蛋白酶体抑制剂MG132对慢性缺氧致小鼠记忆损伤的作用及其机制

目的探讨蛋白酶体抑制剂MG132对慢性缺氧所致小鼠记忆功能损伤的作用及其机制。方法(1)利用低氧工作站构建小鼠中脑多巴胺能神经元MN9D细胞缺氧损伤模型。将MN9D细胞分为常氧组及缺氧12 h、24 h和48 h组,观察缺氧对MN9D细胞中酪氨酸羟化酶(TH)、泛素的K48链(Ub-K48)和Ub-K63表达的影响;将MN9D细胞分为常氧组、缺氧组、缺氧+MG132(25、50、100、200)μmol/L组,观察MG132对缺氧细胞中上述蛋白表达的影响。(2)利用低压舱建立低压缺氧小鼠记忆功能损伤模型。将C57小鼠随机分为常氧组、缺氧3 d组、缺氧21 d组,每组10只,观察低压低氧对小鼠中脑黑质致密部(SNc)TH、Ub-K48和Ub-K63表达的影响;将小鼠随机分为常氧组、缺氧21 d组、缺氧21 d+MG132组,每组8只,观察MG132对缺氧所致小鼠空间记忆损伤的影响。(3)采用Western blotting检测不同缺氧时长及MG132预处理再低氧处理的MN9D细胞中TH、Ub-K48和Ub-K63的蛋白表达水平;采用新物体识别测试检测各组小鼠记忆功能,免疫荧光染色检测SNc区TH阳性免疫反应面积百分比,Western blotting检测小鼠SNc区TH、Ub-K48和Ub-K63表达水平。结果(1)与常氧组比较,缺氧24 h组MN9D细胞中Ub-K48和Ub-K63表达水平增高(P<0.05),TH表达水平降低(P<0.05);各缺氧组Ub-K48/TH和Ub-K63/TH表达水平均增高(P<0.05)。与缺氧组比较,缺氧+MG132100μmol/L组和缺氧+MG132200μmol/L组MN9D细胞中Ub-K48/TH和Ub-K63/TH表达水平降低(P<0.05)。(2)与常氧组比较,缺氧3 d组和缺氧21 d组小鼠中脑SNc区TH表达水平降低(P<0.001),Ub-K48/TH和Ub-K63/TH表达水平升高(P<0.05);缺氧21 d组小鼠新物体识别指数降低(P<0.01),SNc区多巴胺能神经元TH阳性免疫反应面积百分比降低(P<0.05)。与缺氧21 d组比较,缺氧21 d+MG132组小鼠新物体识别指数升高(P<0.01)。结论蛋白酶体抑制剂MG132可改善慢性缺氧所致小鼠记忆损伤,其机制可能与抑制Ub-K48和Ub-K63,上调多巴胺能神经元TH表达有关。

蛋白酶体抑制剂致血栓性微血管病的文献分析

目的:探讨蛋白酶体抑制剂(PI)相关血栓性微血管病(TMA)的发生规律和临床特点,为临床安全用药提供参考。方法:检索中国知网、万方数据库、维普数据库、PubMed、Web of Science等数据库中收录的PI相关TMA的案例报道,检索时间为建库至2023年4月30日。对患者基本信息、用药情况、TMA的临床表现、实验室检查、治疗及预后进行汇总分析。结果:纳入文献37篇,涉及患者92例,其中男性46例(占50.00%),女性29例(占31.52%),性别不详17例(占18.48%);平均年龄为(61±13)岁。TMA的中位发病时间为64 d,临床表现以发热、乏力、恶心/呕吐、少尿/无尿为主。因1例患者出现2次TMA,则合计93例次TMA,患者血小板计数明显降低,中位值为19.5×10^(9)/L,其中0~50×10^(9)/L的患者最多(52例次,占55.91%);64例次患者(占68.82%)的血清肌酐水平升高,其中>177~445μmol/L的患者最多(32例次,占34.41%)。停药和支持治疗后(共93例次),76例次患者(占81.72%)痊愈/好转,6例次(占6.45%)有后遗症,5例次(占5.38%)死亡。PI相关TMA中,主要涉及的药物为卡非佐米(67例次,占72.04%)。结论:应重视PI所致TMA,应用PI时应考虑患者性别、药物种类等因素;根据临床表现及实验室检查结果,尽早识别不良反应,保障患者用药安全。

