人蛋白酶体β亚基4型(PSMB4)与BcL-2家族中促凋亡蛋白分子Bim的相互作用

目的:探讨人蛋白酶体β亚基4型(PSMB4)与Bcl-2家族中的促凋亡蛋白分子Bim之间的相互作用。方法:借助PlexA-bimL技术从人胎脑文库筛选PSMB4,借助显微共聚焦技术探讨PSMB4与Bim相互作用的亚细胞定位,应用免疫共沉淀技术探讨PSMB4与Bim的相互作用。结果:PSMB4与Bim存在于同一细胞中,PSMB4和Bim在空间上存在相互作用。结论:PSMB4和Bim有可能存在空间位置上的共定位;PSMB4在细胞内能够与Bim发生相互作用。

灯盏细辛基于Psmb8/NF-κB轴抑制糖尿病肾病大鼠炎症反应

目的探讨灯盏细辛(erigeron breviscapus,EB)是否通过介导β型蛋白酶体亚基8(proteasome subunitβtype 8,Psmb8)及核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)轴抑制糖尿病肾病大鼠炎症反应。方法随机选10只SPF雄性SD大鼠作为正常组,剩余大鼠用高脂饮食联合链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)构建糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)大鼠模型。成模大鼠共41只,随机剔除1只,将剩余大鼠随机分为模型组、EB低剂量组、EB中剂量组和EB高剂量组,每组10只。其中EB低剂量、EB中剂量和EB高剂量组分别灌胃EB 20、40、80 mg·kg^(-1)·d^(-1),正常组和模型组大鼠给予等量生理盐水,持续给药8周。检测各组大鼠空腹血糖(fasting blood glucose,FBG)、肾脏指数(renal mass index,KI);用全自动生化分析仪检测24 h尿蛋白(urine protein,UPro)、血清肌酐(serum creatinine,Scr)和血尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)水平;HE染色观察大鼠肾组织病理形态变化;用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)和白细胞介素-18(interleukin-18,IL-18)的含量;用实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测Psmb8和NF-κB p65 mRNA相对表达量;用蛋白印迹(Western blotting)法检测Psmb8、NF-κB p65及p-NF-κB p65蛋白的相对表达量。结果与正常组比较,模型组大鼠FBG、KI升高,体质量下降(P<0.05),肾小球形态见明显病理改变,间质水肿并伴有大量炎性细胞浸润,血清TNF-α、IL-1β及IL-18含量升高,肾组织中Psmb8和NF-κB p65 mRNA及Psmb8、NF-κB p65和p-NF-κB p65蛋白的相对表达量升高(P<0.05);与模型组比较,EB低、中、高剂量组大鼠FBG和KI下降,体质量升高(P<0.05),肾组织炎性病理情况见不同程度减轻,血清TNF-α、IL-1β及IL-18含量降低,肾组织中Psmb8和NF-κB p65 mRNA及Psmb8、NF-κB p65和pNF-κB p65蛋白的相对表达量降低(P<0.05);且EB对DN大鼠的炎症抑制作用呈剂量依赖性。结论EB可抑制DN大鼠炎症反应,其作用机制可能与抑制Psmb8/NF-κB轴激活有关。

