。结果TanⅡA能够剂量依赖性地抑制肝癌细胞HepG2增殖,诱导细胞凋亡、ATP生成减少、耗氧量降低以及线粒体膜电位的下降。同时,TanⅡA可诱导HepG2细胞TSPO表达上调并聚集于核内。结论TanⅡA可诱导HepG2细胞凋亡,其机制与促进细胞转位蛋白TSPO表达及细胞核转位,进而引起线粒体功能障碍有关。

转位分子蛋白经由Keap1/Nrf2/HO-1通路激活自噬缓解大鼠糖尿病神经病理性疼痛

目的·探讨转位分子蛋白(translocator protein,TSPO)激动剂Ro5-4864对糖尿病神经病理性疼痛(diabetic neuropathic pain,DNP)大鼠坐骨神经自噬和Kelch样ECH关联蛋白(Kelch-like ECH-associated protein 1,Keap1)/核因子E2相关因子(nuclear factor erythroid-derived-2-like 2,Nrf2)/血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)通路的影响。方法·通过高脂饮食和链脲佐菌素构建2型糖尿病模型,经行为学筛选获得DNP大鼠。24只大鼠根据数字表随机分配到假手术组(Sham组)、DNP模型组(DNP组)、TSPO激动剂Ro5-4864处理组(Ro组)和TSPO激动剂Ro5-4864合用Nrf2抑制剂ML385处理组(Ro+ML385组)。采用up-down法测量大鼠50%机械缩足反射阈值(paw 50%mechanical withdrawal threshold,50%PMWT),时间点选定为处理前(baseline),处理后第3(D3)、7(D7)、14(D14)、21(D21)和28(D28)天。在最后1天收集坐骨神经,使用免疫荧光和Western blotting分析鞘内注射Ro5-4864对DNP大鼠坐骨神经中自噬相关蛋白和Keap1/Nrf2/HO-1通路相关蛋白的影响。结果·与Sham组相比,DNP组大鼠的50%PMWT自第3天开始大幅下降,全程无改善(各时间点均P=0.000);另外,DNP大鼠坐骨神经中Bcl-2相互作用蛋白(Bcl-2 interacting coiled-coil protein 1,Beclin-1)、微管相关蛋白轻链3-Ⅱ(microtubule-associated protein light chain 3-Ⅱ,LC3-Ⅱ)、HO-1和核Nrf2蛋白的含量显著减少(均P=0.000),p62则显著增加(P=0.000)。鞘内注射Ro5-4864改善了以上损伤,大鼠50%PMWT与DNP组相比逐渐上升(D14 P=0.039,D21和D28均P=0.000),自噬和Keap1/Nrf2/HO-1通路的损伤也被修复,表现为Beclin-1、LC3-Ⅱ、HO-1和核Nrf2蛋白含量的升高(均P=0.000)以及p62含量的降低(P=0.001)。但是,Ro5-4864的效应被ML385完全抑制。结论·TSPO激动剂Ro5-4864缓解了DNP,其作用机制可能与通过对Keap1/Nrf2/HO-1通路的正向调节激活了DNP大鼠坐骨神经中的自噬相关。这可能为治疗DNP提供了一个新的策略。

转位蛋白配体XBD173对香烟烟雾提取物诱导小鼠肺炎症反应的减轻作用及其机制

目的:探讨转位蛋白(TSPO)配体XBD173对香烟烟雾提取物(CSE)诱导小鼠肺炎症反应和巨噬细胞M1型极化的影响,阐明其相关分子机制。方法:18只成年雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组、CSE组和CSE+XBD173组,CSE组小鼠采取20μL CSE滴鼻,CSE+XBD173组小鼠给予相同剂量CSE和腹腔注射10 mg·kg^(-1)XBD173。采用HE染色和PAS染色观察各组小鼠肺组织病理形态表现。培养小鼠RAW264.7巨噬细胞,分为对照组、CSE组和CSE+XBD173组,CSE给药浓度为1%,XBD173给药浓度为4 mg·L^(-1),对照组给予相同体积的二甲基亚砜;刺激18 h后,流式细胞术检测各组RAW264.7细胞中CD80、CD86、诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)和活性氧(ROS)表达水平及细胞凋亡率,Western blotting法检测各组RAW264.7细胞中核因子κB/p65(NF-κB/p65)和磷酸化NF-κB/p65(p-NF-κB/p65)蛋白表达水平。采用siRNA敲低RAW264.7细胞中TSPO表达,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组细胞中白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)mRNA表达水平。结果:动物实验,与对照组比较,CSE组小鼠肺组织中炎症细胞数量明显增多、支气管管壁增厚;与CSE组比较,XBD173+CSE组小鼠肺组织中炎症细胞减少,支气管管壁变薄。细胞实验,与对照组比较,CSE组RAW264.7细胞中CD80、CD86、iNOS和ROS表达水平明显升高(P<0.05),细胞凋亡率明显升高(P<0.05),IL-6和TNF-αmRNA表达水平升高(P<0.05),p-NF-κB/p65蛋白表达水平明显升高(P<0.05),NF-κB/p65蛋白表达水平差异无统计学意义(P>0.05);与CSE组比较,XBD173+CSE组RAW264.7细胞中CD80、CD86、iNOS和ROS表达水平明显降低(P<0.05),细胞凋亡率明显降低(P<0.05),IL-6和TNF-αmRNA表达水平明显降低(P<0.05),p-NF-κB/p65蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。siRNA敲低RAW264.7细胞TSPO蛋白表达后,各组细胞中IL-6和TNF-αmRNA表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:XBD173可减轻CSE引起的小鼠肺炎症反应,抑制CSE诱导的巨噬细胞M1极化,其机制可能与NF-κB蛋白有关。

