大孔聚合物层析介质孔结构对蛋白载量的影响

分别以甲基丙烯酸缩水甘油酯和乙二醇二甲基丙烯酸酯作为功能单体和交联剂,采用悬浮聚合方法制备了大孔聚合物微球.考察了致孔剂组成对微球的孔径、比表面积的影响,并用聚乙烯亚胺将微球衍生为阴离子交换层析介质,考察了微球结构与蛋白载量之间的关系.结果表明,微球孔径尺寸随着致孔剂中不良溶剂用量[V(良溶剂)/V(不良溶剂)=1∶1～1∶3. 5]的增加而增大,而比表面积则呈相反趋势.离子交换容量(0. 11～0. 27 mmol/m L)与比表面积(4～38 m2/g)呈正相关,对应的蛋白静态结合载量亦呈正比关系.在所考察的孔径范围(301～1524 nm)内,蛋白动态结合载量先减少后保持稳定,即当孔径超过410 nm后,蛋白动态载量值保持在13 mg/m L不变,表明介质孔径超过此数值后蛋白载量不再受介质的比表面积影响.此外,以乙肝病毒表面抗原分子(HBs Ag,22 nm)为探针分子,利用激光共聚焦显微镜观察了该分子在微球内部的分布,结果表明,在该孔径考察范围内,HBs Ag均能完全扩散至微球内部.

牛血清白蛋白键合的液相手性整体柱制备及其蛋白柱载量的研究

蛋白质柱载量的测定对优化蛋白质类手性整体柱的制备条件具有重要意义。采用热引发原位聚合方法制备了聚甲基丙烯酸缩水甘油酯(GMA)-乙二醇二甲基丙烯酸酯(EDMA)液相整体柱,而后采用环氧法直接键合手性选择剂牛血清白蛋白(BSA),制得高效液相手性整体柱,并且建立考马斯亮蓝(CBB)法测定手性整体柱上的蛋白柱载量。结果显示,BSA最大的柱载量为11.90 mg/g,此时致孔剂组成为环己醇-十二烷醇(65∶35)。将制备的高效液相手性整体柱用于色氨酸和华法林的拆分,色氨酸的两个对映异构体达到基线分离。高效液相手性整体柱的蛋白柱载量与手性拆分的效果呈现正相关。

HPV16-E6-DNA载量与宫颈病变程度及病理特征关系

目的:探讨高危人乳头瘤病毒16型致癌基因E6(HPV16-E6-DNA)载量与宫颈病变程度关系。方法:取集2017年1月-2019年4月本院妇科收治的宫颈病变患者173例临床资料,根据病理学结果分为低度鳞状上皮内瘤变67例(LSIL组)、高度鳞状上皮内瘤变74例(HSIL组)、宫颈癌32例(宫颈癌组),荧光定量PCR技术检测各组宫颈组织标本中HPV16-E6-DNA表达,并分析在不同临床分期(FIGO)、分化程度、病灶大小、肌层浸润程度、病灶类型、淋巴结转移等表达差异。结果:组织中HPV16-E6-DNA载量,宫颈癌组达到>107者占43.8%、105~107占37.5%、<105占18.8%,HSIL组>107占21.6%、105~107占35.1%、<105占43.2%,LSIL组>107占11.9%、105~107占20.9%、<105占67.2%,宫颈癌组HPV16-E6-DNA载量高于LSIL组和HSIL组(P<0.05);宫颈癌组FIGO分期(Ⅲ+Ⅳ期)、肌层浸润>1/2、淋巴结转移阳性标本中HPV16-E6-DNA载量更高(P<0.05),而不同组织分化程度、病灶直径及病灶类型的标本中HPV16-E6-DNA载量未见差异(P>0.05)。结论:在宫颈癌组织中HPV16-E6-DNA载量较LSIL和HSIL患者更高,并与宫颈癌病变不同病理特征有一定关系。

固定化金属亲和层析介质在蛋白纯化中的应用进展

随着生物制药技术的发展,生物制品的生产规模日益扩大,对下游分离纯化技术也提出新的挑战,为满足高效获得符合要求的产品这一需求,各种快速分离纯化蛋白的技术应运而生,其中固定化金属亲和层析色谱在蛋白纯化中的应用取得了快速发展。固定化金属亲和层析具有配基选择简单且稳定性高、特异性好、蛋白结合载量高、蛋白洗脱条件温和、介质易再生、制备工艺简单、造价低等多项优点,逐渐成为蛋白质分离纯化及多个相关领域中最有效的分离技术之一。本文对固定化金属亲和色谱的工作原理、构成、应用现状进行了阐述,其中主要对蛋白载量和金属离子泄露问题进行概括,对螯合层析介质在蛋白质纯化中的前景进行了展望。

赤豆β-半乳糖苷酶固定化及其性质研究

用阳离子修饰的 Sephadex G- 1 0 0 ,经 Br CN活化 ,将部分纯化的赤豆 β-半乳糖苷酶通过吸附和共价交联法固定化。固定化载体表现出较高的蛋白载量和酶活性收率。固定化酶活性收率达 6 5 %。动力学性质研究表明 ,固定化酶酸碱稳定性、热稳定性、存储稳定性和使用稳定性都比游离酶好。