急性冠脉综合征患者血小板蛋白酶活化受体-1的表达及普伐他汀体外干预的影响

目的:观察急性冠脉综合征(ACS)患者血小板蛋白酶活化受体-1(PAR-1)的表达,探讨普伐他汀对血小板PAR-1表达的影响。方法:临床研究共纳入110例研究对象,分为急性冠脉综合征(ACS)组、稳定型心绞痛组和正常对照组,通过ELISA方法检测富血小板血浆PAR-1的表达。体外研究给予不同浓度普伐他汀干预及ADP刺激AMI患者和正常对照者血小板,采用流式细胞仪检测血小板PAR-1和LOX-1表达的变化。结果:ACS组PAR-1浓度显著高于稳定型心绞痛组和正常对照组;稳定性心绞痛组PAR-1浓度显著高于正常对照组。体外研究证实普伐他汀呈浓度依赖的方式抑制ADP诱导的血小板PAR-1和LOX-1表达。结论:ACS患者血小板表达PAR-1明显增加,普伐他汀体外干预能明显降低ADP诱导的进一步血小板PAR-1的表达。

蛋白酶活化受体-1在鼻咽癌中的表达及意义

目的检测PAR1在鼻咽癌中的表达,探讨PAR1在鼻咽癌中表达的意义。方法免疫组织化学(SP法)检测28例良性鼻咽组织、61例鼻咽癌组织中PAR1中的表达;采用RT-PCR、Western Blot检测鼻咽癌细胞系CNE-1、CNE-2中PAR1表达并比较其表达差异。结果PAR1在鼻咽癌组织及两种鼻咽癌细胞株中均表达。PAR1在28例良性鼻咽组织表达为10例,61例鼻咽癌组织中表达48例。PAR1在鼻咽癌组织中的表达率明显高于在良性鼻咽组织中的表达率(P<0.01),高度恶性细胞株中PAR1的表达明显高于其低度恶性细胞株。结论PAR1的表达与鼻咽癌的发生、生长方式、分期、恶性程度等有关。PAR1在鼻咽癌中的表达可能介导鼻咽癌侵袭转移等恶性生物学行为。

宫颈癌组织中蛋白酶活化受体-1的表达与盆腔淋巴结转移的关系

目的:探讨宫颈癌组织中蛋白酶活化受体-1(PAR-1)的表达与盆腔淋巴结转移的关系。方法:采用免疫组织化学方法,检测PAR-1在宫颈鳞癌组织(35例)、腺癌组织(25例)及正常组织(20例)中的表达情况。结果:PAR-1在正常宫颈组织中不表达,在宫颈癌组织中有较高的阳性表达(P<0.01),有淋巴转移的癌组织中PAR-1的阳性表达率明显高于无淋巴转移的癌组织(P<0.01)。结论:PAR-1在宫颈癌组织中的表达与盆腔淋巴结转移密切相关。

蛋白酶活化受体-1在肿瘤中的研究进展

蛋白酶活化受体（protease activated receptors，PARs）家族是血栓形成中的重要G蛋白耦联受体家族．是凝血酶的主要受体。PARs有4种亚型（PAR1～4）。PAR1是PARs家族的主要成员，是最早发现的PARs分子，研究最为深入。PAR1在血栓形成、炎症反应、血管活性、免疫系统功能、血管增生性疾病等过程中发挥重要作用。

结肠癌组织中蛋白酶活化受体-1的表达及意义

目的 探讨结肠癌组织中蛋白酶活化受体-1（PAR-1）mRNA的表达情况及其临床意义.方法 实时荧光定量PCR（RT-PCR）检测33例结肠癌患者癌组织及其相应癌旁组织中PAR-1 mRNA的表达情况,分析PAR-1 mRNA与结肠癌分化程度、病理分期以及转移等指标的相关性.结果 结肠癌组织中PAR-1 mRNA的表达明显增高,比邻近癌旁组织平均高4.99倍;二者ΔCt比较,t=9.15,P〈0.01.同时低分化的结肠癌患者组PAR-1 mRNA表达量明显高于中、高分化患者组,P〈0.01;有转移患者组的PAR-1 mRNA表达量明显高于无转移患者组,P〈0.01;而在结肠癌临床Ⅰ~Ⅱ期与Ⅲ~Ⅳ期患者组之间,PAR-1 mRNA表达量差异无统计学意义,P〉0.05.结论 PAR-1 mRNA在结肠癌中高表达,且与结肠癌的分化及是否转移有关.