胰岛素抵抗大鼠骨骼肌中蛋白激酶B表达及葡萄糖转运蛋白4转位的改变

目的研究高脂饮食喂养的胰岛素抵抗(IR)大鼠骨骼肌中蛋白激酶B(PKB)表达和葡萄糖转运蛋白4(GluT4)转位的改变及饮食治疗、葛根素、罗格列酮干预的影响。方法将雄性SD大鼠50只随机分为正常饮食(A)组和高脂饮食(B)组,2个月后再将B组大鼠随机分为高脂饮食(C)组、正常饮食干预(D)组、葛根素干预(E)组和罗格列酮干预(F)组。干预1个月后检测骨骼肌中PKB的表达及转位至质膜的GluT4含量。结果C组大鼠产生了明显的IR,骨骼肌中PKB的表达较A组显著降低(P<0.01),转位到质膜上的GluT4含量显著减低(P<0.01);D、E、F组大鼠IR明显改善,骨骼肌中PKB的表达较C组大鼠显著增加(P<0.01),GluT4含量较C组大鼠显著升高(P<0.01)。结论高脂饮食喂养的SD大鼠骨骼肌产生明显的IR,骨骼肌中Ins诱导的PKB表达降低,Ins刺激的GluT4向质膜的转位减少。饮食治疗及葛根素、罗格列酮干预能增加骨骼肌中Ins刺激的PKB表达及GluT4向质膜的转位。

低氧预适应增加小鼠脑组织蛋白激酶C膜转位

初步探讨蛋白激酶C(PKC)在脑低氧预适应发生机制中的作用 ,以我室建立的小鼠低氧预适应模型 ,结合SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)、蛋白印迹 (Westernbolt)等生化技术 ,观察了低氧预适应对小鼠大脑皮层及海马组织内PKC膜转位的影响。结果表明 ,在小鼠大脑皮层和海马组织内的PKC膜转位均随着低氧次数 (小鼠低氧耐受时间 )的增加而增高。特别是低氧 3次的海马组织和低氧 4次的大脑皮层和海马组织内 ,PKC膜转位的增加有统计学显著意义。结果提示 ,PKC的激活可能在脑低氧预适应发生机制中具有重要的作用。

小鼠海马齿状回过表达18ku转位蛋白对焦虑和抑郁样行为的调节作用

目的研究小鼠海马齿状回18 ku转位蛋白(TSPO)过表达对焦虑、抑郁样行为的影响,为TSPO成为药物潜在新靶标提供实验依据。方法成年雄性ICR小鼠海马齿状回每侧微注射携带TSPO基因的慢病毒(LV)(2×108TU·m L-1),以致TSPO过表达(LV-TSPO)。第12,14和16天进行小鼠高架十字迷宫、爬梯实验、明暗箱实验检测焦虑样行为,第18和21天进行小鼠悬尾和强迫游泳行为绝望模型检测抑郁样行为;行为学实验结束,采用Western蛋白印迹法和ELISA方法分别检测海马注射孔周围3 mm组织内TSPO蛋白水平和四氢孕酮含量。结果小鼠海马齿状回微注射慢病毒后12 d,小鼠跨格数和站立次数无明显改变;与LV组相比,LV-TSPO组显著增加小鼠进入中心区时间(14±4 vs 25±12,P<0.05);显著增加小鼠进入开臂次数和开臂时间的百分比〔(13±8)%vs(26±18)%,P<0.05;(6±6)%vs(27±6)%,P<0.05)〕;显著减少小鼠站立次数(21±7 vs 12±5,P<0.05);显著增加小鼠进入明箱的次数和时间〔18±8 vs(26±7)s,P<0.05;72±36 vs(191±90)s,P<0.05〕,提示海马齿状回TSPO过表达小鼠表现出显著的抗焦虑样行为作用;与LV组相比,LV-TSPO组明显减少小鼠在悬尾实验和强迫游泳实验中的不动时间〔(94±33 vs(36±20)s,P<0.01;137±36 vs(90±37)s,P<0.05〕,提示海马齿状回TSPO过表达小鼠表现出显著的抗抑郁样作用。与LV组相比,小鼠海马齿状回TSPO过表达可导致海马注射孔周围3 mm组织四氢孕酮含量显著增加(P<0.05)。结论小鼠海马齿状回过表达TSPO具有显著的抗焦虑、抗抑郁样的行为学效应,且TSPO介导的四氢孕酮水平升高可能是其重要机制。

