灯盏细辛基于Psmb8/NF-κB轴抑制糖尿病肾病大鼠炎症反应

目的探讨灯盏细辛(erigeron breviscapus,EB)是否通过介导β型蛋白酶体亚基8(proteasome subunitβtype 8,Psmb8)及核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)轴抑制糖尿病肾病大鼠炎症反应。方法随机选10只SPF雄性SD大鼠作为正常组,剩余大鼠用高脂饮食联合链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)构建糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)大鼠模型。成模大鼠共41只,随机剔除1只,将剩余大鼠随机分为模型组、EB低剂量组、EB中剂量组和EB高剂量组,每组10只。其中EB低剂量、EB中剂量和EB高剂量组分别灌胃EB 20、40、80 mg·kg^(-1)·d^(-1),正常组和模型组大鼠给予等量生理盐水,持续给药8周。检测各组大鼠空腹血糖(fasting blood glucose,FBG)、肾脏指数(renal mass index,KI);用全自动生化分析仪检测24 h尿蛋白(urine protein,UPro)、血清肌酐(serum creatinine,Scr)和血尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)水平;HE染色观察大鼠肾组织病理形态变化;用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)和白细胞介素-18(interleukin-18,IL-18)的含量;用实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测Psmb8和NF-κB p65 mRNA相对表达量;用蛋白印迹(Western blotting)法检测Psmb8、NF-κB p65及p-NF-κB p65蛋白的相对表达量。结果与正常组比较,模型组大鼠FBG、KI升高,体质量下降(P<0.05),肾小球形态见明显病理改变,间质水肿并伴有大量炎性细胞浸润,血清TNF-α、IL-1β及IL-18含量升高,肾组织中Psmb8和NF-κB p65 mRNA及Psmb8、NF-κB p65和p-NF-κB p65蛋白的相对表达量升高(P<0.05);与模型组比较,EB低、中、高剂量组大鼠FBG和KI下降,体质量升高(P<0.05),肾组织炎性病理情况见不同程度减轻,血清TNF-α、IL-1β及IL-18含量降低,肾组织中Psmb8和NF-κB p65 mRNA及Psmb8、NF-κB p65和pNF-κB p65蛋白的相对表达量降低(P<0.05);且EB对DN大鼠的炎症抑制作用呈剂量依赖性。结论EB可抑制DN大鼠炎症反应,其作用机制可能与抑制Psmb8/NF-κB轴激活有关。

桂枝芍药知母汤对尿酸钠诱导的大鼠巨噬细胞Toll-MyD88信号通路炎性信号表达的影响

目的:基于Toll-My D88信号通路观察桂枝芍药知母汤对尿酸钠诱导的大鼠巨噬细胞炎性信号表达的影响,以期分析其抗炎的药效作用机制。方法:以尿酸钠混悬液诱导大鼠巨噬细胞制备痛风性关节炎巨噬细胞模型,以桂枝芍药知母汤含药血清进行干预,ELISA法检测白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、钙结合蛋白S100A8的表达,DNA-蛋白质互作ELISA(DPI-ELISA)方法检测核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)活性;Western-Blot法检测髓性分化因子-88(myeloid differentiation factor 88,My D88)信号衔接蛋白、核因子κB酶抑制剂-β(inhibitor kappa B kinaseβ,IKK-β)、核因子κB抑制蛋白α亚基(NF-kappa-B inhibitor alpha,IKB-α)表达水平;逆转录PCR检测Toll样受体-2(toll-like receptor-2,TLR-2)、TLR-4mRNA的表达。结果:尿酸钠混悬液诱导巨噬细胞造模2 h后,模型细胞对照组IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α、S100A8含量,NF-κB活性,My D88、IKK-β蛋白表达及TLR-2、TLR-4 mRNA表达较正常细胞对照组显著增高(P<0.05),IKB-α表达较正常细胞对照组显著降低(P<0.05);与模型细胞对照组比较,桂枝芍药知母汤各剂量组细胞表达TLR-2、TLR-4 mRNA水平显著降低(P<0.05);在不加受体抑制剂的实验中,桂枝芍药知母汤各剂量组IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α含量,My D88、IKK-β蛋白表达水平显著降低(P<0.05),高剂量组NF-κB活性显著降低(P<0.05),高剂量组S100A8、IKB-α表达水平显著升高(P<0.05)。结论:桂枝芍药知母汤抗炎作用机制与降低TLR-2、TLR-4 mRNA表达,抑制My D88、IKK-β蛋白表达,增加S100A8、IKB-α蛋白表达水平,抑制NF-κB激活,进而降低Toll-My D88信号通路相关炎性因子表达密切有关。

复方黄柏液涂剂对深Ⅱ°烧伤创面炎症反应的影响及量效关系

目的:观察复方黄柏液涂剂不同剂量外用对深Ⅱ°烧伤创面愈合过程中炎症反应的影响。方法:将2019年6月至2020年3月承德医学院附属医院烧伤整形科确诊的深Ⅱ°烧伤火毒伤津证患者120例,采用随机数字表法分为对照组(1%体表面积创面外用碘伏溶液35 mL),低剂量治疗组(1%体表面积创面外用复方黄柏液涂剂17.5 mL)和高剂量治疗组(1%体表面积创面外用复方黄柏液涂剂35 mL),每组各40例,每日换药1次。观察各组患者入院时及治疗后创面炎症反应;各组治疗后4 d,观察创面病理学变化,免疫组织化学法测定创面组织核转录因子-κB亚基p65亲和肽(NF-κB p65)的表达情况;治疗后第4,10,21天各组细菌培养并计数,分别按照酶联免疫吸附法测定创面组织中白细胞介素(IL)-2,IL-8水平及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。结果:入院时各组创面炎症反应程度重且无明显差别,治疗后减轻程度与治疗时间呈正相关,同时相点创面炎症反应对照组>低剂量治疗组>高剂量治疗组。对照组于第4天出现细菌生长,低剂量及高剂量治疗组于第10天出现细菌生长,以金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌检出率最高。与对照组比较,低剂量及高剂量治疗组在治疗后4 d创面组织NF-κB p65吸光度明显降低(P<0.05),在治疗后10,21 d细菌计数明显减少(P<0.05),在治疗后4,10,21 d创面组织中IL-2,IL-8及TNF-α水平明显降低(P<0.05),且上述指标低剂量与高剂量组之间差异具有统计学意义(P<0.05)。光镜下低剂量及高剂量治疗组均较对照组组织水肿减轻,炎症细胞浸润减少,且高剂量组表现更显著。结论:复方黄柏液涂剂外用能减少深Ⅱ°烧伤创面细菌生长,可能通过抑制炎症介质的产生及释放减轻创面炎症反应,且存在一定的量效关系,值得临床推广应用。