蛋白酶体抑制剂MG132对人胃癌细胞MGC-803自噬、凋亡和迁移的影响

目的探究蛋白酶体抑制剂MG132对人胃癌细胞MGC-803自噬、凋亡和迁移的影响,分析其对上皮间质转化(EMT)相关蛋白表达的影响。方法应用0.25μg/mL、0.50μg/mL、1.00μg/mL和2.00μg/mL的MG132处理MGC-803细胞后,用激光共聚焦显微镜检测自噬小体数目的变化以分析其对自噬的影响,通过流式细胞仪检测细胞凋亡比例的变化,并通过Transwell细胞迁移实验检测MG132对细胞迁移能力的影响。通过免疫印迹实验检测细胞凋亡相关蛋白和EMT相关蛋白表达的变化。结果在MGC-803细胞中,与空白对照组比较,随着MG132药物浓度的升高,MG132对MGC-803细胞具有毒性作用;1.00μg/mL的MG132明显增加MGC-803细胞的自噬小体数目(1.00μg/mL:t=9.459,P=0.011);随着MG132浓度的升高,细胞凋亡比例明显增多(0.25μg/mL:t=5.149,P=0.036;0.50μg/mL:t=7.342,P=0.018;1.00μg/mL:t=15.340,P=0.004);Western blotting发现MG132处理MGC-803细胞后,随着药物浓度的增加,BAX表达明显增加(0.25μg/mL:t=4.646,P=0.043;0.50μg/mL:t=4.610,P=0.044;1.00μg/mL:t=10.760,P=0.009),Bcl-2表达明显降低(0.25μg/mL:t=22.850,P=0.002;0.50μg/mL:t=26.780,P=0.001;1.00μg/mL:t=29.890,P=0.001);随着MG132浓度的升高,迁移细胞数目明显减少(0.25μg/mL:t=16.730,P=0.004;0.50μg/mL:t=27.340,P=0.001;1.00μg/mL:t=32.800,P<0.001);0.50μg/mL浓度MG132改变EMT相关蛋白表达水平,E-钙黏蛋白表达明显升高(0.50μg/mL:t=4.405,P=0.048;1.00μg/mL:t=12.170,P=0.007),N-钙黏蛋白(0.50μg/mL:t=5.163,P=0.036;1.00μg/mL:t=6.811,P=0.021)和波形蛋白(0.50μg/mL:t=5.628,P=0.030;1.00μg/mL:t=12.670,P=0.006)表达明显降低。结论MG132处理人胃癌细胞MGC-803能促进细胞自噬和凋亡,并通过EMT进程抑制细胞迁移。

蛋白酶体抑制剂在原发性免疫性血小板减少症中诱导免疫耐受的研究进展

原发性免疫性血小板减少症(immune thrombocytopenia,ITP)的发病机制目前认为与血小板自身抗原免疫失耐受有关,其中T细胞的异常激活起着重要作用,主要表现在血小板自身抗原反应性细胞毒性T细胞的活化增殖、调节性T细胞数量功能异常、辅助性T细胞(Th细胞)亚群失衡等。因此诱导免疫耐受是ITP治疗的重要切入点,通过抑制蛋白酶体的活性抑制T淋巴细胞的增殖活化,为ITP提供潜在治疗靶点。本文综述了蛋白酶体抑制剂在ITP中诱导免疫耐受的研究进展。