急性冠脉综合征患者血小板蛋白酶活化受体-1的表达

目的观察急性冠脉综合征(ACS)患者血小板蛋白酶活化受体-1(PAR-1)的表达,为探讨多种途径抗血小板聚集治疗提供依据。方法临床研究共纳入150例研究对象,分为急性ST段抬高型心肌梗死(STEMI组)、急性非ST段抬高型心肌梗死(NSTEMI组)、不稳定型心绞痛1组(UA-1组,任何一支血管狭窄≥75%)、不稳定型心绞痛2组(UA-2组,50%≤任何一支血管狭窄<75%)、对照组(Cont组,冠脉造影、心肌酶谱正常),每组30例。通过ELISA方法检测富血小板血浆PAR-1的表达。结果 Cont组、UA-2组、UA-1组、NSTEMI组、STEMI组的PAR-1浓度依次逐渐升高,分别为(2.35±0.10)ng/ml、(2.66±0.14)ng/ml、(2.85±0.17)ng/ml、(3.81±0.15)ng/ml、(3.95±0.24)ng/ml,各组总体比较差异有统计学意义(F=182.869,P<0.001),5个研究组组间两两比较结果显示,除STEMI和NSTEMI组间、UA-1和UA-2组间比较差异无统计学意义(P>0.05),其余急性心肌梗死各组(STEMI、NSTEMI组)与心绞痛各组(UA-1、UA-2组)两两比较差异有统计学意义(P<0.001,P<0.01或P<0.05),ACS各组与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.001)。结论 ACS患者血小板PAR-1表达明显增加,PAR-1通路激活可能是ACS发生的始动因素,因此适当抑制PAR-1表达或许成为抗血小板聚集治疗新的有效靶点。

蛋白酶活化受体-1单克隆抗体的制备与鉴定

目的制备蛋白酶活化受体-1(PAR-1)单克隆抗体(mAb)。方法以PAR-1特异性片段为免疫原(13肽)免疫BALB/c小鼠,运用杂交瘤技术制备抗PAR-1 mAb。采用捕获酶联免疫吸附试验(capture ELISA)鉴定mAb的Ig亚类;通过ELISA、Dot blot、免疫组化染色法、流式细胞仪分析、激光共聚焦显微镜技术鉴定mAb的特异性。结果获得2株可稳定分泌抗PAR-1 mAb的杂交瘤细胞,其亚型分别为IgMI、gG2b。免疫组化染色表明,mAb与人扁桃体、结肠组织中的淋巴细胞、包皮组织中的成纤维细胞、肺组织中的巨噬细胞反应呈阳性。流式细胞仪分析显示,2株mAb与人肺腺癌细胞系A549细胞胞浆内及细胞膜上的PAR-1均呈阳性反应。激光共聚焦扫描显微镜观察,荧光标记的阳性反应物在A549细胞胞浆内及细胞膜上均可见。结论成功地制备出抗PAR-1 mAb,为进一步研究炎症性疾病提供有用的试剂。

血小板蛋白酶活化受体-1水平对稳定型心绞痛患者长期预后的影响

目的探讨血小板蛋白酶活化受体-1(PAR-1)水平对稳定型心绞痛(SAP)患者长期预后的影响。方法纳入125例SAP患者,收集患者的一般临床资料并检测入院时富血小板血浆中PAR-1的水平,记录随访18个月期间心血管事件的发生情况。采用受试者工作特征曲线分析PAR-1对SAP患者发生心血管事件的预测效能,分析SAP患者发生心血管事件的影响因素。结果 125例SAP患者PAR-1水平为(2. 79±0. 34) pg/ml。TC、LDL、心绞痛加拿大心血管协会分级、PAR-1水平均为SAP患者心血管事件发生的影响因素(均P <0. 05)。当PAR-1为2. 854 ng/ml时,其预测SAP患者发生心血管事件的敏感度、特异度分别为76. 1%、91. 4%。结论 PAR-1水平升高是SAP患者发生心血管事件的重要危险因素,其可作为评估SAP长期预后的指标。

蛋白酶活化受体-1在宫颈癌组织中的表达及意义

目的探讨蛋白酶活化受体(PAR)-1在宫颈鳞癌、腺癌及原位癌组织中的表达情况。方法收集宫颈鳞癌组织35例、腺癌组织25例、原位癌组织20例及正常宫颈组织标本20例,采用免疫组织化学方法、PAR-1单克隆抗体检测上述组织中PAR-1表达。结果PAR-1在正常宫颈组织中无表达,宫颈原位癌和宫颈浸润癌Ⅰ期及Ⅱ期组的阳性表达率分别为20.0%、36.4%和44.7%,显著高于正常宫颈组(P=0.002 8)。有盆腔淋巴转移的宫颈癌组的PAR-1阳性表达率为68.4%,显著高于无淋巴转移组的29.3%(P=0.004 2)。结论PAR-1与宫颈癌的发生和转移密切相关。

