慢性阻塞性肺疾病蛋白酶/抗蛋白酶失衡机制及中医药干预探讨

慢性阻塞性肺疾病(COPD)是一种以持续存在的呼吸道症状和气流受限为特征的呼吸系统疾病。蛋白酶/抗蛋白酶失衡是COPD的重要发病机制之一,参与肺实质破坏、组织重塑、黏液高分泌和肺功能下降等关键病理环节,是重要的治疗干预靶点。近年来,有效调控COPD蛋白酶/抗蛋白酶平衡的文献研究颇多,本文围绕蛋白酶/抗蛋白酶失衡在COPD中的机制以及相关中医药调控COPD展开阐述,对于拓展COPD治疗具有重要的科学意义。

蛋白酶与抗蛋白酶失衡在COPD中的研究进展

COPD以气道、肺实质和肺血管慢性炎症性病变为特征。大多数研究证实,COPD的发病机制除了炎症及氧化应激外,另外还有蛋白酶与抗蛋白酶失衡。很早以前就有学术假说认为COPD组织损伤是由于由中性粒细胞和巨噬细胞产生的蛋白酶与从血浆渗出的抗蛋白酶失衡引起的。

蛋白酶-抗蛋白酶失衡在兔肺挫伤中的作用

目的 研究蛋白酶 -抗蛋白酶失衡在兔创伤性肺挫伤中的作用。方法 家兔随机分为 2组 ,创伤组 (n =8)和对照组 (n =8) ,采用兔单侧肺挫伤生物撞击模型 ,动态观察血浆中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)、α1 抗胰蛋白酶 (α1 AT)、肿瘤坏死因子 α(TNF α)及白介素 8(IL 8)含量变化 ;活杀动物后取肺组织比较湿 /干重比值 (W/D)、丙二醛 (MDA)、髓过氧化物酶 (MPO)的变化 ,观察支气管肺泡灌洗液 (BALF)中上述细胞因子和炎症介质的变化 ,进行肺组织的病理学光镜检查。结果 创伤组与对照组相比较 ,血浆和BALF中NE的活性升高、血浆α1 AT含量先降低后升高、TNF α、IL 8含量均明显升高 (P <0 .0 1或P <0 .0 5 ) ,兔肺组织损伤以肺出血、水肿和中性粒细胞 (PMN)浸润为主要表现。结论 肺挫伤后 ,PMN激活并释放NE ,使蛋白酶 -抗蛋白酶失衡 ,在创伤性急性肺损伤中有重要的作用。

急性肺损伤中蛋白酶——抗蛋白酶失衡以及抗蛋白酶治疗的研究

急性肺损伤是临床常见危重症，可进一步发展为和呼吸窘迫综合征，是继发于以中性白细胞为主的炎症细胞在肺部羁押并激活，释放氧自由基以及蛋白酶等的结果。蛋白酶在急性肺损伤、急性呼吸衰竭综合征和多脏器损伤发病过程中起重作用，多形核粒细胞和单核／巨噬细胞释放的弹性蛋白酶以及组织蛋白酶Ｂ、Ｌ等具有强大蛋白溶解作用。α１－抗胰蛋白酶是肺脏最重要的抗蛋白酶物质。

苏云金杆菌伴孢晶体的蛋白质和抗蛋白酶多肽及其毒力特性

以SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析了19种苏云金杆菌伴孢晶体的蛋白质和抗胰蛋白酶多肽。以鳞翅目的家蚕和双翅目的致倦库蚊进行了毒力测定。根据蛋白质和抗酶多肽的特性,19种晶体可分为7个类型。晶体蛋白质的组成、溶解特性及抗酶多肽的性质与其对两种昆虫的毒力特性密切相关。含分子量为130—138 kD(千道尔顿)或130—138 kD及60—65 kD蛋白质,抗蛋白酶多肽(PRP)为68—75kD的晶体,对家蚕高毒,但绝大部分对库蚊无毒或微毒。含3种以上蛋白质(15—138kD),抗酶多肽为35—65kD的晶体,对库蚊有强烈毒性,对家蚕则无毒。缺少135kD蛋白质的两种晶体对家蚕低毒。HD-282和L-14晶体的P1蛋白质中同时含有杀鳞翅目和杀蚊毒素。讨论了伴孢晶体的蛋白质结构及结构与毒力之间的关系、晶体蛋白质及毒性肽的性质在菌株定向筛选和遗传工程研究中的意义。