骨髓微环境介导蛋白酶体抑制剂治疗多发性骨髓瘤耐药机制研究现状

多发性骨髓瘤(MM)是恶性浆细胞增生性疾病。近年来随着蛋白酶体抑制剂(PI)、免疫调节剂、CD38-单抗等新型药物的引入以及自体干细胞移植的发展,MM患者的治疗取得了一定的进展,但MM仍然是无法治愈的恶性肿瘤,导致患者疾病进展以及死亡的主要原因是MM细胞耐药,因此我们迫切需要新的疗法。骨髓微环境被视为造血干细胞的“土壤”,以其特征性的三维空间结构为造血干细胞提供赖以生存的基础,与调控造血的生成、干细胞的动员及归巢等生命活动密切相关。MM细胞与骨髓微环境之间错综复杂的关系影响着MM细胞的增殖、存活和耐药性。本文主要围绕MM、骨髓微环境及患者对相关蛋白酶体抑制剂耐药的机制展开综述,以期寻找新的联合治疗方案来降低患者对硼替佐米的耐药性,改善患者的预后。

蛋白酶体抑制剂MG132诱导胃癌细胞AGS凋亡的机制研究

目的蛋白酶体抑制剂MG132已在几种肿瘤治疗中取得一定疗效,但MG132对胃癌细胞凋亡的作用机制尚不完全清楚。因此,本文主要探讨MG132对胃癌细胞AGS凋亡的影响及其可能机制,旨在为胃癌治疗提供实验基础。方法选择AGS细胞为研究对象,实验分为6个组(MG132浓度分别为0、0.5、1、2.5、5、10μmol·L^(-1)),利用CCK-8和克隆形成实验检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡及活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,全自动生化分析仪检测乳酸脱氢酶(detect lactate dehydrogenase,LDH)水平,免疫沉淀(immunoprecipitation,IP)探讨脑型糖原磷酸化酶(brain-type glycogen phosphorylase,PYGB)、受体相互作用蛋白3(receptor interacting protein 3,RIP3)和受体相互作用蛋白1(receptor interacting protein1,RIP1)的相互作用关系,进一步用Western blot检测PYGB、RIP3和RIP1的表达情况。结果不同浓度MG132处理AGS细胞12、24、36 h后,MG132存在浓度和时间依赖性抑制AGS细胞增殖;MG132处理AGS细胞24 h后,诱导AGS细胞凋亡,促进细胞内LDH释放和ROS水平增加;MG132处理AGS细胞24 h后,细胞内PYGB表达水平降低,RIP3和RIP1表达水平升高。此外,IP实验表明PYGB、RIP3和RIP1之间存在相互作用。结论在胃癌细胞AGS中,MG132诱导的AGS细胞凋亡与PYGB表达水平降低,RIP3和RIP1表达水平升高有关。

多发性骨髓瘤对蛋白酶体抑制剂耐药机制及研究进展

多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)是浆细胞恶性增殖为特点的淋巴细胞恶性肿瘤,其经典的临床四联征之一为骨痛,发病率约90%,疼痛部位多为胸腰椎^([1])、胸骨、肋骨等,严重时会发生病理性骨折,甚至需要手术治疗^([1])。在美国,MM诊断的中位年龄为69岁^([2]);在我国一项2014年的多中心研究表明,其诊断的中位年龄为59岁^([3])。