转位蛋白18kDa:未来治疗神经精神疾病的新靶点

转位蛋白18 kDa曾命名为外周型苯二氮受体,2005年把曾称为外周型苯二氮受体的第一亚单位(DB1,18 kDA)重命名为TSPO。TSPO在中枢神经系统中主要分布于胶质细胞线粒体外膜,并在与甾体合成相关的组织中高度表达,参与甾体合成,细胞凋亡和免疫调节等生理调节,其表达与各种神经病变中的脑内炎症和反应性胶质化有关。TSPO配体在临床上具有诊断和治疗神经精神疾病的价值。本文阐述TSPO命名的由来和分子基本结构特征,在中枢神经系统中胶质细胞线粒体外膜的分布以及其参与神经类固醇合成、线粒体凋亡和免疫调节等生理功能,进一步综述现今TSPO配体用于诊断和治疗神经精神疾病的现状。

神经病理性疼痛的药物治疗及其新靶点——18 ku转位蛋白

神经病理性疼痛(neuropathic pain,NP)是由躯体感觉系统的疾病或损伤而产生的一种慢性疼痛,以自发性疼痛、痛觉过敏及异常性疼痛为主要临床特征的疼痛综合征。NP影响22%的慢性疼痛患者~[1],NP不是一种单一的疾病,而是由一系列不同的疾病和病变引起的综合征,表现为一系列的症状和体征,这些不同条件下的机制是多种多样的~[2]。

卒中后抑郁大鼠海马区芳烃受体核转位蛋白2的表达

目的探讨卒中后抑郁(PSD)大鼠海马区芳烃受体核转位蛋白2(ARNT2)的表达。方法 24只雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为假手术组、单纯抑郁组、单纯卒中组和PSD组,每组6只。采用线栓法制备局灶性脑缺血大鼠模型,在此基础上综合孤养、不可预测应激处理复合制备PSD大鼠模型。采用半定量反转录聚合酶链反应、免疫组织化学法检测大鼠海马区ARNT2 mRNA和蛋白的表达。结果单纯卒中组和PSD组大鼠海马区ARNT2 mRNA的相对表达量均高于假手术组(P<0.05),PSD组大鼠海马区ARNT2 mRNA的相对表达量高于单纯卒中组和单纯抑郁组(P<0.05)。单纯抑郁组与假手术组大鼠海马区ARNT2蛋白表达比较差异无统计学意义(P>0.05),单纯卒中组和PSD组大鼠海马区ARNT2蛋白表达均高于假手术组(P<0.05),PSD组大鼠海马CA2区ARNT2蛋白表达显著高于单纯抑郁组和单纯卒中组(P<0.05)。结论 ARNT2参与了PSD发生的生物学过程。

芳香烃受体核转位蛋白的结构及相关功能

芳香烃受体核转位蛋白(aryl hydrocarbon receptor nuclear translocator,ARNT)是碱性螺旋-环-螺旋转录因子超家族中新发现的PAS亚家族的成员之一。它是体内许多bHLH-PAS蛋白共同的专性配偶体,可以与芳香烃受体、低氧诱导因子、果蝇SIM蛋白等形成异二聚体并介导许多信号转导过程,从而使个体对环境污染物(如二恶英)、低氧状态等外界因素的改变产生相应的生物学效应,本文就ARNT的基本结构及其在体内的主要生理功能等方面作一综述。