蛋白酶/抗蛋白酶系统与慢性阻塞性肺疾病

慢性阻塞性肺疾病（COPD）是一种具有气流受限特征的疾病,气流受限不完全可逆、进行性发展,与肺部对有害气体或颗粒的异常炎症反应有关。气道炎症、氧化/抗氧化失衡、蛋白酶/抗蛋白酶失衡均在COPD发病中起重要作用,但其气流受限的分子机制仍未阐明。近年来,蛋白酶/抗蛋白酶失衡与COPD发病机制的研究有很大进展,本文就此作一综述。

抗蛋白酶3抗体检测及影响因素的研究

目的研究血清样本稀释度、封闭液、孵育条件、洗涤条件及酶标板包被后保存时间对血清抗蛋白酶3(PR3)抗体检测结果的影响。方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)对159份血清进行抗PR3抗体检测,并用受试者工作特征曲线(ROC曲线)分析确定阳性界限(cut-off)值。结果血清样本最佳稀释度为1∶50;5%脱脂奶粉封闭酶标板能有效地降低本底值;孵育缓冲液中加入牛血清白蛋白及脱脂奶粉比单用磷酸盐缓冲液(PBS)对测定值有明显影响。经ROC曲线分析实验的阳性临界值为正常阴性对照吸光度(A)值的2.5倍,灵敏度和特异性分别为84.62%和98.46%。结论血清抗PR3检测结果受血清样品稀释、封闭液、孵育条件及阳性临界值的选择等多因素的影响。

CDK4基因突变及其胰蛋白酶-抗胰蛋白酶失衡在胃癌发生中的作用

目的探讨胃癌患者中细胞周期蛋白依赖激酶基因(cell cycle-dependent protein kinase 4,CDK4)突变及其胃癌组织CDK4表达和血清胰蛋白酶-抗胰蛋白酶的失衡情况。方法应用PCR法扩增25例胃癌患者及62名健康体检者的CDK4基因外显子、启动子和侧翼序列,产物纯化后直接测序,分析不同基因型胃癌患者的临床特征,取患者的癌组织、癌旁组织和远离癌的正常组织做CDK4免疫组化,同时应用ELISA法检测同一时期患者及其对照的血清胰蛋白酶和α-抗胰蛋白酶水平,分析其差异性。结果在胃癌患者中发现CDK4基因3号外显子存在高频突变,其中5例患者为c.110 T>A突变,突变造成p.M37T;免疫组化显示,癌组织高表达CDK4,癌旁组织呈弱表达,远离癌的正常组织呈阴性;胃癌患者的血清胰蛋白酶浓度(33.98±11.24)ng/ml显著高于正常对照组(15.96±18.23)ng/ml,而血清抗胰蛋白酶浓度与正常对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 CDK4基因突变及其高表达与胃癌发生密切相关,机体内胰蛋白酶-抗胰蛋白酶的失衡可能是胃癌发病的重要原因。