新型蛋白酶体抑制剂YSY-01A对肿瘤细胞促血管生成作用的抑制及其机制初探

YSY-01A是一种新型蛋白酶体抑制剂,前期研究已经证实其对肿瘤细胞的增殖有抑制作用.但是它对肿瘤血管生成是否有影响尚不明确.本研究旨在探明YSY-01A阻碍肿瘤细胞促进血管生成的作用及机制.我们首先将磺酰罗丹明B(sulforhodamine B,SRB)法与细胞共培养(Transwell)模型相结合,探讨YSY-01A抑制人结肠癌细胞(HT-29 cells)对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)的增殖促进作用;运用高内涵筛选(high content screening,HCS)法研究YSY-01A对HT-29细胞中NF-κB核转位的影响;利用Western blot法检测YSY-01A对HT-29细胞中缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达调控.为了观察YSY-01A对HUVEC增殖和运动有无直接抑制作用,我们采用SRB法观察YSY-01A对HUVEC的增殖抑制作用;运用HCS法分别考察YSY-01A对HUVEC的运动抑制和细胞毒作用.结果证实,YSY-01A可以阻碍HT-29细胞对HUVEC的增殖促进作用并具有浓度依赖性.YSY-01A还可抑制HT-29细胞中NF-κB的核转位,下调HIF-1α及VEGF的表达.进一步研究证实,YSY-01A能够浓度依赖地抑制HUVECs的增殖和运动,而不伴有明显的细胞毒作用.上述结果表明,YSY-01A可以通过抑制蛋白酶体活性下调肿瘤细胞中促血管生成因子的表达,进而在血管内皮细胞中发挥抗血管生成作用.

蛋白酶体抑制剂MG132诱导HepG2细胞凋亡及其机制研究

目的观察蛋白酶体抑制剂MG132对人肝癌细胞HepG2的致凋亡作用,并从泛素蛋白酶体途径(UPP)相关基因E1、E2和E3及天冬氨酸特异的半胱氨酸蛋白酶3(Caspase3)表达初步探讨MG132的致细胞凋亡机制。方法采用多个浓度(2、5、10μmol·L-1)的蛋白酶体抑制剂MG132处理HepG2细胞;流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡率,DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡;逆转录聚合酶链反应(RTPCR)检测UPP相关基因E1、E2、E3和凋亡相关基因Caspase3的转录水平;免疫细胞化学检测Caspase3蛋白表达。结果对照组HepG2细胞凋亡率低于5%,在2、5和10μmol·L-1MG132作用下,细胞凋亡率分别为42.9%、66.1%、72.8%,MG132诱导HepG2细胞凋亡具有量效关系;RTPCR检测发现细胞内UPP相关基因E1、E2、E3mRNA表达下降,而凋亡相关基因Caspase3mRNA表达上调;免疫组化检测Caspase3蛋白表达水平升高。结论蛋白酶体抑制剂MG132能够诱导HepG2细胞凋亡,其机制可能与MG132抑制UPP活性,使细胞内Caspase3蛋白降解减少,同时上调Caspase3基因转录,促进细胞凋亡。

泛素-蛋白酶体抑制剂MG-132对食管癌细胞凋亡和生存素表达的影响

目的:研究泛素-蛋白酶体抑制剂MG-132对食管癌细胞凋亡和生存素(survivin)表达的影响。方法:将泛素-蛋白酶体抑制剂MG-132加入食管癌细胞Eca9706中,采用MTT法测定细胞生长抑制率,经流式细胞仪检测细胞凋亡,免疫细胞化学法检测survivin的表达。结果:MG-132对食管癌细胞生长具有显著抑制作用,作用24、48、72、96h后的IC50分别为120.2、18.1、—12.2、—16.9μmol/L;5.0μmol/L的MG-132作用于食管癌细胞24、48、72、96h后,细胞凋亡率分别为(3.1±0.4)%、(31.7±3.5)%、(50.4±4.8)%、(66.6±6.2)%;Survivin在食管癌细胞中呈高表达,经MG-132作用后,表达明显降低。结论:MG-132能显著抑制食管癌细胞的增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与下调survivin表达有关。

