SDS-蛋白酶法分离棉花cpDNA及psbA基因启动子、终止子克隆

采用SDS-蛋白酶法提取了棉花的叶绿体DNA。琼脂糖电泳及紫外分光光度分析表明,所提取的叶绿体DNA质量高。用所提取的叶绿体DNA作为模板进行RAPD扩增,获得了清晰的扩增图谱。同时以所提取的叶绿体DNA作为模板,以psbA基因启动子、终止子序列设计引物,成功地扩增出预期为312bp和382bp的目标片段。将目标片段克隆测序,经Blantn分析,结果表明上述片段正是psbA基因启动子、终止子序列。该方法与传统的提取方法相比省时、高效、无污染,为进一步开展棉花叶绿体基因工程奠定了良好基础。

木瓜蛋白酶法与超滤膜法提取柿子多糖最佳条件的筛选

【目的】降低传统化学试剂提取而带来的毒性大风险,试用简便、温和、环保又高效的木瓜蛋白酶法、超滤膜法等分离纯化柿子总多糖提取物(TPs PF)。【方法】以当季成熟‘牛心柿’果实为试材,探讨了木瓜蛋白酶脱蛋白过程中不同处理工艺对TPs PF保留率和蛋白质去除率的影响,并进一步选择MWCO为200/10 ku的超滤膜截留收集分子质量10~200 ku的目标多糖组分,以超滤膜通量和TPs PF截留率为评价指标筛选出超滤工艺条件。【结果】TPs PF木瓜蛋白酶法脱蛋白优化工艺参数:酶用量1.0%,温度60℃,处理时间1.5 h,p H值6或7。其中对TPs PF保留率影响较大的因素是处理时间,而对蛋白质去除率影响较大的则是p H值。超滤膜富集分子质量10~200 ku的TPs PF的优化工艺条件:压力0.3 MPa,温度30℃,初始多糖浓度20 g·L^(-1),最后得到TPs PF截留率为(45.82±2.37)%。【结论】试验中的脱蛋白酶法、超滤法等生物分离方法操作简便,温和并获得了较高的提取率,适合于TPs PF的分离提取,并为下一步药理作用的评价提供了物质基础。

蛋白酶法制备芝麻饼粕蛋白质的工艺研究

以脱脂后的芝麻饼粕为原料,采用酶法提取法制备芝麻饼粕蛋白质。在单因素实验的基础上,通过正交实验确定蛋白酶法制备芝麻饼粕蛋白质最佳工艺条件为:酶解时间45min,p H9,酶解温度50℃,加酶量4000U/g,液料比20∶1。在此最佳条件下,芝麻饼粕蛋白质提取率为80.12%。所得产品蛋白质含量为67.89%。

酸性胃蛋白酶法收集猪带绦虫虫卵的实验研究

目的 建立收集绦虫卵的新方法。 方法 用 1%酸性胃蛋白酶溶液消化猪带绦虫孕节 ,观察不同条件下消化孕节收集虫卵的时间 ;比较酸性胃蛋白酶法与物理法收集的虫卵数量及其孵化后六钩蚴存活率 ;观察 1%酸性胃蛋白酶消化孕节 40min和 12 0min收集的虫卵以次氯酸钠法孵化后虫卵孵化率及六钩蚴存活率。 结果 1%酸性胃蛋白酶振荡条件下消化孕节收集虫卵时间短于普通条件下的时间 (P <0 .0 1) ,消化剪碎孕节时间短于消化完整孕节时间 (P<0 .0 1) ;酸性胃蛋白酶法收集虫卵的数量较物理法提高 6.975 % ;酸性胃蛋白酶法和物理法收集的虫卵以次氯酸钠法孵化后孵化率及六钩蚴存活率差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ;1%酸性胃蛋白酶消化孕节 40min和 12 0min收集的虫卵以次氯酸钠法孵化后孵化率及六钩蚴存活率差异无显著性 (P >0 .0 5 )。 结论 成功建立了较为适用的新的猪带绦虫虫卵收集方法—酸性胃蛋白酶法。