化学发光法检测抗髓过氧化物酶抗体和抗蛋白酶3抗体

目的研究全自动、定量和随机上样化学发光法(chemiluminescent immunoassay,CLIA)检测抗髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)抗体和抗蛋白酶3(proteinase 3,PR3)抗体的临床应用价值,为临床抗MPO抗体和抗PR3抗体检测方法的选择提供参考。方法对临床242例常规申请抗中性粒细胞胞浆抗体(anti-neutrophil cytoplasmic autoantibodies,ANCA)检测的样本采用间接免疫荧光法(immunofluorescent assay,IFA)筛查的同时,应用CLIA和酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)平行检测抗MPO抗体和抗PR3抗体。对上述检测结果进行统计学分析。结果 CLIA与ELISA针对抗MPO抗体的检测表现出良好的一致性和符合率,其中总符合率为93.8%,阳性符合率81.9%,阴性符合率98.8%,一致性结果显示kappa=0.845,受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC曲线)以下面积(area under the curve,AUC)为0.966。两种方法学在检测抗PR3抗体时一致性和符合率表现较低,其中总符合率为86.8%,阳性符合率为35.1%,阴性符合率为96.1%。ROC曲线分析显示AUC为0.839;抗PR3抗体两种方法检测结果不一致的样本经第三方试剂验证结果显示,CLIA检测结果与第三方试剂验证结果差异无统计学意义(P>0.05),而ELISA检测结果与第三方试剂验证结果差异存在统计学意义(P<0.05)。CLIA检测结果与IFA检测结果阳性符合率为60.8%、阴性符合率为94.8%、总符合率为79.8%。而ELISA检测结果与IFA检测结果阳性符合率、阴性符合率和总符合率则分别为73.6%、77.2%和75.6%。结论与ELISA比较,CLIA检测抗MPO抗体具有良好的一致性和符合率,而检测抗PR3抗体时一致性和符合率偏低。在检测抗PR3抗体和抗MPO抗体时,CLIA的特异性均优于ELISA。建议实验室开展抗MPO抗体和抗PR3抗体检测方法选择时,应同时结合IFA抗体筛查试验、样本临床信息以及方法学自身特点等因素进行严格的判断和评价。

急性肺损伤中蛋白酶－抗蛋白酶失衡以及抗蛋白酶治疗的研究

急性肺损伤中蛋白酶－抗蛋白酶失衡以及抗蛋白酶治疗的研究梁永杰综述蔡映云审校急性肺损伤（ＡＬＩ）是临床常见危重症，可进一步发展为急性呼吸窘迫综合征（ＡＲＤＳ）和多脏器功能衰竭（ＭＯＦ）。其发病机制尚未完全阐明，治疗方法也不够满意。急性肺损伤是因感染或多...

慢性阻塞性肺疾病的蛋白酶/抗蛋白酶平衡失调机制研究进展

1963年瑞典Laurell和Eriksson发现α1-抗胰蛋白酶（α1—AT）缺乏与青年期肺气肿关系密切。1968年他们提出蛋白酶一抗蛋白酶假说，指出α1-抗胰蛋白酶缺乏使蛋白酶活性增高，肺的结构蛋白特别是弹性蛋白被降解，而弹性蛋白是细胞外基质（ECM）成分，其降解造成肺结构破坏，导致肺气肿。至今这种假说仍被广泛采用。近年来从蛋白酶／抗蛋白酶失衡、慢性炎症损伤与炎症修复假说，到细胞和分子学角度对肺气肿发病机制的研究有了很大进展，

捕获法ELISA检测抗蛋白酶3抗体对韦格纳肉芽肿的临床应用价值

目的探讨捕获法ELISA检测血液中抗蛋白酶3抗体对韦格纳肉芽肿(Wegener's granulomatosis,WG)的敏感性和特异性以及与间接免疫荧光法(indirec timmunofluorescence assay,IIF)的相关性。方法用捕获法ELISA、经典ELISA及IIF检测72例WG患者、206例健康献血员和24例其他自身免疫性疾病患者血清中的抗蛋白酶3(proteinase3,PR3)抗体和胞浆型抗中性粒细胞胞浆抗体(cytoplasmic anti-neutrophil cytoplasmic antibodies,cANCA)。结果PR3捕获法ELISA、经典ELISA测抗PR3对WG的敏感性分别为87.5%和73.6%,二者的特异性均为100%;单独用捕获法ELISA或IIF检测,对WG的检出率分别为87.5%和84.7%,而联合应用检出率可达到91.6%。结论捕获法ELISA检测抗PR3对WG的敏感性以及与IIF的相关性优于经典ELISA,对可疑WG患者,两法联合应用可提高WG的诊断率。