蛋白酶体抑制剂MG132诱导HL-60细胞凋亡前G_2/M期阻滞及机制

背景和目的:蛋白酶体(proteasome)抑制剂能够诱导多种肿瘤细胞凋亡,是一种潜在的有应用前景的抗肿瘤剂。本研究旨在探讨蛋白酶体抑制剂MG132(Z-Leu-Leu-Leu-CHO)诱导白血病细胞HL-60凋亡和G2/M期阻滞的机制。方法:采用荧光显微镜观察、流式细胞术和免疫印迹研究测定MG132诱导HL-60细胞凋亡和周期阻滞及机制。结果:2μmol/L的MG132能够有效地诱导HL-60细胞凋亡,用药后24h就显现有细胞凋亡;在MG132诱导HL-60细胞凋亡出现之前有一个明显的G2/M期阻滞,加MG132后12h时G2/M期时相百分比为63.42±2.02;24h时加MG132组细胞凋亡为16.67±1.48,与对照组G2/M期时相百分比为7.29±3.01及细胞凋亡为0相比,两者之间有显著性差别(P<0.01);咖啡因CAF能够减少MG132诱导HL-60细胞出现的G2/M期阻滞,同时也减少凋亡细胞的比例;细胞周期检查点的负调控因子p21waf/cip1蛋白在加MG132处理后3h有明显的表达,但并未能检测到p53和p27蛋白。结论:MG132诱导HL-60细胞凋亡之前有一个明显的G2/M期阻滞,p21蛋白表达明显上调提示:是p21waf/cip1而不是p53或其同源蛋白参与了其中的调控。

蛋白酶体抑制剂诱导多发性骨髓瘤RPMI8226细胞凋亡及对Notch1和NF-κB表达的影响

多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)的发生、发展与骨髓微环境关系密切,有多种信号通路参与。Notch信号是造血微环境调节造血细胞增殖分化的重要信号通路,其中Notch1与血液肿瘤的发生、发展较为密切。骨髓瘤是高度依赖NF-κB的恶性肿瘤,后者与肿瘤细胞的发生和转移、增殖和凋亡、耐药相关。已证实NF-κB2家族是Notch信号通路的一个靶基因。蛋白酶体抑制剂Bortezomib已获美国FDA批准用于治疗难治及复发多发性骨髓瘤,但其诱导骨髓瘤细胞凋亡的机制尚未完全明确。本研究探讨bortezomib诱导多发性骨髓瘤细胞凋亡和对Notch1、NF-κB表达水平的影响,采用透射电子显微镜检、流式细胞术及原位缺口末端标记技术观察药物对MM细胞凋亡的影响,用RT-PCR法和免疫荧光细胞化学染色分析分别检测细胞凋亡时Notch1及NF-κB的表达情况。结果表明:RPMI8226细胞高表达Notch1和NF-κB;随着bortezomib作用浓度的增高,RPMI8226细胞出现典型的凋亡改变,Notch1的表达逐渐降低,NF-κB在胞核表达减少,胞浆表达增多。这种改变在浓度升高到一定数值时与对照相比具有显著性差异(p<0.05)。结论:bortezomib治疗多发性骨髓瘤机制中有Notch1和NF-κB两条通路的参与,二者可能存在一定的联系,提示Notch1信号可能作为MM治疗的潜在靶点,为相关新药的研发提供一定实验基础。

醛肽类蛋白酶体抑制剂对LPS诱导小鼠巨噬细胞炎症介质表达的影响

目的:探讨醛肽类蛋白酶体抑制剂MG132对脂多糖(LPS)诱导小鼠巨噬细胞Raw264.7核转录因子-κB(NF-κB)活化、炎性因子一氧化氮(NO)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)分泌以及诱导型一氧化氮合酶(iN-OS)表达的影响。方法:利用报告基因检测法分析转染细胞(pNiFty-SEAP/HEK293)中NF-κB的活性;采用DAF-2DA荧光探针法检测Raw264.7细胞内NO的产生;蛋白免疫印迹法探讨细胞中iNOS和IκB-α蛋白表达情况;酶联免疫吸附法测定Raw264.7细胞上清中TNF-α的含量。结果:预先加入MG132能够显著抑制LPS诱导的TNF-α分泌,其抑制率由5μmol/L时的36.7%升高到10μmol/L时的60.4%。反映NO含量的荧光强度值随着MG132给药浓度的增加而降低,其抑制率从2μmol/L时的29.5%达到10μmol/L的55.9%。预刺激后MG132可使胞浆中iNOS蛋白表达减少,IκB-α蛋白却明显增加,NF-κB的活性随着给药浓度的升高而不断降低。结论:MG132能够抑制LPS诱导的TNF-α和NO的产生,减少iNOS表达,具有抗炎作用。其作用机制可能与IκB降解受阻,导致NF-κB活性降低有关。

