转番茄蛋白酶抑制剂Ⅱ基因烟草植株的培育及其抗虫特性分析

将分离的番茄蛋白酶抑制剂Ⅱ基因cDNA序列tin2和含有一个109 bp内含子的基因组DNA序列tin2i,分别构建成植物表达载体pBCT2和pBT2.然后通过农杆菌介导转化烟草叶片外植体,获得了两类转基因烟草植株.分子生物学检测和胰蛋白酶抑制剂活性分析结果表明,tin2序列和tin2i序列都能够在转基因烟草中正确表达.抗虫活性检测结果显示,转tin2i序列的烟草植株的抗虫活性高于转tin2序列的烟草植株,推测这可能与tin2i序列中内含子的存在有关.

番茄蛋白酶抑制剂Ⅱ基因的分离及其内含子功能

应用ＰＣＲ技术，从番茄中分离了具有一个内含子的蛋白酶抑制剂Ⅱ基因的核基因．该内含子序列（ＴＰＩ）的长度为 １０９ ｂｐ，两端存在着典型的 ＧＴ／ＡＧ双核苷酸结构，其 ＡＴ碱基对的含量非常高，约占核苷酸对总数的８０．７％．ＤＮＡ重组实验表明，ＴＰＩ序列能够有效地促进报告基因ｇｕｓＡ的表达水平，而且这种促进作用与该序列的插入位置及方向均无关系，呈现出明显的增强子特性．另外，ＧＵＳ酶组织化学染色、荧光检测以及凝胶阻滞实验等均证明ＴＰＩ序列可能还具有启动子的活性．番茄蛋白酶抑制剂Ⅱ基因的核基因序列在ＧｅｎＢａｎｋ中的登录号为ＡＹ００７２４０．

马铃薯蛋白酶抑制剂-Ⅱ基因在转基因水稻中的遗传及表达

以水稻光敏不育系浙农大 115 (ZAU11S)和 3个转基因品系杂交 ,研究了其F2 群体中bar、pinII基因的遗传及其表达行为。通过涂抹除草剂Basta,进行PCR分析和测定胰蛋白酶被抑制活性 ,发现F2 代bar和pinII基因按孟德尔方式遗传并紧密连锁 ,但在部分植株中bar基因表达不充分 ;作为创伤诱导的pinII基因具有明显的时空表达特性 ,其诱导信号传导不仅向上 ,也向下传导 ;不同水稻转基因系中pinII基因的诱导表达不完全一致。