PSMB8在人绒毛膜滋养层细胞中对细胞凋亡和自噬的影响

目的初步探讨蛋白酶体亚基PSMB8(proteasome subunit beta 8)对人绒毛膜滋养层细胞(HTR-8/Svneo)凋亡及自噬的影响。方法将HTR-8细胞分为转染组和对照组,采用瞬时转染的方法分别将PSMB8 siRNA-1、PSMB8 siRNA-2转入转染组中,将NC siRNA转入对照组中。转染48h后用qRT-PCR进行干涉效率验证,CCK-8检测细胞增殖情况,TUNEL和流式细胞术分析细胞凋亡情况,免疫荧光染色检测细胞内caspase-3(cleaved)和LC3蛋白的表达,qRT-PCR检测细胞中自噬相关基因mRNA表达水平。结果qRT-PCR结果显示,PSMB8 siRNA-1组干扰效果较好。与对照组比较,PSMB8 siRNA-1组细胞增殖能力减弱,HTR-8细胞中TUNEL(15.05±2.62 vs 33.40±2.44,P=0.000)和caspase-3(cleaved)(21.70±5.87 vs 53.29±10.29,P<0.01)阳性率增加。流式结果显示,与对照组比较,PSMB8 siRNA-1组存活细胞比例减少(89.10±0.78 vs 77.00±1.68,P=0.000),早期凋亡和晚期凋亡细胞比例增加(9.09±0.65 vs 10.71±0.61,P<0.05),坏死细胞比例也增加(2.49±0.73 vs 12.49±2.02,P<0.01)。与对照组比较,PSMB8 siRNA-1组LC3蛋白阳性细胞率增加(19.02±3.78 vs 31.90±4.87,P<0.05),各自噬相关基因mRNA相对表达水平均上调。结论在HTR-8细胞中沉默PSMB8基因表达可以诱导细胞凋亡并且激活自噬。

蛋白酶体β亚基8在肿瘤发生发展中的作用及其预测免疫治疗疗效的价值

蛋白酶体β亚基 8(proteasome subunit beta 8,PSMB8)是免疫蛋白酶体的组成部分,在细胞内蛋白质降解、细胞内环境稳定维持和内源性抗原提呈方面发挥重要作用.随着分子检测技术的革新和细胞系实验的进行,PSMB8 在基因组学、表观组学以及转录组学等水平上与肿瘤发生发展之间的密切关系逐渐被揭示,这使得PSMB8 成为肿瘤治疗的靶点并有望成为预测抗肿瘤治疗疗效的生物标志物.随着免疫检查点抑制剂的应用,恶性肿瘤的治疗进入了免疫治疗时代.然而,并非所有接受免疫治疗的患者均能从治疗中获益,因此许多生物标志物被探索并用于适宜治疗人群的筛选.目前,常用的生物标志物有程序性死亡配体1、肿瘤突变负荷等,但这些标志物不能完全解释免疫治疗的临床获益,因此探索更多生物标志物对于精准医疗有着重要的意义.考虑到免疫检查点抑制剂的作用机制在于重新活化免疫细胞,因此需要患者有一定的基础免疫条件,故PSMB8 作为抗原提呈的重要参与分子可能具有预测免疫治疗疗效的价值.文章将结合近年来生物信息学分析文献和细胞及动物实验文献,解析PSMB8在肿瘤发生发展中的作用及对免疫治疗疗效的预测价值.

miR-451通过靶向Psmb8抑制糖尿病肾病小鼠肾小球系膜细胞炎症反应

目的:探讨微小RNA-451(miR-451)对高糖培养的小鼠肾小球系膜细胞(mesangial cells,MCs)炎症发生的抑制作用及靶向β型蛋白酶体亚基8(proteasome subunitβtype 8,Psmb8)基因的调控机制。方法:分别将MCs培养于低糖和高糖DMEM培养基中,q PCR检测miR-451的表达水平;q PCR检测过表达miR-451后炎症相关因子IL-18和TNF-α的m RNA表达水平;Western blot检测IL-18、TNF-α及Psmb8的蛋白表达水平;Western blot检测低表达Psmb8的MCs中IL-18和TNF-α蛋白的相对表达水平。结果:高糖组MCs的miR-451表达水平较低糖组明显降低(P<0.01),而Psmb8表达却显著增高(P<0.01)。进一步在高糖组过表达miR-451后,Psmb8的表达水平明显降低(P<0.01),炎症相关因子IL-18和TNF-α表达水平亦明显降低(P<0.01)。同时,在高糖组中沉默Psmb8后,IL-18和TNF-α表达水平降低(P<0.01)。结论:miR-451在高糖培养的小鼠肾小球系膜细胞中靶向抑制Psmb8的表达,降低炎症相关因子IL-18和TNF-α蛋白的表达,从而缓解高糖诱导的肾小球系膜细胞的炎症反应。