蛋白酶体抑制剂MG-132改善大鼠心肌梗死后心肌结构重塑

目的探讨MG-132对大鼠心肌梗死(心梗)后心肌结构重塑的影响及机制。方法制作大鼠心梗模型,分为MG-132干预(MG)组和心梗对照(MI)组,另设假手术(SH)组,每组大鼠16只。MG组于术后24 h腹腔注射MG-132(0.1 mg.kg-1.d-1),MI组及SH组注射生理盐水对照。连续给药28 d,然后超声检测心脏左室前壁厚度、左室后壁厚度、左室舒张末期直径;处死动物计算左室重量指数及梗死面积,RT-PCR和Western blot分别检测核转录因子-κB p65(NF-κB p65)及白介素-1β(IL-1β)的mRNA和蛋白质表达量。结果梗死面积在MI组和MG组间差异无统计学意义(P>0.05)。与SH组比较,MI组和MG组的左室后壁厚度、左室舒张末直径、左室质量指数明显增大,左室前壁厚度明显减少,NF-κBp65和IL-1β的mRNA及蛋白质表达量明显增加,差异均具有统计学意义(P<0.01)。与MI组比较,MG组左室后壁厚度、左室舒张末直径、左室质量指数,左室前壁厚度改变明显减轻,NF-κB p65和IL-1β的mRNA及蛋白质表达量明显降低,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论MG-132能一定程度地改善大鼠心梗后心肌结构重塑,其机制可能与抑制NF-κB激活,下调炎性细胞因子如IL-1β表达有关。

蛋白酶体抑制剂MG-132对慢性阻塞性肺疾病大鼠炎症因子表达的影响

目的研究蛋白酶体抑制剂MG-132对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠炎症因子表达的影响及其可能的机制。方法采用反复烟熏联合气管内注入脂多糖法成功制备COPD模型后,随机分为4组:COPD非干预组(A组)、COPD+MG-132低浓度(0.05 mg.kg-1.d-1)处理组(B组)、COPD+MG-132高浓度(0.1 mg.kg-1.d-1)处理组(C组)和对照组,每组均为12只。分别于腹腔注射生理盐水或MG-132后1周和4周处死大鼠(每个时间点各组为6只),观察各组大鼠肺组织的病理学改变,酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组大鼠血清与膈肌中的白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6和IL-8的表达。结果 COPD模型组大鼠肺组织病理切片可见明显的肺气肿表现及炎症细胞浸润,应用MG-132后肺气肿及炎性浸润程度有所减轻。实验1周和4周A组、B组及C组大鼠血清IL-1β均高于对照组(P<0.05),B组和C组大鼠血清IL-1β均低于A组(P<0.05),C组干预4周时更明显。实验4周时在C组膈肌中IL-1β含量显著低于A组(P<0.05),血清和膈肌中IL-6含量显著低于A组(P<0.05),血清和膈肌中IL-8含量显著低于A组(P<0.05)。提示MG-132呈时间、剂量依赖性下调COPD模型组血清和膈肌的上述炎症因子的表达。结论 COPD是一种系统性炎症反应性疾病,其炎症不仅表现在肺部,蛋白酶体抑制剂MG-132可以下调炎症因子的表达来减轻COPD的全身炎症反应。