糖化血清蛋白酶法试剂对总胆汁酸测定的影响

目的探讨糖化血清蛋白酶法试剂对日立7600-010全自动生化分析仪测定总胆汁酸结果的影响。方法取混合血清,按照先测定糖化血清蛋白再测定胆汁酸的顺序,观察糖化血清蛋白试剂对胆汁酸测定的影响,并与对照组比较;将糖化血清蛋白的R1试剂、R2试剂及混合工作试剂加入血清中,确定试剂的干扰因素;应用仪器的特殊清洗程序使用不同的清洗液,观察仪器特殊清洗排除试剂间干扰的效果。结果与单独测定胆汁酸的对照组比较,显示糖化血清蛋白酶法试剂对胆汁酸结果有较大的影响,引起胆汁酸测定结果明显升高的主要干扰试剂为R1试剂,采用碱性液作为特殊清洗后,能明显减少糖化血清蛋白酶法试剂对总胆汁酸测定的交叉污染。结论糖化血清蛋白酶法试剂对日立7600-10全自动生化分析仪测定总胆汁酸的结果有明显的正干扰,因此实验室在设定项目程序时,应将有干扰的项目间的顺序错开,并在进行项目组合时予以考虑,以避免相邻间的交叉污染,。

纤维酶-胃蛋白酶法评定青粗饲料蛋白质降解率的研究

用纤维素酶－胃蛋白酶法测定了苜蓿干草、红三叶草、豆腐渣、啤酒糟、高粱青贮、羊草、雀麦草、羊茅的蛋白质降解率（％）分别为88．28，78．83，79．11，75．87，74．26，59．37，82．16和84．90。与瘤胃尼龙袋法测定值（Y）的回归关系为Y＝－34．27＋1．29X（r＝0．72，P＜0．05）。纤维素酶－胃蛋白酶法的培养条件为：40℃水浴培养，纤维素酶最适酶量为75mg（pH4．5，柠檬酸盐缓冲液），胃蛋白酶用量为160IU（pH1．4的KCl－HCl缓冲液）。

羊毛DCCA－蛋白酶法防毡缩工艺的改进

江南大学胡生荣等人为降低现行氯化预处理——蛋白酶处理羊毛防毡缩工艺中DCCA对环境的影响，通过对比高DCCA——低蛋白酶的现行工艺[3．5％（对织物质量分数）DCCA＋0．7％（对织物质量分数）蛋白酶]和低DCCA-高蛋白酶的改进工艺[1％（对织物质量分数）＋2．5％（对织物质量分数）蛋白酶]对羊毛防毡缩性能、润湿性能和断裂强度的影响，

胰蛋白酶消化法和组织块法原代培养人包皮成纤维细胞的比较

小鼠胚胎成纤维细胞(MEFs)是目前国际上公认的人胚胎干细胞(hESCs)体外培养的饲养层细胞,但MEFs存在寿命短、动物源性污染等问题,需要探索适于hESCs体外培养且寿命长的人源性饲养层.采用胰蛋白酶消化法和组织块法分别原代培养人包皮成纤维细胞(hFFs),探索hFFs原代培养的最佳方法,为hFFs作为饲养层在hESCs研究中的应用提供可靠的科学依据;通过倒置显微镜下观察其生长状态和免疫细胞化学染色鉴定,结果显示两种原代培养方法获得的hFFs的形态及生物学特性均符合成纤维细胞;通过测定细胞生长曲线及MTT法检测,结果显示两种原代培养方法获得的不同代数的hFFs均具有较高的增殖活性,传代10余代仍能保持较好的细胞形态,可以制备成饲养层用于hESCs的研究.

生物活性肽及其蛋白酶水解法制备探索

近年来,研究发现食物蛋白质酶解产物中的一些短肽具有除营养功能以外的广泛的生理调节功能,如降血压,降低胆固醇,促进免疫以及促进营养物质的消化吸收,且自在体内的消化吸收性能明显优于单个氨基酸.