MMP-1、PAR-1与子痫前期血管内皮损伤研究进展

MMP-1是基质金属蛋白酶家族成员之一,具有降解细胞外基质中的Ⅰ和Ⅲ型胶原的作用。活化的MMP-1可介导血管壁胶原组织重构,引起管壁通透性增加,水肿和蛋白尿形成。蛋白酶活化受体-1(PAR-1)属于G蛋白偶联受体家族成员,激活后可介导内皮细胞释放ET-1增多并激活Rho激酶通路。子痫前期病人外周血MMP-1表达增高,上调的MMP-1可激活内皮细胞表面PAR-1导致ET-1释放增多,造成血管舒缩功能紊乱、血压增高。此外,MMP-1表达增高导致血管内皮对Ang II等因子的反应性上调亦在子痫前期的病理改变中具有重要作用。

PAR-1促进肿瘤恶性行为机制的研究进展

蛋白酶活化受体-1(PAR-1)是PARs家族中第一个被发现的成员,也称凝血酶受体。PAR-1被肿瘤微环境中的蛋白酶水解激活后,介导多种肿瘤细胞的生物学行为:促进肿瘤细胞增殖、黏附、迁移、侵袭,并参与肿瘤生长、血管新生等多个环节和多条通路。同时,通过调控下游分子和细胞因子,PAR-1可对肿瘤微环境进行重塑,促进肿瘤的进展。

重组水蛭素与喉癌细胞Hep-2中PAR1、VEGF、MMP-2表达的相关性研究

目的检测喉癌及癌旁组织中蛋白酶活化受体1(PAR-1)、血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白-2(MMP-2)的表达,及重组水蛭素(Recombinant hirudin)对喉癌细胞Hep-2中PAR-1、VEGF、MMP-2表达的影响,探讨PAR-1、VEGF、MMP-2在喉癌侵袭及转移中的作用及重组水蛭素的抗肿瘤机制。方法采用免疫组化方法检测喉癌组织及癌旁组织中PAR-1、VEGF、MMP-2的表达;用免疫细胞化学方法检测重组水蛭素共培养和不加入重组水蛭素培养的喉癌细胞中PAR-1、VEGF、MMP-2的表达。结果 PAR-1、VEGF、MMP-2在喉癌组织及有淋巴结转移的癌旁组织中呈高表达,差异有统计学意义;PAR-1、VEGF、MMP-2在重组水蛭素共培养和不加入重组水蛭素培养的表达差异有统计学意义(P<0.05)。结论证实PAR-1、VEGF、MMP-2参与了喉癌的侵袭及转移;重组水蛭素的抗肿瘤及抑制肿瘤转移作用可能与其降低喉癌细胞中PAR-1、VEGF、MMP-2表达有关。

宫颈鳞状细胞癌组织PAR-1基因mRNA的表达及临床意义

目的探讨宫颈鳞状细胞癌(SCC)组织蛋白酶活化受体-1(PAR-1)基因mRNA的表达与临床意义。方法采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测49例宫颈鳞状细胞癌组织中PAR-1基因mRNA的表达情况。结果不同病理分级的宫颈鳞状细胞癌中PAR-1的表达率:Ⅰ级31.3%,Ⅱ级42.1%,Ⅲ级50%,各组之间比较差异无显著性意义(P>0.05)。PAR-1 mRNA在宫颈鳞状细胞癌中的表达率:Ⅰ期40%,Ⅱ期35%,Ⅲ期42.9%,各组之间比较差异无显著性意义(P>0.05)。PAR-1 mRNA在无淋巴结转移的宫颈鳞状细胞癌中的表达率为28.6%,在有淋巴结转移的宫颈鳞状细胞癌中的表达率为71.4%,差异有显著性意义(P<0.01)。结论PAR-1mRNA表达增高可能参与宫颈鳞状细胞癌的转移和侵袭过程。

耳、鼻、咽、喉（081191～081214）

EB病毒潜伏膜蛋白Ⅰ胞外区融合蛋白的表达及纯化；蛋白酶活化受体-1在鼻咽癌中的表达及意义；313例老年鼻咽癌患者临床特征及预后的回顾性研究；EBV-LMP1上调Ezrin表达对鼻咽癌细胞转移潜能的影响；