蛋白酶体抑制剂在非小细胞肺癌靶向治疗中的研究进展

肺癌是全球癌症死亡的首要原因,其中非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）约占肺癌80%～85%.目前临床的一线治疗方案是以铂为基础的联合化疗,但晚期NSCLC患者预后仍然较差,中位生存时间为（9.5±1.5）个月,1年生存率仅为30%.因此,NSCLC的治疗目前仍是极需满足的临床需要.泛素蛋白酶体系统（ubiquitin-proteasome system,UPS）是肿瘤细胞增殖和存活的关键,因此UPS已成为非常具有吸引力的抗癌治疗新方法.文中将评估UPS与不同类型肿瘤生长抑制的关联性,探讨蛋白酶体抑制剂在NSCLC靶向治疗中的作用机制,现就文献中关于使用蛋白酶体抑制剂单药或联合化疗来治疗肺癌患者的研究成果做一个最新的回顾.

蛋白酶体抑制剂对神经细胞nicastrin表达的影响

目的:探讨蛋白酶体抑制剂能否引起神经细胞内nicastrin(NCT)蛋白表达及分布的变化,以明确NCT的蛋白降解是否与蛋白酶体有关。方法:在用人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)建立稳定表达NCT细胞株的基础上,应用蛋白酶体抑制剂处理NCT细胞株,并结合Western blotting、放射性同位素脉冲示踪技术、免疫荧光双标技术,检测蛋白酶体抑制剂处理后神经细胞内NCT的蛋白表达变化。结果:Western blotting结果显示,特异性蛋白酶体抑制剂处理后,神经细胞内源性和外源性转染的NCT的表达显著增强,高度特异的蛋白酶体抑制剂lacta-cystin对NCT蛋白的增强效应呈剂量依赖性和时间依赖性;放射性同位素脉冲示踪结果显示,蛋白酶体抑制剂可显著增强细胞内新合成的NCT蛋白的表达水平,其增强作用是通过阻止[35S]-NCT的蛋白降解来实现的;免疫荧光双标结果提示,NCT与泛素在细胞内共存。结论:神经细胞内NCT的降解由蛋白酶体途径介导;NCT在降解之前经泛素化修饰。

蛋白酶体抑制剂MG132对球囊损伤后血管狭窄的影响

目的观察蛋白酶体抑制剂MG132对球囊损伤后血管狭窄的影响。方法将新西兰白兔40只随机分成正常对照组、高脂组、球囊损伤组和MG132组。球囊损伤组和MG132组兔采用球囊拉伤颈总动脉复制血管损伤后狭窄模型;MG132组在损伤血管局部应用蛋白酶体抑制剂MG132。喂养2周、4周和8周后取颈总动脉损伤段血管制成病理切片行HE染色,测定内膜厚度、中膜厚度和管腔面积,评价颈总动脉血管狭窄。结果球囊损伤组颈总动脉发生明显狭窄、管腔减小、内膜增厚,有泡沫细胞和大量血管平滑肌细胞增殖,而MG132组的病变明显减轻。结论用球囊拉伤新西兰白兔颈总动脉复制的血管狭窄模型,颈总动脉发生明显狭窄,局部应用蛋白酶体抑制剂MG132能够抑制血管内膜增生,抑制损伤后血管狭窄。