18ku转位蛋白选择性配体YL-IPA08对皮质酮诱导BV-2细胞凋亡的保护作用

目的探讨18 ku转位蛋白TSPO选择性配体YL-IPA08对皮质酮诱导BV-2细胞凋亡的保护作用,并研究其可能的作用机制。方法选择性TSPO配体YL-IPA08 1~100 nmol·L^(-1)和(或)TSPO拮抗剂PK11195 100 nmol·L^(-1)预处理小胶质细胞系BV-2细胞2 h,加入皮质酮200μmol·L^(-1)继续培养24 h,分别用流式细胞术检测细胞凋亡,CCK-8法检测细胞存活,Western蛋白质印迹法检测TSPO蛋白表达水平,ELISA法检测细胞培养上清中四氢孕酮的水平。结果与溶剂对照组相比,YL-IPA08 1~100 nmol·L^(-1)与阳性化合物AC-5216一样能降低皮质酮处理的BV-2细胞的凋亡率(P<0.01),且100 nmol·L^(-1)时作用最为显著,该作用能被PK11195 100 nmol·L^(-1)所拮抗(P<0.05)。细胞活性检测显示,YL-IPA08 100 nmol·L^(-1)时能显著升高细胞活性(P<0.01),PK11195 100 nmol·L^(-1)处理会拮抗该作用(P<0.01)。Western蛋白质印迹和ELISA法结果显示,YL-IPA08 100 nmol·L^(-1)时能显著增加皮质酮处理的BV-2细胞TSPO蛋白的表达(P<0.05)并显著升高培养液中四氢孕酮的水平(P<0.05),PK11195 100 nmol·L^(-1)显著逆转该现象,降低四氢孕酮的水平(P<0.05)。结论 YL-IPA08显著抑制皮质酮诱导BV-2细胞的凋亡,表现出对小胶质细胞的保护作用,该作用与其增加TSPO蛋白的表达、升高四氢孕酮的水平密切相关。

转位肽和转位蛋白在非病毒基因转移中的应用

利用非病毒载体转运目的基因时 ,转位肽和转位蛋白能够促进外源DNA通过内吞体膜屏障 ,实现高效的基因转移。转位结构域存在于一些病毒蛋白。

芳香烃受体核转位蛋白在胃癌中的表达及意义

目的:通过检测芳香烃受体核转位蛋白(Ah receptor nucleart ranslocator,ARNT)在胃癌及其多阶段癌前病变组织的表达,初步探索ARNT在胃癌发生中的作用。方法:采用Envision免疫组织化学检测慢性浅表性胃炎30例、慢性萎缩性胃炎30例、肠型化生30例、胃异型增生30例及胃癌70例中ARNT的表达。结果:慢性浅表性胃炎组、慢性萎缩性胃炎组及肠型化生组的ARNT核阳性表达率分别为36.67%(11/30)、50.00%(15/30)及63.33%(19/30);异型增生组的核阳性表达率为80.00%(24/30),明显高于前三组;与前四组比较,胃癌组ARNT核阳性表达率显著升高,为92.86%(65/70),与非癌组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:ARNT在胃癌及其多阶段癌前病变组织中表达逐渐上调,提示ARNT与胃癌的发生密切相关。

转位蛋白与神经退行性疾病

转位蛋白18 k Da（translocator protein 18 k Da,TSPO 18 k Da）曾被称为外周型苯二氮受体（peripheral-type benzodiazepine receptor s,PBRs）的第一亚单位,即位于线粒体外膜的异喹啉结合点地西泮结合抑制物（diazepam binding inhibitor,DBI,18k Da）。1977年Braestrup等[1,2]首次发现中枢神经系统以外存在苯二氮革结合位点，被称为PBRs。

转位蛋白特异性显像剂18F-DPA-714的在线自动化合成及其质量控制

目的建立^(18)F-DPA-714的在线自动化合成方法及其质量控制方法。方法采用日本住友CFN-F100多功能合成模块,自主编辑自动化合成程序,回旋加速器HM-10生产出来的18F-经QMA柱捕获,洗脱,干燥除水后,与前体进行亲核取代反应。粗产品转移至半制备型高效液相色谱(HPLC)分离纯化,收集产品峰,加水稀释后,转移至C_(18)柱上,再经水洗,最后用2mL乙醇洗脱,加生理盐水稀释,经无菌滤膜过滤得到产品。测定其pH值、放射化学纯度、稳定性及细菌内毒素等。结果在线自动化制备^(18)F-DPA-714放射化学纯度>99%,未衰减校正的合成效率为18%~36%(n=20),比活度可达675GBq/mg,整个制备时间约为55min。结论该18F-DPA-714在线自动化制备方法简单,易于操作,工艺安全,有利于工作人员的辐射防护,合成效率稳定,放射化学纯度高,比活度高,各项指标合格,满足临床使用需求。

18ku转位蛋白:焦虑症治疗的潜在新靶点

焦虑症是发病率最高的精神疾病之一,但目前其发病机制尚不明确。近几年的研究表明,18×103(18ku)转位蛋白(TSPO)配体对情感性精神疾病,尤其是焦虑症有治疗作用。并且相比于传统的苯二氮卓艹类抗焦虑药物,TSPO配体具有起效快,副反应少且不易产生耐受性等优势。本文从TSPO的分子结构、体内分布、抗焦虑机制及其配体的近期研究进展等几个方面进行综述。