基质金属蛋白酶-9及基质金属蛋白酶组织抑制物-1表达失衡与宫颈癌局部肿瘤血管生成的关系

目的 :探讨基质金属蛋白酶 - 9(MMP 9)和基质金属蛋白酶组织抑制物 - 1(TIMP 1)在宫颈癌局部肿瘤血管生成中的作用。方法 :采用免疫组织化学SP法检测 75例早期宫颈癌 (ICC)、18例宫颈上皮内瘤样病变 (CIN)和 15例癌旁正常宫颈上皮 (NCE)中MMP 9和TIMP 1的表达情况 ,并检测其中微血管密度 (MVD ,CD3 4 标记 )。结果 :从NCE组到CIN组再到ICC组 ,MMP 9的阳性表达率显著升高 (P <0 0 5 )而TIMP 1未见升高 (P >0 0 5 ) ,并且TIMP 1在ICC组的阳性表达率显著低于MMP 9(P <0 0 1)。MMP 9在ICC组中表达与MVD显著正相关 (r =0 2 87,P <0 0 5 ) ,而TIMP 1与MVD无显著相关性 (r=0 195 ,P >0 0 5 )。宫颈癌中MMP 9表达高于TIMP 1者 ,其MVD显著高于MMP 9表达低于TIMP 1者 (P <0 0 5 )。结论 :MMP 9和TIMP 1表达失衡可能在宫颈癌局部肿瘤血管生成中起重要作用 ,MMP 9表达增强而TIMP 1表达降低 ,其血管生成能力可能显著增强 ,但并非唯一决定因素。检测宫颈癌中MMP 9和TIMP 1表达对进一步了解宫颈癌局部血管生成情况有一定的应用价值。

抗中性粒细胞胞质抗体 抗髓过氧化物酶 抗蛋白酶3在系统性血管炎和其他自身免疫病中的临床意义

目的探讨抗中性粒细胞胞质抗体(ANCA)、抗髓过氧化物酶(MPO)、抗蛋白酶3(PR3)在系统性血管炎和其他自身免疫病患者中的阳性率及其临床检测中的意义。方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测抗MPO抗体和抗PR3抗体,间接免疫荧光技术(IIF)法检测ANCA。结果系统性血管炎患者ACNA阳性率为46.25%,抗PR3和抗MPO抗体阳性率分别为28.25%和12.00%;自身免疫病患者ACNA阳性率为9.86%,抗PR3和抗MPO抗体阳性率分别为1.25%和2.42%。系统性血管炎患者ANCA检出率显著高于自身免疫病患者(χ~2=257.99,P<0.05),系统性血管炎与自身免疫病抗MPO抗体和抗PR3阳性率差异具有统计学意义(抗MPO抗体χ~2=58.85,P<0.05);抗PR3抗体(χ~2=296.13,P<0.05)。结论 ANCA、抗PR3抗体和抗MPO抗体与系统性血管炎密切相关,抗PR3抗体主要与韦格纳肉芽肿病(WG)相关,抗MPO抗体主要与显微镜下多血管炎、结节性多动脉炎、变应性肉芽肿性血管炎相关,ANCA、抗PR3和抗MPO抗体可作为系统性血管炎与自身免疫病诊断和鉴别诊断的重要标志物。

蛋白酶、抗蛋白酶与老年期痴呆

有关ALzheimer氏病(变性型老年期痴呆)(AD)的发病机制的研究，近年来已有较多的进展，其中有关蛋白酶和抗蛋白酶在此病的发病机制，以及在临床诊断和治疗方面的探索，则仅仅是最近3～5年之内的研究热点之一。

抗髓过氧化物酶抗体及抗蛋白酶3抗体双阳性的ANCA相关性血管炎1例

抗髓过氧化物酶(MPO)抗体和抗蛋白酶3(PR3)抗体双阳性的病例在临床和实验室工作中罕见。本文报道本院收治的1例以不明原因发热和呼吸系统、肾脏受累为主要特点,抗MPO抗体、抗PR3抗体双阳性男性患者的诊疗经过及门诊随访,回顾性分析抗MPO抗体、抗PR3抗体双阳性相关文献报道及临床特点,学习该病例的抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)荧光模型,旨在提高临床医生和实验室对此类双阳性病例的认知,提高实验室对疑难罕见ANCA荧光模型报道的准确性,现报道如下。

猪胰脏羧肽酶转酯功能和耐酸抗蛋白酶特性研究

羧肽酶(carboxypeptidase)是一类可水解肽链C末端氨基酸残基的蛋白酶,可用作饲料添加剂,促进畜禽生长。猪胰脏中含有一种羧肽酶A1(CPA1),该酶除能水解蛋白质外,还能分解油脂。CPA1在以酪蛋白和橄榄油为底物时,比活力分别为53.14 U/mg和22.4 U/mg;经过p H2.0酸性环境和胰蛋白酶处理后,其酶活残留率分别为95.65%和78.14%。结果表明,CPA1具有转酯功能和耐酸抗蛋白酶特性。