应用A蛋白酶联法快速检测柑桔溃疡病的研究

应用A蛋白酶联法检测柑桔溃疡病表明,A蛋白预包被适宜浓度为2ug/ml,包被抗血清和检测抗血清工作浓度分别为10^(-5)和10^(-3),抗原稀释液和无症样品浸出液的灵敏率分别为1×10^(3-4)cfu/m和1∶90～100倍。此法对省内外26个溃疡病菌株均能检测,而不与阴性抗原发生反应。对171个柑桔无症样品检测表明,阳性率为63.20%,与常规检验结果基本符合。本法不需要纯化抗体及制备酶标抗体,检测周期仅12小时。

应用改良胃蛋白酶体外法评定水牛皮革蛋白粉的营养价值

应用改良胃蛋白酶体外法评定水牛皮革蛋白粉的营养价值华南农业大学动物科学系冯定远，蒲英远，严七根，黄子凡开发新的蛋白质饲料资源是饲料工业今后研究的一个课题，应用非常规的蛋白质饲料可以部分缓解饲料工业发展中原料供应紧张的矛盾。开发应用新的饲料原料资源的前...

胰蛋白酶消化法工作条件的研究及其应用

在生物药物分析中,采用枯草杆菌蛋白酶(Subtilisin Carlsberg)消化生物样品,释放与蛋白质结合的药物,已有大量的文献报道。但是国内该酶的生产较少,价格较贵,且不易获得。因此,我们采用胰蛋白酶(Trypsin)作为组织消化剂,对其工作条件、药物回收率进行了研究。并将建立的胰蛋白酶消化法,用于兔肝和血中安定、氯丙嗪、巴比妥、戊巴比妥和苯巴比妥的浓度测定,获得了满意结果。

人表皮扫描电镜样品的胰蛋白酶清化法

人表皮扫描电镜样品的胰蛋白酶清化法吕银慧，王仁鹏第三军医大学重庆６３００３８扫描电镜下不仅可观察样品的表面结构，亦可采用割断术来观察组织细胞内部的微细结构，对组织较深层次细胞的表面结构的扫描电镜的观察已有文献报道，本文用胰蛋白酶消化法清楚地观察到表皮...

牛腰肌中μ-钙蛋白酶基因表达量和蛋白活性与嫩度的关系

牛肉嫩度是影响牛肉品质的重要因素,μ-钙蛋白酶是影响牛肉嫩度的关键酶。本研究的目的是探究夏南母牛,夏南公牛,西门塔尔公牛肉中μ-钙蛋白酶mRNA表达量和蛋白活性与嫩度的关系。本研究选取年龄为48月龄的夏南母牛3头,18月龄的夏南公牛3头,15月龄的西门塔尔公牛3头,以腰最长肌为研究对象。利用实时荧光定量PCR分析不同品种牛腰最长肌中μ-钙蛋白酶mRNA表达量;采用酪蛋白酶谱法分析成熟3 d时不同样品μ-钙蛋白酶活性的差异;通过剪切力测定不同品种牛腰最长肌肉质嫩度的差异。结果发现:3个样品牛肉中μ-钙蛋白酶基因mRNA表达量差异不显著(P>0.05);夏南牛与西门塔尔牛肉中μ-钙蛋白酶活性差异极显著(P<0.01);夏南牛与西门塔尔牛剪切力差异极显著(P<0.01)。结论:3个样品腰最长肌中μ-钙蛋白酶的mRNA表达量与牛肉嫩度无显著相关性,夏南母牛比夏南公牛嫩度好,夏南公牛比西门塔尔公牛嫩度好。

反复胰蛋白酶消化法培养SD大鼠视网膜Muller细胞

目的:通过反复胰蛋白酶消化法,建立Muller细胞的培养和纯化方法。方法:采用新生7天的SD大鼠,解剖镜下取视网膜,反复胰蛋白酶消化法消化贴壁后的细胞,细胞形态一致后行免疫组织化学和形态学检查。结果:所得细胞的90%左右谷氨酰胺合成酶(GS)免疫组化染色阳性;荧光显微镜下可见细胞胞体巨大,足突明显,证明是Muller细胞。结论:反复胰蛋白酶消化法是一种简单、可靠的Muller细胞培养方法。