凝血酶诱发人支气管上皮细胞恶性转化

目的探讨凝血酶对人类支气管上皮细胞的致癌性和转化涉及的相关机制。方法用75nmo·lL-1凝血酶持续刺激人类乳头状瘤-18永生化的人支气管上皮细胞(BEP2D)70d,观察不同代龄细胞的血清抗性、软琼脂克隆形成率,流式细胞术观察细胞周期改变,逆转录-聚合酶链反应检测凝血酶受体-蛋白酶活化受体(PAR1),c-myc和p21^(cip1)基因表达水平,蛋白质免疫印迹检测C-MYC和P21^(cip1)蛋白表达变化,鉴定细胞的恶性转化表型。结果经传代培养,凝血酶处理的第10代BEP2D细胞血清抗性增强,接种效率提高,第20代细胞呈非贴壁依赖性生长,软琼脂克隆形成率升高达(0.461±0.009)%。流式细胞术结果显示,第22代细胞处于S期比例为55.63%。凝血酶转化第25代、第27代细胞PAR1基因、c-myc基因及C-MYC蛋白表达水平上调。相反,p21^(cip1)基因和P21^(cip1)蛋白表达减弱。凝血酶处理的第20代细胞已具有较为稳定的转化表型和细胞生物学特性,可能是具有裸小鼠致瘤型的恶性转化细胞。每升2×104抗凝血酶单位水蛭素能够拮抗凝血酶对BEP2D细胞的恶性转化作用。结论凝血酶对人支气管上皮细胞具有恶性转化作用,c-myc基因转录和蛋白表达活化与p21^(cip1)失活在这一过程中发挥关键作用。

大鼠脑缺血再灌后凝血酶与PAR-1的表达及意义

目的探讨大鼠脑缺血再灌后凝血酶(thrombin)及蛋白酶活化受体-1(PAR-1)的表达变化及意义。方法栓线法制作大鼠大脑中动脉闭塞再灌注模型,用Western Blot方法检测对照组及脑缺血2h再灌注不同时程组(12、24h,3、7d)凝血酶和PAR-1蛋白表达水平。结果对照组可以检测到少量凝血酶(thrombin)和PAR-1的表达,两种蛋白于再灌注12h显著上升,3d达高峰(P<0.01),7d下降;缺血再灌注后凝血酶与PAR-1的表达呈高度正相关(r=0.934,P<0.01)。结论凝血酶和PAR-1蛋白的表达增加可能与脑缺血再灌注损伤的发病机制有关;凝血酶可能通过激活PAR-1参与了再灌注损伤的病理生理过程。

MMP-1/PAR-1通路在宫颈癌侵袭转移中的作用

目的:探索基质金属蛋白酶-1(MMP-1)/蛋白酶活化受体-1(PAR-1)通路在宫颈癌侵袭转移中的作用。方法:RT-PCR法检测59例临床宫颈鳞癌组织和15例正常宫颈组织的MMP-1mRNA表达;Transwell实验检测添加重组人MMP-1及干扰PAR-1对宫颈癌Hela细胞转移侵袭能力的影响。结果:宫颈癌组织中的MMP-1(rhMMP-1)表达高于正常宫颈组织,并与侵袭转移程度相关;rhMMP-1能促进Hela细胞的转移能力,并与浓度相关;干扰PAR-1后能抑制MMP-1介导的Hela细胞转移能力。结论:MMP-1/PAR-1通路参与宫颈癌的侵袭转移,可能成为宫颈癌治疗的新靶点。

鼻咽癌组织PAR1和VEGF及MMP1表达相关性的探讨

目的:检测PAR1和VEGF及MMP1在鼻咽癌组织中的共表达及意义。方法:免疫组织化学(SP法)检测61例鼻咽癌组织中PAR1与VEGF、MMP1的表达,并比较PAR1与VEGF、MMP1的表达相关性。结果:PAR1、VEGF和MMP1的阳性表达率分别为78.7%(48/61)、59.0%(41/61)和77.0%(47/61)。PAR1与VEGF在鼻咽癌中的表达正相关(r=0.319,P=0.013),PAR1与MMP1在鼻咽癌中的表达无明显相关性(r=0.192,P=0.152)。结论:PAR1可能协同VEGF参与鼻咽癌的肿瘤血管生存。PAR1在鼻咽癌中的具体作用及详细机制有待进一步深入研究。