抗磷脂抗体、抗蛋白酶3抗体和血小板分布宽度在儿童自身免疫性溶血性贫血诊断中的临床价值

目的 探讨抗蛋白酶3(PR3)抗体、抗磷脂(APL)抗体、血小板分布宽度(PDW)在儿童自身免疫性溶血性贫血(AIHA)诊断中的临床价值。方法 采用回顾性分析方法,以2015年1月至2021年1月惠州市中心人民医院入院的40例AIHA患儿为观察对象,将其设为研究组,并参考疾病类型分为原发性组(n=18)与继发性组(n=22);同时,以同期的40例健康体检儿童为观察对象,设为对照组。检测并比较不同组别儿童的PR3抗体、APL抗体、PDW、平均血小板体积(MPV)、血小板计数(PLT)水平;通过受试者工作特征(ROC)曲线分析PR3抗体、APL抗体、PDW在儿童AIHA诊断中的临床价值;同时,通过多元Logistic回归分析儿童AIHA发生的危险因素。结果 原发性组PR3抗体、APL抗体、PDW水平分别为(31.65±4.08) RU/mL、(43.53±5.66) RU/mL、(20.68±2.42)%,继发性组为(38.52±5.27) RU/mL、(39.03±3.05) RU/mL、(22.39±2.28)%,对照组为(8.17±2.39) RU/mL、(13.58±2.47) RU/mL、(15.08±1.56)%。原发性组、继发性组患儿较对照组的PR3抗体、APL抗体、PDW水平更高,差异均有统计学意义(P<0.05);不同组别间MPV、PLT水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。研究组患儿治疗后PR3抗体、APL抗体、PDW水平为(14.48±1.85)RU/mL、(27.74±1.89)RU/mL、(17.13±1.66)%,较治疗前[(35.37±3.02)RU/mL、(42.06±5.25)RU/mL、(21.97±2.08)%]更低,差异均有统计学意义(P<0.05),研究组患儿治疗前后MPV、PLT水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。ROC曲线分析显示,PR3抗体、APL抗体、PDW联合诊断AIHI的曲线下面积为0.923(95%CI:0.867~0.978,P<0.001),敏感度为85.53%,特异度为98.62%。多元Logistic回归分析显示,儿童AIHA的发生与高PR3抗体、APL抗体水平密切相关,且高PR3抗体、APL抗体水平是儿童AIHA发生的独立危险因素。结论 儿童AIHA诊断中PR3抗体、APL抗体、PDW可能成为潜在标志物,可为儿童AIHA早期诊断提供新的思路及路径。

血清抗髓过氧化物酶抗体、抗蛋白酶3抗体和抗肾小球基底膜抗体联合检测在自身免疫性血管炎中的诊断价值

目的探讨采用血清抗髓过氧化物酶抗体(MPO)、抗蛋白酶3抗体(PR3)和抗肾小球基底膜抗体(GBM)联合检测对于自身免疫性血管炎(AAV)中的诊断价值。方法将平煤神马医疗集团总医院2015年3月—2018年3月收治的自身免疫性血管炎(AAV)患者作为对象开展研究,患者数量为60例,均接受临床基础检查、影像学、体液检查、病理活检等手段进行病情诊断,且被确诊为AAV,其中包含MPA、GPA、EGPA各20例,根据疾病分型分别归为MPA组、GPA组、EGPA组,另选同期前来我院接受体检的健康体检者20例为对照组,受检者均行MPO、PR3、GBM抗体检查,并统计检查结果。结果各组MPO抗体检查结果均高于对照组;在PR3抗体检查中,MPA组、GPA组结果较对照组更高;在GBM抗体检查中,MPA组、EGPA组最终结果较对照组更高,MPA组各项抗体阳性率均较对照组更高;在GPA组中,MPO、PR3两项抗体阳性率较对照组更高,而EGPA组抗体阳性率高于对照组项目为MPO、GBM抗体,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论采用MPO、PR3、GBM抗体联合检查能够对于AAV诊断产生良好的诊断效果,且其对于AAV分型具备一定借鉴价值。