泛素-蛋白酶体抑制剂MG132上调Wnt/β-catenin信号通路改善骨质疏松的实验研究

目的:探讨泛素-蛋白酶体抑制剂MG132改善骨质疏松的机制。方法:32只雌性SD大鼠,体质量220~250 g,8周龄,分为4组(n=8)。A组和B组大鼠采用去卵巢法制备骨质疏松症模型,造模成功后分别给予蛋白酶体抑制剂MG132和二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)干预;C组为假手术对照组,D组为正常组,C组及D组均给予MG132干预。分别于给药后6、12周分批处死动物,于股骨颈组织取材,行病理形态学观察,Micro-CT分析,检测组织中20S蛋白酶体活性,Wnt和β-catenin的表达。结果:形态学观察显示:A组,骨小梁轻度变细,呈网状,偶有中断;B组,骨小梁明显变细、变薄,不连续;C组与D组相似,骨小梁形态结构完整,排列呈网状。骨密度(bone mineral density,BMD),骨表面积(bone surface,BS),骨体积分数(bone volume/total volume,BV/TV)及骨小梁厚度(trabecular thickness,Tb.Th)的分析结果显示:不同时间点,B组的参数比较均差于其他各组(P<0.05),A组的BS差于C组和D组(P<0.05),C组和D组所有参数差异无统计学意义。20S蛋白酶体的RFU值检测结果显示:B组显著高于其他各组(P<0.05);Western blot检测结果显示,A组Wnt蛋白和β-catenin蛋白的灰度值显著高于其他各组(P<0.05)。结论:泛素-蛋白酶体抑制剂MG-132可抑制β-catenin蛋白的降解,从而调控Wnt/β-catenin信号通路,延缓骨质疏松的发生和发展。

蛋白酶体抑制剂抑制肾间质成纤维细胞细胞外基质表达及其机制

目的:本研究旨在观察蛋白酶体抑制剂MG132对转化生长因子β1(TGF-β1)刺激下的大鼠肾间质成纤维细胞的细胞外基质表达的影响并初步探讨其机制。方法:体外培养大鼠肾间质成纤维细胞(NRK/49F),利用实时荧光定量PCR技术(Real-time PCR)分别观察MG132不同浓度直接刺激细胞和对TGF-β1(5ng/ml)诱导下产生的结缔组织生长因子(CTGF)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤维连结蛋白(FN)和III型胶原(ColIII)mRNA表达的影响。应用相同浓度的MG132(2.5μmol/L)预处理后,再加以TGF-β1分别刺激不同时间(0h,6h,12h,24h),同样用Realtime PCR检测上述因子的mRNA水平。利用Western blot观察MG132对TGF-β1诱导的FN和Smads蛋白表达的影响。ELISA方法观察MG132对TGF-β1诱导的FN蛋白分泌的影响。结果:MG132直接作用NRK/49F细胞即可明显降低CTGF、α-SMA和FN、ColIII的mRNA表达水平,随着MG132浓度(0.5、1、2.5、5μmol/L)增大,CTGF的mRNA表达均下降,分别为对照组的65%、46%、17%和20%;α-SMA的mRNA表达均下降,分别为对照组的10%、7%、4%和3%;FN的mRNA表达均下降,分别为对照组的54%、42%、25%和24%;ColIII的mRNA表达均下降,分别为对照组的30%、12%、5%和1%(均为P<0.05)。5ng/mlTGF-β1分别使CTGF、α-SMA和FN、ColIII mRNA表达增加为对照组的6.91、2.11、1.38和3.60倍(P<0.05),用MG132不同浓度(0.5、1、2.5、5μmol/L)预处理后,CTGF mRNA均下降,分别为对照组的3.30、2.84、1.06和0.74倍,α-SMA mRNA均下降,分别为对照组的0.50、0.31、0.28和0.19倍,FN mRNA均下降,分别为对照组的0.80、0.67、0.55和0.37倍,ColIII mRNA均下降,分别为对照组的0.57、0.35、0.28和0.05倍。MG132在各时间点均能使TGF-β1所引起的纤维化相关因子的mRNA表达水平下调。5ng/mlTGF-β1以时间依赖方式诱导p-Smad2、p-Smad3磷酸化增加,1h达到高峰。MG132预处理组p-Smad2、p-Smad 3及FN蛋白表达量与TGF-β1刺激组相比显著下降,各组Smad2/3蛋白表达无显著变化。MG132预处理组FN蛋白分泌量与TGF-β1刺激组相比显著下降。结论:MG132可下调肾间质成纤维细胞的纤维化相关因子的mRNA表达,它能够通过抑制Smad信号转导途径抑制TGF-β1介导的炎症反应,提示MG132在肾脏炎症中具有抑制间质纤维化的潜在作用。